專利名稱：先天性甲狀腺功能減退癥大鼠模型的構(gòu)建方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種醫(yī)學(xué)評價、檢測方法，尤其涉及一種醫(yī)學(xué)實驗動物實驗方法。
背景技術(shù)：
先天性甲狀腺功能減退癥是一種最常見的新生兒代謝疾病(congenital hypothyroidism, CH),國外報道新生兒發(fā)病率為1/3000 1/4000,我國的發(fā)病率約為1/2000，主要表現(xiàn)為體格生長和神經(jīng)精神發(fā)育障礙。早期診斷和治療可防止神經(jīng)、精神損傷的發(fā)生或發(fā)展，否則將導(dǎo)致嚴重的智力受損和代謝異常。甲狀腺是人體最大的內(nèi)分泌腺體，主要作用是合成甲狀腺激素。甲狀腺濾泡是甲狀腺的基本結(jié)構(gòu)和功能單位，由外周的單層濾泡上皮細胞和被圍在中央的濾泡腔組成。濾 泡腔內(nèi)充滿膠體，其主要成分是甲狀腺球蛋白，它參與甲狀腺激素的合成。人體中的甲狀腺激素包括三碘甲狀腺原氨酸(T3)和四碘甲狀腺原氨酸(T4),其中T3是它的主要活性形式，而T4則是T3的前體和(或)儲備形式。甲狀腺激素具有全面促進組織細胞分化、生長及發(fā)育成熟的作用，是機體正常生長、發(fā)育必不可缺少的因素。Gull早在1874年就認識到先天甲狀腺功能低下與智力遲鈍、身材矮小為特征的克汀病的關(guān)系。甲狀腺功能減退患兒常表現(xiàn)青春期滯后。甲狀腺激素是胎兒、新生兒腦發(fā)育的關(guān)鍵激素，尤其是對腦和骨骼的正常發(fā)育。在胚胎時期，T3和T4能誘導(dǎo)神經(jīng)生長因子和某些酶的合成，能促進神經(jīng)元骨架的發(fā)育，促進神經(jīng)元增值分化、突起和突觸的形成，促進膠質(zhì)細胞的生長和髓鞘的形成。甲狀腺激素可刺激骨化中心的發(fā)育和成熟，使軟骨骨化，促進長骨和牙齒生長。在兒童的生長發(fā)育過程中，甲狀腺激素和生長激素(GH)具有協(xié)同作用。甲狀腺激素缺乏時可影響GH的正常作用，導(dǎo)致長骨生長緩慢和骨骺愈合延遲。此外，T3和糖皮質(zhì)激素可增強GH的基因轉(zhuǎn)錄，使GH的生成增加，所以缺乏T3的動物GH和胰島素樣生長因子(IGF)的分泌均減少。人類胎兒在11周前甲狀腺不具備濃集碘和合成甲狀腺激素的能力，胎兒生長發(fā)育所需要的甲狀腺激素必須由母體提供。嚙齒類動物從胚胎期第14d至出生后4w需要足量的甲狀腺激素，如果這一時期甲狀腺激素功能低下或者分泌不足，就會影響胎兒大腦皮層、海馬、小腦等正常的發(fā)育，會對腦的學(xué)習(xí)記憶能力造成影響。建立在病理生理機制上更接近于人類的動物模型是研究人類疾病形成和發(fā)展過程的基礎(chǔ)。目前，復(fù)制先天性甲狀腺功能減退癥動物模型的方法，除了手術(shù)切除甲狀腺、破壞甲狀腺組織而外，還有化學(xué)藥物誘導(dǎo)和飼喂低碘飲食限制碘攝入等方法。如雌鼠在交配前3個月和孕期給予低濃度丙基硫氧嘧啶可誘導(dǎo)暫時性低甲狀腺素血癥動物模型，發(fā)現(xiàn)其仔代學(xué)習(xí)記憶功能低下；將孕鼠從妊娠第Id至仔鼠出生第30d飲用含甲硫咪唑的自來水誘導(dǎo)甲狀腺功能低下仔鼠，發(fā)現(xiàn)仔鼠學(xué)習(xí)記憶能力明顯減退，說明甲狀腺激素對腦的發(fā)育極其重要。然而，手術(shù)切除甲狀腺、破壞甲狀腺組織，以及化學(xué)藥物誘導(dǎo)雖然能夠誘發(fā)甲狀腺功能減退癥，但這是一種特例；這種非自然因素所致甲狀腺功能減退癥在臨床實踐中并不常見。低碘攝入雖然是導(dǎo)致甲狀腺功能減退癥的一種常見因素，但只是部分致病因素，不能完整客觀的反映該病癥的致病原因。目前，通過物理方法培育先天性甲狀腺功能減退癥大鼠的相關(guān)文獻未見報道。

發(fā)明內(nèi)容
針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述缺陷，本發(fā)明旨在提供一種先天性甲狀腺功能減退癥大鼠模型的構(gòu)建方法，它能夠通過物理方法培育出患有先天性甲狀腺功能減退癥的大鼠，從而為該病癥致病機制、診斷、治療以及預(yù)防的研究提供一種新的途徑和可能。為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案具體步驟如下
(1)選用體重220 240g的成年SD大鼠進行適應(yīng)性飼養(yǎng)；
(2)7d后每天對雌性SD大鼠進行復(fù)合刺激處理，連續(xù)5周；所述復(fù)合刺激處理包括
a、束縛刺激，前3d每天用束縛籠對雌性SD大鼠進行適應(yīng)性束縛30min，以后每天束縛180min ；
b、力竭刺激，將雌性SD大鼠放入水溫20±2°C的水池中游泳，前3d每天適應(yīng)性游泳30min,以后每天游泳IOOmin或至力竭；
C、夾尾刺激，每天用卵圓鉗鉗夾雌性SD大鼠尾部lmin，鉗夾力度以雌鼠不適、掙扎、發(fā) 出哀叫為度；
(3)將經(jīng)過上述復(fù)合刺激處理的雌性SD大鼠按2:1比例與雄性SD大鼠合籠，繁殖下一代；繁殖的仔鼠即為先天性甲狀腺功能減退癥大鼠。在上述技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，還可以在步驟(2)中增加低溫刺激，從而有利于同時滿足血清甲狀腺激素水平、生長發(fā)育特征和行為學(xué)指標(biāo)要求的個體出現(xiàn)將雌性SD大鼠放入4±2°C的水池中游泳，前3d每天游泳5min，以后每天游泳30min或至力竭。同理，在上述技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，還可以在步驟(2)中增加在饑餓刺激每隔4 5天隨機對雌性SD大鼠禁食24h。與現(xiàn)有技術(shù)比較，本發(fā)明由于采用了上述技術(shù)方案，完全采用純物理手段培育出患有先天性甲狀腺功能減退癥的大鼠，從而為該病癥致病機制、診斷、治療以及預(yù)防的研究提供一種新的途徑和可能。實驗證明，本發(fā)明方法具有較好的穩(wěn)定性和可重復(fù)性。以下是將本發(fā)明方法培育的仔鼠與正常飼養(yǎng)方法培育的仔鼠所作的一組對比實驗
(1)選擇體重為220 260g、3月齡的雌性SD大鼠44只、雄性SD大鼠22只，適應(yīng)性飼養(yǎng)7d后將雌性SD大鼠隨機分為正常組(n=22)和模型組(n=22)；
(2)對雄性SD大鼠和正常組雌性SD大鼠正常飼養(yǎng)、不給予任何刺激，按本發(fā)明方法對模型組雌性SD大鼠實施束縛刺激、力竭刺激和夾尾刺激；
(3)將正常組的雌性SD大鼠22只與雄性SD大鼠11只合籠、將模型組的雌性SD大鼠22只與另外11只雄性SD大鼠合籠，合籠后查陰栓，查到陰栓為妊娠第0d，單籠飼養(yǎng)，合籠5d后仍未見陰栓的雌鼠也轉(zhuǎn)入單籠飼養(yǎng)；
(4)孕鼠自然分娩后分別記錄正常組及模型組每窩仔鼠數(shù)量，于第1、7、14、21、28天稱取每只仔鼠體重，測量每只仔鼠身長和尾長，測量數(shù)據(jù)見表I ;
(5)仔鼠出生21天后斷奶，第30天隨機選取正常組和模型組各12窩，每窩隨機選取I只仔鼠進行曠場實驗和Morris水迷宮實驗，測量數(shù)據(jù)見表2 ；
(6)水迷宮實驗結(jié)束后第2d，從正常組和模型組仔鼠中各隨機選取的12只仔鼠處死，按酶聯(lián)免疫吸附測定法測定血清TRH、TSH、T3> T4激素水平，測量數(shù)據(jù)見表3。表I :仔鼠0-4周生長發(fā)育情況
權(quán)利要求
1.一種先天性甲狀腺功能減退癥大鼠模型的構(gòu)建方法，其特征在于具體步驟如下 (1)選用體重220 240g的成年SD大鼠進行適應(yīng)性飼養(yǎng)； (2)7d后每天對雌性SD大鼠進行復(fù)合刺激處理，連續(xù)5周；所述復(fù)合刺激處理包括 a、束縛刺激，前3d每天用束縛籠對雌性SD大鼠進行適應(yīng)性束縛30min，以后每天束縛180min ； b、力竭刺激，將雌性SD大鼠放入水溫20±2°C的水池中游泳，前3d每天適應(yīng)性游泳30min,以后每天游泳IOOmin或至力竭； C、夾尾刺激，每天用卵圓鉗鉗夾雌性SD大鼠尾部lmin，鉗夾力度以雌鼠不適、掙扎、發(fā)出哀叫為度； (3)將經(jīng)過上述復(fù)合刺激處理的雌性SD大鼠按2:1比例與雄性SD大鼠合籠，繁殖下一代；繁殖的仔鼠即為先天性甲狀腺功能減退癥大鼠。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的先天性甲狀腺功能減退癥大鼠模型的構(gòu)建方法，其特征在于步驟(2)中的復(fù)合刺激處理還包括低溫刺激將雌性SD大鼠放入4±2°C的水池中游泳，前3d每天游泳5min,以后每天游泳30min或至力竭。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的先天性甲狀腺功能減退癥大鼠模型的構(gòu)建方法，其特征在于步驟(2)中的復(fù)合刺激處理還包括饑餓刺激每隔4 5天隨機對雌性SD大鼠禁食24h。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種先天性甲狀腺功能減退癥大鼠模型的構(gòu)建方法，屬于醫(yī)學(xué)實驗動物實驗方法；旨在提供一種利用物理手段培育患先天性甲狀腺功能減退癥的大鼠，從而為該病癥致病機制、診斷、治療以及預(yù)防的研究提供一種新的途徑和可能。其方法是選用成年雌性SD大鼠連續(xù)5周進行束縛、力竭、夾尾等復(fù)合刺激處理，然后與正常雄性SD大鼠合籠，繁殖下一代；繁殖的仔鼠即為先天性甲狀腺功能減退癥大鼠。本發(fā)明方法具有較好的穩(wěn)定性和可重復(fù)性，是一種利用物理手段復(fù)制先天性甲狀腺功能減退癥動物模型的方法。
文檔編號A01K67/02GK102715126SQ20121020598
公開日2012年10月10日 申請日期2012年6月21日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月21日
發(fā)明者吳曙光, 王興友, 王明鎮(zhèn), 艾世鵬, 錢寧 申請人:貴陽中醫(yī)學(xué)院