專利名稱：5-fu的檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明一般涉及診斷試驗(yàn)，特別是在患者樣品中對(duì)于試驗(yàn)的組合物和診斷方法。
背景技術(shù)：
5-氟尿嘧啶(5-FU)是在癌癥治療中最重要的化療藥物之一。通常用于直腸癌，胃癌，乳腺癌和胰腺癌的各種化療方案。例如，5-FU単獨(dú)或者聯(lián)合療法比如FOLFOX和FOFIRI是在轉(zhuǎn)移性直腸癌中的標(biāo)準(zhǔn)ー線療法。但是，5-FU常常伴隨嚴(yán)重的副作用包括骨髄抑制，粘膜炎，皮炎，腹瀉，心臟毒性甚至死亡。這些副作用至少在某種90程度上是由現(xiàn)有的對(duì)單個(gè)患者的劑量測(cè)定方法導(dǎo)致的?，F(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)治療中劑量的決定方法-體表面積(BSA)僅僅考慮了患者的身高和體重。BSA沒(méi)有考慮許多影響5-FU代謝和效カ的因素比如基因型、年齡、性另O、疾病狀態(tài)、藥物相互作用、器官功能、和合并癥。因此，盡管是基于BSA的相同劑量給藥， 不同患者的5-FU血藥濃度有超過(guò)10倍的差別也就不足為奇。最近的學(xué)術(shù)研究表明，基于血漿5-FU濃度的藥物動(dòng)力學(xué)監(jiān)測(cè)的個(gè)體5-FU劑量調(diào)整可導(dǎo)致對(duì)5-FU的客觀反應(yīng)率的顯著提高。例見(jiàn)Gemelin et al. J. Clin. Oncol.，26(13) :2099-2105 (2008) ；C1imente-Marti et al.，J.Pharmaceut. Sci. ,92 (6)1155-1165(2003) ；Milano et al.，Int. J. Cancer, 41 :537-541 (1988)。這些研究表明接受5-FU治療的個(gè)體患者中的5-FU血液濃度的臨床檢測(cè)對(duì)于5-FU劑量調(diào)整、療效優(yōu)化和減少嚴(yán)重不良反應(yīng)無(wú)疑是需要的。發(fā)明概沭本發(fā)明提供了了ー種在患者樣品中檢測(cè)5-氟尿嘧啶的方法。第一方面，提供了在從接受了 5-FU和可選的其它藥物的患者取得的樣品中檢測(cè)5-FU的方法。該方法中，從攝入5-FU的患者中取得樣品，然后該樣品與ニ氫嘧啶脫氫酶(DPD)滅活劑混合，而后在該樣品中特別是與DH)滅活劑混合的狀態(tài)下測(cè)定5-FU的量。另ー方面，本發(fā)明提供了ー種用5-FU治療患者的方法，包括以下步驟給予患者第一劑5-氟尿嘧啶；測(cè)量取自該攝入5-FU患者的樣品中的5-FU含量，其中所述的樣品在體外摻入ー種DH)滅活劑形成混合物，其中所述樣品中5-FU的量最好是在有滅活劑存在的情況下測(cè)得的；然后給予該患者第二劑5-FU。第二劑給予5-FU的量是根據(jù)患者樣品中所測(cè)量的5-FU水平并基于預(yù)設(shè)最佳或目標(biāo)5-FU AUC來(lái)決定的。本發(fā)明也為5-FU檢驗(yàn)提供了一種處理接受了 5-FU并可選擇地的其它藥物療法患者的血液樣品的方法。在一實(shí)施方案中，該方法包括以下步驟 從攝入5-FU的患者中獲得含有5-FU的血液樣品；從血樣中分離出血漿；在分離血漿中添加DI3D滅活劑以組成混合物；然后將混合物送往實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行混合物中5-FU水平的分析試驗(yàn)。在另ー實(shí)施方案中，該方法包括以下步驟從攝入5-FU的患者中獲得含有5-FU的血液樣品；在血樣中添加Dro滅活劑以組成混合物；然后從混合物中分離出含有5-氟尿嘧啶和滅活劑的血漿。由此獲得的血漿可送往實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行5-FU檢驗(yàn)。在另ー種實(shí)施方案中，處理注入5-FU的患者的血液樣品的方法需要以下步驟-J人患者中獲得含有5-FU的血液樣品；在血樣中添加Dro滅活劑以組成混合物；然后將混合物送往實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行5-FU檢驗(yàn)。本發(fā)明的另一方面，提供了一種組合物，包括從攝入了 5-FU的患者中分離的、混有ニ氫嘧啶脫氫酶滅活劑的樣品，這里所說(shuō)的樣品是血液或血漿或血清，而滅活劑在組合物中的濃度至少為850ng/ml。另ー方面，本發(fā)明提供了ー個(gè)試劑盒包括以下成分在ー個(gè)容器內(nèi)(a)從攝入了5-FU的患者中分離的、混有濃度至少為850ng/ml的ニ氫嘧啶脫氫酶滅活劑的樣品；(b)將該樣品降溫至IOoC以下的手段。在本發(fā)明的各個(gè)方面中，最好樣品從上述患者中分離出來(lái)后5到10個(gè)小時(shí)之內(nèi)不冷凍。滅活劑的例子包括，例如，嘧啶或者吡啶衍生物，特別是尿嘧啶類似物比如恩尿嘧啶(eniluracil)和吉美拉西(Gimeracil)。樣品中的5-FU可通過(guò)任何已知的技術(shù)來(lái)檢驗(yàn)，t匕如，HPLC、Mass-Spec (質(zhì)譜)、或使用抗5-FU抗體的免疫分析。
除非另外定義，本說(shuō)明書(shū)中有關(guān)技術(shù)的和科學(xué)的術(shù)語(yǔ)與本領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)人員所通常理解的意思相同。雖然在實(shí)驗(yàn)或?qū)嶋H應(yīng)用中可以應(yīng)用與此間所述相似或相同的方法和材料，本文還是在下文中對(duì)材料和方法做了描述。在相沖突的情況下，以本說(shuō)明書(shū)包括其中定義為準(zhǔn)，另外，材料、方法和例子僅供說(shuō)明，而不具限制性。本發(fā)明的其他特點(diǎn)和優(yōu)勢(shì)將由下面的具體說(shuō)明和權(quán)利要求書(shū)作詳細(xì)的描述。附圖
簡(jiǎn)沭圖I是顯示實(shí)施于臨床環(huán)境中樣品處理方法的實(shí)施方案的圖表圖2是顯示恩尿嘧啶對(duì)防止血樣中5-FU的降解有效的圖表。圖3是5-こ烯基尿嘧啶，5-碘尿嘧啶和吉美拉西對(duì)穩(wěn)定血液樣品中5-FU都有效的圖表。圖4是顯示血液中低濃度的吉美拉西對(duì)抑制Dro調(diào)節(jié)的5-FU的降解有效的圖解。圖5是顯示長(zhǎng)時(shí)間在不經(jīng)過(guò)血漿分離的血液中保持有吉美拉西的影響的圖解。圖6是顯示轉(zhuǎn)移注射器裝配的一種實(shí)施方案圖。圖7A和7B是顯示轉(zhuǎn)移注射器裝配的一種實(shí)施方案圖。圖8是顯示轉(zhuǎn)移注射器裝配的一種實(shí)施方案圖。發(fā)明詳述I.樣品制備，5-FU檢驗(yàn)，組合物和試劑盒依照本發(fā)明的第一方面，提供了一種處理用于檢驗(yàn)5-FU的包含5-FU的患者樣品(例如，從用5-FU或5-FU前體藥物治療的患者中取得)的方法。該方法導(dǎo)致樣品中5-氟尿嘧啶穩(wěn)定性增強(qiáng)而且顯著提高5-FU檢測(cè)的精確性。因此，在另一方面，本發(fā)明也提供了一種使用根據(jù)處理方法處理的患者樣品進(jìn)行5-FU檢驗(yàn)的方法。一般來(lái)說(shuō)，該處理方法包括以下步驟獲取含有5-FU的樣品(例如，從經(jīng)受5-FU或5-FU前體藥物治療的患者中取得)；在樣品中添加ニ氫嘧啶脫氫酶滅活劑以組成混合物；然后將混合物送往實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行混合物中5-FU檢驗(yàn)。值得注意的是，雖然本發(fā)明的實(shí)施方案本著從5-FU治療患者獲得的患者樣品進(jìn)行詳細(xì)地說(shuō)明，但本發(fā)明也可涵蓋從5-FU前體藥物治療的患者獲得的患者樣品。這樣的前體藥物(例如，喃氟啶，去氧氟尿苷和卡培他濱)在患者體內(nèi)被激活并且轉(zhuǎn)化成5-FU。
本發(fā)明用到的包含5-FU的患者樣品可以來(lái)自任何接受5-FU治療并需要測(cè)量5_FU水平的患者。也可來(lái)自接受一種或多種5-FU前體藥物如喃氟唳(tegafur),去氧氟尿苷和卡培他濱的患者。舉例來(lái)說(shuō)，5-FU通常用于癌癥患者的化療包括患有乳腺癌、肺癌、結(jié)腸直腸癌、胰腺癌或者頭頸癌的患者。5-FU也可用于對(duì)青光眼患者的眼科手術(shù)中作為一種抗瘢痕藥物用在小梁切除位點(diǎn)。另外，5-FU可作為一種面霜局部使用以治療鮑溫病、日光性角化癥和皮膚基底細(xì)胞癌。本發(fā)明的方法對(duì)癌癥患者樣品中的5-FU檢驗(yàn)尤其優(yōu)越，患者可以是經(jīng)受包含5-FU的治療方案的癌癥患者。舉例來(lái)說(shuō)，5-FU通常是與葉酸或亞葉酸一同給予。在轉(zhuǎn)移性直腸癌中，5-FU常常用在諸如FOLFOX(5-FU加上奧沙利鉬和亞葉酸)和FOLFIRI (5-FU加上伊立替康和亞葉酸)等聯(lián)合用藥方案中。新藥如貝伐單抗、帕尼單抗和西妥昔單抗也可加入這些用藥方案中。本發(fā)明適用于所有這些療法和治療方案中，對(duì)獲取于這些療法治療的患者樣品進(jìn)行5-FU檢驗(yàn),并且優(yōu)化給予個(gè)體患者的5-FU劑量。
適用于本發(fā)明的患者樣品可以來(lái)自患者身體的任何部位。例如,合適的樣品可以是組織或來(lái)自于身體的樣品，比如腫瘤組織、血液、血漿、血清、尿液等等。在癌癥治療中，5-氟尿嘧啶往往以靜脈推注或靜脈滴注給藥。根據(jù)所選的治療方案可以是每天、每周、每4周反復(fù)?？梢栽贗到10分鐘或者20-60分鐘時(shí)間段內(nèi)給藥，例如可以連續(xù)5天重復(fù)給藥，每4周一個(gè)周期共6個(gè)周期。在連續(xù)的靜脈滴注中，5-FU可以在幾個(gè)小時(shí)之內(nèi)完成注射，例如8個(gè)小時(shí)內(nèi)完成，每個(gè)星期一次。血液樣品可以從患者注射5-FU之前，之后或者期間的任何時(shí)間提取。很多時(shí)候，需要測(cè)量血液中穩(wěn)定狀態(tài)時(shí)的5-FU水平，在這種情況時(shí)，血液樣品應(yīng)該在達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)后抽取。舉例來(lái)說(shuō)在一個(gè)8小時(shí)的連續(xù)輸液中，穩(wěn)定狀態(tài)可以在開(kāi)始輸液兩小時(shí)后達(dá)到。血液樣品可以通過(guò)任何常規(guī)抽取外周血的方法收集。例如，血液樣品可以收集到特別用于臨床上的管子或小瓶中。血液收集的量依據(jù)特定5-FU檢測(cè)所需而定。例如，I毫升到2毫升到5毫升到10毫升對(duì)大多數(shù)類型的5-FU檢測(cè)都是足夠的?？蛇x擇的是，EDTA或肝素可與血液樣品混合以防止凝血，這種混合可以通過(guò)如用一種肝素化的管子或者一種EDTA管獲得。根據(jù)本發(fā)明，在獲得的包含5-FU的患者樣品中混入二氫嘧啶脫氫酶(DPD)滅活劑以抑制Dro活性和防止5-FU降解。在添加Dro滅活劑并混合之前，患者樣品可以于OoC的溫度下冷淬大約5分鐘或更長(zhǎng)。但更好的是，患者樣品從患者身體分離出來(lái)后立刻摻入DPD滅活劑。然后由此產(chǎn)生的混合物(患者樣品與Dro滅活劑的混合)可以送往實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行樣品中5-FU的量或水平或濃度的檢測(cè)。在一實(shí)施方案中，用于5-FU檢測(cè)的患者樣品的處理方法包括從接受5-FU或5_FU前體藥物治療的患者獲取包含5-氟尿嘧啶的血液樣品，在血液樣品中摻入Dro滅活劑以組成混合物，以及可選擇性將混合物送往實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行患者樣品中5-FU含量的檢測(cè)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，用于5-FU檢測(cè)的患者樣品的加工方法包括從5-FU或5_FU前體藥物治療的患者獲取含有5-氟尿嘧啶的血液樣品，在血液樣品中摻入二氫嘧啶脫氫酶滅活劑以組成混合物；從混合物中分離含有5-FU和滅活劑的血漿；以及可有選擇地將血漿送往實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行患者樣品中5-FU水平的檢測(cè)。在首選實(shí)施方案中，添加的步驟立刻發(fā)生在從患者身體提取血樣之后。也就是說(shuō)，在血液樣品從患者身體中分離出來(lái)后，Dro滅活劑應(yīng)盡快添加并且與收集的血樣混合。從混以DH)滅活劑的的血樣中分離血漿的步驟最好在血液抽取后4或5個(gè)小時(shí)內(nèi)，更好在I小時(shí)內(nèi)進(jìn)行。在另外一個(gè)實(shí)施方案中，用于5-FU檢測(cè)的患者樣品的處理方法包括從接受5-FU或5-FU前體藥物治療的患者身上獲取含有5-氟尿嘧啶的血液樣品，從血樣中分離出血漿，在分離的血漿中摻合進(jìn)DH)滅活劑以組成混合物，以及將混合物送往檢驗(yàn)室進(jìn)行患者樣品中5-FU水平的檢測(cè)。圖I演不了樣品處理方法如何在臨床中實(shí)施。一種DF1D滅活劑注射器(包含DPD滅活劑溶液)和一種轉(zhuǎn)移裝置按圖I所示來(lái)準(zhǔn)備。具體地說(shuō)，將DH)滅活劑注射器的蓋子(也見(jiàn)圖6)旋開(kāi)，將注射器與BD轉(zhuǎn)移裝置相連(也見(jiàn)圖7)，并且將連好的單元備用直到血樣收集完?；颊叩难壕腿鐖DI所示采集。具體地說(shuō)，當(dāng)患者還在繼續(xù)以指定的輸注速率輸注5-FU時(shí)，血液可以采集到6-mL K2-EDTA Vacutainer 真空管中。血液是從外周靜脈采集，而不是從輸注端，要在開(kāi)始5-FU連續(xù)輸注后至少2小時(shí)后采集。采集血液直到管子至少四分之三滿，并且最好是要記錄確切的以mg/m2為單位的5-FU劑量和總的輸注持續(xù)時(shí)間。DH)滅活劑溶液如圖I所示馬上配發(fā)到血液樣品管中。具體的說(shuō)，注射器-轉(zhuǎn)移裝置的結(jié)合單元連接到K2-EDTA真空管并且通過(guò)管塞牢固地插入，而后將注射器柱塞完全壓下。然后通過(guò)輕輕顛倒管子至少3次以混合樣品。通過(guò)1，500g-2, OOOg 10分鐘的離心來(lái)分離血漿。最后，如圖I所示不超過(guò)一半的血漿可用一次性移液管轉(zhuǎn)移到3-mLCryovial 管中。具體地說(shuō)，在移液管尖端插入血漿之前擠壓一次性移液管的球部。然后，將移液管端剛剛插入澄清血漿的頂部并且慢慢松開(kāi)球部。當(dāng)采集血漿時(shí)移液管循著管子下去。不超過(guò)一半的澄清血漿層吸入到移液管中并且要避免反復(fù)吸入以防止擾動(dòng)血漿和紅細(xì)胞之間的黃色外被/細(xì)胞層。將血漿從移液管中轉(zhuǎn)移到3-mL Cryovial管中保存并用于5-FU水平的分析。DH)滅活劑在本領(lǐng)域中眾所周知。DPD (二氫嘧啶脫氫酶，EC I. 3. I. 2)是一種催化嘧啶類化合物的可逆性還原成5，6- 二氫嘧啶的酶。用于此處的術(shù)語(yǔ)“DTO滅活劑”或其改述是指任何抑制DH)酶活性的有機(jī)或無(wú)機(jī)分子，也就是抑制它促進(jìn)嘧啶或5-FU的還原的能力。術(shù)語(yǔ)“Dro滅活劑”不包括5-FU。滅活劑例子包括，舉例來(lái)說(shuō)，嘧啶衍生物、吡啶衍生物、和巴比妥衍生物。在某些實(shí)施方案中，Dro滅活劑是一種Dro抑制劑，最好是一種不可逆的DPD抑制劑。在某些實(shí)施方案中，DPD滅活劑是尿嘧啶衍生物，也就是說(shuō)，一種尿嘧啶化合物在5-位置被選于下列的基團(tuán)替換鹵族原子、C2-4乙烯基、C2-4鹵烯基、C2-6炔基、C2-6鹵炔基、氰基、C1-4烷基、C1-4鹵烷基。在特定的實(shí)施方案中，DPD滅活劑是一種尿嘧啶衍生物，選擇于一組包含恩尿喃唳、丙炔尿喃唳、氰尿喃唳、溴乙炔基尿喃唳、5- (I -氯乙烯基)尿嘧啶、5-碘尿嘧啶、5-溴乙烯尿嘧啶、(E)-5-(2-溴乙烯)尿嘧啶、5-六烷-I炔尿嘧啶(5-hex-l-ynyluracil), 5_乙烯尿卩密唳,5_三氟苯酹尿卩密唳,5_溴尿卩密唳和5_(2_溴-I-氯 乙烯)尿嘧啶。在某些實(shí)施方案中，所用的DH)滅活劑選取于巴比妥酸衍生物、2，4_ 二羥基吡啶衍生物和2，6- 二羥基吡啶衍生物。在某些實(shí)施方案中，DPD滅活劑是一種吡啶衍生物。在特定的實(shí)施方案中，所用的DH)滅活劑是吉美拉西(5-氯-2，4-二羥基吡啶)或者3-氰基-2，6-二羥基吡啶。盡管詞語(yǔ)“一種Dro滅活劑”被用于此，實(shí)際上是指“一個(gè)或多個(gè)Dro滅活劑”，這一點(diǎn)本領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)人員讀過(guò)本說(shuō)明后應(yīng)該清楚。具體地說(shuō)，單一的Dro滅活劑或者兩個(gè)或多個(gè)Dro滅活劑一起可以與一個(gè)患者樣品混合。一般來(lái)說(shuō)，使用一個(gè)總量的一個(gè)或多個(gè)DPD滅活劑以在混合物中達(dá)到一個(gè)終濃度足以實(shí)質(zhì)上抑制患者樣品中DPD的活性，并在樣品處理和儲(chǔ)藏的正常條件下，能在允許完成5-FU檢測(cè)的充足時(shí)間之內(nèi)防止樣品中顯著的或有影響意義的5-FU降解。舉例來(lái)說(shuō)，患者樣品中任何DPD滅活劑總的終濃度可以達(dá)到大約lng/ml到60ii g/ml或者更多。再如，一個(gè)或多個(gè)DTO滅活劑以一個(gè)足夠能抑制患者樣品中DH)活性的量添加混合進(jìn)患者樣品，以至于在從患者獲取樣品后并且放置于室溫(約25oC)下0. 5小時(shí)內(nèi)，患者樣品中不超過(guò)10%的5-FU降解，最好是在獲取樣品后并且放置于室溫下10小時(shí)內(nèi)，患者樣品中的5-FU降解量不超過(guò)10%。所以，所用DH)滅活劑的量可以根據(jù)特定Dro滅活劑的抑制活性和特定患者樣品中Dro的量來(lái)改變，這一點(diǎn)對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)顯而易見(jiàn)。技術(shù)人員可以通過(guò)常規(guī)試驗(yàn)很容易地確定任一 Dro滅活劑的最佳用量,正如以下例子所示。通過(guò)本發(fā)明方法進(jìn)行處理的樣品尤其適合用于5-FU水平的檢測(cè)，因?yàn)闃悠凡杉蠓治鲋斑@一段時(shí)間內(nèi)5-FU降解程度降到了最小限度。因此，本發(fā)明進(jìn)一步提供了一 種檢測(cè)來(lái)自接受了 5-FU或5-FU前體藥物的患者的樣品中5-FU的方法。該方法通常至少包括提供如上所述的經(jīng)過(guò)處理的患者樣品這一步驟，所述患者樣品來(lái)自攝入了 5-FU或5-FU前體藥物的患者，其中所述樣品在體外混合進(jìn)了一種二氫嘧啶脫氫酶(DPD)滅活劑，并且測(cè)量樣品中5-FU含量。在某些實(shí)施方案中，樣品中5-FU含量是在有DH)滅活劑存在的情況下測(cè)量的。在一個(gè)實(shí)施方案中，檢測(cè)5-FU的方法包括從給予5-FU的患者獲取含有5_氟尿嘧啶的血液樣品，將DH)滅活劑混進(jìn)血樣以組成混合物，并且測(cè)量混合物中5-FU的含量。在另一個(gè)實(shí)施方案中，檢測(cè)5-FU的方法包括從接受5-FU治療的患者獲取含有5-FU的血液樣品，在血液樣品中摻入DH)滅活劑以組成混合物；從混合物中分離包含5-FU和滅活劑的血漿；以及測(cè)量血漿中5-FU的含量。在優(yōu)選實(shí)施方案中，從混以DH)滅活劑的血樣中分離血漿的步驟在血液提取后4或5個(gè)小時(shí)以內(nèi)、最好在I小時(shí)以內(nèi)執(zhí)行。在另一個(gè)實(shí)施方案中，檢測(cè)5-FU的方法包括從接受5-FU治療的患者獲取含有5-FU的向液樣品，從血樣中分離血漿，在分離的血漿中混入DI3D滅活劑以組成混合物，以及測(cè)量血漿中5-FU的含量。該領(lǐng)域所熟知的任何5-FU檢測(cè)技術(shù)可用于檢測(cè)通過(guò)本發(fā)明的方法獲得的樣品中的5-FU水平。舉例來(lái)說(shuō)，通過(guò)HPLC定量分析5-FU的方法常常用于5-FU濃度的檢測(cè)。液相質(zhì)譜串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MSMS)對(duì)5-FU的量化分析越來(lái)越流行。此外，美圍專利號(hào)7，205，116公開(kāi)了使用與5-FU特異性地免疫反應(yīng)的抗體進(jìn)行免疫分析在血漿樣品中定量地測(cè)定5-FU，此專利以引用的方式并入本文中。因此，在一實(shí)施方案中，本發(fā)明的5-FU檢測(cè)方法包括使用一種免疫測(cè)定法檢測(cè)獲取于接受了 5-FU或其前體藥物治療的患者的含有5-FU的患者樣品中的5-FU，其中患者樣品是在從患者獲得后在體外混入DH)滅活劑。也就是說(shuō)，測(cè)量步驟包括將含有5-FU的患者樣品與能和5-FU免疫反應(yīng)的抗體接觸并且測(cè)量5-FU與抗體的結(jié)合。5-FU抗體在本領(lǐng)域是被知曉的而且公開(kāi)在美國(guó)專利號(hào)7，205，116。患者樣品可以是血液、血清、血漿、尿液等等，最好通過(guò)以上所述的樣品處理方法制備血漿樣品。確定5-FU與5-FU抗體結(jié)合的步驟中最好是在有如上所述的DH)滅活劑如5-碘嘧啶、5-乙烯尿嘧啶、恩嘧啶(eniluracil)或者吉美拉西(gimeracil)的存在下進(jìn)行。在以下說(shuō)明性例子中，5-FU是用公開(kāi)在美國(guó)專利號(hào)7，205, 116中的一種抗體通過(guò)在Olympus AU680分析儀上的一種基于抗體的凝集測(cè)試測(cè)定的。具體的說(shuō)，提供了兩種分開(kāi)的試劑第一種試劑包括多個(gè)結(jié)合在聚合物或底物上的5-FU分子，而第二種試劑包括多個(gè)附著于載體(納米顆?；蛑樽?上的5-FU抗體。當(dāng)著兩種試劑在沒(méi)有游離5-FU存在的情況下混合時(shí)，他們會(huì)形成大的納米粒子聚集體并且導(dǎo)致散射光達(dá)到一個(gè)很高的吸收值。在存在游離5-FU的情況下，例如當(dāng)與含有5-FU的患者樣品混合時(shí)，凝集反應(yīng)會(huì)有所抑制并且光散射程度較小導(dǎo)致一個(gè)低的吸收值。因此，基于樣品的吸光度可以測(cè)得樣品中5-FU的濃度，而吸光度是由第一種和第二種試劑的聚集量決定的。該儀器用多個(gè)已知的不同濃度5-FU標(biāo)準(zhǔn)樣品校準(zhǔn)，并且制出標(biāo)準(zhǔn)曲線(吸光度vs. 5-FU濃度)。個(gè)體樣品的吸光值與標(biāo)準(zhǔn)曲線相比較以確定濃度。因此，在一特定的實(shí)施方案中，按本發(fā)明的檢測(cè)方法測(cè)定5-FU的步驟包括在含5-FU的患者樣品存在時(shí)將含有多個(gè)結(jié)合在聚合物或底物上的5-FU分子的第一種試劑與含有多個(gè)附著于載體上的5-FU抗體的第二種試劑相接觸，確定第一種和第二種試劑的聚集性?；颊邩悠房梢允茄骸⒀?、血漿、尿液等等，最好通過(guò)以上所訴的樣品處理方法制備血 漿樣品。更好的是，確定5-FU與5-FU抗體結(jié)合的步驟是在有如上所述的DH)滅活劑，如5-碘嘧啶、5-乙烯尿嘧啶、恩嘧啶或者吉美拉西的存在下執(zhí)行。因此，在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明也提供了一種組合物包括(I) 一種與5-FU選擇性免疫反應(yīng)的抗體和(2) —種Dro滅活劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物包括含有5-FU且取自接受5-FU或前體藥物治療的患者的樣品(血液、血清、血漿、尿液等等)，并混有(I) 一種與5-FU選擇性免疫反應(yīng)的抗體和(2) —種DH)滅活劑。最好抗體基本不能與DH)滅活劑發(fā)生免疫反應(yīng)，并且在組合物中有足夠量而可以結(jié)合組合物中基本上所有5-FU分子。組合物中的抗體與Dro滅活劑的交叉反應(yīng)要少于25%，最好少于15%。抗體的例子包括美國(guó)專利號(hào)7，205，116所公開(kāi)的。適合的DH)滅活劑如上所描述的包括但不限于，比如，吉美拉西、5-碘尿嘧啶、5-乙烯尿嘧啶和恩嘧啶。組合物中包含的這些DH)滅活劑的量也如上所述。最好是，DPD滅活劑在組合物中的含量至少有600ng/ml或者至少850ng/ml。在一實(shí)施方案中，組合物包括(I)多個(gè)附著于載體且能與5-FU選擇性免疫反應(yīng)的抗體；(2)多個(gè)結(jié)合在聚合物或底物的5-FU分子；(3) 一種DH)滅活劑。組合物中的抗體與DPD的交叉反應(yīng)要少于25%，更好地少于15%，更好是組合物進(jìn)一步包括含有5-FU且取自接受5-FU或其前體藥物治療的患者的患者樣品(血液、血清、血漿、尿液等等)。本發(fā)明也提供了一種組合物包括從攝入5-FU或其前體藥物的患者分離出來(lái)的并混合有Dro滅活劑的樣品。這種Dro滅活劑最好是吉美拉西。而樣品最好是血液或血漿或血清，并且滅活劑在組合物中的濃度至少為600、850、1000、1200、2000或4000ng/ml另一方面，本發(fā)明提供了一種試劑盒，包括置于容器內(nèi)的(a)從攝入5-FU或其前體藥物的患者分離出來(lái)的樣品(血液、血衆(zhòng)或血清)混合有至少600ng/ml、850ng/ml、1000ng/ml、1200ng/ml、2000ng/ml 或 4000ng/ml 濃度的一種 DF1D 滅活劑?？蛇x擇地，該試劑盒還可進(jìn)一步包括冷卻樣品到低于IOoC的器材。在容器如Styrofoam(聚苯乙烯泡沫塑料)盒子或FedEx包裹里冷卻樣品，冷卻包比如PolarPack (Tegrant)和ThermoSafe 都是可用的，也可用常規(guī)的冰或者干冰。本發(fā)明也提供了一種分析試劑盒，包括在帶有隔室的容器內(nèi)的(I)多個(gè)附著于固體載體且與5-FU選擇性免疫反應(yīng)的抗體；(2)多個(gè)結(jié)合在聚合物或底物的5-FU分子；(3)一種Dro滅活劑。組合物中的抗體與Dro的交叉反應(yīng)要少于25%，最好少于15%。該試劑盒也可選擇性地在一個(gè)獨(dú)立的隔室內(nèi)包含作為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的5-FU。該試劑盒使方便簡(jiǎn)單的測(cè)定任何給定的患者樣品中的5-FU水平的使用方法成為可能。
在本發(fā)明的各個(gè)方面中，混有Dro滅活劑的患者樣品最好不在從患者分離后的I小時(shí)、2小時(shí)、3小時(shí)、4小時(shí)內(nèi)或者5到48小時(shí)內(nèi)冷凍凝固。5-FU的檢測(cè)方法對(duì)優(yōu)化5-FU或者5_FU前體藥物的治療特別有用，其中血液5_FU水平在一劑藥物之后測(cè)定并且作為調(diào)整確定后續(xù)藥物劑量的參考。因此，本發(fā)明的另一個(gè)方面，也提供了一種用5-FU或5-FU前體藥物治療患者的方法。一般來(lái)說(shuō)，該方法包括以下步驟(1)給予需治療患者第一劑5-FU或前體藥物；(2)測(cè)定從患者取得的樣品中的5-FU的含量，其中該樣品在體外與二氫嘧啶脫氫酶滅活劑混合；(3)給予該患者第二劑5-FU或前體藥物。第二劑所給予的5-FU或前體藥物的量是基于所測(cè)得的患者樣品的5-FU水平并參考預(yù)期最優(yōu)或者目標(biāo)5-FU AUC而確定的，然后給予第二劑的量以達(dá)到目標(biāo)濃度之內(nèi)的血液5-FU濃度。在該治療方法中，確定取自患者的樣品中5-FU含量的步驟可包括根據(jù)本發(fā)明如上所述的分析方法，包含本發(fā)明如上所述的樣品處理方法來(lái)分析患者樣品中的5-FU。但是，醫(yī)生也可以從診斷實(shí)驗(yàn)室要個(gè)這樣的鑒定并且從實(shí)驗(yàn)室發(fā)回的檢測(cè)報(bào)告中確定5-FU的水平。舉個(gè)例子，在涉及5-FU的治療中，用曲線下面積(AUC)表示的定量的5_FU的目標(biāo)血藥濃度被建議為20到24mg h/L。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的治療方法用于優(yōu)化5-FU劑量，包括以下步驟(1)給予患者第一劑量的5-FU，其劑量可以根據(jù)BSA(體表面積)確定；(2)測(cè)定從患者取得的樣品中的5-FU的含量，其中該樣品在體外與DH)滅活劑混合；(3)基于在步驟(2)所測(cè)得的5-FU含量，給予患者第二劑5-FU，其劑量通過(guò)計(jì)算預(yù)期能夠達(dá)到在20到25mg -h/L范圍之內(nèi)的血液或血漿5_FU AUC。也就是說(shuō)，如果患者樣品中所測(cè)得的5-FU水平顯示血液或血漿5-FU AUC低于20mg · h/L，則建議醫(yī)生在第二劑中增加給予5-FU的量以超過(guò)第一劑的量。如果患者樣品中所測(cè)得的5-FU水平顯示血液或血漿5-FUAUC高于25mg -h/L,則建議醫(yī)生相較于第一劑的量在第二劑中要減少給予5-FU的量。對(duì)于5-FU檢測(cè)，檢測(cè)方法和其各種實(shí)施方案以上已做了描述并且引用于此而不再重復(fù)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，在上述治療方法中的測(cè)定5-FU含量的步驟包括從接受5-FU治療的患者獲取含有5-FU的血液樣品，在體外摻入DH)滅活劑以組成混合物；從混合物中分離包含5-FU和滅活劑的血漿；以及測(cè)量血漿中5-FU的含量。換一種說(shuō)法，本發(fā)明提供了 Dro滅活劑在制備一種測(cè)定患者樣品中5-FU、以指導(dǎo)對(duì)患者進(jìn)行5-FU或其前體藥物治療的檢測(cè)試劑盒中的應(yīng)用，其中該治療包括以下步驟(I)給予需治療患者第一劑5-FU或其體藥物；(2)測(cè)定從患者取得的樣品中的5-FU的含量，其中該樣品在體外摻入DH)滅活劑以組成混合物；(3)給予患者第二劑5-FU，其劑量是根據(jù)在步驟(2)中所測(cè)得的5-FU含量確定的，并且通過(guò)計(jì)算預(yù)期血液或血漿5-FU AUC能夠達(dá)到一個(gè)預(yù)定的參考范圍內(nèi)例如在20到25mg · h/L范圍之內(nèi)。該檢測(cè)試劑盒的組分如上所述或以下的介紹。II.設(shè)備及試劑盒本發(fā)明也提供了轉(zhuǎn)移裝置用于將Dro滅活劑轉(zhuǎn)移和將Dro滅活劑混合到患者血樣中。需要注意本發(fā)明包括以下描述的轉(zhuǎn)移注射器組件，其中含有或不含有Dro滅活劑。參照?qǐng)D6，轉(zhuǎn)移注射器組件600和600’，在儲(chǔ)存和運(yùn)送一種DH)滅活劑溶液到臨床或檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室，及轉(zhuǎn)移這種儲(chǔ)存的Dro滅活劑溶液到患者樣本內(nèi)時(shí)非常有用。轉(zhuǎn)移注射器組件600 (600和600’)包括一個(gè)槍管610，用來(lái)限定這種轉(zhuǎn)移注射器的腔，其中可以預(yù)填充了一種Dro滅活劑溶液620 (例如，一種溶于DMSO或甲醇中的吉美拉西或恩尿嘧啶溶液)。槍管610從遠(yuǎn)端延伸出一個(gè)頂端630。這個(gè)頂端630在使用的時(shí)候可以可操作地連接一個(gè)針頭。另外，這種轉(zhuǎn)移注射器組件可以還包括一個(gè)頂罩640附著在頂端上，或從槍管610的遠(yuǎn)端延伸出。頂罩640縱向地延伸過(guò)頂端630。這種轉(zhuǎn)移注射器組件600還包含一個(gè)頂帽650,它可操作地與頂端630或頂罩640連接。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，頂罩640和頂帽650有匹配的凹槽，并連鎖在一起。例如，頂罩640有一個(gè)向內(nèi)的凹槽,頂帽就有一個(gè)向外的凹槽,反之亦然,這樣頂帽650就緊緊地?cái)Q住并與頂罩640連鎖在一起，以便密封槍管腔的頂端630。一個(gè)活塞660可滑動(dòng)地插入槍管610的腔中轉(zhuǎn)移注射器組件600’與轉(zhuǎn)移注射器組件600相似，除了在注射器末端630上附加了一個(gè)針頭670。最好這個(gè)針頭用針頭帽保護(hù)。這個(gè)針頭可以用于穿刺另外一個(gè)含有患者樣本的容器(如，瓶子或管子)，通過(guò)滑動(dòng)或推壓活塞660將DH)滅活劑溶液轉(zhuǎn)移到患者樣本容器中。圖7表不了另外一個(gè)轉(zhuǎn)移注射器組件700,它與轉(zhuǎn)移注射器組件600和600’ 一樣，除了轉(zhuǎn)移注射器組件600的頂帽650被針頭罩710或者被那個(gè)可以安裝到轉(zhuǎn)移注射器組件600’上的針頭罩710’所取代。關(guān)于針頭罩710，它包括一個(gè)大致管狀體730同軸環(huán)繞針頭740，并且有一個(gè)管狀壁，其沿著針頭740延伸并超過(guò)針頭的尖端。針頭罩710’除了沒(méi)有針頭740外其它與針頭罩710 —樣。這些針頭罩可操作地連接和安裝到轉(zhuǎn)移注射器組件600或600’上形成轉(zhuǎn)移注射器組件700。例如,在一個(gè)實(shí)施方案中,轉(zhuǎn)移注射器組件600的頂罩640可以有一個(gè)向內(nèi)的凹槽來(lái)連鎖針頭740的魯爾接頭720。在另一個(gè)實(shí)施方案中，轉(zhuǎn)移注射器組件600’的頂罩640可以有一個(gè)向內(nèi)的凹槽來(lái)連鎖魯爾接頭720’，這樣針頭罩710’就連接到轉(zhuǎn)移注射器組件600’上保護(hù)針頭670?；蛘?，720或720’作為一種連接器同軸安裝環(huán)繞針頭740。轉(zhuǎn)移注射器組件700可用來(lái)方便安全地將Dro滅活劑溶液轉(zhuǎn)移到患者樣本管中，如圖8所示。圖8中的轉(zhuǎn)移注射器組件800包括轉(zhuǎn)移注射器組件700及一個(gè)包含患者樣本(例如，血液)的管子810，其中管子810插入到針頭罩710或710’中，針頭740或670穿過(guò)管子的可穿刺帽812插入到樣本管810中。用這種方式，如果轉(zhuǎn)移注射器組件700中含有DH)滅活劑溶液，推動(dòng)活塞660就能將DH)滅活劑溶液轉(zhuǎn)移到樣本管中。另一方面，本發(fā)明提供了一個(gè)試劑盒，包括以上描述的一個(gè)或多個(gè)轉(zhuǎn)移注射器組件。這個(gè)試劑盒可以包含也可以不包含任何形式(例如，溶液)的Dro滅活劑。如果包含，那么這種Dro滅活劑就儲(chǔ)存在轉(zhuǎn)移注射器組件中，或在一個(gè)獨(dú)立的隔室里，可以以足夠的劑量來(lái)抑制患者血樣中Dro酶活性，防止樣本中5-FU的降解。這個(gè)試劑盒還可以包括以下物件中的一個(gè)或更多一次性吸管、血液采集管、用于采集和儲(chǔ)存血漿樣本的冷凍管、運(yùn)輸管、含有吸水材料的用于轉(zhuǎn)移患者樣本的袋子，等等。這個(gè)試劑盒可以還包括說(shuō)明書(shū)，向醫(yī)務(wù)人員闡明為了分析樣本中的5-FU該如何獲取和處理患者樣本，這些都在以上有所詳細(xì)描述。另外，本試劑盒可以包含一個(gè)能與5-FU選擇性免疫反應(yīng)的抗體。本試劑盒也可以可選擇地包含在一個(gè)單獨(dú)隔室里的5-FU以作為標(biāo)準(zhǔn)品。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本試劑盒包含在ー個(gè)容器中(1)如圖6或圖7描述的ー個(gè)轉(zhuǎn)移注射器組件，(2) ー種Dro滅活劑，和(3) —種與5-FU選擇性免疫反應(yīng)的抗體。在另外的實(shí)施方案中，本試劑盒包含在ー個(gè)容器中(I)如圖6或圖7描述的ー個(gè)轉(zhuǎn)移注射器組件，(2) —種DH)滅活劑，(3)多個(gè)吸附在載體上并與5-FU選擇性免疫反應(yīng)的抗體，⑷多個(gè)共軛結(jié)合到聚合物或基質(zhì)上的5-FU分子。更好地是，試劑盒中的抗體與DH)滅活劑的交叉反應(yīng)少于25%、最好少于15%。此試劑盒也可以包含在一個(gè)單獨(dú)隔室里的5-FU作為標(biāo)準(zhǔn)品。更好的是，DPD滅活劑以溶液的形式儲(chǔ)存在轉(zhuǎn)移注射器組件的槍管中。在以下的示例中，用基于抗體凝集的實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)5-FU，使用在美國(guó)專利號(hào)No. 7，205, 116中的ー種抗體，在奧林巴斯AU680型分析儀上進(jìn)行檢測(cè)分析。具體地，樣本中5-FU的濃度的檢測(cè)是根據(jù)樣本的吸光度，吸光度是由納米粒子的聚集數(shù)量所決定的。此系統(tǒng)需要兩種試劑，當(dāng)不存在游離5-FU時(shí)，將兩者混合會(huì)形成大量的納米粒子并散射光源導(dǎo) 致更高的吸收值。當(dāng)存在游離5-FU時(shí)，凝集反應(yīng)得到一定程度的抑制，光的散射減少，產(chǎn)生一個(gè)較低的吸光值。此儀器毎月校準(zhǔn)兩次，生成一條曲線(吸光度對(duì)5-FU濃度)。個(gè)體樣本的吸光度值與曲線進(jìn)行比較確定濃度值。一般而言，凝集實(shí)驗(yàn)中，吸取95 μ L的ー種含有5-FU標(biāo)記的氨基葡聚糖的緩沖液到比色皿中，然后加入7μ L過(guò)濾過(guò)的血漿樣本。將樣本和試劑混勻再孵育3. 5分鐘。將95 μ L的5-FU抗體結(jié)合納米粒子加入到比色皿并混勻。孵育約6. 2分鐘使其完全反應(yīng)，使用AU680分析儀在600nm處定期測(cè)量，整個(gè)過(guò)程獲得27個(gè)數(shù)據(jù)，取兩個(gè)特定時(shí)間點(diǎn)的測(cè)量數(shù)據(jù)計(jì)算5-FU濃度。
實(shí)施例I.使用恩尿嘧啶作為穩(wěn)定劑從6個(gè)捐贈(zèng)者體內(nèi)抽取的6管血樣(噴涂過(guò)K2EDTA的管子，6mL)，輕輕顛倒血樣管幾次使血液與抗凝劑混勻。依據(jù)捐贈(zèng)者將血樣合并且保持個(gè)體獨(dú)立。每種血樣的等分試樣轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的錐形管中，計(jì)算應(yīng)加5-FU(200ng/μ L)儲(chǔ)液的體積并加入到每種血樣中，使得5-FU終濃度為500ng/mL。每種血樣等分成ー組6個(gè)管中(每管5mL血樣)并包含符合下列條件的恩尿嘧啶高濃度(在血液中的終濃度為4000ng/mL)，DMSO溶液；低濃度(在血液中的終濃度為1000ng/mL)，DMSO溶液。另外，將血液加到只含有DMSO(無(wú)恩尿嘧啶)的管中，作為陰性對(duì)照。將所有的采血管顛倒混勻，室溫下孵育45分鐘或24小吋，在適當(dāng)?shù)臅r(shí)間室溫下2000g離心10分鐘分離血漿。離心后立即吸取血漿并分裝到干凈的冷凍管中，在標(biāo)準(zhǔn)條件下用奧林巴斯AU680型分析儀(200 μ L，12，500rpm離心15min)檢測(cè)所有樣本。測(cè)量值是在血漿采集后立刻讀取和在初始讀數(shù)24小時(shí)后讀取。血漿儲(chǔ)存在室溫。圖2表明恩尿嘧啶可以有效防止血樣中5-FU的降解。2.使用5-こ烯尿嘧啶，5-碘尿嘧啶和吉美拉西作為穩(wěn)定劑6個(gè)捐獻(xiàn)者中，每個(gè)捐獻(xiàn)者抽取3管血(噴涂過(guò)K2EDTA的管子，10mL)，將采血管輕輕顛倒幾次與抗凝劑混勻。依據(jù)捐獻(xiàn)者將血樣合并且保持個(gè)體獨(dú)立。將每種血樣的ー個(gè)等份轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的錐形管中，計(jì)算應(yīng)加5-FU(200ng/y L)儲(chǔ)液的體積并加入到每種血樣中，使得5-FU終濃度為500ng/mL。每種血樣等分成ー組4管(每管5mL血樣)，每組管是不同的，但是包括以下綜合條件低濃度5-碘尿嘧啶(血液中終濃度為10 μ g/mL)；高濃度碘尿嘧啶(血液中終濃度為40 μ g/mL)；低濃度5-こ烯尿嘧啶(血液中終濃度為5 μ g/mL)；高濃度5-こ烯尿嘧啶(血液中終濃度為20 μ g/mL)；低濃度吉美拉西(血液中終濃度為300ng/mL)；高濃度吉美拉西(血液中終濃度為1200ng/mL)。 將采血管顛倒混勻，室溫孵育45分鐘。在適當(dāng)?shù)臅r(shí)間，室溫下2000g離心10分鐘分離血漿。離心后立即吸取血漿并分裝到干凈的冷凍管中，在標(biāo)準(zhǔn)條件下用奧林巴斯AU680型分析儀(200 μ L，12，500rpm離心15min)檢測(cè)所有樣本。血漿儲(chǔ)存在室溫。圖3表明5-こ烯尿嘧啶、5-碘尿嘧啶和吉美拉西可以有效穩(wěn)定血樣中的5-FU。3. DPD滅活劑需要量6個(gè)捐獻(xiàn)者中，每個(gè)捐獻(xiàn)者抽取4管血(噴涂過(guò)K2EDTA的管子，10mL)，將采血管輕輕顛倒幾次與抗凝劑混勻。所有捐獻(xiàn)者的血樣都合并到ー個(gè)大管子中，合并的血樣分出兩個(gè)等份轉(zhuǎn)移到兩個(gè)新的管子中。剰余的血樣用于分離白細(xì)胞(WBC)/血沉棕黃層。離心剰余的采血管分離到WBC/血沉棕黃層，提取并合并每管的WBC層，再次離心以富集WBC/血沉棕黃層，分離富集的WBC/血沉棕黃層到ー個(gè)干凈管中。向ImL血樣中加入適當(dāng)體積的5-FU(200ng/l·! L)儲(chǔ)液，使得5-FU終濃度為500ng/mL，其他體積的血樣加入適當(dāng)體積的5-FU(200ng/yL)儲(chǔ)液，使得5-FU終濃度為1500ng/mL。將這些加入了 5-FU的血樣平分成三組，每組8管。另外，設(shè)置ー個(gè)陰性對(duì)照，向其中加入300 μ L30%甲醇/水溶液替代吉美拉西。將低濃度5-FU血樣等分到每組8管中的4管中，每管6mL。高濃度5-FU血樣等分到姆組剩余的4管及陰性對(duì)照管中，姆管6mL。然后向這8管中，姆管加入300 μ L溶于30%甲醇/水、濃度為O. 12mg/mL的吉美拉西,或300 μ L濃度為O. 04mg/mL的吉美拉西。顛倒采血管混勻吉美拉西，然后室溫放置45分鐘。室溫下，2000g離心采血管10分鐘。離心后立即吸取血漿并分裝到干凈的冷凍管中。WBC/血沉棕黃層加入到指定的血漿管中，顛倒混勻。在標(biāo)準(zhǔn)條件下用奧林巴斯AU680型分析儀(200 μ L, 12, 500rpm離心15min)檢測(cè)血衆(zhòng)樣本。加入WBC/血沉棕黃層后立即讀取測(cè)量值(初始)，加WBC/血沉棕黃層24小時(shí)后再測(cè)一次(24小時(shí))。關(guān)于24小時(shí)的測(cè)量，本實(shí)驗(yàn)在測(cè)量前24小時(shí)內(nèi)室溫下存儲(chǔ)血漿，這是為了模擬隔夜環(huán)境運(yùn)輸。下面表I概述了結(jié)果表I
權(quán)利要求
1.一種檢測(cè)樣本中5-氟尿嘧啶的方法，樣本來(lái)自服用5-FU或其前體藥物的患者，該方法包括從所述患者身上獲取樣本，在體外將樣本混入一種或多種ニ氫嘧啶脫氫酶的抑制劑；測(cè)定該樣本中5-氟尿嘧啶的含量。
2.ー種檢測(cè)來(lái)自服用5-FU或其前體藥物的患者的樣本中5-氟尿嘧啶的方法，該方法包括測(cè)量從所述服用5-FU或其前體藥物的患者身上獲取的樣本中5-氟尿嘧啶，該樣本從所述患者上獲取之后，在體外與ー種ニ氫嘧啶脫氫酶抑制劑混合。
3.ー種使用5-氟尿嘧啶或其前體藥物治療患者的方法，包括使患者攝入第一劑5-氟尿嘧啶或其前體藥物；測(cè)定該攝入了 5-氟尿嘧啶或其前體藥物的患者的樣本中的5-氟尿嘧啶含量，該樣本在體外與ー種ニ氫嘧啶脫氫酶抑制劑混合；判定這步完成后，使 該患者服用第二劑5-氟尿嘧啶或其前體藥物。
4.權(quán)利要求1-3任何ー種方法，其中所述測(cè)定或測(cè)量步驟包括將所述樣本與ー種與5-氟尿嘧啶發(fā)生免疫反應(yīng)的抗體接觸。
5.權(quán)利要求1-4中任何ー種方法，其中所述樣本在從所述患者中分離之后10小時(shí)內(nèi)沒(méi)有被冷凍。
6.權(quán)利要求1-5中任何ー種方法，其中所述樣本是血液、血漿、血清或尿液。
7.權(quán)利要求1-6中任何ー種方法，其中所述樣本是血液。
8.權(quán)利要求1-7中任何ー種方法，其中所述抑制劑是嘧啶衍生物或吡啶衍生物。
9.權(quán)利要求8中的方法，其中所述抑制劑是恩尿嘧啶或吉美拉西。
10.權(quán)利要求1-9中任何ー種方法，其中5-氟尿嘧啶是在所述抑制劑存在的情況下測(cè)量。
11.ー種處理從接受了包括5-氟尿嘧啶或其前體藥物的治療方案的患者取得的血樣用于5-氟尿嘧啶檢驗(yàn)分析的方法，所述方法包括從所述患者中獲得含有5-氟尿嘧啶的血樣；從所述血樣中分離血漿；將分離到的血漿與ニ氫嘧啶脫氫酶抑制劑混合形成混合物；以及將所述混合物送入實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行5-氟尿嘧啶檢測(cè)分析。
12.ー種處理從接受了包括5-氟尿嘧啶或其前體藥物的治療方案的患者取得的血樣用于5-氟尿嘧啶檢驗(yàn)分析的方法，所述方法包括從所述患者中獲得包含5-氟尿嘧啶的血樣；將血樣與ニ氫嘧啶脫氫酶抑制劑混合形成混合物；從所述混合物中分離包含5-氟尿嘧啶和所述抑制劑的血漿；及將所述血漿送入實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行5-氟尿嘧啶檢測(cè)分析。
13.—種處理從接受了包括5-氟尿嘧啶或其前體藥物的治療方案的患者取得的血樣用于5-氟尿嘧啶檢驗(yàn)分析的方法，所述方法包括從所述患者中獲得包含5-氟尿嘧啶的血樣；將血樣與ニ氫嘧啶脫氫酶抑制劑混合形成混合物；及將所述混合物送入實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行5-氟尿嘧啶檢測(cè)分析。
14.權(quán)利要求11-13中任何ー種方法，其中所述樣本在從所述患者中分離之后10小時(shí)內(nèi)沒(méi)有被冷凍。
15.權(quán)利要求11-14中任何ー種方法，其中所述抑制劑是ー種嘧啶衍生物或吡啶衍生物。
16.權(quán)利要求15的方法，其中所述抑制劑是恩尿嘧啶或吉美拉西。
17.一種組合物包括 從接受5-氟尿嘧啶處理的患者中獲得的血樣，混有ー種ニ氫嘧啶脫氫酶抑制劑，其中所述抑制劑在體外與所述血樣混合。
18.權(quán)利要求17中的組合物，其中所述抑制劑是ー種嘧啶衍生物或吡啶衍生物。
19.一種組合物包括ー種與5-氟尿嘧啶有選擇性免疫反應(yīng)的抗體并摻有ー種DH)滅活齊 。
20.權(quán)利要求19中的組合物,還包括ー種從接受5-FU或其前體藥物處理的患者中獲得的含有5-FU的患者樣本。
21.權(quán)利要求19或20中的組合物，還包含多個(gè)共軛結(jié)合到聚合物或基質(zhì)上的5-FU分子，其中所述抗體附著在載體上。
22.試劑盒包括，在ー個(gè)容器內(nèi) 一個(gè)從攝入了 5-氟尿嘧啶或其前體藥物的患者中分離到的含有5-氟尿嘧啶的患者樣本，混有ー種ニ氫嘧啶脫氫酶抑制劑，其中所述抑制劑在體外與所述樣本混合；以及將所述樣本冷卻至10°C以下的器材。
23.權(quán)利要求22中的試劑盒，其中所述抑制劑是ー種嘧啶衍生物或吡啶衍生物。
24.權(quán)利要求22或23的試劑盒，其中所述抑制劑濃度至少為850ng/mL，其中所述樣本是血樣、或血漿、或血清。
25.ー種分析用試劑盒包括，在一個(gè)可以分區(qū)的容器中(1) ー種與5-FU有選擇性免疫反應(yīng)的抗體，及⑵ー種DF1D滅活劑。
26.權(quán)利要求25中的試劑盒，還包括幾個(gè)共軛結(jié)合在聚合物或基質(zhì)上的5-FU分子，其中所述抗體附著在載體上。
27.權(quán)利要求25或26的試劑盒，還包含在一個(gè)單獨(dú)的隔室里的5-氟尿嘧啶。
28.權(quán)利要求25、26或27的試劑盒，其中所述5-FU抗體和DB)滅活劑在試劑盒的單獨(dú)的隔室里。
29.權(quán)利要求22-28的任何ー個(gè)試劑盒，還包含據(jù)權(quán)利要求30-34所述的轉(zhuǎn)移注射器組件。
30.一種轉(zhuǎn)移注射器組件，包括 一個(gè)槍管限定所述轉(zhuǎn)移注射器的腔并帶有一個(gè)從所述槍管的遠(yuǎn)端延伸出的頂端；一個(gè)可以滑動(dòng)地插入到所述槍管的腔中的活塞； ー個(gè)連在所述頂端的、或從所述槍管遠(yuǎn)端沿著所述頂端縱向延伸的頂罩；以及 ー個(gè)可操作地與所述頂端或頂罩連接的頂帽，與所述頂罩鎖合從而封閉所述頂端。
31.權(quán)利要求30的轉(zhuǎn)移注射器組件，還包括ー種ニ氫嘧啶脫氫酶抑制劑溶液置于在所述腔中。
32.—種轉(zhuǎn)移注射器組件，包括 一個(gè)槍管限定所述轉(zhuǎn)移注射器的腔并帶有一個(gè)從所述槍管的遠(yuǎn)端延伸出的頂端；一個(gè)可以滑動(dòng)地插入到所述槍管的腔中的活塞；ー個(gè)針頭罩，其帶有ー個(gè)針頭可操作地連接于所述頂端，其中所述針頭罩有ー個(gè)大致管狀體同軸環(huán)繞所述針頭，以及沿所述針頭方向延伸并且超過(guò)所述針頭的鋒利尖端的的管狀壁。
33.權(quán)利要求32的轉(zhuǎn)移注射器組件，還包括一個(gè)裝有患者樣本并且具有ー個(gè)可穿孔瓶蓋的樣本采集管，其中所述樣本采集管被插入到針頭罩中，從而針頭就通過(guò)所述可穿孔瓶蓋插入所述樣本采集管。
34.權(quán)利要求32或33的轉(zhuǎn)移注射器組件，還包含ー種ニ氫嘧啶脫氫酶抑制劑的溶液置于所述腔中。
全文摘要
本發(fā)明提供了用于檢驗(yàn)分析5-FU的方法、組合物、設(shè)備及試劑盒。
文檔編號(hào)G01N33/48GK102648412SQ201080041549
公開(kāi)日2012年8月22日 申請(qǐng)日期2010年7月19日 優(yōu)先權(quán)日2009年7月17日
發(fā)明者B·洛, C·科爾文, H·麥克勞德, M·奧弗菲爾德, S·J·薩拉莫內(nèi) 申請(qǐng)人:美瑞德生物工程公司