專利名稱：：一種腎結(jié)石大鼠模型構(gòu)建方法及實(shí)驗(yàn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種腎結(jié)石大鼠模型構(gòu)建方法，以及利用該腎結(jié)石大鼠模型進(jìn)行腎結(jié)石大鼠腎臟組織THP表達(dá)研究的實(shí)驗(yàn)方法。(二)
背景技術(shù)：
腎結(jié)石是泌尿外科常見(jiàn)病、多發(fā)病，發(fā)病率高，且隨著生活水平的提高，其發(fā)病率呈上升趨勢(shì)。因此腎結(jié)石的發(fā)生機(jī)制和防治研究一直是泌尿外科醫(yī)師關(guān)注的問(wèn)題。近年來(lái)國(guó)際上的研究發(fā)現(xiàn)Tamm-Horsfall蛋白(Tamm-Horsfallprotein,THP)可能是一種抑制尿路結(jié)石形成的大分子有機(jī)物。但是THP抑制結(jié)石形成的機(jī)制及其所起的作用，不同的研究結(jié)果不同，仍存在爭(zhēng)議。雖然國(guó)外有研究者報(bào)道了腎結(jié)石大鼠腎臟組織THP表達(dá)的研究結(jié)果，但還沒(méi)有治療因素干預(yù)下腎結(jié)石大鼠腎臟組織THP表達(dá)的研究報(bào)道。枸櫞酸是研究最早最充分的結(jié)石抑制因子之一，但其確切的防石機(jī)制，與其他大分子抑制因子之間的關(guān)系還有待于進(jìn)一步研究。因此，研究枸櫞酸鉀干預(yù)下腎結(jié)石大鼠腎組織內(nèi)THP的表達(dá)，了解枸櫞酸鉀干預(yù)對(duì)腎組織THP表達(dá)的影響，進(jìn)一步探討枸櫞酸鉀抑制結(jié)石形成的機(jī)制，及枸櫞酸鉀與THP之間的相互關(guān)系，這不僅為解析腎結(jié)石發(fā)病機(jī)理提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，對(duì)臨床尋求腎結(jié)石的防治途徑也具有一定的指導(dǎo)意義。(三)
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的是提供一種腎結(jié)石大鼠模型構(gòu)建方法，以及利用該腎結(jié)石大鼠模型進(jìn)行腎結(jié)石大鼠腎臟組織THP表達(dá)研究的實(shí)驗(yàn)方法。本發(fā)明采用的技術(shù)方案是一種腎結(jié)石大鼠模型構(gòu)建方法，所述方法包括以含乙二醇0.5%和氯化銨0.5%的混合溶液為致石劑，用致石劑替代飲用水喂養(yǎng)SD大鼠至少2周，獲得腎結(jié)石大鼠模型。一種腎結(jié)石大鼠腎臟組織THP表達(dá)研究的實(shí)驗(yàn)方法，所述方法包括選用雄性SD大鼠，飼養(yǎng)一周后，以含乙二醇0.5%和氯化銨0.5%的混合溶液為致石劑替代飲用水喂養(yǎng)SD大鼠2周，處死大鼠，解剖取腎臟，進(jìn)行大鼠腎臟組織THP表達(dá)研究。具體的，所述方法分對(duì)照組、腎結(jié)石組、腎結(jié)石枸櫞酸干預(yù)組進(jìn)行，選用雄性SD大鼠，銅養(yǎng)一周后，分組喂養(yǎng)2周進(jìn)行造模對(duì)照組以飲用水喂養(yǎng)，腎結(jié)石組以致石劑替代飲用水喂養(yǎng)，腎結(jié)石枸櫞酸干預(yù)組以致石劑替代飲用水喂養(yǎng)、并用25%枸櫞酸鉀溶液以lmL/100g體重每天灌胃一次，2周后處死大鼠，解剖取腎臟，觀察腎臟表面形態(tài)，再剖開(kāi)腎臟，取腎組織用10%甲醛固定，于顯微鏡下觀察。為使3組大鼠實(shí)驗(yàn)條件保持一致，在造模過(guò)程中，對(duì)照組和腎結(jié)石組除以飲用水或致石劑喂養(yǎng)外，同時(shí)用飲用水以lmL/100g體重每天灌胃一次。尿液中存在的與腎結(jié)石形成有關(guān)的物質(zhì)，大致可以分為兩類(lèi)，一類(lèi)是促進(jìn)結(jié)石形成的物質(zhì)，包括草酸、尿酸、4丐離子等成分；另一類(lèi)是抑制結(jié)石形成的物質(zhì)，如枸櫞酸、鎂離子及一些有機(jī)大分子物如骨橋蛋白等，這兩類(lèi)物質(zhì)比例失衡被認(rèn)為是引起腎結(jié)石形成的主要原因。乙二醇是草酸的前體，進(jìn)人體內(nèi)后轉(zhuǎn)化成羥乙酸，后者經(jīng)過(guò)一系列的酶促反應(yīng)最終轉(zhuǎn)化為草酸，經(jīng)腎臟排泄，使得尿草酸濃度升高，從而促進(jìn)結(jié)石形成。氯化銨可以減低尿pH值，有利于草酸4丐結(jié)晶結(jié)石形成。枸櫞酸是尿液中作用最強(qiáng)的內(nèi)源性結(jié)石抑制物之一，流行病學(xué)研究證實(shí)腎結(jié)石患者低枸櫞酸尿發(fā)生率達(dá)到61%,而低枸櫞酸尿是腎結(jié)石發(fā)病和復(fù)發(fā)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，研究表明枸櫞酸可絡(luò)合鈣離子形成可溶性鈣復(fù)合物，可直接抑制尿液中晶體的成核、生長(zhǎng)和聚集，還可通過(guò)4^高尿液pH值，糾正尿液過(guò)度酸化，降低成石離子的飽和度，而抑制腎結(jié)石形成。因此臨床上用枸櫞酸鉀治療腎小管酸中毒、低枸櫞酸性草酸鈣結(jié)石及尿酸性結(jié)石。關(guān)于枸櫞酸鉀防治腎結(jié)石的機(jī)制，一般認(rèn)為當(dāng)口服枸櫞酸鉀后，胃腸道吸收的枸櫞酸增加，血枸櫞酸濃度上升，從而經(jīng)腎小球?yàn)V過(guò)的枸櫞酸增加，同時(shí)抑制腎小管重吸收，最終尿液中的枸櫞酸濃度相應(yīng)增加，從而抑制結(jié)石形成。THP是尿液中含量最多的蛋白之一，屬于糖基磷脂酰肌醇錨定家族成員，由糖基磷脂酰肌醇錨定在腎小管亨氏攀升支粗段及遠(yuǎn)曲小管近端的尿路上皮細(xì)胞膜上，通過(guò)磷酸脂酶C分解釋放入小管液，其膜固定型分子量約120kD,自由(尿)型單體分子量約85kDa,結(jié)構(gòu)上，THP的70。/。由肽鏈組成，30%是糖基。有報(bào)道認(rèn)為T(mén)HP能阻止大腸桿菌1型黏附于尿路上皮分化特異糖蛋白(Uroplakins)的Ia和Ib受體，可能起阻滯上尿路的感染的作用。通過(guò)免疫化學(xué)方法在草酸鈣結(jié)晶體外形成試驗(yàn)的草酸鈣有機(jī)質(zhì)中，及乙二醇誘導(dǎo)的大鼠腎模型試驗(yàn)草酸鈣結(jié)晶中均發(fā)現(xiàn)有THP的存在，而在乙二醇誘導(dǎo)的草酸4丐尿路結(jié)石大鼠模型的腎組織及尿液中THP表達(dá)量均減少，因此THP被認(rèn)為是尿路中結(jié)石形成的重要抑制因子。另外有報(bào)道發(fā)現(xiàn)，與分離自正常人的THP相比，從反復(fù)發(fā)生草酸鈣結(jié)石的患者尿液中分離的THP,更大程度上傾向于自我聚集，而抑制草酸鈣結(jié)晶、聚合的作用則相對(duì)較差。在妊娠及某些病理狀態(tài)下，THP的糖基部分發(fā)生了改變，但還不清楚在草酸鈣尿路結(jié)石中是否也存在著這種改變。因此除了提高腎組織中THP的表達(dá)量外，枸櫞酸的干預(yù)也可能使得由于結(jié)石而結(jié)構(gòu)異常的THP結(jié)構(gòu)重新改變，使其自我聚集傾向減弱，而抑制草酸4丐結(jié)晶成核、生長(zhǎng)、聚集的作用加強(qiáng)。這些只是一種假設(shè)，還有待進(jìn)一步的研究"i正實(shí)。本發(fā)明的有益效果主要體現(xiàn)在以含乙二醇0.5%和氯化銨0.5%的混合溶液為致石劑，效果明顯可靠，且作用強(qiáng)烈，得到腎結(jié)石大鼠模型用于后續(xù)實(shí)—瞼研究或藥物篩選，觀察明顯、方法筒單。(四)圖1為三組大鼠腎臟表面結(jié)石形成比較；圖2為三組大鼠腎剖面結(jié)石形成比較(解剖顯微鏡下觀察)；圖3為三組大鼠腎組織THP表達(dá)的免疫組化染色圖(400x);圖4為三組大鼠腎臟成石程度與THP表達(dá)強(qiáng)度對(duì)照?qǐng)D。具體實(shí)施方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步描述，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅限于此實(shí)施例1:一、材料1.主要試劑含0.5%(w/w)乙二醇和0.5%(w/w)氯化銨的混合溶液；25%(w/w)的枸櫞酸鉀溶液；10%(w/w)曱醛；SANTACRUZ公司兔抗人THP蛋白291425序列氨基酸多克隆抗體及羊抗兔ABC染色系統(tǒng)試劑盒。2.動(dòng)物選擇20只雄性SD大鼠，體重約350g,邵逸夫醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室祠養(yǎng)。二、方法1、動(dòng)物和組織準(zhǔn)備選擇20只雄性SD大鼠(由浙江大學(xué)附屬邵逸夫醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室提供)，體重約350g左右，以含有0.5%乙二醇和0.5%氯化銨的混合溶液為致石劑。先將大鼠正常條件下飼養(yǎng)一周，使其充分適應(yīng)環(huán)境后，隨機(jī)分成3組對(duì)照組4只喂普通凈化々欠用水；結(jié)石組8只，以致石劑代替々大用水；枸櫞酸鉀干預(yù)組8只，除以致石劑代替飲用水外，同時(shí)用25Q/。枸櫞酸鉀溶液以lml/100g體重每天灌胃一次。為使三組大鼠實(shí)驗(yàn)條件保持一致，結(jié)石組和對(duì)照組用凈化水以lml/100g體重每天灌胃一次。喂養(yǎng)兩周后處死大鼠，解剖取腎臟，肉眼下觀察腎臟表面形態(tài)，再沿腎門(mén)長(zhǎng)軸剖開(kāi)，部分腎組織用10%曱醛固定、于解剖顯微鏡下觀察腎剖面結(jié)石形成情況。2、腎結(jié)石形成觀察先肉眼觀察腎臟表面，再將剖開(kāi)的腎臟置于解剖顯微鏡下，觀察腎剖面結(jié)晶結(jié)石的形成情況。以腎臟表面和剖面有無(wú)明顯結(jié)晶沉淀物、游離結(jié)石作為判斷有無(wú)結(jié)石形成的標(biāo)準(zhǔn)。并根據(jù)結(jié)晶結(jié)石形成的量及腎臟損傷的程度分為四級(jí)(具體分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表l)。表l:大鼠腎結(jié)石形成分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)表<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>++腎剖面可見(jiàn)結(jié)晶沉淀物，有時(shí)可見(jiàn)小的游離結(jié)石；腎臟外形無(wú)明顯變化或稍腫脹，表面可有釣化斑。+++腎剖面皮質(zhì)、髓質(zhì)嵌有大量的結(jié)晶，并有游離結(jié)石形成；腎臟外形明顯肺脹，表面可見(jiàn)大量4丐化斑，可融合。3、免疫組織化學(xué)染色使用SANTACRUZ公司兔抗人THP蛋白291-425序列氨基酸多克隆抗體及羊抗兔ABC染色系統(tǒng)試劑盒。先將曱醛固定的腎臟組織脫水浸蠟包埋，3um厚切片，再脫蠟水化后，1。/。H202-PBS溶液封閉內(nèi)生過(guò)氧化物酶，枸櫞酸鹽修復(fù)抗原，1.5%血清阻斷1小時(shí)，THP—抗(濃度2ug/ml)室溫下孵育30分鐘，生物素化羊抗兔二抗中孵育30分鐘，卵白素和生物素化辣根過(guò)氧化物酶中孵育30分鐘，DAB顯色5分鐘，再蘇木素復(fù)染，乙醇二曱苯脫水透明，中性樹(shù)脂封片。同時(shí)設(shè)立陰性對(duì)照組，以PBS代替THP—抗。最后于光學(xué)顯微鏡下觀察，按"+++"表示明顯染色(深棕黃色)，"++"表示中度染色(黃色)，"+"表示輕度染色(淺黃色)對(duì)切片染色程度進(jìn)行分級(jí)，并統(tǒng)計(jì)分析。4、數(shù)據(jù)處理所有數(shù)據(jù)均使用SPSS13.0forwindows專業(yè)統(tǒng)計(jì)軟件，采用Kruskal-Walls非參數(shù)檢驗(yàn)對(duì)三組大鼠腎臟成石程度和THP表達(dá)強(qiáng)度進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用Mann-Whitney非參數(shù)檢驗(yàn)對(duì)三組大鼠腎臟成石程度和THP表達(dá)強(qiáng)度進(jìn)行兩兩比較。三、結(jié)果1、結(jié)石形成肉眼觀察可見(jiàn)對(duì)照組大鼠腎臟外形無(wú)明顯異常，質(zhì)軟，未見(jiàn)鉤化斑(如圖la);結(jié)石組大鼠腎臟明顯腫脹、質(zhì)地變硬，腎表面可見(jiàn)大量淺黃色釣化斑，部分融合(見(jiàn)圖lb);枸櫞g吏鉀干預(yù)組大鼠腎臟稍肺脹，表面亦可見(jiàn)淺黃色鈣化斑，但融合不明顯(見(jiàn)圖lc)。解剖顯微鏡下觀察，對(duì)照組大鼠腎剖面皮質(zhì)、髓質(zhì)均無(wú)可見(jiàn)的結(jié)晶結(jié)石沉淀物(見(jiàn)圖2a);結(jié)石組大鼠腎剖面皮質(zhì)、髓質(zhì)嵌有大量的結(jié)晶，并可見(jiàn)游離結(jié)石形成圖(見(jiàn)圖2b);枸櫞酸干預(yù)組大鼠腎剖面皮質(zhì)、髓質(zhì)可見(jiàn)少量結(jié)晶沉淀，未見(jiàn)游離結(jié)石形成(見(jiàn)圖2c),cl結(jié)晶形成較少(+)，c2結(jié)晶形成較多(++)。按上述成石分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)三組大鼠進(jìn)行成石程度分級(jí)如表2。采用Kruskal-Walls檢驗(yàn)對(duì)三組大鼠腎臟成石情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，三組大鼠之間成石程度存在顯著差異(PO.01),采用Mann-Whitney檢驗(yàn)對(duì)三組大鼠腎臟成石程度進(jìn)行兩兩比較，發(fā)現(xiàn)對(duì)照組與結(jié)石組之間、對(duì)照組與枸櫞酸鉀干預(yù)組之間及結(jié)石組與枸櫞酸鉀干預(yù)組之間均有顯著差異(見(jiàn)表2)。表2、三組大鼠腎臟成石程度分級(jí)表<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>2、腎組織THP表達(dá)強(qiáng)度三組大鼠腎臟組織THP免疫組化染色均顯示THP定位于腎小管亨氏攀和遠(yuǎn)曲小管，但是在相同稀釋度的一抗和相同的實(shí)驗(yàn)條件下，三組大鼠腎臟組織免疫組化染色強(qiáng)度差別很大，即腎組織內(nèi)的THP表達(dá)強(qiáng)度差別很大。對(duì)照組染色很深，而結(jié)石組染色很淺，枸櫞酸鉀干預(yù)組則介于兩者之間(見(jiàn)圖3):a、對(duì)照組腎組織THP表達(dá)最強(qiáng)，免疫組化染色最深；b、結(jié)石組腎組織THP表達(dá)最弱，免疫組化染色最淺；c、枸櫞酸鉀干預(yù)組腎組織THP表達(dá)介于兩者之間；d、陰性對(duì)照未見(jiàn)任何組織染色陽(yáng)性。按上述標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)三組大鼠THP表達(dá)強(qiáng)度進(jìn)行分級(jí)(見(jiàn)表3),采用Kruskal-Walls檢驗(yàn)對(duì)三組大鼠腎組織THP表達(dá)強(qiáng)度進(jìn)行分析，結(jié)果顯示三組大鼠之間腎組織THP表達(dá)強(qiáng)度存在顯著差異CP<0.01),采用Mann-Whitney檢驗(yàn)對(duì)三組大鼠腎組織THP表達(dá)強(qiáng)度進(jìn)行兩兩比較，發(fā)現(xiàn)對(duì)照組與結(jié)石組之間、對(duì)照組與枸櫞酸鉀干預(yù)組之間及結(jié)石組與枸櫞酸鉀干預(yù)組之間均有顯著差異(見(jiàn)表3)。表3、三組大鼠腎組織免疫組化染色示THP表達(dá)強(qiáng)度表<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>注與對(duì)照組比豐支i5〈0.05、PO.01;與結(jié)石組比較#P<0.053、腎臟成石程度與THP表達(dá)強(qiáng)度的關(guān)系在結(jié)石形成強(qiáng)度為"+++"的結(jié)石組大鼠腎組織中111表達(dá)明顯減弱為"+";而對(duì)照組大鼠及一只結(jié)石為"+"的枸櫞酸鉀干預(yù)大鼠，其THP表達(dá)則均成強(qiáng)陽(yáng)性"+++"。將每只大鼠的成石程度與THP表達(dá)強(qiáng)度相對(duì)應(yīng)，可以發(fā)現(xiàn)腎臟內(nèi)結(jié)石形成越明顯，則腎組織內(nèi)THP表達(dá)越弱，反之腎臟內(nèi)結(jié)石形成越少，則腎組織內(nèi)THP表達(dá)越強(qiáng)(見(jiàn)圖4)。四、結(jié)論實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，給予0.5%乙二醇和0.5%氯化銨的混合溶液兩周后，6只(75%)結(jié)石組大鼠的腎臟內(nèi)有明顯的結(jié)石形成，其成石程度為"十++",另2只(25%)則有"++"的結(jié)石形成，說(shuō)明以0.5%乙二醇和0.5%氯化銨的混合溶液為致石劑，效果明顯可靠，且作用強(qiáng)烈。實(shí)驗(yàn)中枸櫞酸鉀干預(yù)組大鼠用25%枸櫞酸鉀以lml/100g的量每天灌胃一次，2周以后盡管仍1只(12.5%)大鼠有明顯的結(jié)石形成，但7只(87.5%)大鼠的結(jié)石形成減少，其中4只(50%)明顯減少為"+",這說(shuō)明枸櫞酸鉀確實(shí)是抑制腎結(jié)石形成的有效物質(zhì)。本發(fā)明結(jié)果表明正常的大鼠腎臟表達(dá)THP,并主要定位于腎小管亨氏攀及遠(yuǎn)曲小管，沒(méi)有觀察到在腎小球、間質(zhì)組織或腎小管近曲小管的局限定位，在腎結(jié)石組大鼠腎組織中，雖然有THP表達(dá)，但其表達(dá)強(qiáng)度明顯減弱，這與文獻(xiàn)一致。本實(shí)驗(yàn)中使用枸櫞酸鉀干預(yù)后，8只干預(yù)組大鼠除1只(12.5%)大鼠THP表達(dá)量仍很弱外，另外7只大鼠(87.5%)的THP表達(dá)量都得到不同程度的恢復(fù)，其中2只(25%)THP表達(dá)量與正常大鼠相似。將每只大鼠的成石程度與THP表達(dá)強(qiáng)度相對(duì)應(yīng)，可以發(fā)現(xiàn)在成石程度為"+++"的結(jié)石組大鼠腎組織中THP表達(dá)明顯減弱；而對(duì)照組大鼠及一只成石程度為"+"的枸櫞酸鉀干預(yù)大鼠，其THP表達(dá)則成強(qiáng)陽(yáng)性。從圖4中，可以更明顯地發(fā)現(xiàn)腎臟內(nèi)結(jié)石形成越明顯，則腎組織內(nèi)THP表達(dá)越弱，腎臟內(nèi)結(jié)石形成越少，則腎組織內(nèi)THP表達(dá)越強(qiáng)。有研究發(fā)現(xiàn)與其他糖基磷脂酰肌醇錨定家族成員一樣，THP可自我聚集成較大的復(fù)合物，但聚集的程度高度依賴于外界的pH值及離子濃度，低pH或高離子強(qiáng)度時(shí)趨向于自我聚集，并可能促進(jìn)草酸鈣結(jié)晶的聚集，高pH或低離子強(qiáng)度時(shí)則相反，而在枸櫞酸的存在下，THP自我聚集的傾向明顯減弱，尿液中結(jié)晶的成核、生長(zhǎng)、聚集速度均被抑制。因此設(shè)想枸櫞S臾抑制尿路結(jié)石形成的機(jī)制，除了絡(luò)合鈣離子形成可溶性鈣復(fù)合物，抑制尿液中晶體的成核和聚集，提高尿液pH值外，其有可能通過(guò)恢復(fù)由于結(jié)石形成而受抑制的THP的表達(dá)量，而表達(dá)量得到恢復(fù)的THP則抑制了尿液中結(jié)晶的成核、生長(zhǎng)、聚集。另外在枸櫞酸的存在下，THP自聚集減少，兩者的相互作用也可能使得尿路中結(jié)晶的成核、生長(zhǎng)、聚集的速度得到進(jìn)一步抑制。權(quán)利要求1.一種腎結(jié)石大鼠模型構(gòu)建方法，所述方法包括以含乙二醇0.5％和氯化銨0.5％的混合溶液為致石劑，用致石劑替代飲用水喂養(yǎng)SD大鼠至少2周，獲得腎結(jié)石大鼠模型。2.—種腎結(jié)石大鼠腎臟組織THP表達(dá)研究的實(shí)驗(yàn)方法，其特征在于所述方法包括選用雄性SD大鼠，詞養(yǎng)一周后，以含乙二醇0.5%和氯化銨0.5%的混合溶液為致石劑替代飲用水喂養(yǎng)SD大鼠2周，處死大鼠，解剖取腎臟，進(jìn)行大鼠腎臟組織THP表達(dá)研究。3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于所述方法分對(duì)照組、腎結(jié)石組、腎結(jié)石枸櫞酸干預(yù)組進(jìn)行，選用雄性SD大鼠，飼養(yǎng)一周后，分組喂養(yǎng)2周進(jìn)行造模對(duì)照組以飲用水喂養(yǎng)，腎結(jié)石組以致石劑替代飲用水喂養(yǎng)，腎結(jié)石枸櫞酸干預(yù)組以致石劑替代飲用水喂養(yǎng)、并用25%枸櫞酸鉀溶液以lmL/100g體重每天灌胃一次，2周后處死大鼠，解剖取腎臟，觀察腎臟表面形態(tài)，再剖開(kāi)腎臟，取腎組織用10%曱醛固定，于顯微鏡下觀察。4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于造才莫過(guò)程中，對(duì)照組和腎結(jié)石組同時(shí)用飲用水以lmL/100g體重每天灌胃一次。全文摘要本發(fā)明提供了一種腎結(jié)石大鼠模型構(gòu)建方法，以及利用該腎結(jié)石大鼠模型進(jìn)行腎結(jié)石大鼠腎臟組織THP表達(dá)研究的實(shí)驗(yàn)方法。所述腎結(jié)石大鼠模型構(gòu)建方法包括以含乙二醇0.5％和氯化銨0.5％的混合溶液為致石劑，用致石劑替代飲用水喂養(yǎng)SD大鼠至少2周，獲得腎結(jié)石大鼠模型。本發(fā)明以含乙二醇0.5％和氯化銨0.5％的混合溶液為致石劑，效果明顯可靠，且作用強(qiáng)烈，得到腎結(jié)石大鼠模型用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究或藥物篩選，觀察明顯、方法簡(jiǎn)單。文檔編號(hào)G01N33/48GK101313870SQ20081006222公開(kāi)日2008年12月3日申請(qǐng)日期2008年6月16日優(yōu)先權(quán)日2008年6月16日發(fā)明者李新德,許力為申請(qǐng)人:浙江大學(xué)