專利名稱：一種葡萄糖檢測(cè)試紙的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于定量檢測(cè)葡萄糖含量的檢測(cè)試紙，包括用于葡萄糖檢測(cè)的測(cè)定試紙及利用這種試紙進(jìn)行檢測(cè)的方法，特別涉及一種基于中空結(jié)構(gòu)納米纖維的固定化多酶體系的葡萄糖檢測(cè)試紙。
背景技術(shù)：
糖尿病是世界性的多發(fā)病和常見(jiàn)病，隨著人們生活水平的提高和老年人口的增多，其發(fā)病率呈明顯上升趨勢(shì)。我國(guó)發(fā)病率已達(dá)到2.5-3%，十分接近歐美發(fā)達(dá)國(guó)家的2-5%。全世界約有兩億多病人，已成為全球性的衛(wèi)生保健問(wèn)題，并嚴(yán)重地威脅著人類的健康，成為僅次于心血管病、癌癥的第三大危險(xiǎn)疾病。因而，糖尿病的診斷和治療不僅是我國(guó)，也是全世界醫(yī)學(xué)界面臨的重大課題。目前，檢測(cè)葡萄糖含量最主要及簡(jiǎn)便的方法是利用血糖儀檢測(cè)，血糖儀的核心是一種適用于患者自我檢測(cè)血糖的試紙。患者可以通過(guò)一滴毛細(xì)血管全血作為樣本滴在血糖試紙上，然后利用血糖儀根據(jù)不同的試紙?jiān)磉M(jìn)行血糖含量測(cè)定。目前市場(chǎng)上血糖儀檢測(cè)的基本原理是一種利用葡萄糖氧化酶作為敏感元件來(lái)快速、準(zhǔn)確、方便的測(cè)量葡萄糖含量的生物傳感器。葡萄糖傳感器檢測(cè)裝置基于其使用變換器的物理化學(xué)原理可分為電化學(xué)傳感器、壓電傳感器、熱電傳感器、聲學(xué)傳感器、和光學(xué)傳感器。其中，在血糖儀中應(yīng)用最為廣泛的是電化學(xué)傳感器以及光學(xué)傳感器，電化學(xué)傳感器試紙包括試劑混合物以及一個(gè)或多個(gè)電極，其中該試劑混合物包含至少一種電子轉(zhuǎn)移劑即電子媒介物和分析物特異性生物催化蛋白質(zhì)如具體的酶。此類傳感器依靠電子媒介物和電極表面之間電子的轉(zhuǎn)移，并通過(guò)測(cè)量電化學(xué)氧化還原反應(yīng)發(fā)揮作用。電催化傳感器雖然具有長(zhǎng)期穩(wěn)定性，但由于它們對(duì)設(shè)備要求高、裝置復(fù)雜、對(duì)分析物選擇性較差而存在很大的問(wèn)題。光學(xué)傳感器試紙主要包括試劑混合物(分析物特異性生物催化蛋白質(zhì)如具體的酶和顯色試劑)，相對(duì)電化學(xué)傳感器來(lái)說(shuō)比較簡(jiǎn)單，無(wú)需復(fù)雜的電極之間電子的轉(zhuǎn)移，僅僅通過(guò)特殊顯色劑的顯色來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)葡萄糖濃度的檢測(cè)。普通的葡萄糖檢測(cè)試紙中的酶都是通過(guò)將酶溶液吸附或直接噴灑酶粉于空白試紙上將酶分子附著于試紙表面，但是此種方法載酶率低、操作繁瑣造成了大量的浪費(fèi)。為了保證使用有效期內(nèi)的酶活達(dá)到檢測(cè)靈敏度的要求，往往需要大量增加試劑中昂貴的酶的添加量，因此在一定程度上增加了葡萄糖檢測(cè)成本。即使這樣附著過(guò)量的酶，以上兩種試紙的儲(chǔ)存條件還是比較苛刻，通常需要干燥、避光、低溫和密封保存。主要是因?yàn)樵嚰堉械奶禺愋缘拿?葡萄糖氧化酶和過(guò)氧化物酶)穩(wěn)定性差，易失活和一些顯色試劑見(jiàn)光易分解導(dǎo)致的。[CN202414431U]提出了一種新型的血糖試紙的包裝來(lái)提高血糖試紙的穩(wěn)定性，這種包裝包括上設(shè)多個(gè)泡罩腔的本體，每個(gè)所述泡罩腔內(nèi)均勻獨(dú)立的儲(chǔ)存有血糖試紙，泡罩腔上方開(kāi)口，開(kāi)口位置封有鋁箔。這種實(shí)用新型設(shè)置了多個(gè)泡罩腔，則生產(chǎn)時(shí)可將每片血糖試紙獨(dú)立的放進(jìn)各個(gè)泡罩腔中，然后附上鋁箔；使用時(shí)，可以單獨(dú)的破壞泡罩腔上對(duì)應(yīng)未知的鋁箔，單獨(dú)的取出一片血糖試紙，不影響其他血糖試紙的儲(chǔ)存環(huán)境。但是此方法制備操作比較復(fù)雜,而且又進(jìn)一步的增加了血糖試紙的額外成本。各種專利都致力于提供一種更加方便快捷而且成本低的檢測(cè)方法，但是還是沒(méi)有很好的解決這一問(wèn)題，勢(shì)必使檢測(cè)的成本維持在很高的水平上。目前基于電化學(xué)葡萄糖傳感器的專利主要由以下幾種:[CN 101487814A]涉及了一種包含物為電子媒介體的納米金葡萄糖氧化酶?jìng)鞲衅鞯闹苽浞椒?。該發(fā)明將二茂鐵與巰基環(huán)糊精在有機(jī)溶劑中攪拌反應(yīng)，加入乙醇使反應(yīng)物沉淀分離，無(wú)水乙醇清洗沉淀，干燥，得黃色包含物電子媒介固體JfHAuCl4.4H20溶于DMF中，與另一溶有NaBH4和前述溶液迅速混合，攪拌并反應(yīng)，離心沉淀，固體產(chǎn)物再用乙醇:水混合溶劑洗滌，真空干燥；將固體產(chǎn)物溶于二次水中，取葡萄糖氧化酶溶于二次水中形成酶溶液；將兩溶液混合，將混合液滴在鉬圓盤電極表面，在戊二醛的飽和蒸汽中，得到包含物為電子媒介體的納米金葡萄糖氧化酶?jìng)鞲衅鳌１景l(fā)明雖然解決了第一第二代酶?jìng)鞲衅鞔嬖诘哪承┤毕?，但是制備過(guò)程過(guò)于繁瑣，實(shí)用性過(guò)低。[CN 102621207A]涉及了一種葡萄糖傳感器，該發(fā)明的葡萄糖傳感器的工作電極表面被葡萄糖氧化酶與三角銀納米顆粒復(fù)合膜所覆蓋。通過(guò)將三角銀納米顆粒用于葡萄糖傳感器，有效地提高了葡萄糖檢測(cè)器的靈敏度，使檢測(cè)限達(dá)到了 3-20ymol/L。[CN 101530327A]公布了一種皮下組織實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)用針狀電流式測(cè)定葡萄糖傳感器及其制作方法，包括一個(gè)針狀式參考電極和至少一個(gè)針狀式工作電極，工作電極包括導(dǎo)電層和酶膜層，其特征在于:所述工作電極還包括高分子材料內(nèi)膜層和高分子材料控制擴(kuò)散層，導(dǎo)電層、高分子材料內(nèi)膜層，酶膜層及高分子材料控制擴(kuò)散層由里至外依次覆蓋而成。按照木發(fā)明的制作方法，葡萄糖傳感器穩(wěn)定性好、靈敏性高、輸出電流與葡萄糖濃度的線性范圍廣泛、響應(yīng)時(shí)間短可連續(xù)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，酶結(jié)合的牢固性、穩(wěn)定性好，靈敏度、選擇性和重現(xiàn)性高。[CN 202355415U]實(shí)用新型專利涉及一種可以監(jiān)測(cè)人體體力活動(dòng)的物聯(lián)網(wǎng)血糖儀器。包括:帶面板的殼體，面板上設(shè)有顯示單元的液晶顯示屏和操控單元的多個(gè)操控鍵，殼體中設(shè)有人體運(yùn)動(dòng)能量消耗檢測(cè)單元，殼體中還設(shè)有血糖檢測(cè)單元，血糖檢測(cè)單元在所述的殼體上設(shè)有血糖試紙檢測(cè)位，血糖檢測(cè)單元與有線或無(wú)線通訊單元、顯示單元、操控單元電連接；操控單元設(shè)有能耗-血糖檢測(cè)轉(zhuǎn)換開(kāi)關(guān)，能耗-血糖檢測(cè)轉(zhuǎn)換開(kāi)關(guān)在所述面板上設(shè)有能耗-血糖檢測(cè)轉(zhuǎn)換操作鍵。本實(shí)用新型具有兩個(gè)監(jiān)測(cè)單元，用于監(jiān)測(cè)人體體力活動(dòng)所消耗的能量能耗監(jiān)測(cè)單元和監(jiān)測(cè)人體血糖的監(jiān)測(cè)單元。本實(shí)用新型在能耗監(jiān)測(cè)的同時(shí)，還可以監(jiān)測(cè)血糖，并將兩方面的監(jiān)測(cè)所獲得的數(shù)據(jù)通過(guò)網(wǎng)絡(luò)迅速的傳輸出去。目前基于光學(xué)葡萄糖傳感器的專利主要由以下幾種:[CN 101947115A]提供了一種基于光纖衰減全反射的植入式人體血糖濃度連續(xù)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)，由雙光路構(gòu)成，有光源、衰減器、分光鏡、光纖耦合裝置、光纖ATR傳感器、測(cè)量光探測(cè)器、參考光探測(cè)器、數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)以及計(jì)算機(jī)，光源經(jīng)過(guò)衰減器衰減后，經(jīng)分光鏡分為由測(cè)量光和參考光構(gòu)成的兩條光路，其中的一條光路是，測(cè)量光采用光纖耦合裝置，通過(guò)耦合方法耦合進(jìn)入光纖ATR傳感器，經(jīng)光纖ATR傳感器的透過(guò)光由測(cè)量光探測(cè)器接收；另一條光路是，參考光由參考光探測(cè)器直接接收；經(jīng)測(cè)量光探測(cè)器和參考光探測(cè)器所接收的信號(hào)由數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)同步采集，送往計(jì)算機(jī)進(jìn)行分析處理并顯示測(cè)量結(jié)果，計(jì)算機(jī)還與光源相連接。本發(fā)明采用在體直接測(cè)量方法，直接測(cè)量組織液中的葡萄糖濃度，避免了離體測(cè)量誤差。[CN 102469962A]提供一種從經(jīng)時(shí)地測(cè)定而得的生物體的光學(xué)光譜和校準(zhǔn)模型，以非侵入的方式經(jīng)時(shí)地演算血糖值的血糖值推定裝置。具備從多個(gè)校準(zhǔn)模型或者校準(zhǔn)模型制作用的多個(gè)數(shù)據(jù)組制作校準(zhǔn)模型的校準(zhǔn)模型制作機(jī)構(gòu)。以如下方式構(gòu)成:測(cè)定受檢者的生物體光譜而設(shè)定基準(zhǔn)光譜；求出在上述基準(zhǔn)光譜測(cè)定時(shí)間以外的時(shí)間測(cè)定的測(cè)定光譜與上述基準(zhǔn)光譜之差、即示差譜；根據(jù)上述示差譜的變化而變更上述演算中使用的校準(zhǔn)模型。由此，能夠進(jìn)行血糖值的推定，尤其是在經(jīng)時(shí)地監(jiān)控時(shí)能夠進(jìn)行精度極高的推定。此外，還有很多專利及文獻(xiàn)涉及到血糖儀。但大多是對(duì)血糖儀外觀上的一些小的改變。[CN 202421188U]涉及了一種新型的血糖檢測(cè)儀，包括:安裝血糖儀原件的外殼、顯示器、按鈕和試紙口，顯示器設(shè)置在外殼上部，按鈕設(shè)置在外殼中部，試紙口設(shè)置在外殼下部，還包括卡口采血筆支架，支架設(shè)置在外殼上，此設(shè)計(jì)唯一的不同在于在血糖檢測(cè)儀上安裝固定采血筆支架，可以將采血筆固定在血糖檢測(cè)儀上，使用攜帶方便。[CN 202421126U]提供了一種具有水電池的血糖儀，包括單片機(jī)，所述單片機(jī)的輸入端分別連有輸入電路和A/D轉(zhuǎn)換電路，輸出端連接有IXD顯示單元，所述A/D轉(zhuǎn)換電路的輸入端連接有測(cè)量血糖濃度值的借口電路，所述單片機(jī)輸入端還連接有水電池和測(cè)溫電路。本實(shí)用新型的特點(diǎn)在于通過(guò)水電池獲得提供血糖儀工作的能力，同時(shí)充分利用了綠色能源非常環(huán)保。[301925966S]、[301642379S]、[301926004S]、[301925968S]、[301925636S]、[301925711S]、[301925740S]、[302065336S]等分別都針對(duì)血糖儀的外觀設(shè)計(jì)發(fā)表專利。為了在保證高的檢測(cè)靈敏 度的同時(shí)，降低檢測(cè)試劑中酶的使用量、提高酶的穩(wěn)定性，簡(jiǎn)化制作工藝，降低制作成本，本發(fā)明設(shè)計(jì)一種新的葡萄糖檢測(cè)試紙，并提供利用這種試紙進(jìn)行葡萄糖檢測(cè)的方法。

發(fā)明內(nèi)容
為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明致力于開(kāi)發(fā)一種新的用于體外定量測(cè)定葡萄糖含量的檢測(cè)技術(shù)，主要包括用于葡萄糖檢測(cè)的測(cè)定試紙及利用這種試紙進(jìn)行檢測(cè)的方法。為了提高葡萄糖檢測(cè)試劑的穩(wěn)定性，并使檢測(cè)步驟更加簡(jiǎn)化，本發(fā)明提供一種用于葡萄糖檢測(cè)的檢測(cè)試紙，以及利用此檢測(cè)試紙的顏色變化進(jìn)行葡萄糖檢測(cè)的方法，其特征在于通過(guò)如下步驟制備出葡萄糖試紙，進(jìn)行葡萄糖的分析檢測(cè): 基于組合試劑A的葡萄糖檢測(cè)試紙:I)將一定質(zhì)量的葡萄糖氧化酶、過(guò)氧化物酶溶解于水中得到組合試劑A溶液；將該組合試劑A溶液與甘油充分混合，其中溶液與甘油的體積比為10:90-30:70 ;將該混合液作為同軸共紡靜電紡絲的內(nèi)相溶液，加入到微量進(jìn)樣器中；2)將一定質(zhì)量的鄰-聯(lián)二茴香胺溶于有機(jī)溶劑,并將一定質(zhì)量高分子聚合物溶于此有機(jī)溶劑中充分溶解，得到的透明溶液作為同軸共紡靜電紡絲的外相電紡液，加入到另一微量進(jìn)樣器中。其中外相電紡液是溶于隊(duì)1^-二甲基乙酰胺(內(nèi)含5-1011^/1]11的鄰-聯(lián)二茴香胺)的重量百分比為10 30%的聚氨酯溶液、溶于N，N-二甲基乙酰胺(內(nèi)含5-10mg/ml的鄰-聯(lián)二茴香胺)的重量百分比為10 30%的聚偏氟乙烯溶液、溶于氯仿(內(nèi)含5-10mg/ml的鄰-聯(lián)二茴香胺)的重量百分比為10 30%的聚乳酸溶液或溶于N，N-二甲基乙酰胺(內(nèi)含5-10mg/ml的鄰-聯(lián)二茴香胺)的苯乙烯馬來(lái)酸酐共聚物溶液；3)將內(nèi)、外相電紡液分別通過(guò)管線連接至同軸電紡噴絲頭的進(jìn)液口，將噴絲頭的出液口與高壓電源的正極連接，用鋁箔紙或不銹鋼網(wǎng)連接至高壓電源的負(fù)極作為接收板；4)利用兩臺(tái)注射泵分別控制內(nèi)、外相電紡液的流速，進(jìn)行同軸靜電紡絲，在接收板上得到具有中空結(jié)構(gòu)的聚合物納米纖維，其中用于葡萄糖檢測(cè)的組合試劑A被原位包埋在這種中空納米纖維的空腔中，而顯色劑鄰-聯(lián)二茴香胺則均勻分布在中空纖維的殼層中，從而制備出用于葡萄糖檢測(cè)的試紙；5)將上述步驟4)中所制備出的用于葡萄糖檢測(cè)的試紙用打孔器均勻裁剪成直徑為0.5cm左右大小的膜片；配制一系列已知濃度的葡萄糖溶液，用移液器取10-30 μ I葡萄糖溶液滴到裁剪好的膜片上，30s左右后觀察膜片顏色變化，或用光密度儀讀取膜片在440nm處的反射率，繪制已知葡萄糖濃度和反射率之間的工作曲線，或者將顯色后的膜片作為標(biāo)準(zhǔn)比色卡；在裁剪好的膜片上滴加10-30μ I未知濃度的葡萄糖溶液，30s左右后觀察膜片顏色變化，或用光密度儀讀取膜片在440nm處的反射率，即可根據(jù)工作曲線計(jì)算樣品中的葡萄糖濃度，也可以通過(guò)和標(biāo)準(zhǔn)比色卡對(duì)照，粗略估計(jì)樣品中葡萄糖的濃度。上述用于如權(quán)利要求1所述的用于葡萄糖檢測(cè)的試紙，其特征在于:上述步驟I)中組合試劑A溶液各組分含量如下:葡萄糖氧化酶:0.1-2.0g/L過(guò)氧化物酶:0.1-2.0g/LpH7.0的磷酸鹽緩沖液:50mM該檢測(cè)方法的原理如下:其中葡萄糖氧化酶特異性地將葡萄糖氧化為葡萄糖酸，并生成過(guò)氧化氫；過(guò)氧化物酶利用過(guò)氧化氫，將無(wú)色的鄰-聯(lián)二茴香胺氧化為紅棕色的氧化型產(chǎn)物。如果反應(yīng)發(fā)生在溶液體系中，則可以通過(guò)檢測(cè)溶液在440nm處吸光值的變化，來(lái)檢測(cè)反應(yīng)速率。為了提高酶的穩(wěn)定性，并且使檢測(cè)更加容易操作，本發(fā)明著重于提供一種利用上述反應(yīng)原理進(jìn)行葡萄糖檢測(cè)的試紙，其特征在于所制備出的試紙具有無(wú)紡布膜的形態(tài),原位包埋在中空納米纖維中的葡萄糖氧化酶、過(guò)氧化物酶在中空納米纖維的腔室中，保持游離分散的狀態(tài)，有效提高了酶催化反應(yīng)活性。當(dāng)葡萄糖溶液滴加到試紙上時(shí)，由于發(fā)生上述顯示反應(yīng)而使試紙變?yōu)樽丶t色，利用光密度儀測(cè)定膜在440nm處的折光率，并以空白膜的折光率為參比，計(jì)算折光率的差值Λ折光率(％)。通過(guò)測(cè)定不同葡萄糖濃度下的Λ折光率(％)，以Λ折光率(％) log (葡萄糖濃度)作圖，即可獲得葡萄糖檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。由于本發(fā)明所提供的用于血清總葡萄糖檢測(cè)的試紙具有無(wú)紡布膜的形態(tài)，還可以和24孔板或96孔板相結(jié)合，將包埋有葡萄糖氧化酶、過(guò)氧化物酶以及鄰-聯(lián)二茴香胺的納米纖維膜鋪設(shè)在孔板的表面，構(gòu)建Microarray微陣列，通過(guò)在孔板內(nèi)依次滴加待檢測(cè)的含葡萄糖的溶液，從而可以用于葡萄糖的高通量檢測(cè)。本發(fā)明所制備出的用于葡萄糖檢測(cè)的試紙，葡萄糖氧化酶、過(guò)氧化物酶被包埋的中空納米纖維的空腔內(nèi)，納米微環(huán)境為酶和輔酶提供特殊的穩(wěn)定性機(jī)制，因此其穩(wěn)定性得到了大幅度的提高。顯色劑分布在中空壁上，使得葡萄糖試紙能夠快速顯色，大大縮減了檢測(cè)所用時(shí)間，而且由于酶的高活性和高穩(wěn)定性，使得酶的用量減少，從而可以使檢測(cè)成本大幅度降低。


下面結(jié)合附圖及具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明。圖1實(shí)施例1的葡萄糖檢測(cè)工作曲線，在Unico 2800UV_Vis分光光度計(jì)上獲得。圖2實(shí)施例2所述原位裝載了葡萄糖氧化酶、過(guò)氧化物酶以及鄰-聯(lián)二茴香胺的中空聚氨酯納米纖維，即用于葡萄糖檢測(cè)的試紙的掃描電鏡照片(斷面圖)。圖3實(shí)施例2的葡萄糖檢測(cè)試紙檢測(cè)不同濃度葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液時(shí)，X-Rite 500光密度儀檢測(cè)的結(jié)果。圖4實(shí)施例2的葡萄糖檢測(cè)試紙工作曲線2，在X-Rite 500光密度儀上獲得。圖5實(shí)施例2所述，利用葡萄糖檢測(cè)試紙檢測(cè)待測(cè)樣品中葡萄糖濃度過(guò)程中，試紙顏色隨葡萄糖濃度的變化情況。圖6實(shí)施例2所述，葡萄糖檢測(cè)試紙的儲(chǔ)存穩(wěn)定性。
具體實(shí)施例方式下面以具體化的形式闡述本發(fā)明的實(shí)施方式，但本發(fā)明并不限制于該實(shí)施方式中。實(shí)施例1用于葡萄糖檢測(cè)的溶液形態(tài)試劑和檢測(cè)方法本實(shí)施例描述一種用于總葡萄糖檢測(cè)的測(cè)定試劑和檢測(cè)方法，試劑中各組分含量如下所示:葡萄糖氧化酶:0.01g/L過(guò)氧化物酶:0.01g/L鄰-聯(lián)二茴香胺:0.lmg/mLpH 7.0的磷酸鹽緩沖液:50mM其檢測(cè)方法是采用Unico 2800Uv-Vis分光光度計(jì)進(jìn)行檢測(cè)，操作如下:
權(quán)利要求
1.一種用于葡萄糖檢測(cè)的試紙，其特征在于制備步驟包括: 1)將一定質(zhì)量的葡萄糖氧化酶、過(guò)氧化物酶溶解于緩沖液中得到組合試劑A溶液；將該組合試劑A溶液與甘油充分混合，其中溶液與甘油的體積比為10:90-30:70 ;將該混合液作為同軸共紡靜電紡絲的內(nèi)相溶液，加入到微量進(jìn)樣器中； 2)將一定質(zhì)量的鄰-聯(lián)二茴香胺溶于有機(jī)溶劑，并將一定質(zhì)量高分子聚合物溶于此有機(jī)溶劑中充分溶解，得到的透明溶液作為同軸共紡靜電紡絲的外相電紡液，加入到另一微量進(jìn)樣器中。其中外相電紡液是溶于N，N-甲基乙酰胺(內(nèi)含5-10mg/ml的鄰-聯(lián)二茴香胺)的重量百分比為10 30%的聚氨酯溶液、溶于隊(duì)^二甲基乙酰胺(內(nèi)含5-1011^/1111的鄰-聯(lián)二茴香胺)的重量百分比為10 30%的聚偏氟乙烯溶液、溶于氯仿(內(nèi)含5-10mg/ml的鄰-聯(lián)二茴香胺)的重量百分比為10 30%的聚乳酸溶液或溶于N，N-二甲基乙酰胺(內(nèi)含5-10mg/ml的鄰-聯(lián)二茴香胺)的苯乙烯馬來(lái)酸酐共聚物溶液； 3)將內(nèi)、外相電紡液分別通過(guò)管線連接至同軸電紡噴絲頭的進(jìn)液口，將噴絲頭的出液口與高壓電源的正極連接，用鋁箔紙或不銹鋼網(wǎng)連接至高壓電源的負(fù)極作為接收板； 4)利用兩臺(tái)注射泵分別控制內(nèi)、外相電紡液的流速，進(jìn)行同軸靜電紡絲，在接收板上得到具有中空結(jié)構(gòu)的聚合物納米纖維，其中用于葡萄糖檢測(cè)的組合試劑A被原位包埋在這種中空納米纖維的空腔中，而顯色劑鄰-聯(lián)二茴香胺則均勻分布在中空纖維的殼層中，從而制備出用于葡萄糖檢測(cè)的試紙。
2.如權(quán)利要求1所述的用于葡萄糖檢測(cè)的試紙，其特征在于:上述步驟1)中組合試劑A溶液各組分含量如下: 葡萄糖氧化酶:0.1-2.0g/L 過(guò)氧化物酶:0.1-2.0g/L pH 7.0的磷酸鹽緩沖液:50mM。
3.如權(quán)利要求1所述的用于葡萄糖檢測(cè)的試紙，其特征在于所制備出的試紙具有無(wú)紡布膜的形態(tài)，原位包埋在中空納米纖維中的葡萄糖氧化酶、過(guò)氧化物酶在中空納米纖維的腔室中，保持游離分散的狀態(tài)。
4.利用權(quán)利要求1所述的葡萄糖檢測(cè)試紙進(jìn)行葡萄糖濃度的檢測(cè)的方法，其特征在于:將上述步驟4)中所制備出的用于葡萄糖檢測(cè)的試紙用打孔器均勻裁剪成直徑為0.5cm左右大小的膜片；配制一系列已知濃度的葡萄糖溶液，用移液器取10-30 μ I葡萄糖溶液滴到裁剪好的膜片上，30s左右后觀察膜片顏色變化，或用光密度儀讀取膜片在440nm處的反射率，繪制已知葡萄糖濃度和反射率之間的工作曲線，或者將顯色后的膜片作為標(biāo)準(zhǔn)比色卡；在裁剪好的膜片上滴加10-30 μ l未知濃度的葡萄糖溶液，30s左右后觀察膜片顏色變化，或用光密度儀讀取膜片在440nm處的反射率，即可根據(jù)工作曲線計(jì)算樣品中的葡萄糖濃度，也可以通過(guò)和標(biāo)準(zhǔn)比色卡對(duì)照，粗略估計(jì)樣品中葡萄糖的濃度。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種用于葡萄糖測(cè)定的試紙和檢測(cè)方法，利用同軸共紡靜電紡絲技術(shù)，將葡萄糖氧化酶、過(guò)氧化物酶原位包埋在中空的聚合物納米纖維的腔室內(nèi)，顯色劑鄰-聯(lián)二茴香胺均勻分布在中空納米纖維的殼層壁上，從而得到一種宏觀上具有無(wú)紡布膜形態(tài)的葡萄糖檢測(cè)試紙。當(dāng)向試紙上滴加葡萄糖溶液時(shí)，葡萄糖氧化酶氧化葡萄糖并產(chǎn)生過(guò)氧化氫，在過(guò)氧化物酶的催化作用下將無(wú)色的鄰-聯(lián)二茴香胺氧化成為有色的產(chǎn)物，從而使試紙顯色，通過(guò)測(cè)定試紙顏色變化進(jìn)行葡萄糖的定量檢測(cè)?；谥锌占{米纖維的葡萄糖檢測(cè)試劑具有制備簡(jiǎn)單、酶用量少、檢測(cè)操作簡(jiǎn)便、儲(chǔ)存穩(wěn)定性高的突出優(yōu)點(diǎn)，在準(zhǔn)確快速葡萄糖測(cè)定方面具有應(yīng)用前景。
文檔編號(hào)G01N21/78GK103115919SQ20121057995
公開(kāi)日2013年5月22日 申請(qǐng)日期2012年12月27日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月27日
發(fā)明者張松平, 姬曉元, 蘇志國(guó), 王占麗, 王平 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院過(guò)程工程研究所