專利名稱：微球表面熒光顏色編碼液態(tài)生物芯片診斷試劑盒及其檢測待測物質(zhì)的方法和裝置以及用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于實驗診斷技術產(chǎn)業(yè)開發(fā)及其用途領域，具體涉及新型微球表面熒光顏色編碼液態(tài)生物芯片制作方法及其檢測方法和裝置、以及其在診斷疾病、判斷療效及生物醫(yī)學科研中的用途。本發(fā)明屬于建立在抗原抗體反應和核酸分子雜交反應原理基礎上的一種新技術創(chuàng)新，可同時測定一份標本中的多種待測物質(zhì)。這些待測物質(zhì)包括具有兩個以上抗原決定簇的抗原類物質(zhì)、抗體類物質(zhì)、DNA或RNA分子物質(zhì)。
在醫(yī)院檢驗科開展的大部分腫瘤標記物、激素、細胞因子、酶蛋白分子、各種細菌、病毒、支原體、衣原體、立可次體、各種蛋白質(zhì)分子、多糖分子、類脂以及部分藥物分子等等，都是具有兩個以上抗原決定簇的抗原類物質(zhì)；各種抗微生物抗體，如抗結核桿菌抗體、抗愛滋病病毒抗體，各種自身抗體，如抗核抗體、抗SM抗體等等，大部分是抗體類物質(zhì)；各種微生物體內(nèi)的特異基因、人體或動物體內(nèi)基因的轉錄產(chǎn)物，都是DNA或RNA分子物質(zhì)。本發(fā)明的技術平臺在眾多領域用途廣泛。

背景技術：
診斷試劑盒(diagnostic kit)指為了診斷疾病、判斷療效以及其它用途，對標本中待測物質(zhì)進行檢測，所需要的完整的一套試劑組分。診斷試劑盒檢測待測物質(zhì)往往需要一種設備或裝置，才能對標本中待測物質(zhì)進行檢測并得出結果。比如，胰島素放免診斷試劑盒檢測標本中胰島素水平，需要半自動或全自動放射免疫分析儀，才能對標本中胰島素進行結果分析。
生物芯片技術指一次操作可同時檢測一份標本中成千上萬種待測物質(zhì)的新技術。編碼技術是設計生物芯片的關鍵技術。編碼技術創(chuàng)新是生物芯片的原始性創(chuàng)新。固態(tài)生物芯片以固態(tài)支持物平面坐標位置編碼待測物質(zhì)，其通量取決于固態(tài)支持物面積和點陣大小及其密度，固態(tài)生物芯片定量困難，操作復雜，難以實驗檢測自動化。
液態(tài)生物芯片又稱懸浮式點陣(suspension array)。液態(tài)生物芯片技術，是以微球特征值對不同待測物質(zhì)種類進行編碼并檢測的技術，是國內(nèi)外最先進的生物芯片技術。目前，比較科學合理的微球特征值編碼技術，包括中國人王占科發(fā)明的微球阻抗編碼技術和美國人發(fā)明的微球顏色編碼技術。
美國微球顏色編碼技術主要技術難題和問題是，用于編碼待測物質(zhì)的微球自身顏色與用于定量分析待測物質(zhì)的微球表面熒光顏色不一致，兩種熒光要精密區(qū)分，測定技術復雜。微球阻抗編碼技術主要技術難題是，微球阻抗和微球表面光信號測定需要電路和光路兩套系統(tǒng)。
本發(fā)明主要技術方案包括1)制備攜帶不同熒光顏色的特異抗體、抗原、DNA片段；2)制備攜帶不同特異抗體、抗人或動物免疫球蛋白抗體、DNA片段的無熒光顏色診斷微球；3)多種無熒光顏色診斷微球混合在一起，與一份標本中多種待測抗原、抗體、DNA或RNA片段結合后，再與攜帶不同熒光顏色的特異抗體、抗原、DNA片段特異結合，使不同無熒光顏色診斷微球表面呈現(xiàn)不同熒光顏色；4)不同診斷微球表面熒光顏色種類及其熒光強度分別代表待測抗原、抗體、DNA或RNA種類及其含量，通過微球表面熒光顏色及其熒光強度檢測裝置和相關軟件，自動分析多種待測物質(zhì)含量。
本發(fā)明技術與美國微球自身顏色編碼液態(tài)生物芯片技術最大區(qū)別是，1)本發(fā)明的微球熒光顏色編碼技術是微球表面熒光顏色編碼技術，與微球自身熒光顏色編碼技術有本質(zhì)的區(qū)別；2)本發(fā)明的診斷微球本身無熒光顏色，診斷微球表面熒光顏色來自微球最外層的攜帶不同顏色熒光的抗體、抗原、DNA片段；3)本發(fā)明的檢測通量取決于抗體、抗原、DNA片段能攜帶的熒光顏色的種類數(shù)量；5)本發(fā)明的編碼待測物質(zhì)的診斷微球表面熒光顏色與分析該物質(zhì)含量的診斷微球表面熒光顏色為同一種顏色，微球表面熒光顏色及其熒光強度分別代表待測物質(zhì)種類及其含量，避免了用于編碼待測物質(zhì)的微球自身顏色干擾用于定量分析待測物質(zhì)的微球表面熒光顏色的問題，從而使設備結構更簡單。
本發(fā)明的新型微球表面熒光顏色編碼技術與美國微球自身熒光顏色編碼技術比較見表1。
表1本發(fā)明新型微球表面熒光顏色編碼技術與美國微球自身熒光顏色編碼技術比較 本發(fā)明的技術隨著量子點熒光物質(zhì)的不斷發(fā)現(xiàn)，兩種熒光物質(zhì)按不同比例混合，可使抗體、抗原、DNA片段能攜帶越來越多種顏色，本發(fā)明檢測通量也不斷增高。由于本發(fā)明的診斷微球本身無熒光顏色，裝置不需要區(qū)分診斷微球本身熒光顏色和診斷微球最外層的抗體、抗原、DNA攜帶的熒光顏色，只通過微球表面熒光顏色及其熒光強度分析，即可分析不同待測抗原、抗體、DNA或RNA片段的種類和含量。本發(fā)明的新型微球表面熒光顏色編碼技術是在美國微球自身熒光顏色編碼技術上的一次創(chuàng)新，是設計上的又一次飛躍，技術原理更簡單，易行，更適合產(chǎn)業(yè)化和推廣。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明內(nèi)容的技術思路包括以下幾個方面 一是測定不同抗原類物質(zhì)技術思路為，在微球表面形成“微球表面結合的抗體-待測抗原-攜帶不同熒光顏色的抗體”復合物。微球表面的復合物熒光顏色種類代表待測抗原的種類，微球表面的復合物熒光顏色的深淺，代表待測抗原的含量。
二是測定不同抗體類物質(zhì)技術思路為，在微球表面形成“微球表面結合的抗人或動物免疫球蛋白抗體-待測人或動物抗體-攜帶不同熒光顏色的抗原”復合物。微球表面的復合物熒光顏色種類代表待測抗體的種類，微球表面的復合物顏色的深淺，代表待測抗體的含量。
三是測定不同DNA或RNA片段類技術思路為，在微球表面形成“微球表面結合的DNA片段-待測DNA或RNA片段-攜帶不同熒光顏色的DNA片段”復合物。微球表面的復合物熒光顏色種類代表待測DNA或RNA的種類，微球表面的復合物熒光顏色的深淺，代表待測DNA或RNA片段的含量。
本發(fā)明內(nèi)容的創(chuàng)新性包括以下幾個方面 一是用于編碼待測物質(zhì)的微球熒光顏色不是來自微球本身，而是來自結合在微球表面的攜帶不同熒光顏色的抗體、抗原或DNA片段。
二是用于編碼待測物質(zhì)的熒光顏色與用于定量分析待測物質(zhì)的熒光顏色為同一種顏色。比如，紅色熒光微球編碼愛滋病病毒抗體，微球表面紅色熒光強度就代表愛滋病病毒抗體的含量；綠色熒光微球編碼血清胰島素，微球表面綠色熒光強度就代表血清胰島素含量。
三是新型微球表面熒光顏色編碼液態(tài)生物芯片檢測通量大小取決于能結合在抗原、抗體或DNA片段上的熒光物質(zhì)(含量子點熒光物質(zhì))顏色的種類。
四是微球出現(xiàn)不同顏色熒光是在實驗過程中出現(xiàn)的，不同熒光顏色微球用一種同時判讀微球表面熒光顏色及其熒光信號強度的裝置進行測定。一種微球表面熒光顏色既用于編碼待測物質(zhì)種類，又用于測定待測物質(zhì)含量。
五是新型微球表面熒光顏色編碼技術可用于基于抗原抗體免疫反應原理、DNA和DNA以及DNA和RNA特異互補結合原理基礎上的幾乎所有抗原、抗體、DNA或RNA測定。
六是新型微球表面熒光顏色編碼液態(tài)生物芯片診斷試劑盒檢測待測物質(zhì)所需要的裝置，與配套的新型微球表面熒光顏色編碼液態(tài)生物芯片診斷試劑盒，可應用于診斷疾病、判斷療效和生物醫(yī)學科研領域中所需要檢測的眾多種待測物質(zhì)定性或定量測定。
本發(fā)明的技術方案包括三部分 第一部分為，制備新型微球表面熒光顏色編碼液態(tài)生物芯片診斷試劑盒。
第二部分為，研制新型微球表面熒光顏色編碼液態(tài)生物芯片診斷試劑盒檢測待測物質(zhì)所需要的裝置。
第三部分為，制定新型微球表面顏色編碼液態(tài)生物芯片檢測待測物質(zhì)的方法。
第一部分制備新型微球表面熒光顏色編碼液態(tài)生物芯片診斷試劑盒。
一、制備攜帶不同熒光顏色的系列抗體、抗原、DNA片段 1.研制或購買可用于結合在抗原、抗體或DNA片段上的多種不同顏色熒光物質(zhì)、但不只限于熒光物質(zhì)，包括量子點熒光物質(zhì)等。
2.制訂不同微球表面熒光顏色編碼不同待測抗原、抗體、DNA或RNA片段的對應關系。如微球表面紅色熒光編碼甲肝病毒、微球表面綠色熒光編碼乙型肝炎病毒、微球表面黃色熒光編碼甲胎蛋白、微球表面橙色熒光編碼愛滋病病毒DNA片段等。
3.按照不同微球表面熒光顏色編碼待測抗原、抗體、DNA或RNA片段對應關系，參照國內(nèi)外參考資料和成熟的方法和技術將不同顏色熒光物質(zhì)結合在相對應的特異抗體、抗原、DNA片段上，制備攜帶不同熒光顏色的抗體、抗原、DNA片段。
二、制備攜帶不同抗體、抗人或動物免疫球蛋白抗體、DNA片段的無熒光顏色的系列診斷微球 1.研制或購買可結合不同抗體、抗人或動物免疫球蛋白抗體、DNA片段的無熒光顏色的系列診斷微球，包括乳膠微球、磁性微球以及其它各種微球。
2.參照國內(nèi)外參考資料和成熟的方法和技術，將可與待測樣品中不同抗原、抗體、DNA或RNA片段特異結合的相對應的抗體、抗人或動物免疫球蛋白抗體、DNA片段結合在無熒光顏色的系列診斷微球表面，制備攜帶不同抗體、抗人或動物免疫球蛋白抗體、DNA片段的無熒光顏色的系列診斷微球。
三、組裝新型微球表面熒光顏色編碼液態(tài)生物芯片診斷試劑盒 1.配制微球洗滌液。本發(fā)明采用磷酸緩沖液，但不局限于磷酸緩沖液。
2.配制抗原抗體結合、DNA與DNA結合或DNA與RNA結合反應緩沖液。本發(fā)明采用磷酸緩沖液，但不局限于磷酸緩沖液。
3.將以下組分合理組合在一起，制備新型微球表面熒光顏色編碼液態(tài)生物芯片診斷試劑盒。
1)多種攜帶不同熒光顏色的系列抗體、抗原或DNA片段。
2)多種攜帶不同抗體、抗人或動物免疫球蛋白抗體、DNA片段的無熒光顏色的系列診斷微球。
3)微球洗滌液。
4)抗原抗體結合、DNA與DNA結合或DNA與RNA結合反應緩沖液。
試劑盒中有幾種攜帶不同熒光顏色的抗體、抗原、DNA片段，就配套幾種相對應的攜帶不同抗體、抗人或動物免疫球蛋白抗體、DNA片段的無熒光顏色的系列診斷微球。
結合在微球表面的抗體、DNA片段與攜帶不同熒光顏色的抗體、DNA片段不同，但都可以與待測抗原、DNA或RNA特異結合。
第二部分研制新型微球表面熒光顏色編碼液態(tài)生物芯片診斷試劑盒檢測待測物質(zhì)所需要的裝置。
本發(fā)明的新型微球表面熒光顏色編碼液態(tài)生物芯片診斷試劑盒檢測待測物質(zhì)所需要的裝置，是新型微球表面熒光顏色編碼液態(tài)生物芯片診斷試劑盒檢測待測待測物質(zhì)必不可少的檢測裝置，包括微球表面熒光顏色及其熒光強度分析裝置和軟件分析系統(tǒng)兩個部分。軟件分析系統(tǒng)預存微球表面熒光顏色種類與待測物質(zhì)種類對應關系和不同顏色熒光強度與待測物質(zhì)含量對應關系，接收微球表面熒光顏色信號及其熒光強度信號，根據(jù)微球表面顏色編碼待測物質(zhì)對應關系和不同顏色熒光強度與待測物質(zhì)含量對應關系，判斷微球檢測的待測物質(zhì)種類，并計算待測物質(zhì)的含量。
研制微球表面熒光顏色及其熒光強度分析裝置和軟件分析系統(tǒng)，均參照國內(nèi)外參考資料有關內(nèi)容和成熟的技術和方法進行。
新型微球表面熒光顏色編碼液態(tài)生物芯片診斷試劑盒檢測待測物質(zhì)所需要的裝置的微球熒光顏色及其熒光強度分析裝置和軟件分析系統(tǒng)為統(tǒng)一的整體，可檢測診斷微球表面呈現(xiàn)的不同熒光顏色及其熒光強度，主要應用于診斷疾病、判斷療效和生物醫(yī)學科研中所需要檢測的眾多種待測抗原、抗體、DNA或RNA片段類物質(zhì)的定性或定量測定。
第三部分新型微球表面熒光顏色編碼液態(tài)生物芯片診斷試劑盒檢測待測物質(zhì)的方法 一、測定抗原類物質(zhì)方法 1.測定待測抗原類物質(zhì)基本思路和原理 待測抗原測定最終反應體系為診斷微球表面結合的抗體與待測抗原特異結合，再與不同顏色熒光物質(zhì)標記的抗體特異結合，從而使無熒光顏色診斷微球呈現(xiàn)不同熒光顏色。診斷微球表面不同熒光顏色種類編碼不同待測抗原種類，診斷微球表面不同顏色熒光強度代表不同待測抗原含量。人們需要同時檢測多少種抗原，就混合多少種攜帶不同熒光顏色的特異抗體和多少種攜帶相對應不同抗體的診斷微球。
由于本發(fā)明是建立在以微球表面為載體的“微球表面抗體1-待測抗原-攜帶不同熒光顏色的抗體2”原理基礎上的檢測方法，所以本發(fā)明只能檢測具有多種抗原決定族的抗原，微球表面結合的抗體與攜帶不同熒光顏色的抗體是針對待測抗原不同抗原決定簇的抗體，從而使待測抗原可與微球表面的抗體和攜帶不同熒光顏色抗體同時結合，導致診斷微球呈現(xiàn)不同熒光顏色。細菌，病毒，酶蛋白分子，腫瘤標記物，細胞胞因子以及激素等都是多抗原決定族抗原，本發(fā)明可用于測定診斷疾病和判斷治療疾病效果所需要檢測的大部分抗原類物質(zhì)。
2.制備測定多種待測抗原的微球表面熒光顏色編碼液態(tài)生物芯片診斷試劑盒 各種細菌、病毒、支原體、衣原體、各種腫瘤標記物、酶蛋白分子、激素、免疫細胞因子、各種多肽、多糖、類脂等，都是抗原類物質(zhì)。測定這些抗原類物質(zhì)可廣泛用于疾病診斷和治療以及生物醫(yī)學科研領域，同時檢測這些抗原類物質(zhì)，對及時發(fā)現(xiàn)和診斷疾病，降低科研工作者勞動強度，節(jié)約成本，具有重要意義。
1)制定微球表面熒光顏色編碼待測抗原對應關系 抗體能攜帶多少種熒光顏色，就可以同時編碼多少種待測抗原。我們將抗體能攜帶的熒光顏色種類用于編碼不同待測抗原，制定微球表面熒光顏色編碼待測抗原對應關系，見表2。
表2微球表面熒光顏色編碼待測抗原對應表
表2只起示意作用，微球表面熒光顏色或抗體攜帶的熒光顏色種類不局限于本表列出的顏色種類。
2)制備攜帶不同熒光顏色的系列抗體 按照微球表面熒光顏色編碼待測抗原對應關系，參照國內(nèi)外參考資料和成熟的方法和技術，將不同顏色熒光物質(zhì)標記在針對不同待測抗原的相應抗體上，制備攜帶不同熒光顏色的系列抗體，見表3。
表3制備攜帶不同熒光顏色的系列抗體
表3只起示意作用，不同顏色熒光物質(zhì)種類不局限于本表列出的顏色種類。不同顏色熒光物質(zhì)包括熒光物質(zhì)和量子點熒光物質(zhì)，但不局限于熒光物質(zhì)和量子點熒光物質(zhì)。
我們用2種或2種顏色以上的熒光物質(zhì)，通過控制不同顏色熒光物質(zhì)的混合比值，共同標記在DNA片段上，可得到攜帶更多種熒光顏色的系列抗體，可用于同時編碼更多種待測抗原。見表4。
表4制備攜帶更多種不同熒光顏色的抗體
3)制備微球表面攜帶不同抗體的無熒光顏色的系列診斷微球 購買或自己研制無熒光顏色的微球、包括乳膠微球、磁性微球等，按照微球表面熒光顏色編碼待測抗原對應關系，參照國內(nèi)外參考資料和成熟的方法和技術，將針對不同待測抗原的相應不同抗體，共價結合在無熒光顏色的微球表面，制備攜帶針對不同待測抗原的不同抗體的無熒光顏色的系列診斷微球，見表5。
表5制備攜帶不同抗體的無熒光顏色系列診斷微球
表5只起示意作用，微球表面攜帶的抗體和不同顏色熒光物質(zhì)標記的抗體，針對的待測抗原的抗原決定族不同。微球表面攜帶的抗體與攜帶不同熒光顏色的抗體不同，但都可以與待測抗原結合。
4)配制相關試劑 參照相關參考書有關的內(nèi)容和成熟的方法，配制微球洗滌液、抗原抗體結合反應緩沖液等。
5)組裝檢測多種待測抗原的微球表面熒光顏色編碼液態(tài)生物芯片診斷試劑盒 將以下組分組裝在一起，合成微球表面熒光顏色編碼液態(tài)生物芯片診斷試劑盒。這些組分至少包括 (1)攜帶不同熒光顏色的系列抗體。同時測定幾種不同待測抗原，就混合幾種攜帶不同熒光顏色的抗體。攜帶不同熒光顏色的抗體濃度控制在適當范圍，可在實驗操作前混合。
(2)攜帶不同抗體的無熒光顏色的系列診斷微球。同時測定幾種不同待測抗原，就混合幾種攜帶不同抗體的診斷微球。各種診斷微球濃度控制在105個/升左右，可在實驗操作前混合。
(3)微球洗滌液。
(4)抗原抗體結合反應緩沖液。
(5)微球表面熒光顏色編碼液態(tài)生物芯片試劑盒檢測待測抗原操作說明書。
3.制定微球表面熒光顏色編碼液態(tài)生物芯片診斷試劑盒檢測待測抗原類物質(zhì)方法 1)將含有多種攜帶不同抗體的無熒光顏色的系列診斷微球混合液250微升，加入1毫升的離心管內(nèi)，再加250微升血清或其他測定標本，充分混勻，37℃震蕩保溫1分鐘～2小時，使診斷微球表面攜帶的抗體和樣品中待測抗原充分結合。
2)1500g離心10分鐘，或放置在磁性板上靜止0.1-12小時，使多種診斷微球沉淀，棄去上清，加入微球洗滌液500微升，對沉淀診斷微球進行重懸，再1500g離心10分鐘或放置在磁性板上靜止0.1-12小時，使多種診斷微球再沉淀，再棄去上清液，加入微球洗滌液500微升，對沉淀診斷微球進行重懸，再1500g離心10分鐘或放置在磁性板上靜止0.1-12小時，再棄去上清液，徹底洗去離心管中游離的待測抗原，保留含有多種診斷微球的沉淀物。
3)將含有攜帶不同熒光顏色的系列抗體溶液500微升，加入離心管內(nèi)，與多種診斷微球充分混合，37℃震蕩保溫10分鐘～1小時，使攜帶不同熒光顏色的不同抗體分別與結合在診斷微球表面上的待測抗原進行充分結合反應，重復第2)步，對診斷微球進行洗滌，棄去上清液，保留微球沉淀物。如果標本中含有待測抗原，微球表面呈現(xiàn)熒光顏色。
4)將結合上攜帶不同熒光顏色抗體的診斷微球，通過新型微球表面熒光顏色編碼液態(tài)生物芯片診斷試劑盒檢測待測物質(zhì)所需要的裝置，進行檢測。裝置自動分析診斷微球表面熒光顏色及其熒光強度，軟件分析系統(tǒng)根據(jù)已經(jīng)存儲的微球表面熒光顏色與待測抗原對應關系以及微球熒光強度與待測抗原含量對應關系，自動分析并打印不同待測抗原的含量、陽性和陰性結果報告。
5)結果判讀如果診斷微球表面出現(xiàn)某一種熒光顏色，說明標本內(nèi)的該種熒光顏色編碼的待測抗原陽性，該種顏色熒光強度與該種待測抗原濃度呈正比，采用該種抗原標準品已知濃度做參比測定，可對該種待測抗原進行準確定量。如果微球出現(xiàn)某幾種熒光顏色，說明標本內(nèi)該幾種熒光顏色編碼的幾種待測抗原陽性，該幾種顏色熒光強度與該幾種待測抗原濃度呈正比，采用該幾種抗原標準品已知濃度做參比測定，可對該幾種待測抗原進行準確定量，說明標本中同時存在該幾種抗原物質(zhì)。如果，診斷微球表面未出現(xiàn)加入的抗體攜帶的熒光顏色，說明標本中微球未出現(xiàn)的熒光顏色編碼的待測抗原陰性。如果同時檢測n種待測抗原，加入攜帶n種不同熒光顏色的抗體和相對應的攜帶不同抗體的無熒光顏色的診斷微球，診斷微球表面出現(xiàn)m種顏色，說明標本中同時存在m種抗原物質(zhì)，m種待測抗原含量與m種熒光顏色的強度正相關，(n-m)種待測抗原陰性，具體陰性的(n-m)種待測抗原種類為診斷微球表面未出現(xiàn)的(n-m)種熒光顏色編碼的待測抗原種類。依次類推。
二、測定抗體類物質(zhì)方法 1.測定待測抗體類物質(zhì)基本思路和原理 人體和動物體內(nèi)待測抗體測定最終反應體系為，微球表面結合的抗人或動物免疫球蛋白抗體(抗抗體)與人體或動物體內(nèi)的待測抗體(免疫球蛋白)結合，再與攜帶不同熒光顏色的抗原特異結合，從而使無熒光顏色微球表面呈現(xiàn)不同熒光顏色。診斷微球表面不同熒光顏色種類編碼不同待測抗體種類，診斷微球表面不同顏色熒光強度代表不同待測抗體含量。人們需要同時檢測多少種抗體，就混合多少種攜帶不同熒光顏色的特異抗原。
本發(fā)明是建立在以微球表面為載體的“微球表面抗抗體-待測抗體-攜帶不同熒光顏色的抗原”原理基礎上的檢測方法，本發(fā)明能夠檢測所有人類和動物體內(nèi)的抗體。如果，檢測人類待測抗體，就使用攜帶抗人免疫球蛋白抗體的診斷微球，如果檢測動物體內(nèi)待測抗體，就使用攜帶動物免疫球蛋白抗體的診斷微球。
由于所有抗體都是免疫球蛋白，所以攜帶抗人或動物免疫球蛋白抗體的診斷微球能結合人或動物體內(nèi)所有抗體，但只有結合到待測抗體時，攜帶不同熒光顏色的抗原，才能結合到診斷微球表面，才能使診斷微球表面呈現(xiàn)熒光顏色。如果標本中沒有人體或動物體內(nèi)待測抗體，攜帶不同熒光顏色的抗原，就結合不到診斷微球表面，診斷微球表面不呈現(xiàn)熒光顏色，說明標本中待測抗體陰性。
導致疾病的絕大多數(shù)抗原、如各種微生物，均能誘導機體產(chǎn)生相應抗體，檢測人體內(nèi)這類抗體可作為微生物感染的診斷指標。如檢測HIV抗體，可作為愛滋病患者的診斷指標。
2.制備測定多種待測抗體的微球表面熒光顏色編碼液態(tài)生物芯片診斷試劑盒 在疾病診斷和生命科學研究領域，大部分微生物及藥物分子為抗原類物質(zhì)，包括各種細菌、病毒、支原體、衣原體以及自身物質(zhì)等。這些抗原可刺激機體產(chǎn)生抗體、包括自身抗體。檢測人體內(nèi)這些抗體，可作為感染或接觸某種細菌、病毒、支原體、衣原體以及自身免疫性疾病等的診斷指標。同時檢測這些抗體類物質(zhì)，對及時發(fā)現(xiàn)和診斷多種疾病，具有重要意義。
1)制訂微球表面熒光顏色編碼待測抗體對應關系 抗原能攜帶多少種熒光顏色，就可以同時編碼多少種待測抗體。我們將抗原能攜帶的熒光顏色種類用于編碼不同待測抗原，制定微球表面熒光顏色編碼待測抗體對應關系，見表6。
表6微球表面熒光顏色編碼待測抗體對應表
表6只起示意作用，微球表面熒光顏色或抗原攜帶的熒光顏色種類不局限于本表列出的顏色種類。
2)制作不同顏色熒光物質(zhì)標記的抗原 按照微球表面熒光顏色編碼待測抗體對應關系，參照國內(nèi)外參考資料和成熟的方法和技術，將不同顏色熒光物質(zhì)標記在針對不同待測抗體的相應抗原上，制備攜帶不同熒光顏色的系列抗原，見表7。
表7制備攜帶不同熒光顏色的系列抗原
表7只起示意作用，不同顏色熒光物質(zhì)種類不局限于本表列出的顏色種類。不同顏色熒光物質(zhì)包括熒光物質(zhì)和量子點熒光物質(zhì)，但不局限于熒光物質(zhì)和量子點熒光物質(zhì)。Ag1，Ag2，Ag3，Ag4和Ag5分別代表可與Ab1，Ab2，Ab3，Ab4和Ab5特異結合的抗原。
我們用2種或2種顏色以上的不同顏色熒光物質(zhì)，按不同比例混合共同標記在抗原上，可得到攜帶更多種不同熒光顏色的抗原，用于同時編碼更多種待測抗體，見表8。
表8制備攜帶更多種不同熒光顏色的抗原
3)制備表面攜帶抗人或動物免疫球蛋白抗體的無熒光顏色的診斷微球 購買或自己研制無熒光顏色的微球、包括乳膠微球、磁性微球等，根據(jù)待測抗體類型，按照國內(nèi)外參考資料和成熟的方法和技術，將抗人或動物免疫球蛋白抗體，共價結合在無熒光顏色的微球表面，制備攜帶可結合所有人或動物抗體的無熒光顏色診斷微球，見表9。
表9制備表面攜帶抗人或動物免疫球蛋白抗體的診斷微球
4)配制相關試劑盒組成 參照相關參考書有關的內(nèi)容和成熟的方法，配制微球洗滌液、抗原抗體結合反應緩沖液等。
5)組裝檢測多種待測抗體的微球表面熒光顏色編碼液態(tài)生物芯片診斷試劑盒 將以下組分組裝在一起，合成檢測多種待測抗體的微球表面熒光顏色編碼液態(tài)生物芯片診斷試劑盒。這些組分至少包括 (1)攜帶不同熒光顏色的系列抗原。同時測定幾種不同待測抗體，就混合幾種攜帶不同熒光顏色的抗原。攜帶不同熒光顏色的抗原濃度控制在適當范圍，可在實驗操作前混合。
(2)攜帶抗人或動物免疫球蛋白抗體的診斷微球。待測抗體為人類抗體，加攜帶抗人免疫球蛋白抗體的無熒光顏色的診斷微球，待測抗體為動物類抗體，加攜帶抗動物免疫球蛋白抗體的無熒光顏色的診斷微球。診斷微球濃度控制在109個/升左右，可在實驗操作前混合。
(3)微球洗滌液。
(4)抗原抗體結合反應緩沖液。
(5)微球表面熒光顏色編碼液態(tài)生物芯片試劑盒檢測待測抗體操作說明書。
3.制定微球表面熒光顏色編碼液態(tài)生物芯片診斷試劑盒檢測待測抗體類物質(zhì)方法 1)將含有攜帶抗人或動物免疫球蛋白抗體的診斷微球溶液250微升，加入1毫升的離心管內(nèi)，再加250微升人或動物血清或其他測定標本，充分混勻，37℃震蕩保溫1分鐘～2小時，使診斷微球表面攜帶的抗人或動物免疫球蛋白抗體與人或動物標本中所有抗體(包括待測抗體)充分結合。
2)1500g離心10分鐘，或放置在磁性板上靜止0.1-12小時，使多種診斷微球沉淀，棄去上清，加入微球洗滌液500微升，對沉淀微球進行重懸，再1500g離心10分鐘或放置在磁性板上靜止0.1-12小時，使多種診斷微球再沉淀，再棄去上清液，再加入微球洗滌液500微升，對沉淀微球進行重懸，再1500g離心10分鐘或放置在磁性板上靜止0.1-12小時，再棄去上清液，徹底洗去離心管中游離的待測抗體，保留含有多種診斷微球的沉淀物。
3)將含有多種攜帶不同熒光顏色的系列抗原溶液500微升，加入離心管內(nèi)，與多種診斷微球充分混合，37℃震蕩保溫10分鐘～1小時，使攜帶不同熒光顏色的抗原分別與結合在診斷微球表面上的待測抗體進行充分結合反應，重復第2)步，對診斷微球進行洗滌，棄去上清液，保留微球沉淀物。如果標本中含有待測抗體，微球表面呈現(xiàn)熒光顏色。
4)將結合上攜帶不同熒光顏色抗原的診斷微球，通過新型微球表面熒光顏色編碼液態(tài)生物芯片診斷試劑盒檢測待測物質(zhì)所需要的裝置，進行檢測。裝置自動分析診斷微球表面熒光顏色及其熒光強度，軟件分析系統(tǒng)根據(jù)已經(jīng)存儲的微球表面熒光顏色與待測抗體對應關系以及微球表面熒光強度與待測抗體含量對應關系，自動分析并打印不同待測抗體的含量、陽性和陰性結果報告。
5)結果判讀如果診斷微球表面出現(xiàn)某一種熒光顏色，說明標本內(nèi)的該種熒光顏色編碼的待測抗體陽性，該種顏色熒光強度與該種待測抗體濃度呈正比，采用該種抗體標準品已知濃度做參比測定，可對該種待測抗體進行準確定量。如果微球出現(xiàn)某幾種熒光顏色，說明標本內(nèi)該幾種熒光顏色編碼的幾種待測抗體陽性，該幾種顏色熒光強度與該幾種待測抗體濃度呈正比，采用該幾種抗體標準品已知濃度做參比測定，可對該幾種待測抗體進行準確定量，說明標本中同時存在該幾種待測抗體物質(zhì)。如果，診斷微球表面未出現(xiàn)加入的抗原攜帶的熒光顏色，說明標本中微球未出現(xiàn)的熒光顏色編碼的待測抗體陰性。如果同時檢測n種待測抗體，加入攜帶n種不同熒光顏色的抗原和相對應的攜帶抗人或動物免疫球蛋白抗體的無熒光顏色的診斷微球，診斷微球表面出現(xiàn)m種顏色，說明標本中同時存在m種抗體物質(zhì)，m種待測抗體含量與m種熒光顏色的強度正相關，(n-m)種待測抗體陰性，具體陰性的(n-m)種待測抗體種類為診斷微球表面未出現(xiàn)的(n-m)種熒光顏色編碼的待測抗體種類。依次類推。
三、測定DNA或RNA類物質(zhì)方法 1.測定待測DNA或RNA類物質(zhì)基本思路和原理 待測抗原測定最終反應體系為，微球表面結合的DNA片段與待測DNA或RNA片段特異結合，再與攜帶不同熒光顏色的DNA片段特異結合，從而使無熒光顏色的微球呈現(xiàn)不同熒光顏色。診斷微球表面呈現(xiàn)的不同顏色種類編碼不同待測DNA或RNA片段種類，診斷微球表面不同顏色熒光強度代表不同待測DNA或RNA片段含量。人們需要同時檢測多少種DNA或RNA片段，就混合多少種攜帶不同熒光顏色的互補DNA或RNA片段和多少種攜帶相對應不同DNA或RNA片段的診斷微球。
由于，本發(fā)明是建立在以微球表面為載體的“微球表面DNA片段-待測DNA或RNA片段-攜帶不同熒光顏色的DNA片段”原理基礎上的檢測方法。微球表面攜帶的DNA片段與攜帶不同熒光顏色的DNA片段是針對待測DNA或RNA不同區(qū)域的互補DNA片段，從而使待測DNA或RNA片段可與微球表面結合的DNA和攜帶不同熒光顏色的DNA同時結合，導致診斷微球呈現(xiàn)不同熒光顏色。本發(fā)明可檢測用于疾病診斷和治療以及生物醫(yī)學科研領域的人類和動物體內(nèi)所有基因或RNA以及所有微生物基因等。
2.制備測定多種待測DNA或RNA的微球表面熒光顏色編碼液態(tài)生物芯片診斷試劑盒 所有生命具有DNA或RNA核酸物質(zhì)，RNA是基因DNA表達轉錄的產(chǎn)物。測定這些DNA或RNA類物質(zhì)可廣泛用于疾病診斷和治療以及生物醫(yī)學科研領域，同時檢測這些DNA或RNA類物質(zhì)，對及時發(fā)現(xiàn)和診斷疾病，降低科研工作者勞動強度，節(jié)約成本，具有重要意義。
1)制定微球表面熒光顏色編碼待測DNA或RNA對應關系 DNA片段能攜帶多少種熒光顏色，就可以同時編碼多少種待測抗原。我們將DNA片段能攜帶的熒光顏色種類用于編碼不同待測DNA或RNA片段，制定微球表面熒光顏色編碼待測DNA或RNA片段對應關系，見表10。
表10微球表面熒光顏色編碼待測DNA或RNA對應表
表10只起示意作用，微球表面熒光顏色或DNA攜帶的熒光顏色種類不局限于本表列出的顏色種類，a，b，c，d，e分別代表待測DNA或RNA片段。
2)制備攜帶不同熒光顏色的DNA片段 按照微球表面熒光顏色編碼待測DNA或RNA片段對應關系，參照國內(nèi)外參考資料和成熟的方法和技術，將不同顏色熒光物質(zhì)標記在不同待測DNA或RNA的互補DNA片段上，制備攜帶不同熒光顏色的系列DNA片段，見表11。
表11制備攜帶不同熒光顏色的DNA片段
表11只起示意作用，不同顏色熒光物質(zhì)種類不局限于本表列出的顏色種類不同顏色熒光物質(zhì)包括熒光物質(zhì)和量子點熒光物質(zhì)，但不局限于熒光物質(zhì)和量子點熒光物質(zhì)。a1，b1，c1，d1，e1分別代表能與待測a，b，c，d，e等DNA或RNA片段特異結合的互補DNA片段。
我們用2種或2種顏色以上的熒光物質(zhì)，通過控制不同顏色熒光物質(zhì)的混合比值，共同標記在DNA片段上，可得到攜帶更多種熒光顏色的DNA片段，可用于同時編碼更多種待測DNA或RNA片段，見表12。
表12制備攜帶更多種不同熒光顏色的DNA片段
3)制備表面攜帶不同DNA片段的無熒光顏色的診斷微球 購買或自己研制無熒光顏色的微球、包括乳膠微球、磁性微球等，按照微球表面熒光顏色編碼待測DNA或RNA對應關系，按照國內(nèi)外參考資料和成熟的方法和技術，將針對不同待測DNA或RNA的相應互補DNA片段，共價結合在無微球表面，制備攜帶針對不同待測DNA或RNA片段的互補DNA片段的無熒光顏色診斷微球，見表13。
表13制備表面攜帶不同DNA片段的診斷微球
表13只起示意作用，微球表面攜帶的a2，b2，c2，d2，e2的DNA片段和不同顏色熒光物質(zhì)標記的a1，b1，c1，d1，e1的DNA片段不同，可分別結合在待測DNA或RNA的不同區(qū)域。
4)配制相關試劑盒組成 參照相關參考書有關的內(nèi)容和成熟的方法，配制微球洗滌液、DNA和DNA或RNA結合反應緩沖液等。
5)組裝檢測多種待測DNA或RNA片段的微球表面熒光顏色編碼液態(tài)生物芯片診斷試劑盒 將以下組分組裝在一起，合成微球表面熒光顏色編碼液態(tài)生物芯片試劑盒。這些組分至少包括 (1)攜帶不同熒光顏色的系列DNA片段。同時測定幾種待測DNA或RNA，就混合幾種攜帶不同熒光顏色的抗體。攜帶不同熒光顏色的DNA片段濃度控制在適當范圍，可在實驗操作前混合。
(2)攜帶不同特異DNA片段的系列診斷微球。同時測定幾種待測DNA或RNA，就混合幾種攜帶待測DNA或RNA片段的互補DNA片段的診斷微球。診斷微球表面攜帶的DNA片段與攜帶不同熒光顏色的DNA片段不同，但均是針對相應待測DNA或RNA的互補DNA。各種診斷微球濃度控制在105個/升左右，可在實驗操作前混合。
(3)微球洗滌液。
(4)DNA和DNA或RNA結合反應緩沖液。
(5)微球表面熒光顏色編碼液態(tài)生物芯片試劑盒檢測多種待測DNA或RNA操作說明書。
3.制定微球表面熒光顏色編碼液態(tài)生物芯片試劑盒檢測待測DNA或RNA類物質(zhì)方法 1)將含有多種攜帶不同特異DNA片段的系列診斷微球混合液250微升，加入1毫升的離心管內(nèi)，再加250微升血清或其他測定標本，充分混勻，37℃震蕩保溫1分鐘～2小時，使診斷微球表面攜帶的DNA片段和樣品中待測DNA或RNA片段充分結合。
2)1500g離心10分鐘，或放置在磁性板上靜止0.1-12小時，使多種診斷微球沉淀，棄去上清，加入微球洗滌液500微升，對沉淀診斷微球進行重懸，再1500g離心10分鐘或放置在磁性板上靜止0.1-12小時，使多種診斷微球再沉淀，再棄去上清液，加入微球洗滌液500微升，對沉淀診斷微球進行重懸，再1500g離心10分鐘或放置在磁性板上靜止0.1-12小時，再棄去上清液，徹底洗去離心管中游離的待測DNA或RNA片段，保留含有多種診斷微球的沉淀物。
3)將含有多種攜帶不同熒光顏色的系列DNA片段溶液500微升，加入離心管內(nèi)，與多種診斷微球充分混合，37℃震蕩保溫10分鐘～1小時，使攜帶不同熒光顏色的特異DNA片段分別與結合在診斷微球表面上的待測DNA或RNA片段進行充分結合反應，重復第2)步，對診斷微球進行洗滌，棄去上清液，保留微球沉淀物。如果標本中含有待測DNA或RNA，微球表面呈現(xiàn)熒光顏色。
4)將表面結合上攜帶不同熒光顏色DNA片段的系列診斷微球，通過新型微球表面熒光顏色編碼液態(tài)生物芯片診斷試劑盒檢測待測物質(zhì)所需要的裝置，進行檢測。裝置自動分析診斷微球表面熒光顏色及其熒光強度，軟件分析系統(tǒng)根據(jù)已經(jīng)存儲的微球表面熒光顏色與待測DNA或RNA片段對應關系以及微球表面熒光強度與待測DNA或RNA片段含量對應關系，自動分析并打印不同待測DNA或RNA片段的含量、陽性和陰性結果報告。
5)結果判讀如果診斷微球表面出現(xiàn)某一種熒光顏色，說明標本內(nèi)的該種熒光顏色編碼的待測DNA或RNA片段陽性，該種顏色熒光強度與該種待測DNA或RNA片段濃度呈正比，采用該種DNA或RNA片段標準品已知濃度做參比測定，可對該種待測DNA或RNA片段進行準確定量。如果微球出現(xiàn)某幾種熒光顏色，說明標本內(nèi)該幾種熒光顏色編碼的幾種待測DNA或RNA片段陽性，該幾種顏色熒光強度與該幾種待測DNA或RNA片段濃度呈正比，采用該幾種DNA或RNA片段標準品已知濃度做參比測定，可對該幾種待測DNA或RNA片段進行準確定量，說明標本中同時存在該幾種DNA或RNA片段物質(zhì)。如果，診斷微球表面未出現(xiàn)加入的抗體攜帶的熒光顏色，說明標本中微球未出現(xiàn)的熒光顏色編碼的待測DNA或RNA片段陰性。如果同時檢測n種待測DNA或RNA片段，加入攜帶n種不同熒光顏色的抗體和相對應的攜帶不同抗體的無熒光顏色的診斷微球，診斷微球表面出現(xiàn)m種顏色，說明標本中同時存在m種DNA或RNA片段物質(zhì)，m種待測DNA或RNA片段含量與m種熒光顏色的強度正相關，(n-m)種待測DNA或RNA片段陰性，具體陰性的(n-m)種待測DNA或RNA片段種類為診斷微球表面未出現(xiàn)的(n-m)種熒光顏色編碼的待測DNA或RNA片段種類。依次類推。



圖1是新型微球表面熒光顏色編碼液態(tài)生物芯片檢測待測抗原工作原理示意圖。微球表面不同熒光顏色，來自攜帶不同熒光顏色的特異抗體。微球表面熒光顏色種類編碼待測抗原種類，微球表面熒光強度代表待測抗原含量?！鸨硎緹o熒光顏色的微球，

表示結合在微球表面的特異抗體，■表示結合在微球表面抗體上的待測抗原，

表示結合在待測抗原上的攜帶不同熒光顏色的抗體。
圖2是新型微球表面熒光顏色編碼液態(tài)生物芯片檢測待測抗體工作原理示意圖。微球表面不同熒光顏色，來自攜帶不同熒光顏色的特異抗原。微球表面熒光顏色種類編碼待測抗體種類，微球表面熒光強度代表待測抗體含量。○表示無熒光顏色的微球，

表示結合在微球表面的抗人或動物免疫球蛋白抗體，

表示結合在微球表面抗體上的待測抗體，

表示結合在待測抗體上的攜帶不同熒光顏色的抗原。
圖3是新型微球表面熒光顏色編碼液態(tài)生物芯片檢測待測DNA或RNA工作原理示意圖。微球表面不同熒光顏色來自攜帶不同熒光顏色的DNA片段。微球表面熒光顏色種類代表待測DNA或RNA種類，微球表面熒光強度代表待測DNA或RNA片段含量。○表示無熒光顏色的微球，

表示結合在微球表面的DNA片段，

表示結合在微球表面DNA上的待測DNA或RNA，

表示結合在待測DNA或RNA片段上的攜帶不同熒光顏色的DNA片段。
圖4是檢測新型微球表面熒光編碼液態(tài)生物芯片工作原理示意圖。

具體實施例方式 實施方式1、疾病相關抗原類測定 疾病診斷和觀察療效需要測定機體內(nèi)多種抗原物質(zhì)。隨著對疾病發(fā)生機理的研究深入，越來越多的疾病相關抗原被發(fā)現(xiàn)，這些抗原包括各種外來的微生物和機體產(chǎn)生或本身就存在的物質(zhì)，同時檢測幾種抗原物質(zhì)測定對診斷和預警疾病以及判斷治療效果，具有重要意義。發(fā)明人以同時測定人類甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒三種病毒顆?？乖?HAV，HBV，HCV)為例，加一說明。
1)制定微球表面熒光顏色編碼甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒對應關系。發(fā)明人用微球表面黃綠色熒光(波長為525納米)編碼甲型肝炎病毒，微球表面橙紅色熒光(波長為620納米)編碼乙型肝炎病毒，微球表面紅色熒光(波長為595納米)編碼丙型肝炎病毒。
2)制備攜帶黃綠色、橙紅色和紅色熒光顏色的三種抗體。發(fā)明人購買或自己生產(chǎn)抗HAV，HBV和HCV三種抗體，按照國內(nèi)外參考資料和成熟的方法和技術，將異硫氰酸熒光素(FITC，發(fā)射光波長為525納米，黃綠色)熒光物質(zhì)、四甲基異硫氰酸羅丹明(TRITC，發(fā)射光波長為620納米，橙紅色)熒光物質(zhì)和藻紅蛋白(PE，發(fā)射光波長為595納米，紅色)熒光物質(zhì)分別標記在抗HAV抗體，抗HBV抗體和抗HCV抗體上，制備攜帶三種熒光顏色的不同抗體。
3)制備攜帶可與甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒結合的三種無熒光顏色的診斷微球。自己生產(chǎn)或購買可用來化學共價鍵標記的無熒光顏色的乳膠磁性微球和抗HAV，HBV和HCV三種單克隆抗體，按照國內(nèi)外參考資料和成熟的方法和技術，分別將抗HAV，HBV和HCV三種單克隆抗體結合在乳膠磁性微球表面。
4)將攜帶可分別與甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒結合的三種無熒光顏色的診斷微球按等比例混合，加入磷酸緩沖液，制成每升含105個磁性微球濃度的三元磁性診斷微球診斷。
5)將分別攜帶黃綠色、橙紅色和紅色熒光顏色的HAV，HBV和HCV抗體，按等比例混合，用磷酸緩沖液調(diào)整到適當濃度，制成攜帶三種不同熒光顏色的抗體溶液。
6)將250微升的三元磁性診斷微球放入1毫升的離心管內(nèi)，再加250微升血清或其他測定標本，充分混勻，37℃震蕩保溫1分鐘～2小時，使磁性診斷微球表面三種抗體和樣品中三種待測抗原充分結合。
7)1500g離心10分鐘或放置在磁性板上靜止2-12小時，棄去上清，沉淀用磷酸緩沖液重懸，再1500g離心10分鐘或放置在磁性板上靜止2-12小時，再去上清，沉淀再用磷酸緩沖液重懸，對三元磁性微球進行洗滌，徹底洗去離心管中游離的待測甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒。
8)將攜帶三種不同熒光顏色的抗體溶液500微升，加入離心管，37℃震蕩保溫30分鐘～1小時，使分別攜帶黃綠色、橙紅色和紅色熒光顏色的HAV，HBV和HCV抗體分別與結合在磁性微球表面上的待測HAV，HBV和HCV上，使三元磁性診斷微球呈現(xiàn)不同熒光顏色，重復第7)步，對磁性診斷微球進行洗滌，徹底洗去游離的攜帶三種不同熒光顏色的抗體。
10)用磷酸緩沖液將磁性微球重懸，通過同時測定微球表面熒光顏色及其熒光強度的裝置，進行微球熒光顏色(測定項目)判斷和微球表面熒光強度(物質(zhì)含量)測定。
11)結果判讀如果裝置同時檢測到橙紅色熒光微球和紅色熒光微球，說明血清HBV病毒和HCV病毒同時陽性，血清中HAV病毒陰性。橙紅色熒光強度與HBV濃度呈正比，紅色熒光強度與HCV濃度呈正比。如果，裝置同時檢測到黃綠色熒光微球、橙紅色熒光微球和紅色熒光微球，說明血清HAV病毒、HBV病毒和HCV病毒同時陽性，黃綠色熒光強度與HAV濃度呈正比，橙紅色熒光強度與HBV濃度呈正比，紅色熒光強度與HCV濃度呈正比。如果，裝置只檢測到黃綠色熒光微球，說明血清中除HAV陽性外，其他兩種HBV和HCV病毒均陰性，黃綠色熒光強度與HAV濃度呈正比。依次類推。
以上操作事例只起示范作用，具體詳見有關技術資料。如果要測n種抗原物質(zhì)，需要攜帶n種不同熒光顏色的n種抗體和n種攜帶n種抗體的診斷微球。如果用量子點物質(zhì)來標記抗體，可得到更多種不同熒光顏色的抗體，可同時檢測更多種待測抗原，操作同上。
實施方式2、疾病相關抗體類測定 測定體內(nèi)某些物質(zhì)的抗體，能間接說明體內(nèi)感染了某些微生物，疾病診斷和觀察療效需要測定機體內(nèi)多種抗體物質(zhì)。我們以同時測定抗甲型肝炎病毒(HAV)抗體、抗梅毒螺旋體(HCV)抗體和抗愛滋病病毒(HIV)抗體為例，加一說明。
1)制定微球表面熒光顏色編碼抗甲型肝炎病毒抗體、抗梅毒螺旋體抗體和抗愛滋病病毒抗體對應關系。發(fā)明人用微球表面黃綠色熒光(波長為525納米)編碼抗甲型肝炎病毒抗體，微球表面橙紅色熒光(波長為620納米)編碼抗梅毒螺旋體抗體，微球表面紅色熒光(波長為595納米)編碼抗愛滋病病毒抗體。
2)制備攜帶黃綠色、橙紅色和紅色熒光顏色的三種抗原。發(fā)明人購買或自己生產(chǎn)滅活的甲型肝炎病毒、滅活的梅毒螺旋體和滅活的愛滋病病毒或其基因工程片段，按照國內(nèi)外參考資料和成熟的方法和技術，將異硫氰酸熒光素(FITC，發(fā)射光波長為525納米，黃綠色)熒光物質(zhì)、四甲基異硫氰酸羅丹明(TRITC，發(fā)射光波長為620納米，橙紅色)熒光物質(zhì)和藻紅蛋白(PE，發(fā)射光波長為595納米，紅色)熒光物質(zhì)分別標記在滅活的甲型肝炎病毒、滅活的梅毒螺旋體和滅活的愛滋病病毒或其基因工程片段上，制備攜帶三種熒光顏色的不同不同抗原或其基因工程片段。
3)制備攜帶抗人免疫球蛋白抗體的無熒光顏色的診斷微球。自己生產(chǎn)或購買可用來化學共價鍵標記的無熒光顏色的乳膠磁性微球和抗人類免疫球蛋白抗體，按照國內(nèi)外參考資料和成熟的方法和技術，將抗人類免疫球蛋白抗體共價結合在乳膠磁性微球表面。
4)用磷酸緩沖液將攜帶抗人免疫球蛋白抗體的無熒光顏色的診斷微球調(diào)整到每升含109個磁性微球濃度。
5)將分別攜帶黃綠色、橙紅色和紅色熒光顏色的滅活的甲型肝炎病毒、梅毒螺旋體和愛滋病病毒或其基因工程產(chǎn)品片段，按等比例混合，用磷酸緩沖液調(diào)整到適當濃度，制成攜帶三種不同熒光顏色的抗原溶液。
6)將250微升的攜帶抗人免疫球蛋白抗體的磁性診斷微球放入1毫升的離心管內(nèi)，再加250微升血清或其他測定標本，充分混勻，37℃震蕩保溫1分鐘～2小時，使磁性診斷微球表面抗人免疫球蛋白和樣品中三種待測抗體及其它抗體充分結合。
7)1500g離心10分鐘或放置在磁性板上靜止2-12小時，棄去上清，沉淀用磷酸緩沖液重懸，再1500g離心10分鐘或放置在磁性板上靜止2-12小時，再去上清，沉淀再用磷酸緩沖液重懸，對磁性診斷微球進行洗滌，徹底洗去離心管中游離的待測抗甲型肝炎病毒抗體、抗梅毒螺旋體抗體和抗愛滋病病毒抗體。
8)將攜帶三種不同熒光顏色的抗原溶液500微升，加入離心管，37℃震蕩保溫30分鐘～1小時，使分別攜帶黃綠色、橙紅色和紅色熒光顏色的滅活的甲型肝炎病毒、梅毒螺旋體和愛滋病病毒或其基因工程產(chǎn)品片段分別與結合在磁性診斷微球表面上的待測抗甲型肝炎病毒抗體、抗梅毒螺旋體抗體和抗愛滋病病毒抗體上，使三元磁性診斷微球呈現(xiàn)不同熒光顏色，重復第7)步，對磁性診斷微球進行洗滌，徹底洗去游離的攜帶三種不同熒光顏色的抗原。
10)用磷酸緩沖液將磁性微球重懸，通過同時測定微球表面熒光顏色及其熒光強度的裝置，進行微球熒光顏色(測定項目)判斷和微球表面熒光強度(物質(zhì)含量)測定。
11)結果判讀如果裝置同時檢測到橙紅色熒光微球和紅色熒光微球，說明血清抗梅毒螺旋體抗體和抗愛滋病病毒抗體同時陽性，血清中抗甲型肝炎病毒抗體陰性。橙紅色熒光強度與抗梅毒螺旋體抗體濃度呈正比，紅色熒光強度與抗愛滋病病毒抗體濃度呈正比。如果，裝置同時檢測到黃綠色熒光微球、橙紅色熒光微球和紅色熒光微球，說明血清抗甲型肝炎病毒抗體、抗梅毒螺旋體抗體和抗愛滋病病毒抗體同時陽性，黃綠色熒光強度與HAV濃度呈正比，橙紅色熒光強度與抗梅毒螺旋體抗體濃度呈正比，紅色熒光強度與抗愛滋病病毒抗體濃度呈正比。如果，裝置只檢測到黃綠色熒光微球，說明血清中除抗甲型肝炎病毒抗體陽性外，其他兩種抗梅毒螺旋體抗體和抗愛滋病病毒抗體均陰性，黃綠色熒光強度與抗甲型肝炎病毒抗體濃度呈正比。依次類推。
以上操作事例只起示范作用，具體詳見有關技術資料。如果要測n種抗原物質(zhì)，需要攜帶n種不同熒光顏色的n種抗原。如果用量子點物質(zhì)來標記抗體，可得到更多種不同熒光顏色的抗原，可同時編碼更多種待測抗體，操作同上。
實施方式3、疾病相關核酸類物質(zhì)測定 測定某微生物的特異核酸片段，能夠特異診斷該微生物的存在。發(fā)明人以同時測定人乳頭瘤狀病毒、衣原體、支原體特異DNA片段為例，加一說明。
1)制定微球表面熒光顏色編碼人乳頭瘤狀病毒特異DNA片段、衣原體特異DNA片段和支原體特異DNA片段對應關系。發(fā)明人用微球表面黃綠色熒光(波長為525納米)編碼人乳頭瘤狀病毒特異DNA片段，微球表面橙紅色熒光(波長為620納米)編碼衣原體特異DNA片段，微球表面紅色熒光(波長為595納米)編碼支原體特異DNA片段。
2)制備攜帶黃綠色、橙紅色和紅色熒光顏色的三種人乳頭瘤狀病毒特異DNA片段、衣原體特異DNA片段和支原體特異DNA片段的互補DNA片段。發(fā)明人購買或自己生產(chǎn)三種抗人乳頭瘤狀病毒特異DNA片段，衣原體特異DNA片段和支原體特異DNA片段的互補DNA片段，按照國內(nèi)外參考資料和成熟的方法和技術，將異硫氰酸熒光素(FITC，發(fā)射光波長為525納米，黃綠色)熒光物質(zhì)、四甲基異硫氰酸羅丹明(TRITC，發(fā)射光波長為620納米，橙紅色)熒光物質(zhì)和藻紅蛋白(PE，發(fā)射光波長為595納米，紅色)熒光物質(zhì)分別標記在人乳頭瘤狀病毒，衣原體和支原體特異DNA片段的互補DNA片段上，制備攜帶三種熒光顏色的不同DNA片段。
3)制備攜帶可分別與人乳頭瘤狀病毒特異DNA片段、衣原體特異DNA片段和支原體特異DNA片段結合的三種無熒光顏色的診斷微球。自己生產(chǎn)或購買可用來化學共價鍵標記的無熒光顏色的乳膠磁性微球和人乳頭瘤狀病毒，衣原體和支原體特異DNA片段的互補DNA片段，按照國內(nèi)外參考資料和成熟的方法和技術，分別將人乳頭瘤狀病毒，衣原體和支原體特異DNA片段的互補DNA片段結合在乳膠磁性微球表面。
4)將攜帶可分別與人乳頭瘤狀病毒特異DNA片段、衣原體特異DNA片段和支原體特異DNA片段結合的三種無熒光顏色的診斷微球按等比例混合，加入磷酸緩沖液，制成每升含105個磁性微球濃度的三元磁性診斷微球診斷。
5)將分別攜帶黃綠色、橙紅色和紅色熒光顏色的人乳頭瘤狀病毒，衣原體和支原體特異DNA片段的互補DNA片段，按等比例混合，用磷酸緩沖液調(diào)整到適當濃度，制成攜帶三種不同熒光顏色的DNA片段溶液。
6)將250微升的三元磁性診斷微球放入1毫升的離心管內(nèi)，再加250微升待測標本，充分混勻，37℃震蕩保溫1分鐘～2小時，使磁性診斷微球表面三種待測DNA片段的互補DNA片段和標本中三種待測DNA片段充分結合。
7)1500g離心10分鐘或放置在磁性板上靜止2-12小時，棄去上清，沉淀用磷酸緩沖液重懸，再1500g離心10分鐘或放置在磁性板上靜止2-12小時，再去上清，沉淀再用磷酸緩沖液重懸，對三元磁性微球進行洗滌，徹底洗去離心管中游離的待測標本中的人乳頭瘤狀病毒特異DNA片段、衣原體特異DNA片段和支原體特異DNA片段。
8)將攜帶三種不同熒光顏色的三種待測DNA片段的互補DNA片段溶液500微升，加入離心管，37℃震蕩保溫30分鐘～1小時，使分別攜帶黃綠色、橙紅色和紅色熒光顏色的人乳頭瘤狀病毒特異DNA片段的互補片段，衣原體特異DNA片段的互補片段和支原體特異DNA片段的互補片段分別與結合在磁性微球表面上的待測人乳頭瘤狀病毒特異DNA片段，衣原體特異DNA片段和支原體特異DNA片段上，使三元磁性診斷微球呈現(xiàn)不同熒光顏色，重復第7)步，對磁性診斷微球進行洗滌，徹底洗去游離的攜帶三種不同熒光顏色的三種待測DNA片段的互補片段。
10)用磷酸緩沖液將磁性微球重懸，通過同時測定微球表面熒光顏色及其熒光強度的裝置，進行微球熒光顏色(測定項目)判斷和微球表面熒光強度(物質(zhì)含量)測定。
11)結果判讀如果裝置同時檢測到橙紅色熒光微球和紅色熒光微球，說明標本中衣原體特異DNA片段和支原體特異DNA片段同時陽性，標本中人乳頭瘤狀病毒特異DNA片段陰性，橙紅色熒光強度與衣原體特異DNA片段濃度呈正比，紅色熒光強度與支原體特異DNA片段濃度呈正比。如果，裝置同時檢測到黃綠色熒光微球、橙紅色熒光微球和紅色熒光微球，說明標本中人乳頭瘤狀病毒特異DNA片段、衣原體特異DNA片段和支原體特異DNA片段同時陽性，黃綠色熒光強度與人乳頭瘤狀病毒特異DNA片段濃度呈正比，橙紅色熒光強度與衣原體特異DNA片段濃度呈正比，紅色熒光強度與支原體特異DNA片段濃度呈正比。如果，裝置只檢測到黃綠色熒光微球，說明血清中除人乳頭瘤狀病毒特異DNA片段陽性外，其他兩種衣原體特異DNA片段和支原體特異DNA片段病毒均陰性，黃綠色熒光強度與人乳頭瘤狀病毒特異DNA片段濃度呈正比。依次類推。
以上操作事例只起示范作用，具體詳見有關技術資料。如果要測n種DNA片段，需要攜帶n種不同熒光顏色的n種待測DNA片段的互補DNA片段和n種攜帶n種待測DNA片段的互補DNA片段的診斷微球。如果用量子點物質(zhì)來標記DNA片段，可得到更多種不同熒光顏色的DNA片段，可同時編碼更多種待測DNA片段，操作同上。
RNA也是核酸類物質(zhì)，細胞漿中的mRNA(信使RNA)是評價一個基因表達情況的重要指標，檢測標本中的RNA水的具體實施方式
與檢測標本中的DNA片段方式基本相同，不再贅述。
實施方式4、待測抗原類物質(zhì)定量測定 很多激素、腫瘤標記物以及酶蛋白分子都是抗原物質(zhì)，存在于正常人群血清或體液中，疾病或異常條件下升高或降低，同時檢測這些抗原類物質(zhì)，對早期診斷和預警某些疾病，具有重要意義。發(fā)明人以同時測定血清中胰島素(INS)、甲胎蛋白(AFP)和癌胚抗原(CEA)三種抗原物質(zhì)為例，加一說明。
1)制訂微球表面熒光顏色編碼胰島素、甲胎蛋白和癌胚抗原對應關系。發(fā)明人用微球表面黃綠色熒光編碼INS，微球表面橙紅色熒光編碼AFP，微球表面紅色熒光編碼CEA。
2)制作攜帶黃綠色、橙紅色和紅色熒光顏色的抗INS，抗AFP和抗CEA三種抗體。發(fā)明人購買或自己生產(chǎn)抗INS，抗AFP和抗CEA三種多克隆抗體，按照國內(nèi)外參考資料和成熟的方法和技術，將異硫氰酸熒光素(FITC，發(fā)射光波長為525納米，黃綠色)熒光物質(zhì)、四甲基異硫氰酸羅丹明(TRITC，發(fā)射光波長為620納米，橙紅色)熒光物質(zhì)和藻紅蛋白(PE，發(fā)射光波長為595納米，紅色)熒光物質(zhì)分別標記抗INS，抗AFP，和抗CEA上，制作攜帶三種熒光顏色的不同抗體。
3)制作攜帶可與INS，AFP和CEA結合的三種診斷微球。自己生產(chǎn)或購買可用來化學共價鍵標記的乳膠磁性微球，按照國內(nèi)外參考資料和成熟的方法和技術，分別將抗INS，抗AFP，和抗CEA三種單克隆抗體結合在乳膠磁性微球表面。
4)將三種診斷磁性微球用磷酸緩沖液洗滌，按等比例混合，用含抗原抗體反應磷酸緩沖液進行重懸，制成每升含105個磁性微球濃度的三元磁性微球診斷。
5)將250微升三元磁性微球芯片放入4支容量為1毫升的離心管內(nèi)，分別加入250微升血清測定標本和已知濃度為CINSS的INS標準定值血清、已知濃度為CAFPS的AFP標準定值血清和已知濃度為CCEAS的CEA標準定值血清，37℃震蕩保溫1分鐘～2小時，使磁性微球表面抗體與待測樣品以及各標準定值血清中的待測物質(zhì)充分結合。
6)1500g離心10分鐘或放置在磁性板上靜止2-12小時，棄去上清，用磷酸緩沖液重懸，再1500g離心10分鐘或放置在磁性板上靜止2-12小時，再去上清，對三元磁性診斷微球進行洗滌，徹底洗去離心管中游離的待測INS，AFP和CEA物質(zhì)。
7)加入攜帶三種熒光顏色的抗INS，抗AFP，和抗CEA三種抗體溶液500微升，37℃震蕩保溫30分鐘～1小時，使攜帶三種熒光顏色的抗INS，抗AFP，和抗CEA三種抗體分別結合在磁性微球表面上的三種待測物質(zhì)上，使三元診斷微球呈現(xiàn)不同熒光顏色，重復第6)步，對磁性診斷微球進行洗滌，棄去上清液。
8)用磷酸緩沖液將磁性微球重懸，通過同時測定磁性微球表面顏色和磁性微球表面熒光強度的裝置，進行磁性微球顏色(測定項目)判斷和磁性微球表面熒光強度(物質(zhì)含量)測定。
9)結果判讀 ①如果裝置檢測到INS標準定值血清測定管、AFP標準定值血清測定管和CEA標準定值血清測定管中，分別只出現(xiàn)黃綠色熒光微球，橙紅色熒光微球和紅色熒光微球，說明微球表面熒光編碼液態(tài)生物芯片試劑盒有效。
②計算出INS標準定值血清測定管中的5000個黃綠色熒光微球的平均熒光強度為FGS，計算出AFP標準定值血清測定管中5000個橙紅色熒光微球的平均熒光強度為FYS，計算出CEA標準定值血清測定管中5000個紅色熒光微球的平均熒光強度為FRS。
③計算出待測血清標本測定管的5000個黃綠色熒光微球的平均熒光強度為FGX，計算出待測血清標本測定管的5000個橙紅色熒光微球的平均熒光強度為FYX，計算出待測血清標本測定管的5000個紅色熒光微球的平均熒光強度為FRX。因為待測血清標本測定管中的INS，AFP，CEA濃度不為0，所以如果待測血清標本測定管中出現(xiàn)不呈現(xiàn)任何熒光顏色的微球，說明微球表面熒光編碼液態(tài)生物芯片試劑盒無效或操作有失誤。
④根據(jù)朗比定律，待測血清INS的濃度(CINSX)、待測血清AFP的濃度(CAFPX)和待測血清CEA的濃度(CCEAX)計算公式分別表達如下 CINSX＝FGX×CINSS/FGS。
CAFPX＝FYX×CAFPS/FYS。
CCEAX＝FRX×CCEAS/FRS。
以上操作事例只起示范作用，具體詳見有關技術資料。如果要測n種待測抗原定量水平，需要n種已知濃度的待測物質(zhì)定值血清，以及n種攜帶不同熒光顏色的抗體和n種相應無熒光顏色的診斷微球，操作同上。
權利要求
1、一種微球表面熒光顏色編碼液態(tài)生物芯片診斷試劑盒，其特征在于包括1)多種攜帶不同熒光顏色的系列抗體、抗原、DNA片段，2)多種表面攜帶不同抗體、抗人或動物免疫球蛋白抗體、DNA片段的無熒光顏色的系列診斷微球，3)微球洗滌液，4)抗原抗體結合、DNA與DNA結合或DNA與RNA結合反應緩沖液，5)陽性對照標本和陰性對照標本或已知濃度的各待測物質(zhì)的標準品等。
2、如權利要求1所述的一種微球表面熒光顏色編碼液態(tài)生物芯片診斷試劑盒，其特征在于不同顏色熒光物質(zhì)結合在多種不同抗體、抗原、DNA片段上，使多種不同抗體、抗原、DNA片段攜帶不同顏色種類的熒光，并結合在無熒光顏色的不同系列診斷微球表面，使無熒光顏色的不同系列診斷微球表面呈現(xiàn)不同熒光顏色。
3、如權利要求1所述的一種微球表面熒光顏色編碼液態(tài)生物芯片診斷試劑盒，其特征在于兩種或兩種以上不同顏色熒光物質(zhì)，包括量子點熒光物質(zhì)、按不同比例混合共同結合在多種不同抗體、抗原、DNA片段上，使多種不同抗體、抗原、DNA片段攜帶更多種不同顏色種類的熒光，并結合在無熒光顏色的不同系列診斷微球表面，使無熒光顏色的不同系列診斷微球表面呈現(xiàn)更多種不同熒光顏色。
4、如權利要求1所述的一種微球表面熒光顏色編碼液態(tài)生物芯片試劑盒，其特征在于多種無熒光顏色的不同系列診斷微球表面攜帶不同抗體、抗人或動物免疫球蛋白抗體、DNA片段，可與人體或動物體內(nèi)的多種不同待測抗原、抗體、DNA或RNA片段進行特異結合反應。
5、一種微球表面熒光顏色編碼液態(tài)生物芯片診斷試劑盒檢測待測物質(zhì)的方法，其特征在于首先，建立微球表面熒光顏色代表(編碼)待測抗原、抗體、DNA或RNA片段一一對應關系；然后，將多種表面攜帶不同抗體、抗人或動物免疫球蛋白抗體、DNA片段的無熒光顏色的系列診斷微球混合在一起，加入待測抗原、抗體、DNA或RNA標本，經(jīng)溫育，使多種攜帶不同抗體、抗人或動物免疫球蛋白抗體、DNA片段的無熒光顏色的系列診斷微球表面特異結合上待測抗原、抗體、DNA或RNA片段，對微球進行洗滌，然后沉淀微球，棄去游離的待測抗原、抗體、DNA或RNA片段，再加入多種攜帶不同熒光顏色的系列抗體、抗原、DNA片段，經(jīng)溫育，使多種攜帶不同熒光顏色的系列抗體、抗原、DNA片段結合在不同的相應診斷微球表面，對微球進行洗滌，然后沉淀微球，棄去游離的攜帶不同熒光顏色的抗體、抗原或DNA片段，保留反應后的沉淀微球，并用磷酸緩沖液重懸；最后，通過一種微球表面熒光顏色及其強度分析裝置，對反應后的診斷微球表面熒光顏色及其熒光強度進行判斷和分析。
6、如權利要求5所述的一種微球表面熒光顏色編碼液態(tài)生物芯片診斷試劑盒檢測待測物質(zhì)的方法，其特征在于微球表面不同熒光顏色的種類代表(編碼)不同待測抗原、抗體、DNA或RNA片段的種類，微球表面不同顏色熒光的強度代表不同待測抗原、抗體、DNA或RNA片段的含量；表面呈現(xiàn)不同熒光顏色的診斷微球本身無熒光顏色，特異結合在微球表面最外層的攜帶不同熒光顏色的抗體、抗原、DNA片段使無熒光顏色的不同診斷微球表面呈現(xiàn)不同熒光顏色；表面呈現(xiàn)不同熒光顏色的診斷微球表面熒光顏色，來自特異結合在微球表面上的人體或動物體內(nèi)的不同待測抗原、抗體、DNA或RNA片段上的攜帶不同熒光顏色的抗體、抗原、DNA片段。
7、如權利要求5所述的一種微球表面熒光顏色編碼液態(tài)生物芯片診斷試劑盒檢測待測物質(zhì)的方法，其特征在于將用于編碼待測物質(zhì)的診斷微球表面熒光顏色和用于定量分析待測物質(zhì)的診斷微球表面熒光顏色為同一種顏色，一種顏色熒光既用于編碼待測物質(zhì)，又用于待測物質(zhì)定量分析；微球表面熒光顏色及其熒光強度分別代表待測抗原、抗體、DNA或RNA片段種類及其含量；微球表面出現(xiàn)熒光顏色是在實驗操作過程中出現(xiàn)的，微球表面呈現(xiàn)熒光顏色，說明該微球表面熒光顏色代表的待測抗原、抗體、DNA或RNA片段陽性；微球表面不呈現(xiàn)熒光顏色，說明該微球表面熒光顏色代表的待測抗原、抗體、DNA或RNA片段陰性。
8、如權利要求5所述的一種微球表面熒光顏色編碼液態(tài)生物芯片診斷試劑盒檢測待測物質(zhì)的方法，其特征在于需要同時測定n種待測抗原、抗體、DNA片段，就混合n種攜帶不同熒光顏色的系列抗體、抗原、DNA片段以及n種攜帶不同系列抗體、抗人或動物免疫球蛋白抗體、DNA片段的無熒光顏色的診斷微球；攜帶不同熒光顏色的系列抗體、抗原、DNA片段與結合在無熒光顏色微球表面的系列抗體、抗人或動物免疫球蛋白抗體、DNA片段不同，但均可以與待測抗原、抗體、DNA片段結合。
9、一種微球表面熒光顏色編碼液態(tài)生物芯片診斷試劑盒檢測待測物質(zhì)所需要的裝置，其特征在于裝置包括二部分一是微球表面熒光顏色及其強度分析裝置，同時分析微球表面熒光顏色種類及不同熒光顏色的熒光強度；二是軟件分析系統(tǒng)，預存微球表面熒光顏色種類代表(編碼)待測物質(zhì)一一對應關系以及不同熒光顏色強度代表不同待測物質(zhì)含量線性關系，接收微球表面熒光顏色種類及其熒光強度信號，根據(jù)預存的微球表面熒光顏色與待測物質(zhì)種類對應關系，判斷微球檢測的待測物質(zhì)種類，根據(jù)陰性對照品、陽性對照品及標準品濃度的微球表面熒光強度，分析待測物質(zhì)陰性、陽性或含量，并自動打印一份標本中的不同待測抗原、抗體、DNA或RNA片段結果報告。
10、一種微球表面熒光顏色編碼液態(tài)生物芯片診斷試劑盒檢測待測物質(zhì)的方法及其所需要的裝置的用途，其特征在于用于診斷疾病，判斷療效以及科研工作領域需要檢測的多種抗原、抗體、DNA或RNA片段的測定。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)學檢驗診斷試劑盒及其配套裝置開發(fā)及應用領域。主要技術方案包括1)將攜帶不同熒光顏色的抗體、抗原、DNA片段和攜帶不同抗體、抗免疫球蛋白抗體、DNA片段的無熒光顏色的診斷微球等成分組合在一起，組裝成微球表面熒光顏色編碼液態(tài)生物芯片診斷試劑盒；2)建立微球表面熒光顏色編碼液態(tài)生物芯片診斷試劑盒檢測待測物質(zhì)的方法，并通過一種裝置及其軟件，自動分析微球表面呈現(xiàn)的熒光顏色及其熒光強度；3)診斷微球表面熒光顏色種類及其熒光強度分別代表待測物質(zhì)種類及其含量。診斷疾病和判斷療效所需要檢測的大部分待測物質(zhì)為抗原、抗體、DNA或RNA類物質(zhì)，本發(fā)明的新技術應用廣泛。
文檔編號G01N33/52GK101672848SQ20091017410
公開日2010年3月17日 申請日期2009年9月24日 優(yōu)先權日2009年9月24日
發(fā)明者王占科, 雷萬生, 津 常, 祝仲珍, 柴長春, 湞 王, 潘小清, 朱皓皞, 群 肖, 志 王 申請人:王占科