專利名稱：一種固定化酶整體毛細(xì)管色譜柱及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬色譜柱制備技術(shù)，特別涉及一種固定化酶整體毛細(xì)管色譜柱及其制備和應(yīng)用。 背景技術(shù)：
固定化酶色譜柱的制備，目前國(guó)內(nèi)外已有開展?，F(xiàn)有技術(shù)的制備方法是以顆粒載 體固定酶，裝柱而成。顆粒載體種類較多，可以是大孔吸附樹脂，離子交換樹脂，也可以是葡 聚糖凝膠、瓊脂糖凝膠等。固定酶的方式有吸附法，如大孔樹脂固定酶，也有共價(jià)交聯(lián)法，如 葡聚糖固定酶。由于顆粒載體固定酶再裝柱，因而，無(wú)法制成柱徑在1毫米以下的毛細(xì)管固 定化柱。顆粒載體固定酶色譜柱主要應(yīng)用于親和層析分離，分離純化與柱中固定的酶具有 親和力的成分。固定化酶整體毛細(xì)管色譜柱目前國(guó)內(nèi)外均處于研究階段，固定化材料與毛 細(xì)管的選用有較多種類，應(yīng)用領(lǐng)域也處于探索之中。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是制備一種可應(yīng)用于篩選與酶具有親和作用的化合物的固定化酶 整體毛細(xì)管色譜柱。為提高篩選靈敏度，采用溶膠凝膠法固定酶，制成整體毛細(xì)管柱。本發(fā)明采用的技術(shù)方案是一種固定化酶整體毛細(xì)管色譜柱，所述的固定化酶整體毛細(xì)管色譜柱按照以下方 法制備得到(1)將四乙氧基硅烷與甘油以質(zhì)量比1 0.2 0.6混合后，再加入四乙氧基硅 烷質(zhì)量2 3%的強(qiáng)酸性離子交換樹脂，在35 45°C下，攪拌混合72 120小時(shí)，然后過(guò) 濾除去強(qiáng)酸性離子交換樹脂，取濾液減壓蒸餾除去甘油與反應(yīng)生成的乙醇(通常在真空度 300Pa、25°C溫度下進(jìn)行減壓蒸餾)，得到改性硅烷，改性硅烷中加入改性硅烷質(zhì)量1. 2 1. 6倍的水和改性硅烷質(zhì)量1. 5 2. 5%的lmol/L的磷酸溶液，混勻得到改性硅烷溶液；(2)在濃度40mmol/L、pH值為7. 0 7. 5的磷酸緩沖液中加入平均分子量為400 1500的聚乙二醇和酶，配成含有酶和聚乙二醇的磷酸緩沖液，所述含有酶和聚乙二醇的磷 酸緩沖液中聚乙二醇的濃度為70 90mg/mL，酶的濃度為90 100mg/mL，將含有酶和聚乙 二醇的磷酸緩沖液與步驟(1)得到的改性硅烷溶液以質(zhì)量比1 1混合，攪拌均勻后得混 合液，用注射器注入所述的混合液預(yù)處理過(guò)的玻璃毛細(xì)管中，注滿后靜置5 10分鐘，然 后將玻璃毛細(xì)管浸入40mmol/L、pH值7. 0的磷酸緩沖液中，于3 7 (優(yōu)選 5°C )下靜置 7 9天，制得所述固定化酶整體毛細(xì)管色譜柱，所述酶為胰蛋白酶、α葡萄糖苷酶或血管 緊張素轉(zhuǎn)化酶。所述預(yù)處理過(guò)的玻璃毛細(xì)管按照以下方法制備得到玻璃毛細(xì)管用無(wú)水乙醇浸泡 1 3小時(shí)后，用注射器將體積百分比濃度為10%的氨丙基三乙氧硅烷的無(wú)水乙醇溶液注 入毛細(xì)管中，注滿后靜置30 40分鐘，再用無(wú)水乙醇沖洗干凈，于90°C烘箱烘干30 40 分鐘，制得所述預(yù)處理過(guò)的玻璃毛細(xì)管，所述玻璃毛細(xì)管的內(nèi)徑為0. 2 1. 0毫米，管長(zhǎng)通常為5 20厘米。所述步驟(1)中，所述強(qiáng)酸性離子交換樹脂優(yōu)選732型強(qiáng)酸性離子交換樹脂、717 型強(qiáng)酸性離子交換樹脂、DOOl型強(qiáng)酸性離子交換樹脂或D201型強(qiáng)酸性離子交換樹脂。本發(fā)明還提供一種固定化酶整體毛細(xì)管色譜柱的制備方法，所述的方法包括以下 步驟 a、玻璃毛細(xì)管用無(wú)水乙醇浸泡1 3小時(shí)后，用注射器將體積百分比濃度為10% 的氨丙基三乙氧硅烷的無(wú)水乙醇溶液注入毛細(xì)管中，注滿后靜置30 40分鐘，再用無(wú)水乙 醇沖洗干凈，于90°C烘箱烘干30 40分鐘，制得預(yù)處理過(guò)的玻璃毛細(xì)管，所述玻璃毛細(xì)管 的內(nèi)徑為0. 2 1. 0毫米，管長(zhǎng)為5 20厘米；b、將四乙氧基硅烷與甘油以質(zhì)量比1 0.2 0.6混合后，再加入四乙氧基硅烷 質(zhì)量2 3%的強(qiáng)酸性離子交換樹脂，在35 45°C下，攪拌混合72 120小時(shí)，然后過(guò)濾 除去強(qiáng)酸性離子交換樹脂，取濾液減壓蒸餾除去甘油與乙醇(通常在真空度300Pa、25°C溫 度下進(jìn)行減壓蒸餾)，得到改性硅烷，改性硅烷中加入改性硅烷質(zhì)量1. 2 1. 6倍的水和改 性硅烷質(zhì)量1. 5 2. 5%的lmol/L的磷酸溶液，混勻得到改性硅烷溶液；C、在濃度40mmol/L、pH值為7. 0 7. 5的磷酸緩沖液中加入平均分子量為400 1500的聚乙二醇和酶，配成含有酶和聚乙二醇的磷酸緩沖液，所述含有酶和聚乙二醇的磷 酸緩沖液中聚乙二醇的濃度為70 90mg/mL，酶的濃度為90 100mg/mL，將含有酶和聚乙 二醇的磷酸緩沖液與步驟b得到的改性硅烷溶液以質(zhì)量比1 1混合，攪拌均勻后得混合 液，用注射器將所述的混合液注入步驟a制得的預(yù)處理過(guò)的玻璃毛細(xì)管中，注滿后靜置5 10分鐘，然后將玻璃毛細(xì)管浸入40mmol/L、pH值7. 0的磷酸緩沖液中，于3 7°C下靜置 7 9天，制得所述固定化酶整體毛細(xì)管色譜柱，所述酶為胰蛋白酶、α葡萄糖苷酶或血管 緊張素轉(zhuǎn)化酶。本發(fā)明所述的固定化酶整體毛細(xì)管色譜柱可應(yīng)用于篩選與所述固定化酶整體毛 細(xì)管色譜柱中固定的酶有親和作用的化合物。具體的，所述應(yīng)用的方法為待篩選化合物用水配成濃度小于1 μ g/mL的三種不 同濃度的樣品溶液，分別用注射泵注入含有待驗(yàn)親和作用的酶的固定化酶整體毛細(xì)管色譜 柱中，控制流速4 μ L/min，跟蹤檢測(cè)流出液中待篩選化合物的濃度，當(dāng)流出液中待篩選化合 物的濃度與樣品溶液的初始濃度相同時(shí)，記錄為濃度平衡時(shí)間，若三種不同濃度的樣品溶 液的濃度平衡時(shí)間相同，表示待篩選化合物與固定化酶整體毛細(xì)管色譜柱中固定的酶無(wú)親 和作用，若三種不同濃度的樣品溶液的濃度平衡時(shí)間有差別，表示待篩選化合物與固定化 酶整體毛細(xì)管色譜柱中固定的酶有親和作用，而且三種不同濃度的樣品溶液的濃度平衡時(shí) 間相差越大，表示親和作用越強(qiáng)。本發(fā)明提供的固定化酶整體毛細(xì)管色譜柱以甘油改性四乙氧基硅烷為酶固定化 材料，較其它硅烷材料生物親和性好。色譜柱以固定化酶的硅烷整體填充，選用0. 2 1. 0 毫米內(nèi)徑的玻璃毛細(xì)管柱，當(dāng)待篩選化合物的水溶液過(guò)柱時(shí)，檢測(cè)化合物與酶親和作用的 靈敏度，高于現(xiàn)有的固定化酶色譜柱。本發(fā)明的制備方法所制成的固定化酶色譜柱較其它 方法制成的色譜柱使用穩(wěn)定性高，用于化合物篩選更準(zhǔn)確。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步描述，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅限于 此。實(shí)施例1 選用內(nèi)徑0. 5毫米的玻璃毛細(xì)管(美國(guó)PolymicroTechnologies，LL 公司產(chǎn))，取管長(zhǎng)10厘米，用無(wú)水乙醇浸泡1小時(shí)。將氨丙基三乙氧硅烷(比利時(shí)ACROS Organics公司產(chǎn))用無(wú)水乙醇為溶劑配制10%體積百分濃度的溶液，用注射器注入毛細(xì)管 中，注滿，靜置保持30分鐘，然后用無(wú)水乙醇沖洗干凈，90°C烘箱烘35分鐘，制得預(yù)處理過(guò) 的玻璃毛細(xì)管備用。將30g四乙氧基硅烷(比利時(shí)ACROS Organics公司產(chǎn))與12g甘油混合，加入 0. 7g 732型強(qiáng)酸性離子交換樹脂(丹東市東方樹脂廠)，在40°C下，共混100小時(shí)，濾布過(guò) 濾分離出樹脂，取濾液于25°C下減壓蒸餾(真空度300Pa)去除多余的甘油與生成的乙醇， 得到改性硅烷24g。改性硅烷加入38g水和0. 36gl摩爾/升的磷酸溶液，共混均勻得到改 性硅烷溶液。將磷酸一氫鈉與磷酸二氫鈉在去離子水中配成總濃度為40毫摩爾/升，pH值7. 5 的磷酸緩沖液。在磷酸緩沖液中配入平均分子量400的聚乙二醇(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限 公司產(chǎn))，控制濃度為90毫克/毫升，并配入胰蛋白酶(合肥博美生物科技有限責(zé)任公司 產(chǎn))，控制濃度為100毫克/毫升。將0.5g含有胰蛋白酶和聚乙二醇的磷酸緩沖液與已配 制的0. 5g改性硅烷溶液共混，攪拌均勻得混合液。用注射器將混合液注入已預(yù)處理的玻璃 毛細(xì)管中，注滿后靜置10分鐘，將制成的毛細(xì)管柱浸入pH7. 0，總濃度為40毫摩爾/升的磷 酸一氫鈉/磷酸二氫鈉緩沖液中，于3°C冰箱中放置7天。即完成固定化酶整體毛細(xì)管色譜 柱的制備。將苦參堿(純度96. 5%)用去離子水配制成濃度為0·25μβ/πι1、0·05μβ/πι1、 0. 01 μ g/ml的溶液，用注射泵注入所制備的固定化酶整體毛細(xì)管色譜柱，控制流速4微升/ 分鐘。上述三個(gè)濃度的樣液過(guò)柱時(shí)苦參堿出柱達(dá)到濃度平衡的時(shí)間分別為29. 5分鐘，25. 3 分鐘和22. 6分鐘，說(shuō)明苦參堿與胰蛋白酶有親和作用。實(shí)施例2 選用內(nèi)徑0. 2毫米的玻璃毛細(xì)管(美國(guó)PolymicroTechnologies，LL 公司產(chǎn))，取管長(zhǎng)20厘米，用無(wú)水乙醇浸泡1小時(shí)。將氨丙基三乙氧硅烷(比利時(shí)ACROS Organics公司產(chǎn))用無(wú)水乙醇為溶劑配制10%體積百分濃度的溶液，用注射器注入毛細(xì)管 中，注滿，靜置保持40分鐘，然后用無(wú)水乙醇沖洗干凈，90°C烘箱烘40分鐘，制得預(yù)處理過(guò) 的玻璃毛細(xì)管備用。將30g四乙氧基硅烷(比利時(shí)ACROS Organics公司產(chǎn))與18g甘油混合，加入 0. 9g D201大孔型強(qiáng)酸性離子交換樹脂(天津市波鴻樹脂科技有限公司)，在45°C下，共混 120小時(shí)，濾布過(guò)濾分離出樹脂，取濾液于25°C下減壓蒸餾(真空度300Pa)去除多余的甘 油與生成的乙醇，得到改性的硅烷25g。改性硅烷加入30g水和0. 48g 1摩爾/升的磷酸溶 液，共混均勻得到改性硅烷溶液。將磷酸一氫鈉與磷酸二氫鈉在去離子水中配成總濃度為40毫摩爾/升，pH值為 7. 0的磷酸緩沖液。在磷酸緩沖液中配入平均分子量1500的聚乙二醇(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑 有限公司產(chǎn))，濃度為70毫克/毫升。配入α葡萄糖苷酶(無(wú)錫酶制劑廠產(chǎn))，濃度為90 毫克/毫升。將含有酶和聚乙二醇的磷酸緩沖液0. 6g與已配制的改性硅烷溶液0. 6g共混，攪拌均勻得混合液。用注射器將混合液注入已預(yù)處理的玻璃毛細(xì)管中，注滿后靜置5分鐘， 將制成的毛細(xì)管柱浸入PH7. 0，總濃度為40毫摩爾/升的磷酸一氫鈉/磷酸二氫鈉緩沖液 中，于7°C冰箱中放置9天。即完成固定化酶整體毛細(xì)管色譜柱的制備。
將齊墩果酸(純度95. 3% )用去離子水配制成濃度為0. 20μ g/ml、0· 08μ g/ml、 0. 02μ g/ml的溶液，用注射泵注入所制備的固定化酶整體毛細(xì)管色譜柱，控制流速4微升 /分鐘。上述三個(gè)濃度的樣液過(guò)柱時(shí)齊墩果酸出柱達(dá)到濃度平衡的時(shí)間分別為28. 7分鐘， 26. 2分鐘和23. 4分鐘，說(shuō)明齊墩果酸與α葡萄糖苷酶有親和作用。實(shí)施例3 選用內(nèi)徑1.0毫米的玻璃毛細(xì)管(美國(guó)PolymicroTechnologies，LL 公司產(chǎn))，取管長(zhǎng)5厘米，用無(wú)水乙醇浸泡1小時(shí)。將氨丙基三乙氧硅烷(比利時(shí)ACROS Organics公司產(chǎn))用無(wú)水乙醇配制10%體積百分濃度的溶液，用注射器注入毛細(xì)管中，注 滿，保持35分鐘，用無(wú)水乙醇沖洗干凈，90°C烘箱烘30分鐘，制得預(yù)處理過(guò)的玻璃毛細(xì)管備 用。將30g四乙氧基硅烷(比利時(shí)ACROS Organics公司產(chǎn))與6g甘油混合，加入0. 6g DOOl大孔型強(qiáng)酸性離子交換樹脂(北京海德能公司)，在35°C下，共混72小時(shí)，濾布過(guò)濾分 離出樹脂，取濾液于25°C下減壓蒸餾(真空度300Pa)去除多余的甘油與生成的乙醇，得到 改性的硅烷22g。改性硅烷加入32g水和0. 55g濃度為1摩爾/升的磷酸溶液，共混均勻得 到改性硅烷溶液。將磷酸一氫鈉與磷酸二氫鈉在去離子水中配成總濃度為40毫摩爾/升，pH值為 7. 3的磷酸緩沖液。在磷酸緩沖液中配入平均分子量1000的聚乙二醇(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑 有限公司產(chǎn))，濃度為80毫克/毫升。配入血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(上海西唐生物科技有限公 司)，濃度為95毫克/毫升。將含有酶和聚乙二醇的磷酸緩沖液0. 8g與已配制的改性硅 烷溶液0. Sg共混，攪拌均勻得混合液。用注射器將混合液注入已預(yù)處理的玻璃毛細(xì)管中， 注滿后靜置8分鐘，將制成的毛細(xì)管柱浸入pH7. 0，總濃度為40毫摩爾/升的磷酸一氫鈉/ 磷酸二氫鈉緩沖液中，于5°C冰箱中放置8天。即完成固定化酶整體毛細(xì)管色譜柱的制備。將樺木酚(純度92.7% )用去離子水配制成濃度為0·25μβ/πι1、0· 10 μ g/ml、 0. 05 μ g/ml的溶液，用注射泵注入所制備的固定化酶整體毛細(xì)管色譜柱，控制流速4微升/ 分鐘。上述三個(gè)濃度的樣液過(guò)柱時(shí)樺木酚出柱達(dá)到濃度平衡的時(shí)間分別為29. 6分鐘，26. 5 分鐘和24. 1分鐘，說(shuō)明樺木酚與血管緊張素轉(zhuǎn)化酶有親和作用。
權(quán)利要求
一種固定化酶整體毛細(xì)管色譜柱，其特征在于所述的固定化酶整體毛細(xì)管色譜柱按照以下方法制備得到(1)將四乙氧基硅烷與甘油以質(zhì)量比1∶0.2～0.6混合后，再加入四乙氧基硅烷質(zhì)量2～3％的強(qiáng)酸性離子交換樹脂，在35～45℃下，攪拌混合72～120小時(shí)，然后過(guò)濾除去強(qiáng)酸性離子交換樹脂，取濾液減壓蒸餾除去甘油與生成的乙醇，得到改性硅烷，所述改性硅烷中加入改性硅烷質(zhì)量1.2～1.6倍的水和改性硅烷質(zhì)量1.5～2.5％的1mol/L的磷酸溶液，混勻得到改性硅烷溶液；(2)在濃度40mmol/L、pH值為7.0～7.5的磷酸緩沖液中加入平均分子量為400～1500的聚乙二醇和酶，配成含有酶和聚乙二醇的磷酸緩沖液，所述含有酶和聚乙二醇的磷酸緩沖液中聚乙二醇的濃度為70～90mg/mL，酶的濃度為90～100mg/mL，將含有酶和聚乙二醇的磷酸緩沖液與步驟(1)得到的改性硅烷溶液以質(zhì)量比1∶1混合，攪拌均勻后得混合液，用注射器將所述的混合液注入預(yù)處理過(guò)的玻璃毛細(xì)管中，注滿后靜置5～10分鐘，然后將玻璃毛細(xì)管浸入40mmol/L、pH值7.0的磷酸緩沖液中，于3～7℃下靜置7～9天，制得所述固定化酶整體毛細(xì)管色譜柱，所述酶為胰蛋白酶、α葡萄糖苷酶或血管緊張素轉(zhuǎn)化酶。
2.如權(quán)利要求1所述的固定化酶整體毛細(xì)管色譜柱，其特征在于所述預(yù)處理過(guò)的玻璃 毛細(xì)管按照以下方法制備得到玻璃毛細(xì)管用無(wú)水乙醇浸泡1 3小時(shí)后，用注射器將體積 百分比濃度為10%的氨丙基三乙氧硅烷的無(wú)水乙醇溶液注入毛細(xì)管中，注滿后靜置30 40分鐘，再用無(wú)水乙醇沖洗干凈，于90°C烘箱烘干30 40分鐘，制得所述預(yù)處理過(guò)的玻璃 毛細(xì)管，所述玻璃毛細(xì)管的內(nèi)徑為0. 2 1. 0毫米。
3.如權(quán)利要求2所述的固定化酶整體毛細(xì)管色譜柱，其特征在于所述玻璃毛細(xì)管的管 長(zhǎng)為5 20厘米。
4.如權(quán)利要求1所述的固定化酶整體毛細(xì)管色譜柱，其特征在于所述強(qiáng)酸性離子交換 樹脂為732型強(qiáng)酸性離子交換樹脂、717型強(qiáng)酸性離子交換樹脂、D001型強(qiáng)酸性離子交換樹 脂或D201型強(qiáng)酸性離子交換樹脂。
5.如權(quán)利要求1所述的固定化酶整體毛細(xì)管色譜柱，其特征在于所述步驟(1)中，所述 取濾液減壓蒸餾是在真空度300Pa、25°C溫度下進(jìn)行減壓蒸餾。
6.如權(quán)利要求1所述的固定化酶整體毛細(xì)管色譜柱的制備方法，其特征在于所述的方 法包括以下步驟a、玻璃毛細(xì)管用無(wú)水乙醇浸泡1 3小時(shí)后，用注射器將體積百分比濃度為10%的氨 丙基三乙氧硅烷的無(wú)水乙醇溶液注入毛細(xì)管中，注滿后靜置30 40分鐘，再用無(wú)水乙醇沖 洗干凈，于90°C烘箱烘干30 40分鐘，制得預(yù)處理過(guò)的玻璃毛細(xì)管，所述玻璃毛細(xì)管的內(nèi) 徑為0. 2 1. 0毫米，管長(zhǎng)為5 20厘米；b、將四乙氧基硅烷與甘油以質(zhì)量比1 0.2 0.6混合后，再加入四乙氧基硅烷質(zhì)量 2 3%的強(qiáng)酸性離子交換樹脂，在35 45°C下，攪拌混合72 120小時(shí)，然后過(guò)濾除去強(qiáng) 酸性離子交換樹脂，取濾液在真空度減壓蒸餾除去甘油與乙醇，得到改性硅烷，改性硅烷中 加入改性硅烷質(zhì)量1. 2 1. 6倍的水和改性硅烷質(zhì)量1. 5 2. 5%的lmol/L的磷酸溶液， 混勻得到改性硅烷溶液；c、在濃度40mmol/L、pH值為7.0 7. 5的磷酸緩沖液中加入平均分子量為400 1500的聚乙二醇和酶，配成含有酶和聚乙二醇的磷酸緩沖液，所述含有酶和聚乙二醇的磷酸緩 沖液中聚乙二醇的濃度為70 90mg/mL，酶的濃度為90 100mg/mL，將含有酶和聚乙二醇 的磷酸緩沖液與步驟b得到的改性硅烷溶液以質(zhì)量比1 1混合，攪拌均勻后得混合液，用 注射器將所述的混合液注入步驟a制得的預(yù)處理過(guò)的玻璃毛細(xì)管中，注滿后靜置5 10分 鐘，然后將玻璃毛細(xì)管浸入40mmol/L、pH值7. 0的磷酸緩沖液中，于3 7°C下靜置7 9 天，制得所述固定化酶整體毛細(xì)管色譜柱，所述酶為胰蛋白酶、α葡萄糖苷酶或血管緊張素 轉(zhuǎn)化酶。
7.如權(quán)利要求1所述的固定化酶整體毛細(xì)管色譜柱應(yīng)用于篩選與所述固定化酶整體 毛細(xì)管色譜柱中固定的酶有親和作用的化合物。
8.如權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于所述應(yīng)用的方法為待篩選化合物用水配成 濃度小于1 μ g/mL的三種不同濃度的樣品溶液，分別用注射泵注入含有待驗(yàn)親和作用的酶 的固定化酶整體毛細(xì)管色譜柱中，控制流速4 μ L/min，跟蹤檢測(cè)流出液中待篩選化合物的 濃度，當(dāng)流出液中待篩選化合物的濃度與樣品溶液的初始濃度相同時(shí)，記錄為濃度平衡時(shí) 間，若三種不同濃度的樣品溶液的濃度平衡時(shí)間相同，表示待篩選化合物與固定化酶整體 毛細(xì)管色譜柱中固定的酶無(wú)親和作用，若三種不同濃度的樣品溶液的濃度平衡時(shí)間有差 另IJ，表示待篩選化合物與固定化酶整體毛細(xì)管色譜柱中固定的酶有親和作用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種固定化酶整體毛細(xì)管色譜柱，按照以下方法制備得到將四乙氧基硅烷與甘油，在強(qiáng)酸性離子交換樹脂作用下，制得改性硅烷，改性硅烷中加水和磷酸溶液，混勻得到改性硅烷溶液；然后將含有酶和聚乙二醇的磷酸緩沖液與改性硅烷溶液以質(zhì)量比1∶1混合，攪拌均勻后，用注射器注入預(yù)處理過(guò)的玻璃毛細(xì)管中，注滿后靜置5～10分鐘，然后將玻璃毛細(xì)管浸入磷酸緩沖液中，于3～7℃下靜置7～9天，制得固定化酶整體毛細(xì)管色譜柱。所述固定化酶整體毛細(xì)管色譜柱可應(yīng)用于篩選與所述固定化酶整體毛細(xì)管色譜柱中固定的酶有親和作用的化合物。本發(fā)明固定化酶整體毛細(xì)管色譜柱的制備方法簡(jiǎn)單，使用穩(wěn)定性高，用于化合物篩選更準(zhǔn)確。
文檔編號(hào)G01N30/60GK101876653SQ20101020929
公開日2010年11月3日 申請(qǐng)日期2010年6月25日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月25日
發(fā)明者盧時(shí)勇, 張錚, 錢俊青 申請(qǐng)人:浙江工業(yè)大學(xué)