豬毛發(fā)中西馬特羅殘留量的檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種豬毛發(fā)中西馬特羅殘留量的檢測方法，該方法包括以下步驟：（1）供試品溶液的制備：豬毛發(fā)樣品經(jīng)清洗、水解、提取、凈化步驟，得到供試品溶液；（2）高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測：以沙丁胺醇-D3為內(nèi)標，采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測豬毛發(fā)中西馬特羅的含量。本發(fā)明無需宰殺生豬等動物，實現(xiàn)動物活體檢測，由于毛發(fā)生長周期長，更能準確監(jiān)控畜禽生產(chǎn)過程中是否使用過西馬特羅，檢測步驟操作簡便，特異性強、靈敏度高，檢測結(jié)果準確可靠，為畜禽食品安全生產(chǎn)的監(jiān)管提供可靠的控制確證技術(shù)。
【專利說明】豬毛發(fā)中西馬特羅殘留量的檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及檢測領(lǐng)域，具體涉及一種豬毛發(fā)中西馬特羅殘留量的檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002]瘦肉精是具有腎上腺素受體激動作用的一類藥物的統(tǒng)稱，又稱β 2-興奮劑，具有促進肌肉生長、提高瘦肉率的作用，曾作為生長添加劑被廣泛關(guān)注，但β 2-受體激動劑在動物體內(nèi)有一定的殘留時間，通過食物鏈進入人體后會使一些易感人群產(chǎn)生明顯的中毒癥狀，危害人類健康。西馬特羅(Cimaterol)是目前常見的瘦肉精之一。我國于2002年農(nóng)業(yè)部176號公告《禁止在飼料和動物飲用水中使用的藥物品種目錄》中已明令禁止西馬特羅在畜禽生產(chǎn)上的使用，但受經(jīng)濟利益驅(qū)使，西馬特羅在畜禽生產(chǎn)上的使用仍然屢禁不止。
[0003]目前國家或行業(yè)部門已出臺了多項動物源性食品或尿液中的西馬特羅殘留量檢測標準，豬及其肉制品中的西馬特羅的檢測方法也多見報導。如孫雷等(高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測豬尿中四種受體激動劑殘留的研究.中國獸藥雜志，2008，42(4):15-18)建立了豬尿中克侖特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇和西馬特羅殘留檢測的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜方法，液相色譜條件為:色譜柱為XBridge C18柱(150_ x2.1_，5 μ m)，流動相為
0.1%甲酸甲醇溶液+0.1%甲酸水溶液，梯度洗脫，柱溫為30°C，流速為0.2mL/min，進樣量為20 yL ;質(zhì)譜條件為:電噴霧離子源(ESI)，多反應監(jiān)測(MRM)方式進行采集，同位素內(nèi)標法定量；結(jié)果表明，四種β_受體激動劑在l_50ng/mL濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，方法檢測限為0.3ng/mL，定量限為0.5ng/mL，該方法快速、簡便、專屬性強、靈敏度高。
[0004]但西馬特羅在食用組織或尿液中半衰期較短，在一定休藥期后將無法在肌肉或內(nèi)臟組織中被檢測出來，因此無法準確監(jiān)控畜禽生產(chǎn)過程中是否使用過此類違禁藥物，這給食品安全生產(chǎn)的監(jiān)管帶來一定困難。而毛發(fā)因為其結(jié)構(gòu)成分特點和較低的代謝活性，使得藥物進入其中后代謝緩慢，可長期蓄積保留，在動物毛發(fā)中具有較長的殘留時間，因此毛發(fā)較畜禽產(chǎn)品的肌肉組織、肝臟及尿液更適合做為有效的檢測樣本為食品安全生產(chǎn)中違禁藥物監(jiān)管提供更可靠的確證依據(jù)。目前，尚未見有采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測豬毛發(fā)中西馬特羅的含量。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明針對西馬特羅在食用組織或尿液中半衰期較短，不利于食品安全生產(chǎn)監(jiān)管的現(xiàn)狀，提供了一種豬毛發(fā)中西馬特羅殘留量的檢測方法，通過采集豬毛，進行簡單前處理檢測豬毛發(fā)中西馬特羅殘留量，無需宰殺生豬，實現(xiàn)動物活體檢測，毛發(fā)樣本較尿液也更方便獲取。該方法檢測步驟操作簡便，特異性強、靈敏度高，檢測結(jié)果準確可靠，為畜禽食品安全生產(chǎn)的監(jiān)管提供可靠的控制確證技術(shù)。
[0006]本發(fā)明的技術(shù)方案為:
[0007]—種豬毛發(fā)中西馬特羅殘留量的檢測方法，該方法包括以下步驟:
[0008]1.供試品溶液的制備:[0009]a.清洗:取豬毛發(fā)樣品，用清洗劑清洗，蒸餾水漂凈，烘干或晾干；
[0010]b.水解:取清洗好的豬毛發(fā)樣品剪碎，稱取0.2g至50mL塑料離心管中，加入
0.5mol -L-1氫氧化鈉溶液5mL、內(nèi)標溶液，置于50°C水浴鍋中恒溫2小時，得豬毛發(fā)水解液；
[0011]c.提取:在豬毛發(fā)水解液中加入鹽酸，再用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至9.8±0.2，加入氯化鈉，用IOmL乙酸乙酯-異丙醇(3:2)混合溶液提取，離心，轉(zhuǎn)移上層有機相至圓底燒瓶中，再用5mL乙酸乙酯-異丙醇(3:2)混合溶液提取下層水相，離心，合并有機相，在40°C水浴下減壓濃縮近干，加入2mL0.1mol.L-1鹽酸溶解殘渣，得備用液；
[0012]d.凈化:取備用液過PCX固相萃取柱，依次用30mmol -T1鹽酸、甲醇各3mL淋洗，抽干，再用5%氨水甲醇溶液5mL洗脫，洗脫液吹干,用1:1的乙腈-水溶液0.2mL溶解，作為供試品溶液；
[0013]2.高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測:
[0014]a.液相色譜條件:色譜柱:CAPCELL PAK CR柱,2.1mmX 150mm,粒度5 μ m ;流動相A為含0.1%甲酸的IOmmol.L-1乙酸銨水溶液，流動B為含0.1%甲酸的乙腈，流動相A:流動 B 為 55:45 ;流速:0.2mL/min ;柱溫:30°C ;進樣量:20μ L ;
[0015]b.質(zhì)譜條件:電噴霧離子源(ESI)，正離子掃描模式；選擇反應監(jiān)測(SRM);噴霧電壓:3500V ;毛細管溫度:350°C蒸發(fā)溫度:100°C ;鞘氣壓力3.67kPa，輔助氣流量5L.min—1。
[0016]以上所述豬毛發(fā)中西馬特羅殘留量的檢測方法，所述內(nèi)標物質(zhì)為沙丁胺醇-D3，所述內(nèi)標溶液優(yōu)選500ng.πιL-1沙丁胺醇-D3的甲醇溶液0.02mL。
[0017]以上所述豬毛發(fā)中西馬特羅殘留量的檢測方法，所述清洗劑可為除去豬毛發(fā)雜質(zhì)的任何物質(zhì)，如:二氯甲烷、丙酮、己烷等有機溶劑、表面活性劑、水等，優(yōu)選為十二烷基磺酸納，最佳優(yōu)選0.1%十二烷基橫酸納。
[0018]以上所述豬毛發(fā)中西馬特羅殘留量的檢測方法，所述烘干步驟優(yōu)選為置50°C干燥箱中烘干。
[0019]以上所述豬毛發(fā)中西馬特羅殘留量的檢測方法，所述提取步驟優(yōu)選為:在豬毛水解液加入0.5mol.1/1鹽酸3mL,再用0.1mol *L_1鹽酸調(diào)節(jié)pH值至9.8±0.2,加入2g氯化鈉，用IOmL乙酸乙酯-異丙醇(3:2)混合溶液提取，在3500r.mirT1下離心5min，轉(zhuǎn)移上層有機相，再用5mL乙酸乙酯-異丙醇(3:2)混合溶液提取下層水相，3500r.mirT1下離心5min，合并有機相，在40°C水浴下減壓濃縮近干，加入2mL0.1mol.L-1鹽酸溶解殘渣，得備用液。
[0020]以上所述豬毛發(fā)中西馬特羅殘留量的檢測方法，所述凈化步驟優(yōu)選為:PCX固相萃取柱依次用甲醇、水、30mmol.L-1鹽酸活化，取備用液過PCX固相萃取柱，依次用3OmmoI *L_1鹽酸、甲醇各3mL淋洗,抽干,用5%氨水甲醇溶液5mL洗脫,洗脫液在50°C下用氮氣吹干，用1:1的乙腈-水溶液0.5mL溶解，渦旋混勻后過0.45 μ m濾膜，作為供試品溶液。
[0021]以上所述豬毛發(fā)中西馬特羅殘留量的檢測方法，所述質(zhì)譜條件所述質(zhì)譜條件西馬特羅的定量離子為m/z220 > 160，定性離子為m/z220 > 160和m/z220 > 202，沙丁胺醇-D3的定量離子為m/z為243 > 151。
[0022]本方法按照內(nèi)標法以峰面積計算西馬特羅在毛發(fā)中的殘留量，計算公式為:
【權(quán)利要求】
1.一種豬毛發(fā)中西馬特羅殘留量的檢測方法，其特征在于，該方法包括以下步驟: (1)供試品溶液的制備: a.清洗:取豬毛發(fā)樣品，用清洗劑清洗，蒸餾水漂凈，烘干或晾干； b.水解:取清洗好的豬毛發(fā)樣品剪碎，稱取0.2g至50mL塑料離心管中，加入0.5mol.L—1氫氧化鈉溶液5mL、內(nèi)標溶液，置于50°C水浴鍋中恒溫過夜，得豬毛發(fā)水解液； c.提取:在豬毛發(fā)水解液中加入鹽酸，再用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至9.8±0.2，加入氯化鈉，用IOmL乙酸乙酯-異丙醇(3:2)混合溶液提取，離心，轉(zhuǎn)移上層有機相至圓底燒瓶中，再用5mL乙酸乙酯-異丙醇(3:2)混合溶液提取下層水相，離心，合并有機相，在40°C水浴下減壓濃縮近干，加入2mL0.1mol.l1鹽酸溶解殘渣，得備用液； d.凈化:取備用液過PCX固相萃取柱,依次用30mmol*L_1鹽酸、甲醇各3mL淋洗,抽干，再用5%氨水甲醇溶液5mL洗脫,洗脫液吹干,用1:1的乙腈-水溶液0.2mL溶解，作為供試品溶液； (2)高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測: a.液相色譜條件:色譜柱:CAPCELLPAK CR柱,2.1mmX 150mm,粒度5 μ m ;流動相A為含0.1%甲酸的IOmmol.l1乙酸銨水溶液，流動B為含0.1%甲酸的乙腈，流動相A:流動B為 55:45 ;流速:0.2mL/min ;柱溫:30°C ;進樣量:20μ L ; b.質(zhì)譜條件:電噴霧離子源(ESI)，正離子掃描模式；選擇反應監(jiān)測(SRM);噴霧電壓:3500V ;毛細管溫度:350°C蒸發(fā)溫度:100°C ;鞘氣壓力3.67kPa，輔助氣流量5L.min—1。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述豬毛發(fā)中西馬特羅殘留量的檢測方法，其特征在于，所述內(nèi)標溶液為500ng.L—1沙丁胺醇-D3的甲醇溶液0.02mL。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述豬毛發(fā)中西馬特羅殘留量的檢測方法，其特征在于，所述清洗劑為十二烷基磺酸鈉。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述豬毛發(fā)中西馬特羅殘留量的檢測方法，其特征在于，所述烘干步驟為置50°C干燥箱中烘干。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述豬毛發(fā)中西馬特羅殘留量的檢測方法，其特征在于，所述提取步驟為:在豬毛水解液加入0.5mol.I/1鹽酸3mL，再用0.1mol.171鹽酸調(diào)節(jié)pH值至9.8 ±0.2，加入2g氯化鈉，用IOmL乙酸乙酯-異丙醇(3:2)混合溶液提取，在3500 r.mirT1下離心5min，轉(zhuǎn)移上層有機相，再用5mL乙酸乙酯-異丙醇(3:2)混合溶液提取下層水相，3500 r *min_1下離心5min,合并有機相,在40°C水浴下減壓濃縮近干,加入2mL0.1mol *L_1鹽酸溶解殘渣，得備用液。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述豬毛發(fā)中西馬特羅殘留量的檢測方法，其特征在于，所述凈化步驟為:PCX固相萃取柱依次用甲醇、水、30mmol.L—1鹽酸活化，取備用液過PCX固相萃取柱，依次用30mmol.I/1鹽酸、甲醇各3mL淋洗，抽干，用5%氨水甲醇溶液5mL洗脫，洗脫液在50°C下用氮氣吹干，用1:1的乙腈-水溶液0.5mL溶解，渦旋混勻后過0.45 μ m濾膜，作為供試品溶液。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述豬毛發(fā)中西馬特羅殘留量的檢測方法，其特征在于，所述質(zhì)譜條件西馬特羅的定量離子為m/z220 > 160，定性離子為m/z220 > 160和m/z220 > 202，沙丁胺醇-D3的定量離子為m/z為243 > 151。
8.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一所述豬毛發(fā)中西馬特羅殘留量的檢測方法，其特征在于，所述方法在檢測 動物毛發(fā)中的應用。
【文檔編號】G01N30/02GK103675145SQ201310698917
【公開日】2014年3月26日 申請日期:2013年12月18日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月18日
【發(fā)明者】潘艷坤, 張?zhí)m, 葉開富, 楊益林, 黃一凡, 謝濤, 張思敏, 劉永強 申請人:廣西壯族自治區(qū)分析測試研究中心