葉酸受體α作為用于表達葉酸受體α的癌癥的診斷和預(yù)后標記的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了用于評價受試者是否患有表達FRα的癌癥的方法或試劑盒，用于預(yù)測患有表達FRα的癌癥的受試者中卵巢癌的方法或試劑盒，用于評價受試者將發(fā)展表達FRα的癌癥的風(fēng)險水平的方法或試劑盒，和將患有表達FRα的癌癥的受試者分層為癌癥治療組的方法。本發(fā)明涉及確定源自受試者的樣品中不與細胞結(jié)合的葉酸受體α(FRα)的水平且將該水平與對照樣品中的FRα水平進行比較。
【專利說明】葉酸受體Ct作為用于表達葉酸受體Ct的癌癥的診斷和預(yù)
后標記
[0001]相關(guān)串請
本申請要求2010年11月5日提交的美國臨時申請?zhí)?1/410，497和2011年7月15日提交的美國臨時申請?zhí)?1/508，444的申請日的權(quán)益，所述申請中每一篇的完整內(nèi)容通過引用并入本文。
[0002]發(fā)明背景
在人中，葉酸的高親和力受體源于三種同種型:a、0和Y。a和0形式通常通過糖基磷脂酰肌醇(GPI)錨與細胞膜結(jié)合。它們在細胞外和內(nèi)吞區(qū)室之間再循環(huán)，且能夠?qū)⑷~酸轉(zhuǎn)運進入細胞內(nèi)。FRa的可溶性形式可以通過蛋白酶或磷脂酶對膜錨定的葉酸受體的作用而衍生。
[0003]葉酸受體a (也稱為FR a、FR- a、F0LR-1或F0LR1)在各種上皮組織中表達，所述上皮組織包括脈絡(luò)叢、肺、甲狀腺、腎、子宮、乳房、輸卵管、附睪、和唾液腺。Weitman, SD等k,Cancer Res 52: 3396-3401 (1992) ；ffeitman 沒)等)k，Cancer Res 52: 6708-6711。已經(jīng)在各種癌癥中觀察到FR a的過表達，所述癌癥包括肺癌(例如細支氣管肺泡癌、類癌腫瘤、和非小細胞肺癌，如腺癌)；間皮瘤；卵巢癌；腎癌；腦癌(例如間變性室管膜瘤、小腦青少年毛細胞型星形細胞瘤、和腦腫瘤轉(zhuǎn)移)；子宮頸癌；鼻咽癌；中胚層衍生的腫瘤；頭頸部鱗狀細胞癌；子宮內(nèi)膜癌；卵巢的子宮內(nèi)膜樣腺癌、漿液性囊腺癌、乳腺癌；膀胱癌；胰腺癌；骨癌(例如高級骨肉瘤)；垂體癌(例如垂體腺瘤)；結(jié)腸直腸癌和骨髓甲狀腺癌。參見例如，美國專利號7, 754, 698 ;美國專利申請?zhí)?005/0232919 ；W0 2009/132081 ；Bueno R 等人 J of Thoracic and Cardiovascular Surgery, 121(2): 225-233 (2001)；Elkanat H & Ratnam M.Fro`ntiers in Bioscience, 11, 506-519 (2006) ；Fisher R.E.J Nucl Med, 49: 899-906 (2008) ；Franklin, Wk 等k Int J Cancer,增刊 8: 89-95(1994) ；Hartman L.C.等Int J Cancer 121: 938-942 (2007) ；Iwakiri S 等K Annalsof Surgical Oncology, 15(3): 889-899 ；Parker N.等人 Analytical Biochemistry,338: 284-293 (2005) ；ffeitman,沒)等k Cancer Res 52: 3396-3401 (1992) ；Saba N.F.等人 Head Neck, 31(4): 475-481 (2009) ；Yang R等人C/i/? Cancer Res 13: 2557-2567(2007)。在一些類型的癌癥(例如，頭頸部鱗狀細胞癌)中，F(xiàn)Ra表達的更高水平與預(yù)后更差相關(guān)，而在其他類型的癌癥(例如，非小細胞肺癌)中，F(xiàn)Ra表達的更高水平與預(yù)后更好相關(guān)。參見例如，Iwakiri S 等人 Annals of Surgical Oncology, 15(3): 889-899 ;SabaN.F.等k Head Neck, 31(4): 475-481 (2009)。
[0004]癌癥的更早期檢測提高存活率和生活質(zhì)量。為了提高早期診斷和治療的可能性，迫切需要用于診斷癌癥、用于確定發(fā)展癌癥的風(fēng)險水平、和用于預(yù)測癌癥的進展的非侵入性方法。本發(fā)明滿足這些對于表達FR a的癌癥的需要。
[0005]發(fā)明概沭
本發(fā)明提供了評價受試者是否患有表達FR a的癌癥(如肺癌或卵巢癌)的方法，評價在患有表達FRa的癌癥的受試者中表達FRa的癌癥(如肺癌或卵巢癌)的進展的方法，將表達FRa的癌癥的受試者分層為至少四個癌癥治療組之一的方法，評價卵巢癌或肺癌的M0RAb-003治療的效力的方法以及用于評價受試者是否患有表達FRa的癌癥(如肺癌或卵巢癌)或者用于評價在受試者中表達FRa的癌癥(如肺癌或卵巢癌)的進展的試劑盒。
[0006]評價受試者是否患有表達FR a的癌癥的方法
在第一個方面，本發(fā)明提供了評價受試者是否患有表達FRa的癌癥的方法，其通過確定在源自受試者的樣品中不與細胞結(jié)合的葉酸受體a (FRa)的水平而實現(xiàn)；并且將樣品中不與細胞結(jié)合的葉酸受體a (FRa)的水平與對照樣品中FRa的水平相比較，其中源自受試者樣品中FRa水平與對照樣品中FRa水平之間的差異是受試者患有表達FR a的癌癥的指示；其中通過將樣品與結(jié)合FRa的抗體接觸來評價源自受試者的樣品中FRa的水平。在特定的實施方案中，樣品是尿、血清、血漿或腹水。
[0007]在另一個方面，本發(fā)明涉及評價受試者是否患有表達FR a的癌癥的方法，其通過下列實現(xiàn):確定在源自受試者的尿樣品中不與細胞結(jié)合的葉酸受體a (FRa)的水平；并且將源自受試者尿樣品中不與細胞結(jié)合的葉酸受體a (FRa)的水平與對照樣品中FRa的水平相比較，其中源自受試者尿樣品中FRa水平與對照樣品中FRa水平之間的差異是受試者患有表達FRa的癌癥的指示。在進一步方面，本發(fā)明提供了評價受試者是否患有表達FRa的癌癥的方法，其通過下列實現(xiàn):確定在源自受試者的血清樣品中不與細胞結(jié)合的葉酸受體a (FRa)的水平；并且將源自受試者血清樣品中不與細胞結(jié)`合的葉酸受體a (FRa)的水平與對照樣品中FRa的水平相比較，其中源自受試者血清樣品中FRa水平與對照樣品中FRa水平之間的差異是受:試者患有表達FR a的癌癥的指不。
[0008]在本發(fā)明前述方面的各個實施方案中，表達FRa的癌癥選自肺癌、間皮瘤、卵巢癌、腎癌、腦癌、子宮頸癌、鼻咽癌、頭頸部鱗狀細胞癌、子宮內(nèi)膜癌、乳腺癌、膀胱癌、胰腺癌、骨癌、垂體癌、結(jié)腸直腸癌和骨髓甲狀腺癌。在特定實施方案中，表達FR a的癌癥是卵巢癌。在另一個實施方案中，表達FR a的癌癥是非小細胞肺癌，如腺癌。
[0009]在另一個方面，本發(fā)明涉及評價受試者是否患有卵巢癌的方法，其通過確定在源自受試者的尿樣品中不與細胞結(jié)合的葉酸受體a (FRa)的水平而實現(xiàn)，其中尿樣品中不與細胞結(jié)合的FRa以高于約9100 pg/ml的濃度存在是受試者患有卵巢癌的指示。
[0010]在本發(fā)明前述方面的各個方面，F(xiàn)Ra在尿樣品中存在的濃度高于約9500 pg/mL、約 10,000 pg/mL、約 11,000 pg/mL、約 12,000 pg/mL、約 13,000 pg/mL、約 14,000 pg/mL、約 15,000 pg/mL、約 16,000 pg/mL、約 17,000 pg/mL、約 18,000 pg/mL、約 19,000 pg/mL、或約20，000 pg/mL是受試者患有卵巢癌的指示。
[0011]在各個方面，F(xiàn)Ra的水平通過將樣品與結(jié)合FR a的抗體接觸來確定。例如，抗體選自:
(a)與M0RAb-003抗體結(jié)合相同表位的抗體；
(b)(I ,t SEQ ID NO:1 CGFTfSGYGLS > % CDRH L SEQ ID
NO;2 i MISSGGSYTY Y ADSVKG)為 CDRH2, SEQ ? NO:3 11ICDDPAWFA Yi 為 CDRH3, SEQ ID XO:4 (SVSSSISSNNLH) 'k CDRL1.SEQ ID KO:5 (GTSNLAS)為 CDRU 和 SEQ ID NO:6 (QOWSSYPYMYT)為 CDRlJ 的lit體:(C) MOV 18 抗體；
(d)與M0V18抗體結(jié)合相同表位的抗體；
(e)548908 抗體；
(f)與548908抗體結(jié)合相同表位的抗體；
(g)6D398抗體；
(h)與6D398抗體結(jié)合相同表位的抗體；
(i)與26B3抗體結(jié)合相同表位的抗體；
【權(quán)利要求】
1.評價受試者是否患有表達FRa的癌癥的方法，所述方法包括 確定在源自所述受試者的樣品中不與細胞結(jié)合的葉酸受體a (FRa)的水平；并且 將所述不與細胞結(jié)合的葉酸受體a (FRa)的水平與對照樣品中FRa的水平相比較，其中源自所述受試者的樣品中FRa水平與所述對照樣品中FRa水平之間的差異是所述受試者患有表達FRa的癌癥的指不； 其中通過將所述樣品與結(jié)合FR a的抗體接觸來評價源自所述受試者的樣品中不與細胞結(jié)合的FRa水平。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述樣品選自尿、血清、血漿或腹水。
3.權(quán)利要求1的方法，其中所述表達FRa的癌癥選自肺癌、間皮瘤、卵巢癌、腎癌、腦癌、子宮頸癌、鼻咽癌、頭頸部鱗狀細胞癌、子宮內(nèi)膜癌、乳腺癌、膀胱癌、胰腺癌、骨癌、垂體癌、結(jié)腸直腸癌和骨髓甲狀腺癌。
4.權(quán)利要求1的方法，其中所述表達FRa的癌癥是卵巢癌。
5.權(quán)利要求3的方法，其中所述表達FRa的癌癥是肺癌。
6.權(quán)利要求5的方法，其中所述表達FRa的癌癥是非小細胞肺癌。
7.權(quán)利要求6的方法，其中所述非小細胞肺癌是腺癌。`
8.權(quán)利要求1的方法，其中FRa在所述樣品中存在的濃度高于約9500pg/mL、約10,000 pg/mL、約 11,000 pg/mL、約 12,000 pg/mL、約 13,000 pg/mL、約 14,000 pg/mL、約15,000 pg/mL、約 16,000 pg/mL、約 17,000 pg/mL、約 18,000 pg/mL、約 19,000 pg/mL、或約20，000 pg/mL是所述受試者患有卵巢癌的指示。
9.權(quán)利要求1的方法，其中通過將所述樣品與選自下列的抗體接觸來確定所述FRa水平: (a)與M0RAb-003抗體結(jié)合相同表位的抗體；
(b)包含SEQ ID NO:1 (GFTFSGYGLS)作為 CDRHl、SEQ ID NO: 2 (MISSGGSYTYYADSVKG)作為 CDRH2、SEQ ID NO:3 (HGDDPAffFAY)作為 CDRH3、SEQ ID NO:4 (SVSSSISSNNLH)作為CDRLl、SEQ ID NO:5 (GTSNLAS)作為 CDRL2 和 SEQ ID NO:6 (QQffSSYPYMYT)作為 CDRL3 的抗體；
(c)MOV18 抗體； (d)與M0V18抗體結(jié)合相同表位的抗體；
(e)548908 抗體； (f)與548908抗體結(jié)合相同表位的抗體； (g)6D398抗體； (h)與6D398抗體結(jié)合相同表位的抗體； (i)與26B3抗體結(jié)合相同表位的抗體； (j)包含 SEQ ID NO:55 (GYFMN)作為 CDRHl、SEQ ID NO:56 (RIFPYNGDTFYNQKFKG)作為 CDRH2、SEQ ID NO: 57 (GTHYFDY)作為 CDRH3、SEQ ID NO: 51 (RTSENIFSYLA)作為 CDRLl、SEQ ID NO:52 (NAKTLAE)作為 CDRL2 和 SEQ ID NO:53 (QHHYAFPffT)作為 CDRL3 的抗體；
(k) 26B3 抗體； (I)與19D4抗體結(jié)合相同表位的抗體； (m)包含 SEQ ID NO:39 (HPYMH)作為 CDRHl、SEQ ID NO:40 (RIDPANGNTKYDPKFQG)作為 CDRH2、SEQ ID NO:41 (EEVADYTMDY)作為 CDRH3、SEQ ID NO:35 (RASESVDTYGNNFIH)作為 CDRLl、SEQ ID NO:36 (LASNLES)作為 CDRL2 和 SEQ ID NO:37 (QQNNGDPffT)作為 CDRL3的抗體；
(n) 19D4 抗體； (O)與9F3抗體結(jié)合相同表位的抗體；
(P)包含SEQ ID N0:31 (SGYYWN)作為CDRHl、SEQ ID NO:32 (YIKSDGSNNYNPSLKN)作為CDRH2、SEQ ID NO:33 (EffKAMDY)作為 CDRH3、SEQ ID NO:27 (RASSTVSYSYLH)作為 CDRLl、SEQ ID NO:28 (GTSNLAS)作為 CDRL2 和 SEQ ID NO:29 (QQYSGYPLT)作為 CDRL3 的抗體；(q)9F3 抗體； (r)與24F12抗體結(jié)合相同表位的抗體；
(s)包含SEQ ID NO:47 (SYAMS)作為CDRHl、SEQ ID NO:48 (EIGSGGSYTYYPDTVTG)作為CDRH2、SEQ ID NO:49 (ETTAGYFDY)作為 CDRH3、SEQ ID NO:43 (SASQGINNFLN)作為 CDRLl、SEQ ID NO:44 (YTSSLHS)作為 CDRL2 和 SEQ ID NO:45 (QHFSKLPffT)作為 CDRL3 的抗體；(t)24F12 抗體； (U)包含可變區(qū)輕鏈的抗體，所述可變區(qū)輕鏈選自LK26HuVK (SEQ ID NO: 13)；LK26HuVKY (SEQ ID NO:14) ；LK26HuVKPff (SEQ ID NO:15);和 LK26HuVKPW, Y (SEQ IDNO:16)； (V)包含可變區(qū)重鏈的抗體，所述可變區(qū)重鏈選自LK26HuVH (SEQ ID NO: 17)；LK26HuVH FAIS，N (SEQ ID NO:18) ；LK26HuVH SLF (SEQ ID NO:19) ；LK26HuVH I, I (SEQID NO:20);和 LK26K0LHuVH (SEQ ID N0:21)； (w)包含重鏈可變區(qū) LK26K0LHuVH (SEQ ID NO: 21)和輕鏈可變區(qū) LK26HuVKPW, Y (SEQID NO: 16)的抗體； (X)包含重鏈可變區(qū)LK26HuVH SLF (SEQ ID NO: 19)和輕鏈可變區(qū)LK26HuVKPW, Y(SEQ ID NO: 16)的抗體；和 (y)包含重鏈可變區(qū)LK26HuVH FAIS, N (SEQ ID NO: 18)和輕鏈可變區(qū) LK26HuVKPW, Y(SEQ ID NO: 16)的抗體。
10.權(quán)利要求1的方法，其中所述抗體選自鼠抗體、人抗體、人源化抗體、雙特異性抗體、嵌合抗體、Fab、Fab’ 2、ScFv、SMIP、親和抗體、高親合多聚體、versabody、納米抗體和結(jié)構(gòu)域抗體。
11.權(quán)利要求1的方法，其中所述抗體是標記的。
12.權(quán)利要求11的方法，其中所述抗體是用標記進行標記的，所述標記選自放射標記、生物素標記、發(fā)色團標記、熒光團標記、ECL標記和酶標記。
13.權(quán)利要求1的方法，其中所述FRa水平通過使用下列技術(shù)確定，所述技術(shù)選自western印跡分析、放射免疫測定、免疫熒光定量、免疫沉淀、平衡透析、免疫擴散、溶液相測定、電化學(xué)發(fā)光免疫測定(ECLIA)和ELISA測定。
14.權(quán)利要求1的方法，其中所述對照樣品包含在健康受試者中FRa的標準化對照水平。
15.權(quán)利要求1的方法，其中在測定所述樣品中的FRa水平之前用胍處理所述樣品。
16.權(quán)利要求1的方法，其中在測定所述樣品中的FRa水平之前稀釋所述樣品。
17.權(quán)利要求1的方法，其中在測定所述樣品中的FRa水平之前，離心、渦旋或離心和渦旋所述樣品。
18.權(quán)利要求1的方法，其中通過將所述樣品與選自下列的抗體對接觸來評價源自所述受試者的樣品中的FRa水平 (a)固定到固體載體的M0V18抗體和標記的M0RAB-003抗體； (b)固定到固體載體的9F3抗體和標記的24F12抗體； (c)固定到固體載體的26B3抗體和標記的19D4抗體；和 (d)固定到固體載體的9F3抗體和標記的26B3抗體。
19.評價在患有表達FRa的癌癥的受試者中表達FR a的癌癥的進展的方法，所述方法包括 確定在源自所述受試者的樣品中不與細胞結(jié)合的葉酸受體a (FRa)的水平；并且將所述不與細胞結(jié)合的葉酸受體a (FRa)的水平與對照樣品中FRa的水平相比較，其中與所述對照樣品中的FRa水平相比，源自所述受試者的樣品中的FRa水平的增加是所述癌癥將迅速進展的指示；并且其中與所述對照樣品中的FRa水平相比，源自所述受試者的樣品中的FRa水平的降低是癌癥將緩慢進展或?qū)⑼嘶闹甘?，從而評價在所述受試者中所述表達FRa的癌癥的進展； 其中通過將所述樣品與結(jié)合FR a的抗體接觸來評價源自所述受試者的樣品中所述不與細胞結(jié)合的FRa水平。
20.將患有表達FRa的癌癥的受試者分層為至少四個癌癥治療組之一的方法，其包括: 確定在源自所述受試者的樣品中不與細胞結(jié)合的葉酸受體a (FRa)的水平；并且 基于所述不與細胞結(jié)合的葉酸受體a (FRa)的水平，將所述受試者分層為至少四個癌癥治療組之一； 其中通過將所述樣品與結(jié)合FR a的抗體接觸來評價源自所述受試者的樣品中所述不與細胞結(jié)合的FRa水平。
21.權(quán)利要求20的方法，其中所述表達FRa的癌癥是卵巢癌并且所述受試者被分層在I期、II期、III期或IV期卵巢癌中。
22.在患有卵巢癌或肺癌的受試者中監(jiān)測卵巢癌或肺癌的M0RAb-003治療的效力的方法，所述方法包括 確定在源自所述受試者的樣品中不與細胞結(jié)合的葉酸受體a (FRa)的水平，其中所述受試者以前已經(jīng)施用過M0RAb-003 ;并且 將所述源自所述受試者的樣品中不與細胞結(jié)合的葉酸受體a (FRa)的水平與對照樣品中FRa的水平相比較，其中與所述對照樣品中的FRa水平相比，所述源自所述受試者的樣品中FRa水平的增加是所述M0RAb-003治療無效的指示；并且其中與所述對照樣品中的FRa水平相比，源自所述受試者的樣品中FRa水平的降低是所述M0RAb_003治療有效的指/Jn o
23.預(yù)測患有卵巢癌或肺癌的受試者是否將對M0RAb-003治療響應(yīng)的方法，所述方法包括 確定在源自所述受試者的樣品中不與細胞結(jié)合的葉酸受體a (FRa)的水平；并且將所述源自所述受試者的樣品中不與細胞結(jié)合的葉酸受體a (FRa)的水平與對照樣品中FRa的水平相比較，其中所述源自所述受試者的樣品中的FRa水平與所述對照樣品中的FR a水平之間的差異是所述受試者將對M0RAb-003治療響應(yīng)的指示。
24.治療患有卵巢癌或肺癌的受試者的方法，所述方法包括 確定在源自所述受試者的樣品中不與細胞結(jié)合的葉酸受體a (FRa)的水平，其中所述樣品包括尿或血清；并且 將所述不與細胞結(jié)合的葉酸受體a (FRa)的水平與對照樣品中FRa的水平相比較，其中所述源自所述受試者的樣品中的FRa水平與所述對照樣品中的FRa水平之間的差異是所述受試者患有卵巢癌或肺癌的指示；并且 將治療有效量的M0RAb-003施用于所述受試者,從而治療所述患有卵巢癌或肺癌的受試者。
25.用于評價受試者是否患有表達FRa的癌癥或用于評價受試者中表達FRa的癌癥的進展的試劑盒，所述試劑盒包含 用于確定源自所述受試者的樣品中不與細胞結(jié)合的葉酸受體a (FRa)的水平的裝置；和 用于使用所述試 劑盒以評價所述受試者是否患有表達FRa的癌癥或評價表達FRa的癌癥的進展的說明書。
【文檔編號】G01N33/82GK103687618SQ201180064293
【公開日】2014年3月26日 申請日期:2011年11月4日 優(yōu)先權(quán)日:2010年11月5日
【發(fā)明者】D.J.奧香內(nèi)西, L.格拉索, S.萬, Q.曹, E.B.索默斯 申請人:莫福特克公司