專利名稱：一種聚丙烯酰胺凝膠電泳中的dna銀染方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于分子遺傳學(xué)領(lǐng)域的電泳染色方法，具體涉及一種聚丙烯酰胺凝膠電泳 (PAGE)中的DNA銀染方法。
背景技術(shù)：
聚丙烯酰胺凝膠(PAGE)電泳是分析蛋白質(zhì)和核酸樣品的一種常用的方法，在分子 生物學(xué)及相關(guān)學(xué)科的基礎(chǔ)和臨床研究中得以廣泛的應(yīng)用。電泳后對(duì)樣品的顯示有許多的方 法，銀染法因具有靈敏度高、無毒無害且顯色結(jié)果可以隨干膠直接保存等優(yōu)點(diǎn)而得以廣泛 應(yīng)用，特別是近幾年在SSCP、DDPCR和DNA測(cè)序等實(shí)驗(yàn)中更顯示出其優(yōu)越性。傳統(tǒng)的銀染方 法主要包含下面幾個(gè)步驟(1)預(yù)處理與固定，(2)染色，(3)顯色，(4)終止反應(yīng)。整個(gè)過 程比較繁瑣，要用到蒸餾水或去離子水、乙醇、硝酸、硝酸銀、碳酸鈉、甲醛、硫代硫酸鈉、乙 酸等多種化學(xué)試劑。近年來，許多研究人員對(duì)PAGE膠中蛋白質(zhì)和DNA的銀染和顯色的過程 優(yōu)化進(jìn)行了探索，以求得到簡(jiǎn)便、快速、靈敏度高且消耗低的銀染顯色方法，但改良后的方 法，染色與顯色的整個(gè)過程仍然至少需要40 50min。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷或不足，本發(fā)明的目的在于，提供一種快速、靈敏和 有效的聚丙烯酰胺(PAGE)電泳中的DNA銀染方法。為了實(shí)現(xiàn)上述任務(wù)，本發(fā)明采取如下的技術(shù)解決方案
一種聚丙烯酰胺(PAGE)電泳中的DNA銀染方法，其特征在于，該方法先用質(zhì)量濃度 0. 1%的AgN03浸泡聚丙烯酰胺凝膠lOmin - 15min,然后對(duì)用浸泡后的聚丙烯酰胺凝膠蒸餾 水清洗凝膠2次，再用質(zhì)量分?jǐn)?shù)0. 04%的Na2C03、每升含有質(zhì)量濃度37%的HCOH，2mL、質(zhì)量 分?jǐn)?shù)2%的NaOH的混合溶液顯色5min - 6min,顯色后用蒸餾水沖洗聚丙烯酰胺凝膠2次。所述的聚丙烯酰胺凝膠的質(zhì)量濃度為8%或12%，交聯(lián)度為29 :1。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下有益的技術(shù)效果
傳統(tǒng)的DNA銀染方法需要5-6種化學(xué)試劑，配制4種溶液，花費(fèi)40-60min才能完成染色 步驟，而本方法只需要4種化學(xué)試劑，即硝酸銀(AgN03)、氫氧化鈉(NaOH)、碳酸鈉(Na2C03) 和甲醛(HC0H)，配制2種溶液，花費(fèi)20min就可以達(dá)到與傳統(tǒng)染色方法相同的結(jié)果，而且在 變性聚丙烯酰胺電泳(PAGE)中，該方法可以將DNA的用量降低到0. 44ng ；在非變性聚丙烯 酰胺電泳(PAGE)中可以將DNA的用量降低到3. 5ng。本方法與傳統(tǒng)染色方法相比，不僅節(jié) 約了時(shí)間，降低了成本，而且提高了檢測(cè)的靈敏度。


圖1是采用本發(fā)明對(duì)GDF9基因外顯子1的PCR產(chǎn)物的變性聚丙烯酰胺凝膠(濃度 12%)電泳檢測(cè)對(duì)比圖，圖中，A表示本發(fā)明的DNA銀染方法；B表示采用傳統(tǒng)方法1 ；C表示 采用傳統(tǒng)方法2 ；D表示采用傳統(tǒng)方法3 ；圖2是采用本發(fā)明對(duì)微衛(wèi)星BM1329PCR產(chǎn)物的非變性聚丙烯酰胺凝膠(濃度8%)電泳 檢測(cè)圖，圖中，1、2、3和8表示關(guān)中奶山羊；4和5表示濟(jì)寧青山羊；6和7表示布爾山 羊；9和10表示西農(nóng)薩能奶山羊，M表示pBR322DNA/MspI ；
圖3是采用本發(fā)明對(duì)GDF9基因外顯子2PCR產(chǎn)物的變性聚丙烯酰胺凝膠(濃度12%)電 泳檢測(cè)圖，圖中，1、2和3表示關(guān)中奶山羊；4、5和7表示濟(jì)寧青山羊；6和8表示布爾 山羊；9、10和11表示西農(nóng)薩能奶山羊；
以下通過對(duì)3種傳統(tǒng)的DNA銀染方法與本發(fā)明的DNA銀染方法的實(shí)施例進(jìn)行比較分 析，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。
具體實(shí)施例方式1、3種傳統(tǒng)的DNA銀染方法與本發(fā)明的DNA銀染方法的比較
按照表1的操作步驟對(duì)3種傳統(tǒng)的DNA銀染方法(圖中的方法1、方法2和方法3)與本 發(fā)明的DNA銀染方法進(jìn)行比較，電泳檢測(cè)結(jié)果如圖1所示，從圖1可知，本發(fā)明的染色方法 明顯優(yōu)于3種傳統(tǒng)的染色方法。用8%的非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)400頭山羊的微衛(wèi)星BM1329，使用本發(fā)明 的DNA銀染方法染色，檢測(cè)結(jié)果如圖2所示；
用12%變性聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)400頭山羊GDF9基因外顯子2的多態(tài)性，使用本 發(fā)明的DNA銀染方法染色，試驗(yàn)結(jié)果如圖3所示。從圖2和圖3可知，使用優(yōu)化后的DNA銀染方法染色能夠獲得良好的試驗(yàn)結(jié)果。表1 :3種傳統(tǒng)的DNA銀染方法與本發(fā)明的DNA銀染方法操作步驟的比較
注表中所用試劑為質(zhì)量濃度。
表2 3種傳統(tǒng)的DNA銀染方法與本發(fā)明的DNA銀染方法效果的比較
權(quán)利要求
一種聚丙烯酰胺(PAGE)電泳中的DNA銀染方法，其特征在于，該方法先用質(zhì)量濃度0.1%的AgNO3浸泡聚丙烯酰胺凝膠10min–15min，然后對(duì)用浸泡后的聚丙烯酰胺凝膠蒸餾水清洗凝膠2次，再用質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.04%的Na2CO3、每升含有質(zhì)量濃度37%的HCOH，2mL、質(zhì)量分?jǐn)?shù)2%的NaOH所構(gòu)成的混合溶液顯色5min–6min，顯色后用蒸餾水沖洗聚丙烯酰胺凝膠2次。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的聚丙烯酰胺凝膠的濃度為8%或12%， 交聯(lián)度為29 :1。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種聚丙烯酰胺凝膠(PAGE)電泳中的DNA銀染方法，先用0.1%AgNO3浸泡聚丙烯酰胺凝膠10–15min，用蒸餾水清洗2次，其次用0.04%的Na2CO3、2mL的37%HCOH/L、2%的NaOH混合溶液顯色5–6min，蒸餾水沖洗2次即可完成全部染色過程。傳統(tǒng)的DNA銀染方法需要5-6種化學(xué)試劑，配制4中溶液，花費(fèi)40-60min才能完成染色步驟，而本方法只需要4種化學(xué)試劑，配制2種溶液，花費(fèi)20min就可以達(dá)到與傳統(tǒng)染色方法相同的結(jié)果，而且在變性聚丙烯酰胺電泳(PAGE)中，本染色方法可以將DNA的量降低到0.44ng；在非變性聚丙烯酰胺電泳(PAGE)中可以將DNA的量降低到3.5ng。本方法與傳統(tǒng)染色方法相比，不僅節(jié)約了時(shí)間，降低額成本，而且提高了檢測(cè)的靈敏度。
文檔編號(hào)G01N1/30GK101865798SQ20101019944
公開日2010年10月20日 申請(qǐng)日期2010年6月12日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月12日
發(fā)明者侯金星, 姬云濤, 安小鵬, 宋宇軒, 曹斌云, 王建剛 申請(qǐng)人:西北農(nóng)林科技大學(xué)