專利名稱：食物中鳥嘌呤和腺嘌呤檢測方法
技術領域：
本發(fā)明涉及食物中鳥嘌呤和腺嘌呤的檢測方法。
背景技術：
近年來，痛風病已經(jīng)變成危害人類健康的普遍疾病之一。痛風病又名高尿血酸癥。主要原因是由于 人體內嘌呤代謝紊亂產(chǎn)生過多尿酸引起的。長期攝入高嘌呤食物如海鮮、肉類等食品，極易使人體內產(chǎn)生過多嘌呤，引發(fā)嘌呤代謝的紊亂，從而導致高尿血酸癥。對于痛風病患者應嚴格控制嘌呤類食物的攝入量。由于我國對于食物中嘌呤含量的統(tǒng)計比較模糊，并且還沒有制定相應的國家標準能夠對嘌呤進行檢測。國內對嘌呤的檢測發(fā)表的文章較少，且根據(jù)文章所提供的方法不能夠對檢測方法進行重現(xiàn)。由于鳥嘌呤和腺嘌呤具有較大的極性和一定的堿性化合物特征，運用液相色譜儀和常用的C18色譜柱有很大的困難。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是彌補現(xiàn)有技術中的不足，提供一種操作簡單、靈敏快速、成本低廉的食物中鳥嘌呤和腺嘌呤檢測方法。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術方案為:鳥嘌呤和腺嘌呤檢測方法，包括以下步驟:(I)對鳥嘌呤和腺嘌呤標準品進行液相色譜配紫外檢測器檢測；(2)根據(jù)步驟⑴的檢測結果繪制鳥嘌呤和腺嘌呤標準曲線；(3)待測樣品中鳥嘌呤和腺嘌呤的檢測前預處理；(4)對待測樣品的鳥嘌呤和腺嘌呤進行液相色譜配紫外檢測器檢測，根據(jù)檢測結果和標準曲線，計算出待測樣品中鳥嘌呤和腺嘌呤的含量。步驟⑵所述的檢測前預處理步驟為:準確稱取0.200g待測樣品于IOml比色管中，加入IOmL三氟乙酸-甲酸溶液,放置在90°C水浴中I小時水解；水解完畢后，將溶液全部轉入IOOml旋蒸瓶中40°C旋轉蒸發(fā)至近干；然后用流動相定容到5mL ;過0.22 μ m水相濾
膜上備用。本發(fā)明的鳥嘌呤和腺嘌呤檢測方法，通過鳥嘌呤和腺嘌呤標準品標準曲線繪制、酸性試劑對鳥嘌呤和腺嘌呤水解，借助高效液相色譜儀配紫外檢測器對食物中鳥嘌呤和腺嘌呤進行檢測；根據(jù)檢測結果和標準曲線計算出待測樣品中鳥嘌呤和腺嘌呤的含量。本發(fā)明的發(fā)明克服了鳥嘌呤和腺嘌呤在液相中保留不穩(wěn)定的缺點，操作簡單、靈敏快速、成本低廉，重復性好。


圖1 圖5不同濃度的鳥嘌呤和腺嘌呤標準品液相色譜配紫外檢測器響應值譜圖6 圖7分別為鳥嘌呤和腺嘌呤的標準曲線；圖8為實施例1中待測樣品中鳥嘌呤和腺嘌呤的液相色譜配紫外檢測器響應值譜圖；圖9 圖11分別為樣品加標量20 μ g、50 μ g、100 μ g的鳥嘌呤和腺嘌呤的液相色
譜配紫外檢測器響應值譜圖。
具體實施例方式實施例1本實施例食物中鳥嘌呤和腺嘌呤的檢測方法，包括以下步驟:一、儀器和溶液配制:1、儀器:液相色譜儀(配紫外檢測器):Agilentl260LC ;水浴鍋:90°C ;旋轉蒸發(fā)儀；pH計；十萬分之一天平 2、溶液的配制(I)氫氧化鈉溶液(0.1moI/L):準確稱量0.4g氫氧化鈉用水定容到100mL。(2)鳥嘌呤標準儲備液:稱取一定質量的標準品，加入5mL氫氧化鈉溶液溶解，用水定容到lOOmL，配成500mg/L的標準儲備液。(3)線嘌呤標準儲備液:稱取一定質量的標準品，加入5mL氫氧化鈉溶液溶解，用水定容到lOOmL，配成500mg/L的標準儲備液。(4)鳥嘌呤和腺嘌呤混合標準溶液:吸取一定體積的鳥嘌呤和腺嘌呤標準儲備液，配制成100mg/L的混合標準溶液。(5)乙酸銨溶液(流動相):準確稱取1.54g乙酸銨，用水定容到1L，用磷酸將pH調至3.0。(6)三氟乙酸-甲酸溶液:以體積比1:1配制三氟乙酸、甲酸的混酸溶液。二、對鳥嘌呤和腺嘌呤標準品進行液相色譜配紫外檢測器檢測:1、分別配制 1.00mg/L、5.00mg/LU0.00mg/L、20.00mg/LU00.0Omg/L 的鳥嘌呤和腺嘌呤混合標準液，用高效液相色譜儀紫外檢測器進行測定。液相色譜配紫外檢測器檢測條件為:安捷倫1260液相色譜配VWD檢測器；色譜柱:ASB-C18250mmX4.6mm，5.Ομπι ;流速:1.0mL/min ;柱溫:30 °C ;進樣量 10 μ L ;檢測波長:254nm流動相:0.02mol/L的乙酸銨溶液(pH = 3.0)；濃度為1.00mg/L,5.00mg/L、10.00mg/L,20.00mg/L、100.0Omg/L 的鳥嘌呤和腺嘌呤混合標準液的檢測譜圖分別對應于圖1、圖2、圖3、圖4、圖5 ;2、以鳥嘌呤和腺嘌呤標準品的濃度為縱坐標，檢測器響應值為橫坐標分別繪制鳥嘌呤和腺嘌呤的標準曲線，分別見圖6、圖7 ;3、待測樣品中鳥嘌呤和腺嘌呤的檢測前預處理:準確稱取0.200g(精確到小數(shù)點后三位)待測樣品于IOml比色管中，加入IOmL三氟乙酸-甲酸溶液，放置在90°C水浴中I小時水解；水解完畢后，將溶液全部轉入IOOml旋蒸瓶中40°C旋轉蒸發(fā)至近干；然后用流動相定容到5mL ;過0.22 μ m水相濾膜；備用；4、對步驟3處理后的待測樣品進行液相色譜配紫外檢測器檢測；檢測條件同步驟2的檢測條件；檢測譜圖如圖8所示。根據(jù)待測樣品的檢測器響應值、鳥嘌呤和腺嘌呤的標準曲線，分別計算出待測樣品中鳥嘌呤和腺嘌呤的含量。實施例2本實施例采用樣品加標回收率試驗，對本發(fā)明方法的重復性進行評估，樣品加標回收率的檢測步驟如下:分別在樣品中加入濃度為100mg/L的鳥嘌呤和腺嘌呤混合標準溶液0.2ml、0.5ml、1.0ml，分別對應加標量20 μ g、50 μ g、100 μ g ;以不加標準溶液的樣品為空白對照；檢測方法同實施例1，響應值譜圖分別見圖9、圖10、圖11 ;根據(jù)分析結果計算本發(fā)明的方法鳥嘌呤和腺嘌呤的加標回收率，結果分別見表1、表2所示:表1樣品中鳥嘌呤含量和加標回收率統(tǒng)計表
權利要求
1.食物中鳥嘌呤和腺嘌呤檢測方法，其特征在于:包括以下步驟: (1)對鳥嘌呤和腺嘌呤標準品進行液相色譜配紫外檢測器檢測； (2)根據(jù)步驟(I)的檢測結果繪制鳥嘌呤和腺嘌呤標準曲線； (3)待測樣品中鳥嘌呤和腺嘌呤的檢測前預處理； (4)對待測樣品的鳥嘌呤和腺嘌呤進行液相色譜配紫外檢測器檢測，根據(jù)檢測結果和標準曲線，計算出待測樣品中鳥嘌呤和腺嘌呤的含量。
2.根據(jù)權利要求1所述的食物中鳥嘌呤和腺嘌呤檢測方法，其特征在于:所述檢測前預處理步驟為:準確稱取0.200g待測樣品于IOml比色管中，加入IOmL三氟乙酸-甲酸溶液，放置在90°C水浴中I小時水解；水解完畢后，將溶液全部轉入IOOml旋蒸瓶中40V旋轉蒸發(fā)至近干；然后用流動相定容到5mL ;過0.22 μ m水相濾膜上備用。
3.根據(jù)權利要求1或2所述的食物中鳥嘌呤和腺嘌呤檢測方法，其特征在于:所述步驟I和步驟4的液相色譜配紫外檢測器檢測條件為:安捷倫1260液相色譜配VWD檢測器；色譜柱:ASB-C18250mmX4.6mm，5.Ομπι ;流速:1.0mL/min ;柱溫:30°C ;進樣量 10 μ L ;檢測波長:254nm流動相:0.02mol/L的乙酸 銨溶液(pH = 3.0)。
全文摘要
本發(fā)明涉及食物中鳥嘌呤和腺嘌呤的檢測方法。鳥嘌呤和腺嘌呤檢測方法，包括以下步驟(1)對鳥嘌呤和腺嘌呤標準品進行液相色譜配紫外檢測器檢測；(2)根據(jù)步驟(1)的檢測結果繪制鳥嘌呤和腺嘌呤標準曲線；(3)待測樣品中鳥嘌呤和腺嘌呤的檢測前預處理；(4)對待測樣品的鳥嘌呤和腺嘌呤進行液相色譜配紫外檢測器檢測，根據(jù)檢測結果和標準曲線，計算出待測樣品中鳥嘌呤和腺嘌呤的含量。本發(fā)明的鳥嘌呤和腺嘌呤檢測方法步驟簡單，操作簡便，重復性好，省時省力，靈敏快速、成本低廉。
文檔編號G01N30/02GK103235056SQ20131013804
公開日2013年8月7日 申請日期2013年4月12日 優(yōu)先權日2013年4月12日
發(fā)明者傅鵬, 劉青, 劉剛, 紀偉 申請人:潤德(山東)檢測技術有限公司