專利名稱：食物中鳥嘌呤和腺嘌呤檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及食物中鳥嘌呤和腺嘌呤的檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
近年來(lái)，痛風(fēng)病已經(jīng)變成危害人類健康的普遍疾病之一。痛風(fēng)病又名高尿血酸癥。主要原因是由于 人體內(nèi)嘌呤代謝紊亂產(chǎn)生過(guò)多尿酸引起的。長(zhǎng)期攝入高嘌呤食物如海鮮、肉類等食品，極易使人體內(nèi)產(chǎn)生過(guò)多嘌呤，引發(fā)嘌呤代謝的紊亂，從而導(dǎo)致高尿血酸癥。對(duì)于痛風(fēng)病患者應(yīng)嚴(yán)格控制嘌呤類食物的攝入量。由于我國(guó)對(duì)于食物中嘌呤含量的統(tǒng)計(jì)比較模糊，并且還沒(méi)有制定相應(yīng)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)能夠?qū)︵堰蔬M(jìn)行檢測(cè)。國(guó)內(nèi)對(duì)嘌呤的檢測(cè)發(fā)表的文章較少，且根據(jù)文章所提供的方法不能夠?qū)z測(cè)方法進(jìn)行重現(xiàn)。由于鳥嘌呤和腺嘌呤具有較大的極性和一定的堿性化合物特征，運(yùn)用液相色譜儀和常用的C18色譜柱有很大的困難。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種操作簡(jiǎn)單、靈敏快速、成本低廉的食物中鳥嘌呤和腺嘌呤檢測(cè)方法。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為:鳥嘌呤和腺嘌呤檢測(cè)方法，包括以下步驟:(I)對(duì)鳥嘌呤和腺嘌呤標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行液相色譜配紫外檢測(cè)器檢測(cè)；(2)根據(jù)步驟⑴的檢測(cè)結(jié)果繪制鳥嘌呤和腺嘌呤標(biāo)準(zhǔn)曲線；(3)待測(cè)樣品中鳥嘌呤和腺嘌呤的檢測(cè)前預(yù)處理；(4)對(duì)待測(cè)樣品的鳥嘌呤和腺嘌呤進(jìn)行液相色譜配紫外檢測(cè)器檢測(cè)，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果和標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出待測(cè)樣品中鳥嘌呤和腺嘌呤的含量。步驟⑵所述的檢測(cè)前預(yù)處理步驟為:準(zhǔn)確稱取0.200g待測(cè)樣品于IOml比色管中，加入IOmL三氟乙酸-甲酸溶液,放置在90°C水浴中I小時(shí)水解；水解完畢后，將溶液全部轉(zhuǎn)入IOOml旋蒸瓶中40°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干；然后用流動(dòng)相定容到5mL ;過(guò)0.22 μ m水相濾
膜上備用。本發(fā)明的鳥嘌呤和腺嘌呤檢測(cè)方法，通過(guò)鳥嘌呤和腺嘌呤標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制、酸性試劑對(duì)鳥嘌呤和腺嘌呤水解，借助高效液相色譜儀配紫外檢測(cè)器對(duì)食物中鳥嘌呤和腺嘌呤進(jìn)行檢測(cè)；根據(jù)檢測(cè)結(jié)果和標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出待測(cè)樣品中鳥嘌呤和腺嘌呤的含量。本發(fā)明的發(fā)明克服了鳥嘌呤和腺嘌呤在液相中保留不穩(wěn)定的缺點(diǎn)，操作簡(jiǎn)單、靈敏快速、成本低廉，重復(fù)性好。


圖1 圖5不同濃度的鳥嘌呤和腺嘌呤標(biāo)準(zhǔn)品液相色譜配紫外檢測(cè)器響應(yīng)值譜圖6 圖7分別為鳥嘌呤和腺嘌呤的標(biāo)準(zhǔn)曲線；圖8為實(shí)施例1中待測(cè)樣品中鳥嘌呤和腺嘌呤的液相色譜配紫外檢測(cè)器響應(yīng)值譜圖；圖9 圖11分別為樣品加標(biāo)量20 μ g、50 μ g、100 μ g的鳥嘌呤和腺嘌呤的液相色
譜配紫外檢測(cè)器響應(yīng)值譜圖。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1本實(shí)施例食物中鳥嘌呤和腺嘌呤的檢測(cè)方法，包括以下步驟:一、儀器和溶液配制:1、儀器:液相色譜儀(配紫外檢測(cè)器):Agilentl260LC ;水浴鍋:90°C ;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；pH計(jì)；十萬(wàn)分之一天平 2、溶液的配制(I)氫氧化鈉溶液(0.1moI/L):準(zhǔn)確稱量0.4g氫氧化鈉用水定容到100mL。(2)鳥嘌呤標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液:稱取一定質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)品，加入5mL氫氧化鈉溶液溶解，用水定容到lOOmL，配成500mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。(3)線嘌呤標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液:稱取一定質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)品，加入5mL氫氧化鈉溶液溶解，用水定容到lOOmL，配成500mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。(4)鳥嘌呤和腺嘌呤混合標(biāo)準(zhǔn)溶液:吸取一定體積的鳥嘌呤和腺嘌呤標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，配制成100mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。(5)乙酸銨溶液(流動(dòng)相):準(zhǔn)確稱取1.54g乙酸銨，用水定容到1L，用磷酸將pH調(diào)至3.0。(6)三氟乙酸-甲酸溶液:以體積比1:1配制三氟乙酸、甲酸的混酸溶液。二、對(duì)鳥嘌呤和腺嘌呤標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行液相色譜配紫外檢測(cè)器檢測(cè):1、分別配制 1.00mg/L、5.00mg/LU0.00mg/L、20.00mg/LU00.0Omg/L 的鳥嘌呤和腺嘌呤混合標(biāo)準(zhǔn)液，用高效液相色譜儀紫外檢測(cè)器進(jìn)行測(cè)定。液相色譜配紫外檢測(cè)器檢測(cè)條件為:安捷倫1260液相色譜配VWD檢測(cè)器；色譜柱:ASB-C18250mmX4.6mm，5.Ομπι ;流速:1.0mL/min ;柱溫:30 °C ;進(jìn)樣量 10 μ L ;檢測(cè)波長(zhǎng):254nm流動(dòng)相:0.02mol/L的乙酸銨溶液(pH = 3.0)；濃度為1.00mg/L,5.00mg/L、10.00mg/L,20.00mg/L、100.0Omg/L 的鳥嘌呤和腺嘌呤混合標(biāo)準(zhǔn)液的檢測(cè)譜圖分別對(duì)應(yīng)于圖1、圖2、圖3、圖4、圖5 ;2、以鳥嘌呤和腺嘌呤標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為縱坐標(biāo)，檢測(cè)器響應(yīng)值為橫坐標(biāo)分別繪制鳥嘌呤和腺嘌呤的標(biāo)準(zhǔn)曲線，分別見圖6、圖7 ;3、待測(cè)樣品中鳥嘌呤和腺嘌呤的檢測(cè)前預(yù)處理:準(zhǔn)確稱取0.200g(精確到小數(shù)點(diǎn)后三位)待測(cè)樣品于IOml比色管中，加入IOmL三氟乙酸-甲酸溶液，放置在90°C水浴中I小時(shí)水解；水解完畢后，將溶液全部轉(zhuǎn)入IOOml旋蒸瓶中40°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干；然后用流動(dòng)相定容到5mL ;過(guò)0.22 μ m水相濾膜；備用；4、對(duì)步驟3處理后的待測(cè)樣品進(jìn)行液相色譜配紫外檢測(cè)器檢測(cè)；檢測(cè)條件同步驟2的檢測(cè)條件；檢測(cè)譜圖如圖8所示。根據(jù)待測(cè)樣品的檢測(cè)器響應(yīng)值、鳥嘌呤和腺嘌呤的標(biāo)準(zhǔn)曲線，分別計(jì)算出待測(cè)樣品中鳥嘌呤和腺嘌呤的含量。實(shí)施例2本實(shí)施例采用樣品加標(biāo)回收率試驗(yàn)，對(duì)本發(fā)明方法的重復(fù)性進(jìn)行評(píng)估，樣品加標(biāo)回收率的檢測(cè)步驟如下:分別在樣品中加入濃度為100mg/L的鳥嘌呤和腺嘌呤混合標(biāo)準(zhǔn)溶液0.2ml、0.5ml、1.0ml，分別對(duì)應(yīng)加標(biāo)量20 μ g、50 μ g、100 μ g ;以不加標(biāo)準(zhǔn)溶液的樣品為空白對(duì)照；檢測(cè)方法同實(shí)施例1，響應(yīng)值譜圖分別見圖9、圖10、圖11 ;根據(jù)分析結(jié)果計(jì)算本發(fā)明的方法鳥嘌呤和腺嘌呤的加標(biāo)回收率，結(jié)果分別見表1、表2所示:表1樣品中鳥嘌呤含量和加標(biāo)回收率統(tǒng)計(jì)表
權(quán)利要求
1.食物中鳥嘌呤和腺嘌呤檢測(cè)方法，其特征在于:包括以下步驟: (1)對(duì)鳥嘌呤和腺嘌呤標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行液相色譜配紫外檢測(cè)器檢測(cè)； (2)根據(jù)步驟(I)的檢測(cè)結(jié)果繪制鳥嘌呤和腺嘌呤標(biāo)準(zhǔn)曲線； (3)待測(cè)樣品中鳥嘌呤和腺嘌呤的檢測(cè)前預(yù)處理； (4)對(duì)待測(cè)樣品的鳥嘌呤和腺嘌呤進(jìn)行液相色譜配紫外檢測(cè)器檢測(cè)，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果和標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出待測(cè)樣品中鳥嘌呤和腺嘌呤的含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的食物中鳥嘌呤和腺嘌呤檢測(cè)方法，其特征在于:所述檢測(cè)前預(yù)處理步驟為:準(zhǔn)確稱取0.200g待測(cè)樣品于IOml比色管中，加入IOmL三氟乙酸-甲酸溶液，放置在90°C水浴中I小時(shí)水解；水解完畢后，將溶液全部轉(zhuǎn)入IOOml旋蒸瓶中40V旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干；然后用流動(dòng)相定容到5mL ;過(guò)0.22 μ m水相濾膜上備用。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的食物中鳥嘌呤和腺嘌呤檢測(cè)方法，其特征在于:所述步驟I和步驟4的液相色譜配紫外檢測(cè)器檢測(cè)條件為:安捷倫1260液相色譜配VWD檢測(cè)器；色譜柱:ASB-C18250mmX4.6mm，5.Ομπι ;流速:1.0mL/min ;柱溫:30°C ;進(jìn)樣量 10 μ L ;檢測(cè)波長(zhǎng):254nm流動(dòng)相:0.02mol/L的乙酸 銨溶液(pH = 3.0)。
全文摘要
本發(fā)明涉及食物中鳥嘌呤和腺嘌呤的檢測(cè)方法。鳥嘌呤和腺嘌呤檢測(cè)方法，包括以下步驟(1)對(duì)鳥嘌呤和腺嘌呤標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行液相色譜配紫外檢測(cè)器檢測(cè)；(2)根據(jù)步驟(1)的檢測(cè)結(jié)果繪制鳥嘌呤和腺嘌呤標(biāo)準(zhǔn)曲線；(3)待測(cè)樣品中鳥嘌呤和腺嘌呤的檢測(cè)前預(yù)處理；(4)對(duì)待測(cè)樣品的鳥嘌呤和腺嘌呤進(jìn)行液相色譜配紫外檢測(cè)器檢測(cè)，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果和標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出待測(cè)樣品中鳥嘌呤和腺嘌呤的含量。本發(fā)明的鳥嘌呤和腺嘌呤檢測(cè)方法步驟簡(jiǎn)單，操作簡(jiǎn)便，重復(fù)性好，省時(shí)省力，靈敏快速、成本低廉。
文檔編號(hào)G01N30/02GK103235056SQ20131013804
公開日2013年8月7日 申請(qǐng)日期2013年4月12日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月12日
發(fā)明者傅鵬, 劉青, 劉剛, 紀(jì)偉 申請(qǐng)人:潤(rùn)德(山東)檢測(cè)技術(shù)有限公司