專利名稱：果糖纈氨酸的制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及果糖纈氨酸氧化酶底物，即由葡萄糖和氨基酸反應形成的Amadori產(chǎn)物-果糖纈氨酸的制備方法。
背景技術：
血液中的糖化血紅蛋白反應了一段時期內(nèi)生物體內(nèi)的血糖水平，近年來被用作糖尿病診斷和治療的重要指標。目前市場上主要采用酶法用于檢測人體內(nèi)糖化血紅蛋白的含量，利用該法測定糖化血紅蛋白需用到一類特殊的酶類——果糖纈氨酸氧化酶，該酶作用于糖化多肽或糖化氨基酸，其作用產(chǎn)物經(jīng)過一系列氧化還原反應，最后通過終產(chǎn)物的顯色來確定糖化血紅蛋白的含量。因此果糖纈氨酸氧化酶為糖化血紅蛋白測定中的關鍵酶。目前研究表明，人血液中糖化血紅蛋白糖基化的位點為纈氨酸-NH2殘基，因此制備人血液糖化血紅蛋白的模擬底物，即果糖纈氨酸[N_( 1-脫氧-D-果糖-1-yl)-纈氨酸]，對篩選高活性、高穩(wěn)定性及高特異性的果糖纈氨酸氧化酶及研究其酶學性質(zhì)格外重要。該
底物的實質(zhì)即是氨基酸與還原糖通過美拉德(Maillard)反應生成的中間產(chǎn)物-Amadori
化合物。其反應原理是還原糖的羰基與氨基酸的氨基之間進行加成，加成物迅速失去I分子水轉(zhuǎn)變?yōu)橄７?Schiff)堿,再經(jīng)環(huán)化形成相應的N-取代的醒,最后通過Amadori重排形成較穩(wěn)定的1-氨基-1-脫氧-2-酮糖。具體的反應過程如下:
權利要求
1.一種果糖纈氨酸的制備方法，其特征在于:包括以下制備步驟: (1)以1 10重量份的L-纈氨酸、1(Γ50重量份的D-葡萄糖為原料，80 800重量份濃度為0.0f3mol/L、pH3飛的吡啶乙酸鹽溶液或吡啶甲酸鹽溶液為溶劑，控制反應溫度為1(T5(TC攪拌反應I飛天； (2)反應完畢后，過濾，所得的反應溶液控制真空度為-0.01'0.09MPa、溫度為3(T50°C進行減壓蒸干，得到干物質(zhì)； (3)將步驟(2)所得的干物質(zhì)以1:0.5~10的比例溶解于甲醇或乙醚中，在(T10°C低溫放置，析出淡黃色物質(zhì)，過濾，經(jīng)冷凍干燥后得白色固體物質(zhì)，即為果糖纈氨酸。
2.根據(jù)權利要求1所述的果糖纈氨酸的制備方法，其特征在于:所述的吡啶乙酸鹽為4-吡啶乙酸鹽、2-吡啶乙酸鹽或3-吡啶乙酸鹽。
3.根據(jù)權利要求2所述的果糖纈氨酸的制備方法，其特征在于:所述的吡啶乙酸鹽為4-吡啶乙酸鹽酸鹽。
4.根據(jù)權利要求1所述的果糖纈氨酸的制備方法，其特征在于:所述的吡啶甲酸鹽為4-吡啶甲酸鹽、2-吡啶甲酸鹽或3-吡啶甲酸鹽。
5.根據(jù)權利要求4所述的果糖纈氨酸的制備方法，其特征在于:所述的吡啶甲酸鹽為2-吡啶甲酸鹽酸鹽。
6.根據(jù)權利要求1所述的果糖纈氨酸的制備方法，其特征在于:所述的干物質(zhì)以1: 0.5 10的比例溶解于甲醇或乙醚中，其比例為重量/體積比。
全文摘要
本發(fā)明公開一種果糖纈氨酸的制備方法，步驟包括以1~10份的L-纈氨酸、10~50份的D-葡萄糖為原料，80~800份0.01~3mol/LpH3~6吡啶乙酸鹽溶液或吡啶甲酸鹽溶液為溶劑，溫度10~50℃攪拌反應1~5天；反應完畢后，過濾，所得的溶液減壓蒸干得到干物質(zhì)；將所得的干物質(zhì)溶解于甲醇或乙醚中，在0~10℃低溫放置，析出淡黃色物質(zhì)，過濾，經(jīng)冷凍干燥后得白色固體物質(zhì)，即為果糖纈氨酸。本發(fā)明具有制備步驟簡單、得率高，且得到的底物純度高的優(yōu)點。
文檔編號G01N21/31GK103113427SQ20131004781
公開日2013年5月22日 申請日期2013年2月6日 優(yōu)先權日2013年2月6日
發(fā)明者鄒炳德, 鄒繼華, 陸慧賢, 周海濱 申請人:寧波美康生物科技股份有限公司