一種熒光分析方法和裝置制造方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種熒光分析方法和裝置，具體地，本發(fā)明公開了一種用于定量檢測(cè)樣品中的待測(cè)物的滲漏檢測(cè)裝置，所述裝置包括(1)包含檢測(cè)區(qū)的多孔膜和(2)位于多孔膜下方的吸收墊。本發(fā)明還公開了一種基于所述滲漏檢測(cè)裝置的定量檢測(cè)待測(cè)物的檢測(cè)方法和一種基于所述檢測(cè)方法的檢測(cè)裝置。
【專利說明】一種熒光分析方法和裝置
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于體外檢測(cè)【技術(shù)領(lǐng)域】，具體地涉及一種基于測(cè)量熒光強(qiáng)度的分析方法和
>J-U裝直。
【背景技術(shù)】
[0002]在免疫檢測(cè)領(lǐng)域中，常常需要對(duì)各類抗原或抗體進(jìn)行定性或定量檢測(cè)?，F(xiàn)有技術(shù)中，以“競爭抑制和雙抗夾心”為基礎(chǔ)衍生出多種免疫反應(yīng)分析方法，如:放射免疫法、酶聯(lián)免疫法、化學(xué)發(fā)光法、時(shí)間分辨熒光法和熒光免疫法等，可用于確定病原微生物，對(duì)人體的特異性蛋白定量檢測(cè)，從而對(duì)疾病進(jìn)行輔助診斷或監(jiān)測(cè)等等，用途非常廣泛。這類免疫反應(yīng)分析方法，通常將捕獲抗體固定于固相載體，然后與抗原(目標(biāo)蛋白)反應(yīng)，洗滌后再與標(biāo)記抗體反應(yīng)，洗滌，最后檢測(cè)放射性強(qiáng)度、溶液吸光度或光信號(hào)等，從而報(bào)告檢測(cè)樣本中目標(biāo)蛋白的濃度。上述方法的自動(dòng)化免去了人工洗滌的煩瑣，但正因?yàn)樽詣?dòng)化，使得儀器體積龐大價(jià)格昂貴，一般只在大型實(shí)驗(yàn)室使用。
[0003]斑點(diǎn)金免疫滲濾技術(shù)(dotimmunogold filtration assay, DIGFA)是 Spielberg等最初于1989年通過檢測(cè)抗HIV建立，隨著膠體金技術(shù)、材料技術(shù)以及計(jì)算機(jī)的高速發(fā)展，斑點(diǎn)金免疫滲濾技術(shù)日臻完備，作為以膜為載體的膠體金快速診斷技術(shù)中的一種，具有檢測(cè)快速、便捷、不需要特殊設(shè)備、結(jié)果判斷直觀等優(yōu)點(diǎn)。由于該方法只需肉眼觀察即可，非專業(yè)人士也可操作，使急診、基層醫(yī)院、病人床邊和現(xiàn)場等遠(yuǎn)離大型實(shí)驗(yàn)室的地方開展相關(guān)檢測(cè)成為可能，所以應(yīng)用范圍相當(dāng)廣泛。如:已應(yīng)用于多種寄生蟲病標(biāo)志物、心臟病標(biāo)志物、傳染性疾病標(biāo)志物、毒物、性傳播疾病和其他生化指標(biāo)的檢測(cè)等，在其他領(lǐng)域如食品衛(wèi)生、環(huán)境保護(hù)等領(lǐng)域都有報(bào)道。
[0004]DIGFA法已經(jīng)超過20年的發(fā)展，但其基本的工作原理并未改變，這決定了到目前為止，它只用于定性或半定量檢測(cè)且靈敏度也不如前述的定量免疫分析方法，進(jìn)一步的應(yīng)用遇到了瓶頸。因此，本領(lǐng)域急需對(duì)現(xiàn)有的DIGFA方法進(jìn)行變革，在賦予其高靈敏度和定量準(zhǔn)確的新優(yōu)勢(shì)的同時(shí)，保持其快捷、簡便、成本低廉等特點(diǎn)，從而進(jìn)一步擴(kuò)展其應(yīng)用領(lǐng)域。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明提供了一種滲漏檢測(cè)裝置，用于定量檢測(cè)樣品中的待測(cè)物。
[0006]本發(fā)明提供了一種定量檢測(cè)待測(cè)物的檢測(cè)方法，所述方法靈敏度高，定量準(zhǔn)確。
[0007]本發(fā)明還提供了 一種定量檢測(cè)待測(cè)物的檢測(cè)裝置。
[0008]在本發(fā)明第一方面中，提供了一種滲漏檢測(cè)裝置，該滲漏檢測(cè)裝置包括:
[0009](I)包含檢測(cè)區(qū)的多孔膜，其中，所述的檢測(cè)區(qū)包含被熒光物質(zhì)標(biāo)記的固定化檢測(cè)齊U，并且
[0010](al)所述固定化檢測(cè)劑能與樣品中的待測(cè)物結(jié)合，從而形成“檢測(cè)劑一待測(cè)物”復(fù)合物；其中所述待測(cè)物還可與結(jié)合劑結(jié)合，從而當(dāng)檢測(cè)區(qū)接觸含待測(cè)物的樣品和結(jié)合劑后，在檢測(cè)區(qū)形成“檢測(cè)劑一待測(cè)物一結(jié)合劑”復(fù)合物；[0011]或者
[0012](bl)所述固定化檢測(cè)劑能與結(jié)合劑結(jié)合，從而形成“檢測(cè)劑一結(jié)合劑”復(fù)合物；其中所述結(jié)合劑還可與待測(cè)物結(jié)合，從而當(dāng)檢測(cè)區(qū)接觸含待測(cè)物和結(jié)合劑的混合溶液后，在檢測(cè)區(qū)形成“檢測(cè)劑一結(jié)合劑”復(fù)合物；
[0013]其中，所述結(jié)合劑被吸光物質(zhì)標(biāo)記，且所述吸光物質(zhì)影響所述熒光物質(zhì)的熒光強(qiáng)度；
[0014](2)位于多孔膜下方的吸收墊，所述吸收墊具有吸收能力，使得加至檢測(cè)區(qū)的樣品和液體透過多孔膜并被吸收墊吸收。
[0015]在另一優(yōu)選例中，所述的檢測(cè)區(qū)包含有一種或多種固定化檢測(cè)劑；較佳地，所述的結(jié)合劑數(shù)量為一種或多種，從而可同時(shí)用于檢測(cè)一種或多種待測(cè)物。
[0016]在另一優(yōu)選例中，所述的滲漏檢測(cè)裝置是定量檢測(cè)裝置。
[0017]在另一優(yōu)選例中，所述的待測(cè)物為抗原或抗體。
[0018]在另一優(yōu)選例中，所述的待測(cè)物是抗原，則所述的結(jié)合劑和檢測(cè)劑是可同時(shí)結(jié)合于所述抗原的抗體；或者所述的待測(cè)物是抗體，則所述的檢測(cè)劑和結(jié)合劑是可同時(shí)結(jié)合于所述抗體的抗原或所述抗體的抗體(抗抗體)。
[0019]在另一優(yōu)選例中，所述的待測(cè)物是抗原，則所述的結(jié)合劑是可結(jié)合于所述抗原的抗體，所述檢測(cè)劑是所述抗原的等同物；或者所述的待測(cè)物是抗體，則所述的結(jié)合劑是可結(jié)合于所述抗體的抗原或所述抗體的抗體(抗抗體)，所述檢測(cè)劑是所述抗體的等同物。
[0020]在本發(fā)明第二方面中，提供了一種滲漏檢測(cè)裝置，該滲漏檢測(cè)裝置包括:
[0021](I)包含檢測(cè)區(qū)的多孔膜，其中，所述的檢測(cè)區(qū)包含固定的第一檢測(cè)劑，其中，所述第一檢測(cè)劑被熒光物質(zhì)標(biāo)記，能與可流動(dòng)的第二檢測(cè)劑形成復(fù)合檢測(cè)劑，并且
[0022](a2)所述復(fù)合檢測(cè)劑能與樣品中的待測(cè)物結(jié)合，從而形成“復(fù)合檢測(cè)劑一待測(cè)物”復(fù)合物；所述待測(cè)物可與結(jié)合劑結(jié)合，從而當(dāng)檢測(cè)區(qū)接觸含待測(cè)物的樣品和結(jié)合劑后，在檢測(cè)區(qū)形成“復(fù)合檢測(cè)劑一待測(cè)物一結(jié)合劑”復(fù)合物；
[0023]或者
[0024](b2)所述復(fù)合檢測(cè)劑能與結(jié)合劑結(jié)合，從而形成“復(fù)合檢測(cè)劑一結(jié)合劑”復(fù)合物；其中所述結(jié)合劑還可與待測(cè)物結(jié)合，從而當(dāng)檢測(cè)區(qū)接觸含待測(cè)物和結(jié)合劑的混合溶液后，在檢測(cè)區(qū)形成“復(fù)合檢測(cè)劑一結(jié)合劑”復(fù)合物；
[0025]其中，所述結(jié)合劑被吸光物質(zhì)標(biāo)記，且所述吸光物質(zhì)影響所述熒光物質(zhì)的熒光強(qiáng)度；
[0026](2)位于多孔膜下方的吸收墊，所述吸收墊具有吸收能力，使得加至檢測(cè)區(qū)的樣品和液體透過多孔膜并被吸收墊吸收。
[0027]在另一優(yōu)選例中，所述的第二檢測(cè)劑的數(shù)量為一種或多種；較佳地，所述的結(jié)合劑數(shù)量為一種或多種，從而可同時(shí)用于檢測(cè)一種或多種待測(cè)物。
[0028]在另一優(yōu)選例中，所述復(fù)合檢測(cè)劑為“第一檢測(cè)劑一第二檢測(cè)劑”復(fù)合物。
[0029]在另一優(yōu)選例中，所述“復(fù)合檢測(cè)劑一待測(cè)物”復(fù)合物為“第一檢測(cè)劑一第二檢測(cè)劑一待測(cè)物”復(fù)合物。
[0030]在另一優(yōu)選例中，所述“復(fù)合檢測(cè)劑一待測(cè)物一結(jié)合劑”復(fù)合物為“第一檢測(cè)劑一第二檢測(cè)劑一待測(cè)物一結(jié)合劑”復(fù)合物。[0031]在另一優(yōu)選例中，所述“復(fù)合檢測(cè)劑一結(jié)合劑”復(fù)合物為“第一檢測(cè)劑一第二檢測(cè)劑一結(jié)合劑”復(fù)合物。
[0032]在另一優(yōu)選例中，所述的滲漏檢測(cè)裝置是定量檢測(cè)裝置。
[0033]在另一優(yōu)選例中，所述待測(cè)物為抗原或抗體。
[0034]在另一優(yōu)選例中，所述的待測(cè)物是抗原，則所述的結(jié)合劑和第二檢測(cè)劑是可同時(shí)結(jié)合于所述抗原的抗體；或者所述的待測(cè)物是抗體，則所述的第二檢測(cè)劑和結(jié)合劑是可同時(shí)結(jié)合于所述抗體的抗原或所述抗體的抗體(抗抗體)。
[0035]在另一優(yōu)選例中，所述的待測(cè)物是抗原，則所述的結(jié)合劑是可結(jié)合于所述抗原的抗體，所述第二檢測(cè)劑是所述抗原的等同物；或者所述的待測(cè)物是抗體，則所述的結(jié)合劑是可結(jié)合于所述抗體的抗原或所述抗體的抗體(抗抗體)，所述第二檢測(cè)劑是所述抗體的等同物。
[0036]在另一優(yōu)選例中，所述第一檢測(cè)劑為標(biāo)記熒光物質(zhì)的鏈親和素(SA)，則所述第二檢測(cè)劑被生物素(biotin)標(biāo)記。
[0037]在另一優(yōu)選例中，該滲漏檢測(cè)裝置還包括:
[0038]在吸收墊下方存在一底部裝置；
[0039]在多孔膜上方存在一蓋部裝置，所述蓋部裝置上具有可供加入樣品的開孔，且所述多孔膜位于該開孔下方。
[0040]在另一優(yōu)選例中，所述熒光物質(zhì)的激發(fā)或發(fā)射光譜與所述吸光物質(zhì)的吸收光譜全部或部分重疊。
[0041]在另一優(yōu)選例中，所述的待測(cè)物包括:蛋白、核酸或小分子化合物。
[0042]在另一優(yōu)選例中，所述的待測(cè)物是液相(溶液)、懸浮液或固相。
[0043]在另一優(yōu)選例中，所述的熒光物質(zhì)選自下組:熒光素、羧基熒光素、2-甲氧基熒光素、4，5_ 二甲氧基熒光素、羅丹明、藻紅蛋白、量子點(diǎn)、或稀土元素離子或其螯合物。
[0044]在另一優(yōu)選例中，所述的吸光物質(zhì)選自下組:膠體金、納米金棒、納米銀棒或其組
八
口 o
[0045]在另一優(yōu)選例中，所述的吸光物質(zhì)為納米金棒。
[0046]在另一優(yōu)選例中，所述的納米金棒的縱橫比為1.5-10，較佳地為1.5-5。
[0047]在另一優(yōu)選例中，所述的納米金棒的長度為10-200nm，較佳地為20-100nm。
[0048]在另一優(yōu)選例中，所述的膠體金是平均粒徑為10_70nm的膠體金顆粒。
[0049]在另一優(yōu)選例中，所述多孔膜上還包括不同于檢測(cè)區(qū)的對(duì)照區(qū)，所述對(duì)照區(qū)含有固定化的對(duì)照劑，其中，所述對(duì)照劑用于特異性結(jié)合被吸光物質(zhì)標(biāo)記的結(jié)合劑。
[0050]在另一優(yōu)選例中，所述對(duì)照區(qū)用于顯示待測(cè)物的檢測(cè)結(jié)果的有效性。
[0051]在本發(fā)明第三方面中，提供了一種定量檢測(cè)待測(cè)物的熒光分析方法，包括步驟:
[0052](I)包括:
[0053](al)將待測(cè)物樣品和結(jié)合劑分別添加于滲漏檢測(cè)裝置的檢測(cè)區(qū)，或?qū)⒋郎y(cè)物樣品和結(jié)合劑的混合物添加于所述的檢測(cè)區(qū)，
[0054]其中，所述的檢測(cè)區(qū)包含被熒光物質(zhì)標(biāo)記的固定化檢測(cè)劑，并且所述固定化檢測(cè)劑能與樣品中的待測(cè)物結(jié)合，從而形成“檢測(cè)劑一待測(cè)物”復(fù)合物；其中所述待測(cè)物可與結(jié)合劑結(jié)合，從而當(dāng)檢測(cè)區(qū)接觸含待測(cè)物的樣品和結(jié)合劑后，在檢測(cè)區(qū)形成“檢測(cè)劑一待測(cè)物一結(jié)合劑”復(fù)合物；
[0055]或者
[0056](a2)將第二檢測(cè)劑、待測(cè)物樣品和結(jié)合劑分別添加于滲漏檢測(cè)裝置的檢測(cè)區(qū)，或?qū)⒌诙z測(cè)劑、待測(cè)物樣品和結(jié)合劑的混合物添加于所述的檢測(cè)區(qū)，
[0057]其中，所述的檢測(cè)區(qū)包含固定的第一檢測(cè)劑，其中，所述第一檢測(cè)劑被熒光物質(zhì)標(biāo)記，能與可流動(dòng)的第二檢測(cè)劑形成復(fù)合檢測(cè)劑，并且所述復(fù)合檢測(cè)劑能與樣品中的待測(cè)物結(jié)合，從而形成“復(fù)合檢測(cè)劑一待測(cè)物”復(fù)合物；所述待測(cè)物可與結(jié)合劑結(jié)合，從而當(dāng)檢測(cè)區(qū)接觸第二檢測(cè)劑、含待測(cè)物的樣品和結(jié)合劑后，在檢測(cè)區(qū)形成“復(fù)合檢測(cè)劑一待測(cè)物一結(jié)合齊U”復(fù)合物；
[0058]并且，所述結(jié)合劑被吸光物質(zhì)標(biāo)記，且所述吸光物質(zhì)影響所述熒光物質(zhì)的熒光強(qiáng)度；
[0059](2):檢測(cè)所述檢測(cè)區(qū)的熒光強(qiáng)度F，從而測(cè)得待測(cè)物的存在與否或數(shù)量。
[0060]在本發(fā)明第四方面中，提供了一種定量檢測(cè)待測(cè)物的熒光分析方法，包括步驟:
[0061](I)包括:
[0062](bl)將待測(cè)物樣品和結(jié)合劑依次添加于滲漏檢測(cè)裝置的檢測(cè)區(qū)，或者將待測(cè)物樣品和結(jié)合劑的混合物添加于所述的檢測(cè)區(qū)，
[0063]其中，所述的檢測(cè)區(qū)包含被熒光物質(zhì)標(biāo)記的固定化檢測(cè)劑，并且所述固定化檢測(cè)劑能與結(jié)合劑結(jié)合，從而形成“檢測(cè)劑一結(jié)合劑”復(fù)合物；其中所述結(jié)合劑還可與待測(cè)物結(jié)合，從而當(dāng)檢測(cè)區(qū)接觸待測(cè)物樣品和結(jié)合劑后，在檢測(cè)區(qū)形成“檢測(cè)劑一結(jié)合劑”復(fù)合物；
[0064]或者
[0065](b2)將待測(cè)物樣品、第二檢測(cè)劑和結(jié)合劑依次添加于滲漏檢測(cè)裝置的檢測(cè)區(qū)，
[0066]或者
[0067]首先提供一將待測(cè)物樣品和第二檢測(cè)劑的第一混合物，然后將結(jié)合劑和第一混合物依次添加于所述的檢測(cè)區(qū)，或者將結(jié)合劑和第一混合物所形成的第二混合物添加于所述的檢測(cè)區(qū)，
[0068]或者
[0069]首先提供一待測(cè)物樣品和結(jié)合劑的第三混合物，然后將第二檢測(cè)劑和第三混合物依次添加于所述的檢測(cè)區(qū)，或者將第二檢測(cè)劑與第三混合物所形成的第四混合物添加于所述的檢測(cè)區(qū)，
[0070]其中，所述的檢測(cè)區(qū)包含固定的第一檢測(cè)劑，其中，所述第一檢測(cè)劑被熒光物質(zhì)標(biāo)記，能與可流動(dòng)的第二檢測(cè)劑形成復(fù)合檢測(cè)劑，并且所述復(fù)合檢測(cè)劑能與結(jié)合劑結(jié)合，從而形成“復(fù)合檢測(cè)劑一結(jié)合劑”復(fù)合物；其中所述結(jié)合劑可與待測(cè)物結(jié)合，從而當(dāng)檢測(cè)區(qū)接觸待測(cè)物樣品、第二檢測(cè)劑和結(jié)合劑后，在檢測(cè)區(qū)形成“復(fù)合檢測(cè)劑一結(jié)合劑”復(fù)合物；
[0071]并且，所述結(jié)合劑被吸光物質(zhì)標(biāo)記，且所述吸光物質(zhì)影響所述熒光物質(zhì)的熒光強(qiáng)度；
[0072](2)檢測(cè)所述檢測(cè)區(qū)的熒光強(qiáng)度F，從而測(cè)得待測(cè)物的存在與否或數(shù)量。
[0073]在另一優(yōu)選例中，所述步驟(2)包括:將檢測(cè)區(qū)的熒光強(qiáng)度F和標(biāo)準(zhǔn)曲線或者與未加樣的初始熒光強(qiáng)度I7O進(jìn)行比較，從而確定待測(cè)物的存在與否或數(shù)量。
[0074]在另一優(yōu)選例中，所述的待測(cè)物是液相(溶液)、懸浮液或固相。[0075]在另一優(yōu)選例中，當(dāng)待測(cè)物為固相時(shí)，步驟(I)還包括加入溶劑(如水或緩沖液)
[0076]在另一優(yōu)選例中，所述的方法還包括用已知濃度的待測(cè)物標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行測(cè)量，從而制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的步驟。
[0077]在本發(fā)明第五方面中，提供了一種定量檢測(cè)待測(cè)物的熒光檢測(cè)裝置，所述的裝置包括:
[0078](a) 一本發(fā)明第一方面或第二方面所述的滲漏檢測(cè)裝置；和
[0079](b) 一用于檢測(cè)熒光強(qiáng)度的檢測(cè)器。
[0080]在另一優(yōu)選例中，所述裝置還包括光源和計(jì)算機(jī)。
[0081]所述光源照射到檢測(cè)區(qū)處，激發(fā)出的熒光進(jìn)入檢測(cè)器，由計(jì)算機(jī)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和分析。
[0082]應(yīng)理解，在本發(fā)明范圍內(nèi)中，本發(fā)明的上述各技術(shù)特征和在下文(如實(shí)施例)中具體描述的各技術(shù)特征之間都可以互相組合，從而構(gòu)成新的或優(yōu)選的技術(shù)方案。限于篇幅，在
此不再一一累述。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0083]圖1A是滲漏檢測(cè)裝置示意圖。
[0084]圖1B是滲漏檢測(cè)裝置示意圖。
[0085]圖2是檢測(cè)裝置示意圖。
[0086]圖3是實(shí)施例1的AFP標(biāo)準(zhǔn)系列濃度(IgC)與相應(yīng)熒光強(qiáng)度(IgF)標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
[0087]圖4是實(shí)施例2的AFP標(biāo)準(zhǔn)系列濃度(IgC)與相應(yīng)熒光強(qiáng)度(IgF)標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
[0088]圖5是實(shí)施例3的CRP標(biāo)準(zhǔn)系列濃度(C)與相應(yīng)熒光強(qiáng)度(F)標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
【具體實(shí)施方式】
[0089]本發(fā)明人通過長期而深入的研究，發(fā)現(xiàn)了一種基于熒光淬滅原理的檢測(cè)方法，所述方法采用固定化的被熒光物質(zhì)標(biāo)記的檢測(cè)劑，不僅可以通過目測(cè)檢測(cè)區(qū)的顏色來判斷是否含有待測(cè)物，還可以通過測(cè)量檢測(cè)區(qū)處熒光強(qiáng)度的方式來定量檢測(cè)待測(cè)物。所述方法不僅具有靈敏度高，定量準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)，而且操作仍然十分簡便、快捷、且成本低廉。所述方法是基于本發(fā)明提供的一種滲濾測(cè)試裝置，通過一種含有光源和檢測(cè)器的裝置實(shí)現(xiàn)了對(duì)待測(cè)物的定量檢測(cè)。在此基礎(chǔ)上，發(fā)明人完成了本發(fā)明。
[0090]滲漏檢測(cè)裝置
[0091]現(xiàn)在更詳細(xì)地描述用于制造本發(fā)明滲漏檢測(cè)裝置的方法和材料。應(yīng)注意，滲漏檢測(cè)裝置的具體構(gòu)造可以變化，這取決于意圖用滲漏檢測(cè)裝置來進(jìn)行的具體測(cè)試。在實(shí)施例之外制造滲漏檢測(cè)裝置的變動(dòng)方法，也落于本發(fā)明范圍之中。
[0092]滲漏檢測(cè)裝置可包括蓋部裝置1，所述蓋部裝置具有一個(gè)用于加樣的開孔11，所述開孔可以是圓形、方形等多種形狀。
[0093]多孔膜2 (或微孔膜)位于蓋部裝置I的開孔下方，所述多孔膜包括:檢測(cè)區(qū)和優(yōu)選的設(shè)置有對(duì)照區(qū)，且通常對(duì)照區(qū)與檢測(cè)區(qū)之間有適當(dāng)?shù)目臻g。
[0094]吸收墊3位于多孔膜下方。
[0095]位于吸收墊下方還具有一底部裝置4。[0096]按圖1B所示，分別將多孔膜2、吸收墊3、蓋部裝置I和底部裝置4裝配成滲濾測(cè)試裝置，其中，多孔膜上已固定了被熒光物質(zhì)標(biāo)記的檢測(cè)劑。
[0097]所述滲漏檢測(cè)裝置可以是多種形式存在，例如板，片或盒等。以盒為例，所述蓋部裝置為盒蓋，所述底部裝置為盒底，可以將多孔膜安放在盒蓋開孔(如0.4?0.8cm的圓孔)正下方，吸收墊在多孔膜的正下方，緊密閉合蓋、底，使多孔膜貼緊吸收墊，即制備成圖1A所示的滲漏檢測(cè)裝置。
[0098]所述蓋部裝置和底部裝置可以用任何穩(wěn)定的、無孔的材料制成。因?yàn)樵S多測(cè)定用水作為擴(kuò)散介質(zhì)，因此底部裝置較佳地是基本上不透水的，且其強(qiáng)度應(yīng)足以支承粘于其的滲漏檢測(cè)裝置。在一個(gè)優(yōu)選例中，背襯片是用聚合物物(如塑料)制成的。
[0099]所述吸收墊可以用任何能吸收作為樣品和緩沖液的液體的材料制成。吸收墊片的吸收能力應(yīng)足夠大，以便吸收添加至滲漏檢測(cè)裝置的液體。適用于吸收墊片的材料的例子包括纖維素和玻璃纖維。
[0100]所述多孔膜可以用任何材料制成，只要該材料有足夠孔隙度從而允許在表面和內(nèi)部發(fā)生流體的毛細(xì)管作用。多孔膜應(yīng)有足夠的孔隙度，從而允許涂有抗體或抗原的顆粒移動(dòng)。多孔膜還可被含待檢測(cè)分析物的樣品中所用的液體潤濕(例如，對(duì)于水性液體具有親水性，對(duì)于有機(jī)溶劑具有疏水性)。通過例如在美國專利N0.4，340, 482或N0.4，618，533中所述的方法(這些方法描述了將疏水表面轉(zhuǎn)變成親水表面)，可以改變其疏水性從而使其具有親水性以便用于水性液體?？捎糜谥圃於嗫啄さ牟牧侠影?聚脂膜、纖維素、硝酸纖維素、乙酸纖維素、玻璃纖維、尼龍、聚電解質(zhì)離子交換膜、丙烯共聚物/尼龍、和聚醚砜(polyethersulfone)。在一優(yōu)選例中,所述多孔膜為硝酸纖維素膜片
[0101]檢測(cè)方法
[0102]本發(fā)明滲漏檢測(cè)裝置可用于大量不同的滲漏分析方法，而這些分析方法涉及一種或多種可流動(dòng)結(jié)合劑、一種固定化檢測(cè)劑和任選地涉及一種或多種可流動(dòng)的第二檢測(cè)劑。所述的固定化檢測(cè)劑被熒光物質(zhì)標(biāo)記，至少一種結(jié)合劑被吸光物質(zhì)標(biāo)記，當(dāng)熒光物質(zhì)標(biāo)記的檢測(cè)劑和吸光物質(zhì)標(biāo)記的結(jié)合劑結(jié)合后，可形成含有吸光物質(zhì)和熒光物質(zhì)的復(fù)合物。具體地，當(dāng)所述吸光物質(zhì)影響(部分淬滅或全部淬滅)所述熒光物質(zhì)的熒光強(qiáng)度時(shí)，本發(fā)明的檢測(cè)方法即可通過檢測(cè)熒光物質(zhì)的熒光強(qiáng)度來測(cè)定待測(cè)物的數(shù)量。
[0103]如本文所用，術(shù)語“待測(cè)物”、“其等同物”或“分析物”指待用滲漏檢測(cè)裝置檢測(cè)以及可任選地被定量測(cè)定的、樣品中的任何組份，待測(cè)物或其等同物或分析物的例子包括:蛋白質(zhì)，如激素或其他分泌蛋白質(zhì)、酶和細(xì)胞表面蛋白；糖蛋白；肽；小分子；多糖；抗體(包括單克隆抗體或多克隆抗體及其片段)；核酸；藥物(包括地高辛等強(qiáng)心甙類藥物)；毒素；病毒或病毒顆粒；細(xì)胞壁組份；或其他具有表位的化合物。
[0104]優(yōu)選地，所述的待測(cè)物包括腫瘤標(biāo)志物、心肌標(biāo)志物等特異性的蛋白，所述腫瘤標(biāo)志物選自下組:甲胎蛋白(AFP)、C-反應(yīng)蛋白(CRP)、癌胚抗原(CEA)、癌抗原125 (CA125)、糖抗原19-9 (CA19-9)、總前列腺特異性抗原(PSA)、游離前列腺特異性抗原(f-PSA)、神經(jīng)原特異性烯醇化酶(NSE)、糖鏈抗原(CA242)、癌抗原(CA15-3)、或人絨毛膜促性腺激素(3 -HCG)。
[0105]結(jié)合劑
[0106]本發(fā)明所用的結(jié)合劑可以是任何能夠結(jié)合于待測(cè)物或其等同物的物質(zhì)。具體地，為特異性結(jié)合待測(cè)物或其等同物的物質(zhì)。
[0107]有各種不同類型的分子可用作分析物結(jié)合劑，其中包括例如:寡核苷酸、抗體、工程化蛋白、肽、半抗原、或含有抗原(該抗原具有分析物結(jié)合位點(diǎn))的異源混合物的裂解物。P.Holliger 等人，Trends in Biotechnology 13:7-9 (1995) ; S.M.Chamow 等人，Trends inBiotechnology 14:52-60(1996)。如果待檢測(cè)分析物是配體,那么可使用結(jié)合于該配體的受體，反之亦然。
[0108]檢測(cè)劑
[0109]本發(fā)明所用的檢測(cè)劑可以是任何能與結(jié)合劑和/或樣品中的待測(cè)物或其等同物結(jié)合的物質(zhì)，包括例如:抗體、工程化蛋白、肽、半抗原、或含有抗原(該抗原具有分析物結(jié)合位點(diǎn))的異源混合物的裂解物。
[0110]優(yōu)選地，可以通過抗原和抗體的結(jié)合或寡核苷酸與互補(bǔ)核酸單鏈特異性結(jié)合的方式將含有熒光標(biāo)記的物質(zhì)與含有吸光物質(zhì)標(biāo)記的物質(zhì)結(jié)合；還可以通過生物素(biotin)和鏈親和素(Streptavidin，SA)的結(jié)合方式，從而將含有熒光標(biāo)記的物質(zhì)與含有吸光物質(zhì)標(biāo)記的物質(zhì)結(jié)合。
[0111]標(biāo)記物質(zhì)
[0112]連于結(jié)合劑或檢測(cè)劑的可檢測(cè)標(biāo)記物包括大量不同物質(zhì)，只要標(biāo)記物能夠被檢測(cè)。可檢測(cè)標(biāo)記物的例子包括(但并不限于):顆粒、發(fā)光標(biāo)記物；比色標(biāo)記物、熒光標(biāo)記物；化學(xué)標(biāo)記物；酶；放射性標(biāo)記物；或射頻標(biāo)記物；金屬膠體；和化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物。常用檢測(cè)方法的例子包括(但并不限于):光學(xué)方法，如測(cè)量光散射、單反射、光度計(jì)或光電倍增管；放射性(用蓋革計(jì)數(shù)器等進(jìn)行測(cè)量)；導(dǎo)電性或電介質(zhì)(電容)；電化學(xué)法檢測(cè)所釋放的電活性物質(zhì)，如銦、秘、鎵、締離子[如用Hayes等人(Analytical Chem.66:1860-1865 (1994)所述的方法]，或亞鐵氰化物[如用 Roberts 和 Durst (Analytical Chem.67:482-491 (1995)所提出的方法。其中通過在檢測(cè)區(qū)滴加洗滌劑，使包裹在脂質(zhì)體中的亞鐵氰化物被釋放出，然后用電化學(xué)法檢測(cè)釋放的亞鐵氰化物]。其他常規(guī)方法只要合適，也可使用。
[0113]在一個(gè)優(yōu)選例中，可檢測(cè)標(biāo)記物是顆粒?？墒褂玫念w粒例子包括(但并不限于):膠體金顆粒；膠體硫顆粒；膠體硒顆粒；膠體硫酸鋇顆粒；膠體硫酸鐵顆粒；金屬碘酸鹽顆粒；鹵化銀顆粒；二氧化娃顆粒；膠體(水合)金屬氧化物顆粒；膠體金屬硫化物顆粒；膠體硒化鉛顆粒；膠體硒化鎘顆粒；膠體金屬磷酸鹽顆粒；膠體金屬鐵酸鹽顆粒；涂有有機(jī)或無機(jī)層的上述任一種膠體顆粒；蛋白質(zhì)或肽分子；脂質(zhì)體；或有機(jī)聚合物乳膠顆粒，例如聚苯乙烯乳膠珠。
[0114]用于檢測(cè)劑的標(biāo)記物，本發(fā)明優(yōu)先選用熒光標(biāo)記物(簡稱熒光物質(zhì))，用于結(jié)合劑的標(biāo)記物，本發(fā)明優(yōu)先選用吸光物質(zhì)標(biāo)記物(簡稱吸光物質(zhì))。當(dāng)熒光標(biāo)記物和吸光標(biāo)記物通過特定的方式結(jié)合后，當(dāng)熒光物質(zhì)的激發(fā)或發(fā)射光譜與吸光物質(zhì)的吸收光譜部分或完全重疊時(shí),吸光物質(zhì)會(huì)影響(部分淬滅或全部淬滅)突光物質(zhì)的突光，從而通過檢測(cè)突光物質(zhì)的熒光強(qiáng)度來測(cè)定待測(cè)物的數(shù)量。
[0115]熒光物質(zhì)和吸光物質(zhì)的選擇
[0116]用于本發(fā)明標(biāo)記的熒光物質(zhì)和吸光物質(zhì)應(yīng)配合使用，基本原則是熒光物質(zhì)的激發(fā)或發(fā)射光譜與吸光物質(zhì)的吸收光譜部分或完全重疊。最優(yōu)的是完全重疊，如此會(huì)有較高的檢測(cè)靈敏度。[0117]代表性的突光物質(zhì)包括(但并不限于):突光素、羧基突光素、2-甲氧基突光素、4,5-二甲氧基突光素、羅丹明、藻紅蛋白(Phycoerythrin, PE)、量子點(diǎn)、稀土元素離子(如Eu3+)及其螯合物等組合，只要所選熒光物質(zhì)的激發(fā)或發(fā)射光譜與所選吸光物質(zhì)的吸收光譜
有重疊即可。
[0118]代表性的吸光物質(zhì)包括(但并不限于):膠體金、納米金棒、納米銀棒等組合，只要所選吸光物質(zhì)的吸收光譜與所選熒光物質(zhì)的激發(fā)或發(fā)射光譜重疊即可。
[0119]膠體金顆?？捎萌魏纬Ｒ?guī)方法制造,例如總結(jié)于G.Frens, 1973 Nature PhysicalScience, 241:20(1973)中的方法。其他方法描述于美國專利N0.5，578，577,5, 141，850、4，775，636、4，853，335、4，859，612、5，079，172、5，202，267、5，514，602、5，616，467、5，681，775。
[0120]如本文所用，術(shù)語“納米金棒”指具有一定縱橫比、且橫軸和縱軸處于5-200納米范圍的金顆粒。
[0121]一種特別優(yōu)選的吸光物質(zhì)是膠體金，尤其是粒徑為20-40nm的膠體金。
[0122]優(yōu)選地，本領(lǐng)域技術(shù)人員常用熒光標(biāo)記物質(zhì)包括PE，PE的吸收光譜在55(T650nm之間，最大發(fā)射波長為575nm,而30nm膠體金的吸收光譜在30(T800nm,較寬泛,最大吸收峰為525飛30nm處，與PE的發(fā)射光譜有部分重疊，所以選擇30nm膠體金作為相應(yīng)的吸光物質(zhì)。
[0123]熒光淬滅原理
[0124]含有熒光標(biāo)記的物質(zhì)與含有吸光物質(zhì)標(biāo)記的物質(zhì)結(jié)合后，當(dāng)熒光物質(zhì)的激發(fā)或發(fā)射光譜與作為熒光淬滅劑的吸光物質(zhì)的吸收光譜全部或部分重疊時(shí)，因共振能量轉(zhuǎn)移，吸光物質(zhì)會(huì)對(duì)該熒光物質(zhì)的熒光產(chǎn)生淬滅作用。
[0125]本發(fā)明中，引起熒光淬滅的原因包括兩個(gè)方面:一是復(fù)合物內(nèi)部吸光物質(zhì)對(duì)熒光物質(zhì)的淬滅；二是堆積在一起的復(fù)合物之間的相互淬滅，如:復(fù)合物甲的吸光物質(zhì)淬滅復(fù)合物乙的熒光，復(fù)合物乙的吸光物質(zhì)淬滅復(fù)合物丙的熒光，復(fù)合物丙的吸光物質(zhì)淬滅復(fù)合物甲的熒光，依此類推。
[0126]工作原理
[0127]現(xiàn)結(jié)合圖1A和圖1B和具體的實(shí)施方式說明本發(fā)明檢測(cè)方法的工作原理:
[0128]方法一、
[0129](1.1)選擇一檢測(cè)劑，所述檢測(cè)劑是對(duì)待測(cè)物特異性結(jié)合的物質(zhì)(如待測(cè)物為抗原，則檢測(cè)劑為該抗原的一抗體，記為Abl)，并預(yù)先對(duì)該檢測(cè)劑進(jìn)行熒光物質(zhì)標(biāo)記，生成經(jīng)熒光物質(zhì)標(biāo)記的檢測(cè)劑(記為F-Abl)，然后將其固定在多孔膜上。要求該熒光物質(zhì)的激發(fā)與發(fā)射光譜和吸光物質(zhì)(如膠體金)的吸收光譜全部或部分重疊。
[0130](1.2)通過加樣孔11，將含有待測(cè)物(如抗原，記為Ag)的樣品和結(jié)合劑(如抗原的膠體金標(biāo)記第二抗體，簡稱為抗原的金標(biāo)抗體，記為Ab2-G)加在多孔膜上，樣品中的待測(cè)物和結(jié)合劑與固定在此的熒光物質(zhì)標(biāo)記的針對(duì)抗原的檢測(cè)劑(F-Abl)結(jié)合，形成3元復(fù)合物，即“F-Abl-Ag-Ab2-G”夾心復(fù)合物，其中的金淬滅檢測(cè)區(qū)處的熒光物質(zhì)的熒光。
[0131](1.3)游離金標(biāo)抗體被對(duì)照區(qū)的對(duì)照劑(如抗金標(biāo)抗體的抗體)捕獲，呈現(xiàn)紅色，說明檢測(cè)有效。
[0132](1.4)測(cè)定檢測(cè)區(qū)處熒光物質(zhì)的熒光強(qiáng)度，熒光越強(qiáng)說明待測(cè)物濃度越低，反之則越高；如樣本中無抗原時(shí)，不能形成“夾心復(fù)合物”，則檢測(cè)區(qū)處的熒光強(qiáng)度為原始熒光強(qiáng)度。
[0133]方法二、
[0134]檢測(cè)區(qū)處也可固定其他能捕獲“夾心復(fù)合物”的熒光標(biāo)記物質(zhì)。
[0135](2.1)將含有待測(cè)物(如抗原，記為Ag)的樣品和兩種結(jié)合劑(如抗原的兩種抗體:膠體金標(biāo)記的抗體，也稱為抗原的金標(biāo)抗體，記為Ab2-G ；以及biotin標(biāo)記的抗體，記為Abl-biotin)混合后，待測(cè)物、金標(biāo)抗體和biotin標(biāo)記的抗體完全復(fù)溶后，形成如G-Ab2-Ag-Ab1-biotin 的 3 兀復(fù)合物。
[0136](2.2)通過加樣孔11，將所述3元復(fù)合物加在多孔膜上，固定在此的熒光標(biāo)記的能與biotin結(jié)合的檢測(cè)劑(如突光標(biāo)記的SA,記為F-SA)捕獲上述3元復(fù)合物，形成如G-Ab2-Ag-Abl-biotin-SA-F的4元復(fù)合物，其中的金淬滅檢測(cè)區(qū)處的熒光物質(zhì)的熒光。
[0137](2.3)游離金標(biāo)抗體被對(duì)照劑(如抗金標(biāo)抗體的抗體)捕獲，呈現(xiàn)紅色，說明檢測(cè)有效。
[0138](2.4)測(cè)定檢測(cè)區(qū)處熒光物質(zhì)的熒光強(qiáng)度，熒光越強(qiáng)說明待測(cè)物濃度越低，反之則越高；如樣本中無抗原時(shí)，不能形成“夾心復(fù)合物”，則檢測(cè)區(qū)處的熒光強(qiáng)度為原始熒光強(qiáng)度。
[0139]本發(fā)明還適用于競爭抑制法:
[0140]方法三、
[0141](3.1)將待測(cè)物的等同物(如待測(cè)物為抗原，該等同物為其標(biāo)準(zhǔn)抗原，記為AgO)標(biāo)記熒光，生成被熒光物質(zhì)標(biāo)記的檢測(cè)劑(記為F-AgO)，然后將其固定在圖1B的多孔膜上。
[0142](3.2)先將含有待測(cè)物(如抗原，記為Ag)的樣品、結(jié)合劑(如抗原的金標(biāo)抗體，記為Abl-G)混勻，形成含Ag-Abl-G的復(fù)合物的混合物，當(dāng)Abl-G的含量大于待測(cè)物的含量時(shí)，Abl-G會(huì)剩余。
[0143](3.3)通過加樣孔11，將步驟(3.2)的混合物滴加至多孔膜上(如滴加2?3滴，待完全滲入，可再通過加樣孔11滴加洗滌液2?3滴，待完全滲入)。固定在此的熒光標(biāo)記的檢測(cè)劑(如F-AgO)捕獲上述混合液中剩余的Abl-G，形成如F-AgO-Abl-G的復(fù)合物，其中的金淬滅檢測(cè)區(qū)處的熒光物質(zhì)的熒光。
[0144](3.4)測(cè)定檢測(cè)區(qū)處熒光物質(zhì)的熒光強(qiáng)度，熒光越強(qiáng)，待測(cè)物濃度越高，反之，則待測(cè)物的濃度越低；若樣本中無待測(cè)物，則多孔膜上檢測(cè)區(qū)處形成的“F-Ag0-Abl-G”最多，相應(yīng)地，熒光最弱。
[0145]方法四、
[0146](4.1)將待測(cè)物的等同物(如待測(cè)物為抗原，該等同物為其標(biāo)準(zhǔn)抗原，記為AgO)標(biāo)記biotin(記為biotin-AgO),而圖1B的多孔膜上固定標(biāo)記了突光物質(zhì)的檢測(cè)劑(記為F-SA)。
[0147](4.2)將含有待測(cè)物(如抗原，記為Ag)的樣品、結(jié)合劑(如抗原的金標(biāo)抗體，記為Abl-G)和標(biāo)記有biotin的待測(cè)物等同物混勻，形成含biotin-Ag0_Abl-G的復(fù)合物的混合物。
[0148]另一優(yōu)選例中，先將含有待測(cè)物的樣品、結(jié)合劑混勻，形成如Ag-Abl-G的復(fù)合物，當(dāng)Abl-G的含量大于Ag的含量時(shí)，Abl-G會(huì)剩余。再和標(biāo)記有biotin的待測(cè)物等同物混合，復(fù)溶，形成含biotin-AgO-Abl-G的復(fù)合物的混合物。
[0149]另一優(yōu)選例中，先將含有待測(cè)物的樣品和標(biāo)記有biotin的待測(cè)物等同物混勻，再和結(jié)合劑混合，復(fù)溶，形成含biotin-AgO-Abl-G的復(fù)合物的混合物。
[0150](4.3)通過加樣孔11，將步驟(4.2)得到的混合物滴加至多孔膜上(如滴加2~3滴，待完全滲入，可再通過加樣孔11滴加洗滌液2~3滴，待完全滲入)。固定在此的熒光標(biāo)記的檢測(cè)劑(如F-SA)捕獲上述混合液中biotin-AgO-Abl-G的復(fù)合物，形成如F-SA-biotin-AgO-Abl-G的復(fù)合物，其中的金淬滅檢測(cè)區(qū)處的熒光物質(zhì)的熒光。
[0151](4.4)測(cè)定檢測(cè)區(qū)處熒光物質(zhì)的熒光強(qiáng)度，熒光越強(qiáng)，待測(cè)物濃度越高，反之，則待測(cè)物的濃度越低；若樣本中無待測(cè)物，則多孔膜上檢測(cè)區(qū)處形成的“F-AgO-Abl-G”最多，相應(yīng)地，熒光最弱。
[0152]檢測(cè)裝置
[0153]現(xiàn)結(jié)合圖2說明本發(fā)明的檢測(cè)裝置:
[0154]如圖2所示，所述裝置可以包括:滲漏檢測(cè)裝置、檢測(cè)器、光源、光導(dǎo)纖維和計(jì)算機(jī)。還可以包括一份檢測(cè)方法的使用說明。其中滲漏檢測(cè)裝置的工作原理如上所述，熒光強(qiáng)度的檢測(cè)方法可以如下所述(但不僅限于此)，任何可用于檢測(cè)熒光強(qiáng)度的方法均可用于本發(fā)明的檢測(cè)裝置。
[0155]激發(fā)光通過Y型光導(dǎo)纖維的I個(gè)分支照射到多孔膜的檢測(cè)區(qū)處，激發(fā)出的熒光通過Y型光導(dǎo)纖維的另I分支進(jìn)入檢測(cè)器，由計(jì)算機(jī)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和分析。
[0156]本發(fā)明中，光源用于提供某一發(fā)射波長的光線，從而激發(fā)突光物質(zhì)發(fā)出突光?？蛇x用任何可以提供合適波長的光·源，包括(但不限于):LED、氙燈、鹵鎢燈、激光等。一種優(yōu)選的光源是激光光源，激光光源可用本領(lǐng)域常規(guī)的方法和設(shè)備(如激光器)產(chǎn)生。代表性的激光器包括(但并不限于):半導(dǎo)體激光器、氦氖激光器、氬離子激光器、還包括波長可選的激光器、多波長激光器和雙波長激光器等。
[0157]激光器產(chǎn)生的激光波長與激光介質(zhì)有關(guān)，常見的激光波長見下表:
[0158]
【權(quán)利要求】
1.一種滲漏檢測(cè)裝置，其特征在于，該滲漏檢測(cè)裝置包括: (1)包含檢測(cè)區(qū)的多孔膜，其中，所述的檢測(cè)區(qū)包含被熒光物質(zhì)標(biāo)記的固定化檢測(cè)劑，并且 (al)所述固定化檢測(cè)劑能與樣品中的待測(cè)物結(jié)合，從而形成“檢測(cè)劑一待測(cè)物”復(fù)合物；其中所述待測(cè)物還可與結(jié)合劑結(jié)合，從而當(dāng)檢測(cè)區(qū)接觸含待測(cè)物的樣品和結(jié)合劑后，在檢測(cè)區(qū)形成“檢測(cè)劑一待測(cè)物一結(jié)合劑”復(fù)合物； 或者(bl)所述固定化檢測(cè)劑能與結(jié)合劑結(jié)合，從而形成“檢測(cè)劑一結(jié)合劑”復(fù)合物；其中所述結(jié)合劑還可與待測(cè)物結(jié)合，從而當(dāng)檢測(cè)區(qū)接觸含待測(cè)物和結(jié)合劑的混合溶液后，在檢測(cè)區(qū)形成“檢測(cè)劑一結(jié)合劑”復(fù)合物； 其中，所述結(jié)合劑被吸光物質(zhì)標(biāo)記，且所述吸光物質(zhì)影響所述熒光物質(zhì)的熒光強(qiáng)度； (2)位于多孔膜下方的吸收墊，所述吸收墊具有吸收能力，使得加至檢測(cè)區(qū)的樣品和液體透過多孔膜并被吸收墊吸收。
2.一種滲漏檢測(cè)裝置，其特征在于，該滲漏檢測(cè)裝置包括: (1)包含檢測(cè)區(qū)的多孔膜，其中，所述的檢測(cè)區(qū)包含固定的第一檢測(cè)劑，其中，所述第一檢測(cè)劑被熒光物質(zhì)標(biāo)記，能與可流動(dòng)的第二檢測(cè)劑形成復(fù)合檢測(cè)劑，并且 (a2)所述復(fù)合檢測(cè)劑能與樣品中的待測(cè)物結(jié)合，從而形成“復(fù)合檢測(cè)劑一待測(cè)物”復(fù)合物；所述待測(cè)物可與結(jié)合劑結(jié)合，從而當(dāng)檢測(cè)區(qū)接觸含待測(cè)物的樣品和結(jié)合劑后，在檢測(cè)區(qū)形成“復(fù)合檢測(cè)劑一待測(cè)物一結(jié)合劑”復(fù)合物； 或者(b2)所述復(fù)合檢測(cè)劑能·與結(jié)合劑結(jié)合，從而形成“復(fù)合檢測(cè)劑一結(jié)合劑”復(fù)合物；其中所述結(jié)合劑還可與待測(cè)物結(jié)合，從而當(dāng)檢測(cè)區(qū)接觸含待測(cè)物和結(jié)合劑的混合溶液后，在檢測(cè)區(qū)形成“復(fù)合檢測(cè)劑一結(jié)合劑”復(fù)合物； 其中，所述結(jié)合劑被吸光物質(zhì)標(biāo)記，且所述吸光物質(zhì)影響所述熒光物質(zhì)的熒光強(qiáng)度； (2)位于多孔膜下方的吸收墊，所述吸收墊具有吸收能力，使得加至檢測(cè)區(qū)的樣品和液體透過多孔膜并被吸收墊吸收。
3.如權(quán)利要求1或2所述的滲漏檢測(cè)裝置，其特征在于，該滲漏檢測(cè)裝置還包括: 在吸收墊下方存在一底部裝置； 在多孔膜上方存在一蓋部裝置，所述蓋部裝置上具有可供加入樣品的開孔，且所述多孔膜位于該開孔下方。
4.如權(quán)利要求1或2所述的滲漏檢測(cè)裝置，其特征在于，所述熒光物質(zhì)的激發(fā)或發(fā)射光譜與所述吸光物質(zhì)的吸收光譜全部或部分重疊。
5.如權(quán)利要求1或2所述的滲漏檢測(cè)裝置，其特征在于，所述的待測(cè)物包括:蛋白、核酸或小分子化合物。
6.如權(quán)利要求1或2所述的滲漏檢測(cè)裝置，其特征在于，所述的熒光物質(zhì)選自下組:熒光素、羧基熒光素、2-甲氧基熒光素、4,5- 二甲氧基熒光素、羅丹明、藻紅蛋白、量子點(diǎn)、或稀土元素離子或其螯合物。
7.如權(quán)利要求1或2所述的滲漏檢測(cè)裝置，其特征在于，所述的吸光物質(zhì)選自下組:膠體金、納米金棒、納米銀棒或其組合。
8.如權(quán)利要求1或2所述的滲漏檢測(cè)裝置，其特征在于，所述多孔膜上還包括不同于檢測(cè)區(qū)的對(duì)照區(qū)，所述對(duì)照區(qū)含有固定化的對(duì)照劑，其中，所述對(duì)照劑用于特異性結(jié)合被吸光物質(zhì)標(biāo)記的結(jié)合劑。
9.一種定量檢測(cè)待測(cè)物的熒光分析方法，其特征在于，包括步驟: (1)包括: (al)將待測(cè)物樣品和結(jié)合劑分別添加于滲漏檢測(cè)裝置的檢測(cè)區(qū)，或?qū)⒋郎y(cè)物樣品和結(jié)合劑的混合物添加于所述的檢測(cè)區(qū)， 其中，所述的檢測(cè)區(qū)包含被熒光物質(zhì)標(biāo)記的固定化檢測(cè)劑，并且所述固定化檢測(cè)劑能與樣品中的待測(cè)物結(jié)合，從而形成“檢測(cè)劑一待測(cè)物”復(fù)合物；其中所述待測(cè)物可與結(jié)合劑結(jié)合，從而當(dāng)檢測(cè)區(qū)接觸含待測(cè)物的樣品和結(jié)合劑后，在檢測(cè)區(qū)形成“檢測(cè)劑一待測(cè)物一結(jié)合劑”復(fù)合物； 或者(a2)將第二檢測(cè)劑、待測(cè)物樣品和結(jié)合劑分別添加于滲漏檢測(cè)裝置的檢測(cè)區(qū)，或?qū)⒌诙z測(cè)劑、待測(cè)物樣品和結(jié)合劑的混合物添加于所述的檢測(cè)區(qū)， 其中，所述的檢測(cè)區(qū)包含固定的第一檢測(cè)劑，其中，所述第一檢測(cè)劑被熒光物質(zhì)標(biāo)記，能與可流動(dòng)的第二檢測(cè)劑形成復(fù)合檢測(cè)劑，并且所述復(fù)合檢測(cè)劑能與樣品中的待測(cè)物結(jié)合，從而形成“復(fù)合檢測(cè)劑一待測(cè)物”復(fù)合物；所述待測(cè)物可與結(jié)合劑結(jié)合，從而當(dāng)檢測(cè)區(qū)接觸第二檢測(cè)劑、含待測(cè)物的樣品和結(jié)合劑后，在檢測(cè)區(qū)形成“復(fù)合檢測(cè)劑一待測(cè)物一結(jié)合劑，，復(fù)合物; 并且，所述結(jié)合劑被吸光物質(zhì)標(biāo)記，且所述吸光物質(zhì)影響所述熒光物質(zhì)的熒光強(qiáng)度； (2):檢測(cè)所述檢測(cè)區(qū)的熒光強(qiáng)度F，從而測(cè)得待測(cè)物的存在與否或數(shù)量。
10.一種定量檢測(cè)待測(cè)物的熒光分析方法，其特征在于，包括步驟: (1)包括: (bl)將待測(cè)物樣品和結(jié)合劑依次添加于滲漏檢測(cè)裝置的檢測(cè)區(qū)，或者將待測(cè)物樣品和結(jié)合劑的混合物添加于所述的檢測(cè)區(qū)， 其中，所述的檢測(cè)區(qū)包含被熒光物質(zhì)標(biāo)記的固定化檢測(cè)劑，并且所述固定化檢測(cè)劑能與結(jié)合劑結(jié)合，從而形成“檢測(cè)劑一結(jié)合劑”復(fù)合物；其中所述結(jié)合劑還可與待測(cè)物結(jié)合，從而當(dāng)檢測(cè)區(qū)接觸待測(cè)物樣品和結(jié)合劑后，在檢測(cè)區(qū)形成“檢測(cè)劑一結(jié)合劑”復(fù)合物； 或者 (b2)將待測(cè)物樣品、第二檢測(cè)劑和結(jié)合劑依次添加于滲漏檢測(cè)裝置的檢測(cè)區(qū)， 或者首先提供一將待測(cè)物樣品和第二檢測(cè)劑的第一混合物，然后將結(jié)合劑和第一混合物依次添加于所述的檢測(cè)區(qū)，或者將結(jié)合劑和第一混合物所形成的第二混合物添加于所述的檢測(cè)區(qū)， 或者首先提供一待測(cè)物樣品和結(jié)合劑的第三混合物，然后將第二檢測(cè)劑和第三混合物依次添加于所述的檢測(cè)區(qū)，或者將第二檢測(cè)劑與第三混合物所形成的第四混合物添加于所述的檢測(cè)區(qū)， 其中，所述的檢測(cè)區(qū)包含固定的第一檢測(cè)劑，其中，所述第一檢測(cè)劑被熒光物質(zhì)標(biāo)記，能與可流動(dòng)的第二檢測(cè)劑形成復(fù)合檢測(cè)劑，并且所述復(fù)合檢測(cè)劑能與結(jié)合劑結(jié)合，從而形成“復(fù)合檢測(cè)劑一結(jié)合劑”復(fù)合物；其中所述結(jié)合劑可與待測(cè)物結(jié)合，從而當(dāng)檢測(cè)區(qū)接觸待測(cè)物樣品、第二檢測(cè)劑和結(jié)合劑后，在檢測(cè)區(qū)形成“復(fù)合檢測(cè)劑一結(jié)合劑”復(fù)合物； 并且，所述結(jié)合劑被吸光物質(zhì)標(biāo)記，且所述吸光物質(zhì)影響所述熒光物質(zhì)的熒光強(qiáng)度； (2)檢測(cè)所述檢測(cè)區(qū)的熒光強(qiáng)度F，從而測(cè)得待測(cè)物的存在與否或數(shù)量。
11.如權(quán)利要求9或10所述的方法，其特征在于，步驟(2)包括:將檢測(cè)區(qū)的熒光強(qiáng)度F和標(biāo)準(zhǔn)曲線或者與未加樣的初始熒光強(qiáng)度進(jìn)行比較，從而確定待測(cè)物的存在與否或數(shù)量。
12.一種定量檢測(cè)待測(cè)物的熒光檢測(cè)裝置，其特征在于，所述的裝置包括: (a)一權(quán)利要求1或2所述的滲漏檢測(cè)裝置；和 (b)一用于檢測(cè)熒光強(qiáng)度的檢測(cè) 器。
【文檔編號(hào)】G01N33/564GK103713126SQ201210378333
【公開日】2014年4月9日 申請(qǐng)日期:2012年9月29日 優(yōu)先權(quán)日:2012年9月29日
【發(fā)明者】不公告發(fā)明人 申請(qǐng)人:龐磊