專利名稱：用銪原子標記法對移液器容量精確度進行比對與校準的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及到一種對移液器容量的精確度進行比對與校準的方法，具體地說是一種采用銪原子標記法對移液器容量的精確度進行比對與校準的鑒定方法。
背景技術：
移液器是采用空氣排代原理的量出式加樣器，廣泛應用于醫(yī)藥衛(wèi)生、環(huán)境檢測、食品安全、精細化工等技術領域，是各科研所、實驗室定量分析的常用工具。移液器容量的精確度，直接關系到實驗結果的可靠性。目前，國內(nèi)外移液器容量精確度的校準方法有兩種①重量分析法?！吨腥A人民共和國國家計量檢定規(guī)程》JJG 646-90規(guī)定，用蒸餾水稱重法作為移液器容量精確度檢定的標準方法，但該操作繁瑣，實驗受到氣溫、濕度、氣壓等影響，同時檢測靈敏度較低，僅為0.1mg，實驗誤差較大，且3次稱重結果很難判別誤差引起的原因，此法適用于容量為20μl以上移液器的校準。②分光光度測定法。如重鉻酸鉀法、曙紅法等，此方法應用“朗拜-比耳”比色原理，缺陷是對高濃度、低濃度溶液存在線性偏差，檢測靈敏度為10-3-10-4g/L。另外，對容量小于20ul的微量移液器，國內(nèi)外至今尚未提出或建立起有效的比對與校準方法，而小容量移液器正是分子生物學、基因工程、蛋白質工程實驗的主要加樣工具。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術問題在于提出一種靈敏度高、重復性好、操作簡便的用銪原子標記法對移液器容量精確度進行比對與校準的方法。
為解決上述技術問題，本發(fā)明用銪原子標記法對移液器容量精確度進行比對與校準的方法包括如下工作步驟1、標準移液器吸液將標準移液器的滴頭浸入銪標記溶液內(nèi)，滴頭完全吸滿；2、標準移液器放液將標準移液器移至聚乙烯板條內(nèi)壁底部并排空其內(nèi)的銪標記溶液；3、重復上述過程，利用標準移液器加樣若干孔；4、平行試驗用待檢移液器吸取同一銪標記溶液，重復上述1-3步驟，用待檢移液器也加樣相同數(shù)量孔；5、結果測定將上述已加樣的聚乙烯板條同時放到時間分辨檢測儀上測熒光讀數(shù)，通過測得熒光值(CPS值)來反映溶液內(nèi)的熒光物質顆粒數(shù)量，對標準移液器和待檢移液器進行容量比對與校準。
上述用銪原子標記法對移液器容量精確度進行比對與校準的方法，利用標準移液器和待檢移液器各加樣20孔。
上述用銪原子標記法對移液器容量精確度進行比對與校準的方法，在吸液前，先將標準移液器和待檢移液器及吸液嘴與銪標記溶液在室溫平衡30分鐘。
上述用銪原子標記法對移液器容量精確度進行比對與校準的方法，在吸液前，先將銪原子溶液用增強液稀釋，最終將濃度控制在CPS值為100000-200000/100μl之間，使溶液充分混均。
上述用銪原子標記法對移液器容量精確度進行比對與校準的方法，在吸液前先進行預吸液，即選擇潔凈、合適的吸液嘴安置在標準移液器套筒上，壓緊吸液嘴使之與套筒之間無空氣間隙，預吸入銪標記溶液并排回原容器中，吸液、排液重復多次。
上述用銪原子標記法對移液器容量精確度進行比對與校準的方法，吸液時，將標準移液器和待檢移液器的滴頭浸入銪標記溶液液面下2-3mm處，然后緩慢平穩(wěn)地放松按鈕，待1-2秒鐘滴頭完全吸滿后，滴頭離開液面，貼壁停留2-3秒，淌走多余的液體。
上述用銪原子標記法對移液器容量精確度進行比對與校準的方法，放液時，將標準移液器和待檢移液器移至已編號的聚乙烯板條內(nèi)壁底部，保持垂直狀態(tài)，輕輕壓下按鈕至第一停點位置，等待1-2秒鐘，移動滴頭貼內(nèi)壁，完全撳下按鈕，以排盡滴頭內(nèi)的銪標記溶液，然后將滴頭沿內(nèi)壁向上移開。
上述用銪原子標記法對移液器容量精確度進行比對與校準的方法，所述時間分辨熒光儀的激發(fā)波長為336～337nm，測定波長為610～613nm。
上述用銪原子標記法對移液器容量精確度進行比對與校準的方法，測定得到CPS值后計算出兩移液器的CPS均值，利用公式CV＝SD/CPS均值×100％和R＝[待檢移液器CPS均值-標準移液器CPS均值]/標準移液器CPS均值×100％相對誤差分別計算出CV值(表示移液器的精密度---反映隨機誤差)及相對誤差R(表示待檢移液器的準確度---反映系統(tǒng)誤差)；對CV值超過標準規(guī)定誤差范圍的移液器棄用；如待檢移液器的CV值符合規(guī)定但與標準移液器的CPS均值不相等時，調節(jié)移液器頂部旋鈕，調整其容量大?。辉俅沃貜蜋z測步驟1-5及上述計算調整步驟，直至待檢移液器CPS均值與標準移液器的CPS均值相等，即R趨向于0為止。
本發(fā)明由于采用了上述方法，它通過測定標準移液器與待檢移液器對同一銪標記溶液吸樣的熒光值，計算出各自的相關數(shù)據(jù)。由于在同一銪標記濃度下，顆粒數(shù)的多少反映容量的大小，從而可對兩移液器的容量進行比對，并計算出相對誤差。測定結果的CV值應在《定量、可調移液器計量檢定規(guī)程》JJG 646-90規(guī)定的允許誤差范圍之內(nèi)。對CV值超過JJG 646-90規(guī)定誤差范圍的移液器應棄用；如CV符合規(guī)定，且待檢移液器的CPS均值與標準移液器的CPS均值相等，則表示兩者容量相同。如待檢移液器的CV符合規(guī)定，但與標準移液器的CPS均值不相等時，表示兩者容量不相同。這時，就需要對待檢移液器的容量進行校準用專用扳手調節(jié)移液器頂部旋鈕，順時針旋轉，容量調大；逆時針旋轉，容量調小，隨后再進行20次標記溶液加樣測定，直至待檢移液器與標準移液器之間的CPS均值相等為止。它利用時間分辨熒光檢測技術(time-resolvedfluoroimmunoassay，TR-FIA)所具有的高靈敏度與高穩(wěn)定性特點，以鑭系銪原子(Eu)作為示蹤材料(原子序數(shù)63，原子半徑2.56，原子體積28.9cm3/mol)，以β-萘甲酰三氟丙酮(β-NTA)為熒光增強液，以336～337nm為激發(fā)波長，以610～613nm為測定波長，用時間分辨熒光儀檢測魯赫曼紫色熒光光譜，以《中華人民共和國國家計量檢定規(guī)程》JJG 646-90為判斷標準，建立起精確有效、簡便快速的用銪原子標記技術對移液器容量精確度進行比對與校準的方法。它具有本底低(200～400cps)、靈敏度高(檢測靈敏度達10-12～10-14g/L)、特異性強(激發(fā)光與發(fā)射光的STOKES位移大于200nm)、重復性好(CV＜1％)、示蹤物穩(wěn)定(銪半衰期長達上萬年)、標準曲線線性范寬等檢測優(yōu)點。利用本發(fā)明方法，可以更好地執(zhí)行關于醫(yī)療機構間醫(yī)學檢驗、醫(yī)學影像檢查互認的有關規(guī)定，既是各實驗室內(nèi)部質量控制的具體要求，又為推進醫(yī)療機構間醫(yī)學檢驗、檢查結果“一單通”提供了技術保障。


圖1是本發(fā)明比對與校準方法的流程圖。
具體實施例方式下面以100μl待檢移液器與100μl標準移液器的比對與校準方法為例進行具體說明。該方法包括如下工作步驟1、確定標準移液器選用1支已經(jīng)國家計量部門檢定的100μl移液器作為本次實驗的標準移液器。
2、容量設定轉動移液器頂部調節(jié)旋鈕，將標準移液器及待檢移液器的容量調節(jié)到100μl刻度。
3、將銪原子溶液用增強液(β-萘甲酰三氟丙酮(β-NTA))稀釋，最終將濃度控制在CPS值為100000-200000/100μl之間，溶液充分混均。這樣，CPS值的線性比較好，也可減少由于自然界中放射本底產(chǎn)生的誤差。
4、溫度平衡先將標準移液器、待檢移液器和吸液嘴與銪標記溶液在室溫平衡30分鐘。這樣，可使吸液嘴的熱脹冷縮度一致，同時溶液中溶質和溶劑能充分混合均勻，保證一致性。
5、預吸液選擇潔凈、合適的吸液嘴安置在標準移液器套筒上，稍加扭轉壓緊吸液嘴使之與套筒之間無空氣間隙。垂直握持移液器，預吸入銪標記溶液并排回原容器中，吸液、排液共重復5次，整個操作動作柔和，避免按鈕急速彈回。由于水第一次接觸到塑料吸液嘴時會有吸附性，通過5次預吸后就能使吸液嘴保持濕潤度，即保證以后吸液和放液的吸附性保持一致。
6、吸液垂直握持標準移液器，把按鈕壓至第一停點，滴頭浸入銪標記溶液液面下2-3mm處，然后緩慢平穩(wěn)地放松按鈕，等1-2秒鐘滴頭完全吸滿后，滴頭離開液面，貼壁停留2-3秒，淌走多余的液體。
7、放液將移液器移至已編號聚乙烯板條內(nèi)壁底部，保持垂直狀態(tài)，輕輕壓下按鈕至第一停點位置，等待1-2秒鐘，移動滴頭貼內(nèi)壁，完全撳下按鈕，以排盡滴頭內(nèi)的銪標記溶液，然后將滴頭沿內(nèi)壁向上移開，用標準移液器共加樣20孔。
8、平行試驗用待檢移液器吸取同一銪標記溶液，重復上述5-8步驟，用待檢移液器也加樣20孔。
9、結果測定將上述已加樣40孔的聚乙烯板條同時放到時間分辨檢測儀上測熒光讀數(shù)，通過測得CPS值來反映容液內(nèi)的熒光物質顆粒數(shù)量。在同一濃度下，CPS的數(shù)值反映出了容量的大小，從而可對兩移液器的容量進行相互比較。
10、計算方法通過上述標準移液器與待檢移液器各20次加樣，應用時間分辨熒光法實測值，計算出兩移液器的CPS均值、CV及相對誤差R。計算公式為CV＝SD/CPS均值×100％；相對誤差R＝[待檢移液器CPS均值-標準移液器CPS均值]/標準移液器CPS均值×100％。
11、容量比對待檢移液器的CV值應在《定量、可調移液器計量檢定規(guī)程》J JG 646-90規(guī)定的范圍之內(nèi)。對CV值超過JJG 646-90規(guī)定誤差范圍的移液器應棄用；如待檢移液器的CV符合規(guī)定，且兩者的CPS均值相等，則表示兩者容量完全相同。
12、容量校準當待檢移液器CV符合規(guī)定，但與標準移液器的CPS均值不相等時，表示兩者容量不相等。這時，就需要對待檢移液器的容量進行校準用專用扳手調節(jié)移液器頂部旋鈕，順時針旋轉，容量調大；逆時針旋轉，容量調小。隨后再次重復5-12步驟，直至待檢移液器CPS均值(XR)與標準移液器的CPS均值(XS)相等，即R趨向于0為止。
本發(fā)明方法中，移液器的加樣孔數(shù)可以不是20次，如10次、25次等等，加樣20孔以上的準確性會更高一些。
權利要求
1.用銪原子標記法對移液器容量精確度進行比對與校準的方法，其特征在于，它包括如下工作步驟1、標準移液器吸液將標準移液器的滴頭浸入銪標記溶液內(nèi)，滴頭完全吸滿；2、標準移液器放液將標準移液器移至聚乙烯板條內(nèi)壁底部并排空其內(nèi)的銪標記溶液；3、重復上述過程，利用標準移液器加樣若干孔；4、平行試驗用待檢移液器吸取同一銪標記溶液，重復上述1-3步驟，用待檢移液器也加樣相同數(shù)量孔；5、結果測定將上述已加樣的聚乙烯板條同時放到時間分辨檢測儀上測熒光讀數(shù)，通過測得熒光值CPS值來反映溶液內(nèi)的熒光物質顆粒數(shù)量，對標準移液器和待檢移液器進行容量比對與校準。
2.如權利要求1所述的用銪原子標記法對移液器容量精確度進行比對與校準的方法，其特征在于，利用標準移液器和待檢移液器各加樣20孔。
3.如權利要求1或2所述的用銪原子標記法對移液器容量精確度進行比對與校準的方法，其特征在于，在吸液前，先將標準移液器和待檢移液器及吸液嘴與銪標記溶液在室溫平衡30分鐘。
4.如權利要求1或2所述的用銪原子標記法對移液器容量精確度進行比對與校準的方法，其特征在于，在吸液前，先將銪原子溶液用增強液稀釋，最終將濃度控制在CPS值為100000-200000/100μl之間，使溶液充分混均。
5.如權利要求1或2所述的用銪原子標記法對移液器容量精確度進行比對與校準的方法，其特征在于，在吸液前先進行預吸液，即選擇潔凈、合適的吸液嘴安置在標準移液器套筒上，壓緊吸液嘴使之與套筒之間無空氣間隙，預吸入銪標記溶液并排回原容器中，吸液、排液重復多次。
6.如權利要求1或2所述的用銪原子標記法對移液器容量精確度進行比對與校準的方法，其特征在于，吸液時，將標準移液器和待檢移液器的滴頭浸入銪標記溶液液面下2-3mm處，然后緩慢平穩(wěn)地放松按鈕，待1-2秒鐘滴頭完全吸滿后，滴頭離開液面，貼壁停留2-3秒，淌走多余的液體。
7.如權利要求1或2所述的用銪原子標記法對移液器容量精確度進行比對與校準的方法，其特征在于，放液時，將標準移液器和待檢移液器移至已編號的聚乙烯板條內(nèi)壁底部，保持垂直狀態(tài)，輕輕壓下按鈕至第一停點位置，等待1-2秒鐘，移動滴頭貼內(nèi)壁，完全撳下按鈕，以排盡滴頭內(nèi)的銪標記溶液，然后將滴頭沿內(nèi)壁向上移開。
8.如權利要求1或2所述的用銪原子標記法對移液器容量精確度進行比對與校準的方法，其特征在于，所述時間分辨熒光儀的激發(fā)波長為336～337nm，測定波長為610～613nm。
9.如權利要求1或2所述的用銪原子標記法對移液器容量精確度進行比對與校準的方法，其特征在于，測定得到CPS值后計算出兩移液器的CPS均值，利用公式CV＝SD/CPS均值×100％和R＝[待檢移液器CPS均值-標準移液器CPS均值]/標準移液器CPS均值×100％相對誤差分別計算出CV值及相對誤差R；對CV值超過標準規(guī)定誤差范圍的移液器棄用；如待檢移液器的CV值符合規(guī)定但與標準移液器的CPS均值不相等時，調節(jié)移液器頂部旋鈕，調整其容量大??；再次重復檢測步驟1-5及上述計算調整步驟，直至待檢移液器CPS均值與標準移液器的CPS均值相等，即R趨向于0為止。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種用銪原子標記法對移液器容量精確度進行比對與校準的方法，包括如下工作步驟1.標準移液器吸液將標準移液器的滴頭浸入銪標記溶液內(nèi)，滴頭完全吸滿；2.標準移液器放液將標準移液器移至聚乙烯板條內(nèi)壁底部并排空其內(nèi)的銪標記溶液；3.重復上述過程，利用標準移液器加樣若干孔；4.平行試驗用待檢移液器吸取同一銪標記溶液，重復上述1－3步驟，用待檢移液器也加樣相同數(shù)量孔；5.結果測定將上述已加樣的聚乙烯板條同時放到時間分辨檢測儀上測熒光讀數(shù)，通過測得熒光值(CPS值)來反映溶液內(nèi)的熒光物質顆粒數(shù)量，對標準移液器和待檢移液器進行容量比對與校準。本發(fā)明方法具有靈敏度高、重復性好、操作簡便等優(yōu)點。
文檔編號G01F25/00GK101038202SQ20071006719
公開日2007年9月19日 申請日期2007年2月6日 優(yōu)先權日2007年2月6日
發(fā)明者王志剛, 邵平揚 申請人:王志剛