一種黃蜀葵花藥材的鑒別方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種黃蜀葵花藥材的鑒別方法，是以蘆丁、金絲桃苷、槲皮素為對照品或以蘆丁、金絲桃苷為對照品，將供試品溶液和對照藥品溶液點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以60～75%冰醋酸為展開劑，三氯化鋁試液顯色，置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。本發(fā)明提供的黃蜀葵花藥材鑒別方法專屬性強(qiáng)，藥材及化學(xué)試劑使用量少，操作簡便，重現(xiàn)性好，適用于所有來源的黃蜀葵花藥材的鑒別以及含有黃蜀葵花藥材的制成品中是否含有黃蜀葵花藥材的鑒別。
【專利說明】一種黃蜀葵花藥材的鑒別方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及藥材的定性、鑒別方法，特別是涉及黃蜀葵花藥材的鑒別方法。
【背景技術(shù)】
[0002]黃蜀葵花為錦葵科植物黃蜀葵的干燥花冠，在我國有悠久的藥用歷史，《嘉祐本草》、《本草綱目》上均有藥用記載。性甘、寒，歸腎、膀胱經(jīng)，用于濕熱壅遏，淋濁水腫；外治癰疽腫毒，水火燙傷。
[0003]黃蜀葵花的主要成分包括金絲桃苷、異槲皮苷、槲皮素、楊梅素、蘆丁等。其中金絲桃苷含量最高，有顯著的局部鎮(zhèn)痛作用，對心肌、腦缺血起保護(hù)作用，對肝胃粘膜起保護(hù)作用，并有解痙鎮(zhèn)痛和降血脂、增強(qiáng)免疫功能等作用。槲皮素可作為藥品，具有較好的祛痰、止咳和平喘作用，此外還有降低血壓、增強(qiáng)毛細(xì)血管抵抗力、減少毛細(xì)血管脆性、降血脂等作用。蘆丁具有抗炎、抗病毒及維持血管抵抗力、降低其通透性、減少血管脆性等作用。
[0004]山東省中藥材標(biāo)準(zhǔn)(2002年版)收載了黃蜀葵花藥材，其鑒別項(xiàng)選用鹽酸鎂粉反應(yīng)，鑒別其中的黃酮苷，以出現(xiàn)紅色至紫紅色反應(yīng)為指標(biāo)，操作相對簡單，但專屬性差，只要含有黃酮苷類成分的不同藥材均可呈現(xiàn)正反應(yīng)。
[0005]中華人民共和國藥典(2010年版)一部中新收載黃蜀葵花，改善了黃蜀葵花藥材的鑒別方法。其操作過程為:“取本品粉末lg，加0.18%鹽酸乙醇溶液20ml，置水浴上加熱回流I小時(shí)，趁熱濾過，濾液濃縮至5ml，作為供試品溶液。另取槲皮素對照品，加乙醇制成每Iml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述兩種溶液各I μ 1，分別點(diǎn)于同一用0.5%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以甲苯一乙酸乙酯一甲酸5:4:1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置紫外光燈365nm下檢視，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，呈相同顏色的熒光斑點(diǎn)”。該方法是通過鹽酸水解反應(yīng)，將黃蜀葵花中有效成分金絲桃苷、槲皮素一 3 —葡萄糖苷、異槲皮苷等去掉取代基轉(zhuǎn)換為槲皮素，然后以槲皮素對照品作為參t匕，鑒別藥材真?zhèn)?。其方法專屬性相對較強(qiáng)，但是存在操作過程繁鎖、使用化學(xué)試劑種類多、鑒別時(shí)間長等不足，不適合生產(chǎn)過程中快速檢驗(yàn)的要求。
[0006]另外，中藥市場上摻雜摻假、以次充好的現(xiàn)象數(shù)不勝數(shù)。中藥是用于治病的，如果治療使用假藥材或劣質(zhì)藥材，不但不能起到治療效果，反而可能延誤病情，甚至危害生命，故加強(qiáng)中藥材和中成藥質(zhì)量管理成為越來越重要的工作。中藥材的鑒別歷來是難點(diǎn)，方法專屬性直接決定鑒別方法的價(jià)值。采用單一對照品進(jìn)行鑒別雖然具有一定的專屬性，但是由于中藥材成分復(fù)雜，很多中藥材都含有同一有效成分，因此常常會出現(xiàn)誤判現(xiàn)象。比如，藥典中收錄的含槲皮素的中藥材就有瓦松、地錦草、垂盆草、杠板歸、金錢草、側(cè)柏葉、銀杏葉、葶藶子、黃蜀葵花等，使用黃蜀葵花藥材的鑒別方法對這些藥材進(jìn)行鑒別時(shí)，均會出現(xiàn)槲皮素特征點(diǎn)，造成假陽性結(jié)果。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的目的是提供一種黃蜀葵花藥材的鑒別方法，本發(fā)明提供的方法操作簡便、專屬性更強(qiáng)、重現(xiàn)性好，能夠快速準(zhǔn)確地對黃蜀葵花藥材進(jìn)行鑒別。
[0008]本發(fā)明提供的黃蜀葵花藥材的鑒別方法是以蘆丁、金絲桃苷和槲皮素為對照品，采用薄層色譜法進(jìn)行鑒別，具體方法包括:
1)、供試品溶液制備
取黃蜀葵花藥材粉末0.1?0.5g，加Ch4—元醇10ml，充分溶解后，濾過，取濾液作為供試品溶液；
2)、對照品溶液制備
分別取蘆丁、金絲桃苷、槲皮素對照品，以(:卜4一元醇制成每Iml含蘆丁0.05?0.lmg、金絲桃苷0.1?0.3mg、槲皮素0.05?0.1mg的溶液,作為蘆丁對照品溶液、金絲桃苷對照品溶液和槲皮素對照品溶液；
或者，
將蘆丁、金絲桃苷和槲皮素對照品同時(shí)溶于(:卜4 一元醇中，制成每Iml含蘆丁 0.05?0.lmg、金絲桃苷0.1?0.3mg、槲皮素0.05?0.1mg的溶液,作為對照品溶液；
3)、薄層色譜法鑒別
分別吸取上述供試品溶液和對照品溶液各2?10 μ L，點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以60?75%冰醋酸為展開劑，展距6cm，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，熱風(fēng)吹干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與各對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
[0009]本發(fā)明提供的黃蜀葵花藥材的鑒別方法還可以是以蘆丁和金絲桃苷為對照品，采用薄層色譜法進(jìn)行鑒別，具體方法包括:
1)、供試品溶液制備
取黃蜀葵花藥材粉末0.1?0.5g，或相當(dāng)于0.1?0.5g黃蜀葵花藥材的含黃蜀葵花藥材制成品粉末，加(:卜4 一元醇10ml，充分溶解后，濾過，取濾液作為供試品溶液；
2)、對照品溶液制備
分別取蘆丁、金絲桃苷對照品，以(:卜4 一元醇制成每Iml含蘆丁 0.05?0.lmg、金絲桃苷0.1?0.3mg的溶液，作為蘆丁對照品溶液、金絲桃苷對照品溶液；
或者，
將蘆丁、金絲桃苷對照品同時(shí)溶于(:卜4 一元醇中，制成每Iml含蘆丁 0.05?0.lmg、金絲桃苷0.1?0.3mg的溶液，作為對照品溶液；
3)、薄層色譜法鑒別
分別吸取上述供試品溶液和對照品溶液各2?10 μ L，點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以60?75%冰醋酸為展開劑，展距6cm，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，熱風(fēng)吹干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與各對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
[0010]本發(fā)明上述方法中，步驟I)中所述的充分溶解是采取各種常規(guī)的溶解手段，如攪拌、振蕩、加熱等，用C1M—元醇將黃蜀葵花藥材中的有效成分盡可能多地溶解出來。其中最簡單有效的溶解方法是將溶液置于超聲波中處理20min。
[0011]本發(fā)明提供的上述黃蜀葵花藥材的鑒別方法是一個(gè)典型的定性分析方法。在不同的實(shí)驗(yàn)環(huán)境和試驗(yàn)條件下，得到的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可能會有略微的區(qū)別。在實(shí)際操作中，允許對上述鑒別方法中的實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行適當(dāng)?shù)恼{(diào)整，以其獲得最佳的試驗(yàn)結(jié)果，以方便鑒別。
[0012]一般地，優(yōu)選以70%冰醋酸為展開劑。可以根據(jù)實(shí)際情況，對展開劑的濃度進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。
[0013]如果由于上述實(shí)驗(yàn)條件改變，或者受實(shí)驗(yàn)環(huán)境的影響，使得樣品斑點(diǎn)顯色不好，還可以對薄層板進(jìn)行適當(dāng)加熱，以利于顯色。
[0014]本發(fā)明所述百分濃度均為體積百分濃度。
[0015]本發(fā)明的黃蜀葵花鑒別方法不僅適用于所有來源的、單一的(包括干品、鮮品、不同產(chǎn)地)黃蜀葵花藥材，同樣也適用于以所有來源黃蜀葵花藥材制備的人用藥品、食品、保健品、化妝品、獸藥等各種制成品(包括單方、復(fù)方制成品)中是否含有黃蜀葵花藥材的鑒別。
[0016]本發(fā)明所使用的蘆丁、金絲桃苷、槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品由中國藥品生物制品檢定所制備。以薄層色譜法鑒別黃蜀葵花依據(jù)中華人民共和國藥典(2010年版)的相應(yīng)規(guī)定進(jìn)行。
[0017]本發(fā)明鑒別方法成熟，經(jīng)過不同實(shí)驗(yàn)條件鑒別以及對多批不同產(chǎn)地、不同來源的黃蜀葵花藥材進(jìn)行鑒別對比，均能準(zhǔn)確鑒別藥材，專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好。進(jìn)而將本發(fā)明鑒別方法應(yīng)用于含有黃蜀葵花的制成品如復(fù)方黃葵顆粒中黃蜀葵花的鑒別，陰性無干擾，專屬性好，同樣具有很好的鑒別效果。
[0018]與現(xiàn)有藥典中黃蜀葵花藥材的鑒別方法比較，本發(fā)明的鑒別方法具有以下優(yōu)點(diǎn)。
[0019]1.專屬性更強(qiáng)。本發(fā)明方法同時(shí)采用蘆丁、金絲桃苷兩種對照品或蘆丁、金絲桃苷、槲皮素三種對照品作為參比物質(zhì)，來鑒別黃蜀葵花藥材及含黃蜀葵花藥材制成品，能夠更為全面地反映藥材質(zhì)量信息，更有效地避免假陽性結(jié)果，提高了鑒別專屬性。能夠在生產(chǎn)過程中更為全面、快速地檢驗(yàn)判定產(chǎn)品質(zhì)量，更好地控制黃蜀葵花藥材及其制劑的臨床安全性，保證產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定可靠。
[0020]2.供試品溶液制備方法簡便。直接加入(:卜4 一元醇的一種，采用超聲或回流等方法提取即可得到，相對于藥典方法需要配制鹽酸乙醇溶液，以鹽酸乙醇溶液加熱回流以使水解反應(yīng)完全簡便了很多。
[0021]3.鑒別時(shí)間縮短。整個(gè)操作過程在I小時(shí)內(nèi)即可完成，而藥典方法則至少需要2小時(shí)以上。
[0022]4.藥材、試劑使用量少。本發(fā)明鑒別方法僅需藥材0.1?0.5g，整個(gè)檢測僅需要Ch4—元醇、冰醋酸、三氯化鋁少數(shù)幾種試劑即可完成，而藥典方法則需要至少Ig藥材，整個(gè)檢測涉及鹽酸、乙醇、甲苯、乙酸乙酯、甲酸、三氯化鋁多種試劑，且試劑使用量大，有機(jī)溶劑毒性大。
[0023]5.方法靈敏度高。僅需極少量對照品即可以顯色明顯，靈敏度高。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0024]圖1為實(shí)施例1的薄層色譜展開效果圖。
[0025]圖2為實(shí)施例2的薄層色譜展開效果圖。
[0026]圖3為實(shí)施例3的薄層色譜展開效果圖。
[0027]圖4為實(shí)施例4的薄層色譜展開效果圖。
【具體實(shí)施方式】
[0028]實(shí)施例1 本實(shí)施例黃蜀葵花藥材來源于安徽亳州。
[0029]取黃蜀葵花藥材粉末0.lg，加甲醇10ml，置超聲波中處理20min充分溶解，濾過，取濾液作為供試品溶液；分別取蘆丁、金絲桃苷、槲皮素對照品，加甲醇分別制成每Iml含蘆丁 0.05mg、金絲桃苷0.lmg、槲皮素0.05mg的溶液,作為對照品溶液。
[0030]吸取上述四種溶液各10 μ L，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以60%冰醋酸為展開齊U，展距6cm，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，熱風(fēng)吹干，置365nm紫外光燈下檢視。色譜圖如圖1，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，由此可判定所鑒別藥材為黃蜀葵花。
[0031]實(shí)施例2
本實(shí)施例黃蜀葵花藥材來源于江蘇興化。
[0032]取黃蜀葵花藥材粉末0.5g，加乙醇10ml，置超聲波中處理20min充分溶解，濾過，取濾液作為供試品溶液；取蘆丁、金絲桃苷和槲皮素對照品同時(shí)加入乙醇中，制成每Iml含蘆丁 0.05mg、金絲桃苷0.lmg、槲皮素0.05mg的溶液，作為對照品溶液；另取實(shí)施例1來源于安徽亳州的黃蜀葵花藥材同法制成對照藥材溶液。
[0033]吸取上述三種溶液各5 μ L，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以75%冰醋酸為展開劑，展距6cm，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，熱風(fēng)吹干，置紫外光燈(365nm)下檢視。色譜圖如圖2，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，且與對照藥材色譜圖無明顯區(qū)別，由此可判定所鑒別藥材為黃蜀葵花。
[0034]實(shí)施例3
本實(shí)施例黃蜀葵花藥材來源于河北刑臺。
[0035]取黃蜀葵花藥材粉末0.5g，加正丁醇10ml，置超聲波中處理20min充分溶解，濾過，取濾液作為供試品溶液；分別取蘆丁、金絲桃苷對照品，分別加正丁醇制成每Iml含蘆丁 0.lmg、金絲桃苷0.3mg的溶液，作為對照品溶液。
[0036]吸取上述三種溶液各2 μ L，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以75%冰醋酸為展開劑，展距6cm，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，熱風(fēng)吹干，置紫外光燈(365nm)下檢視。色譜圖如圖3，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，由此可判定所鑒別藥材為黃蜀葵花。
[0037]實(shí)施例4
本實(shí)施例對復(fù)方黃葵顆粒中的黃蜀葵花藥材進(jìn)行鑒別，所用黃蜀葵花藥材來源于江蘇興化。
[0038]處方:黃蜀葵花1000g、敗醬草500g、粉萆蘚240g、虎杖400g、劉寄奴350g、姜黃250g、柴胡250g、酒大黃250g、白術(shù)250g、制何首烏200g。
[0039]制法:黃蜀葵花、姜黃，乙醇加熱回流提取I小時(shí),濾過,濾液回收乙醇,濃縮成稠膏；敗醬草、粉萆蘚、虎杖、劉寄奴、柴胡、酒大黃、白術(shù)、制何首烏八味，加水煎煮二次，每次I小時(shí)，合并煎液，加乙醇冷沉24小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇，濃縮；合并上述二種浸膏，加乳糖100g、糊精400g，混勻，干燥，制成1000g，即得。
[0040]取復(fù)方黃葵顆粒5g，加甲醇10ml，置超聲波中處理20min充分溶解，濾過，取濾液作為供試品溶液；取蘆丁、金絲桃苷對照品同時(shí)加入甲醇中，制成每Iml含蘆丁 0.lmg、金絲桃苷0.3mg的溶液，作為對照品溶液；另取除黃蜀葵花藥材的復(fù)方黃葵顆粒陰性樣品5g，力口甲醇10mL，置超聲波中處理20min充分溶解，濾過，取濾液作為陰性對照溶液。
[0041]吸取上述三種溶液各5 μ L，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以70%冰醋酸為展開劑，展距6cm，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，熱風(fēng)吹干，置紫外光燈(365nm)下檢視。色譜圖如圖4，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對照樣品無相應(yīng)斑點(diǎn)，由此可判定所鑒別藥物制成品中含有黃蜀葵花藥材。
【權(quán)利要求】
1.一種黃蜀葵花藥材的鑒別方法，是以蘆丁、金絲桃苷和槲皮素為對照品，采用薄層色譜法進(jìn)行鑒別，具體方法包括: 取黃蜀葵花藥材粉末0.1~0.5g，加Ch4—元醇10ml，充分溶解后，濾過，取濾液作為供試品溶液； 分別取蘆丁、金絲桃苷、槲皮素對照品，以Ch4—元醇制成每Iml含蘆丁0.05~0.1mg,金絲桃苷0.1~0.3mg、槲皮素0.05~0.1mg的溶液,作為蘆丁對照品溶液、金絲桃苷對照品溶液和槲皮素對照品 溶液；或?qū)⑻J丁、金絲桃苷和槲皮素對照品同時(shí)溶于(:卜4一元醇中，制成每Iml含蘆丁 0.05~0.lmg、金絲桃苷0.1~0.3mg、槲皮素0.05~0.1mg的溶液,作為對照品溶液； 分別吸取上述供試品溶液和對照品溶液各2~10 μ L，點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以60~75%冰醋酸為展開劑，展距6cm，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，熱風(fēng)吹干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與各對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
2.—種黃蜀葵花藥材的鑒別方法，是以蘆丁、金絲桃苷為對照品，采用薄層色譜法進(jìn)行鑒別，具體方法包括: 取黃蜀葵花藥材粉末0.1~0.5g，或相當(dāng)于0.1~0.5g黃蜀葵花藥材的含黃蜀葵花藥材制成品粉末，加C1~4 一元醇IOml，充分溶解后，濾過，取濾液作為供試品溶液； 分別取蘆丁、金絲桃苷對照品，以(:卜4 一元醇制成每Iml含蘆丁 0.05~0.lmg、金絲桃苷0.1~0.3mg的溶液，作為蘆丁對照品溶液、金絲桃苷對照品溶液；或?qū)⑻J丁、金絲桃苷對照品同時(shí)溶于C1^4 一元醇中，制成每Iml含蘆丁 0.05~0.lmg、金絲桃苷0.1~0.3mg的溶液，作為對照品溶液； 分別吸取上述供試品溶液和對照品溶液各2~10 μ L，點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以60~75%冰醋酸為展開劑，展距6cm，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，熱風(fēng)吹干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與各對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的黃蜀葵花藥材的鑒別方法，其特征是所述的充分溶解是將溶液置于超聲波中處理20min。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的黃蜀葵花藥材的鑒別方法，其特征是所述展開劑為70%冰醋酸。
【文檔編號】G01N30/90GK103487546SQ201310394319
【公開日】2014年1月1日 申請日期:2013年9月3日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月3日
【發(fā)明者】張愛榮, 王志敏, 賀婕, 金旭宇 申請人:王志敏