專利名稱：一種治療眼底出血中藥制劑和血明目的質(zhì)量檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬中藥成方制劑領(lǐng)域，具體來說是涉及一種治療眼底出血中藥制劑和血明目的質(zhì)量檢測方法。
背景技術(shù)：
以蒲黃、丹參、地黃等制成的治療眼底出血的中藥制劑和血明目具有涼血止血、滋陰化瘀、養(yǎng)肝明目。用于陰虛肝旺，熱傷絡(luò)脈所引起的眼底出血。然而中藥成份比較復(fù)雜，含有許多未知成份。目前既能有效控制治療急性咽喉炎的中藥制劑的產(chǎn)品質(zhì)量，又能操作方便的檢測方法，還沒有報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種能有效控制中藥制劑和血明目質(zhì)量，準確度高的質(zhì)量檢測方法。
為達到上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為一種治療眼底出血中藥制劑和血明目的質(zhì)量檢測方法，將菊花、黃芩、半量的車前子、半量的蒲黃，混合粉碎成細粉，備用；剩余車前子、蒲黃與其余丹參、地黃、墨旱蓮、決明子、茺蔚子、女貞子、夏枯草、龍膽、郁金、木賊、赤芍、牡丹皮、山楂、當(dāng)歸、川芎加水浸泡30分鐘，煎煮二次，每次2小時，合并煎液，濾過。濾液減壓濃縮至60℃時相對密度為1.35～1.39的稠膏，加入上述細粉混合均勻，60℃烘干，粉碎成細粉，加入糊精，用85％乙醇制成顆粒，60℃烘干，整粒，加入硬脂酸鎂，混勻，壓片，包糖衣或薄膜衣，即得，其檢測方法包括以下步驟
(1)取本品10片(每片0.3g)，除去包衣，研細，加乙醇20ml，浸漬1小時后，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加無水乙醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取墨旱蓮對照藥材1g，加乙醇20ml，同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以9∶1環(huán)己烷-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，置碘蒸氣中熏至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；(2)取本品10片(每片0.3g)，除去包衣，研細，加甲醇20ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取黃芩對照藥材1g，加甲醇20ml，同法制成對照藥材溶液；再取黃芩苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以5∶3∶1∶1乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1％三氯化鐵乙醇溶液；供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；(3)取本品10片(每片0.3g)，除去包衣，研細，加甲醇20ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10ml使溶解，再加鹽酸1ml，加熱30分鐘，立即冷卻，用乙醚振搖提取2次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，殘渣加三氯甲烷1ml使溶解，作為供試品溶液；另取決明子對照藥材1g，加甲醇20ml，同法制成對照藥材溶液；再取大黃素、大黃酚對照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各3μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以15∶5∶1的60～90℃石油醚-乙酸乙酯-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；(4)取本品20片(每片0.3g)，除去包衣，研細，加熱水30ml使溶解，用稀鹽酸調(diào)節(jié)PH值為2-3，離心，取上清液用乙酸乙酯振搖提取二次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取原兒茶醛對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以5∶6∶3∶1的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲苯-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％三氯化鐵乙醇溶液，105℃加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；(5)丹參素的含量測定對照品溶液的制備取丹參素對照品5mg，精密稱定，置50ml量瓶中，用50％甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取1ml，置10ml量瓶中，加50％甲醇至刻度，搖勻，即得每1ml中含丹參素0.01mg的對照品溶液；供試品溶液的制備取本品20片(每片0.3g)，除去包衣，精密稱定，研細，取1g，精密稱定，置100ml量瓶中，加50％甲醇適量，超聲處理30分鐘，放冷，加50％甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；用高效液相色譜法測定以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以10∶90的甲醇-0.5％醋酸為流動相；檢測波長為281nm；理論板數(shù)按丹參素峰計算應(yīng)不低于1500；分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，計算樣品中丹參素的含量。
本發(fā)明通過試驗得出，每片含丹參以丹參素(C9H10O5)計，不得少于0.25mg。
本發(fā)明的治療眼底出血的中藥制劑包括丸劑、膠囊劑、顆粒劑、片劑常規(guī)劑型。
本發(fā)明相對于現(xiàn)有技術(shù)的優(yōu)點為本發(fā)明提供了對黃芩苷、大黃素、大黃酚、原兒茶醛的定性鑒別，制定出了最佳的供試品制備方法，找到了合適的展開劑，能對該制劑進行有效的定性鑒別。此外本發(fā)明改進了丹參中主要成分的含量測定方法，采用高效液相色譜法對丹參素進行含量測定，制定出了最佳的供試品制備方法和流動相配制方法，克服了原測定丹參中主要成分丹參酮II A方法步驟多、時間長、有機溶劑用量多的缺點，大大提高含量檢測的準確度。本方法的建立，有利于市場上對治療眼底出血中藥制劑和血明目的真?zhèn)蝺?yōu)劣進行鑒別。
四、具體實施例以下通過治療眼底出血中藥制劑和血明目質(zhì)量檢測方法的實施例進一步說明本發(fā)明的有益的效果將菊花、黃芩、半量的車前子、半量的蒲黃，混合粉碎成細粉，備用；剩余車前子、蒲黃與其余丹參、地黃、墨旱蓮、決明子、茺蔚子、女貞子、夏枯草、龍膽、郁金、木賊、赤芍、牡丹皮、山楂、當(dāng)歸、川芎加水浸泡30分鐘，煎煮二次，每次2小時，合并煎液，濾過。濾液減壓濃縮至60℃時相對密度為1.35～1.39的稠膏，加入上述細粉混合均勻，60℃烘干，粉碎成細粉，加入糊精，用85％乙醇制成顆粒，60℃烘干，整粒，加入硬脂酸鎂，混勻，壓片，包糖衣或薄膜衣，即得，其檢測方法包括以下步驟(1)取本品10片，除去包衣，研細，加乙醇20ml，浸漬1小時后，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加無水乙醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取墨旱蓮對照藥材1g，加乙醇20ml，同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以9∶1環(huán)己烷-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，置碘蒸氣中熏至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；(2)取本品10片，除去包衣，研細，加甲醇20ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取黃芩對照藥材1g，加甲醇20ml，同法制成對照藥材溶液；再取黃芩苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以5∶3∶1∶1乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1％三氯化鐵乙醇溶液；供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；(3)取本品10片，除去包衣，研細，加甲醇20ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10ml使溶解，再加鹽酸1ml，加熱30分鐘，立即冷卻，用乙醚振搖提取2次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，殘渣加三氯甲烷1ml使溶解，作為供試品溶液；另取決明子對照藥材1g，加甲醇20ml，同法制成對照藥材溶液；再取大黃素、大黃酚對照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各3μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以15∶5∶1的60～90℃石油醚-乙酸乙酯-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；(4)取本品20片，除去包衣，研細，加熱水30ml使溶解，用稀鹽酸調(diào)節(jié)PH值為2-3，離心，取上清液用乙酸乙酯振搖提取二次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取原兒茶醛對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以5∶6∶3∶1的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲苯-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％三氯化鐵乙醇溶液，105℃加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；(5)丹參素的含量測定對照品溶液的制備取丹參素對照品5mg，精密稱定，置50ml量瓶中，用50％甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取1ml，置10ml量瓶中，加50％甲醇至刻度，搖勻，即得每1ml中含丹參素0.01mg的對照品溶液；供試品溶液的制備取本品20片，除去包衣，精密稱定，研細，取1g，精密稱定，置100ml量瓶中，加50％甲醇適量，超聲處理30分鐘，放冷，加50％甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；用高效液相色譜法測定以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以10∶90的甲醇-0.5％醋酸為流動相；檢測波長為281nm；理論板數(shù)按丹參素峰計算應(yīng)不低于1500；分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，計算樣品中丹參素的含量。
重復(fù)上述步驟一次，計算樣品中丹參素含量的平均值為0.32mg/粒。
用實施例所述質(zhì)量檢測方法反復(fù)試驗9次，得出丹參素含量(mg/粒)平均值，結(jié)果見下表

實驗報告1、儀器與試藥儀器Shimadzu 10A型高效液相色譜儀，日本島津。LC-10AVP輸液泵，SPD-10AVP型紫外檢測器。
試藥甲醇為色譜純，水為超純水，其它化學(xué)試劑均為分析純。
對照品丹參素，由上海醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院提供。
供試品和血明目片。
2、色譜條件色譜柱C18色譜柱，150×4.6mm；流動相甲醇-0.5％醋酸(10∶90)。
柱溫室溫檢測波長281nm靈敏度0.2AUFS
3、提取完全性考察根據(jù)提取條件分析，正文樣品溶液的制備過程，主要受超聲處理的影響，因此，我們對其進行考察與比較。
超聲處理時間對提取完全性的影響 取同一批樣品(批號001228)，約1.0g，共三份，精密稱定，置100ml量瓶中，加入50％甲醇90ml，分別按15、30、45分鐘不同時間進行超聲處理，放冷，加50％甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。按上述色譜條件，依法測定，試驗結(jié)果請見表1。
表1超聲處理試驗及結(jié)果

試驗結(jié)果表明，超聲處理30分鐘，丹參素即可提取完全，故選擇30分鐘為超聲處理時間。
4、方法學(xué)考察線性關(guān)系及范圍的考察精密吸取對照品溶液2、4、6、8、10μl，分別注入液相色譜儀，依法測定，結(jié)果請見表2。
表2線性關(guān)系考察試驗及結(jié)果

以進樣量為橫坐標，峰面積積分值為縱坐標，繪制標準曲線，并進行直線回歸，回歸方程為Y＝237216X-1806.5，r＝0.9991。試驗結(jié)果表明，本方法進樣量在0.0208～0.104mg范圍內(nèi)，呈良好的線性關(guān)系。
精密度試驗精密吸取同一對照品溶液5μl，連續(xù)重復(fù)進樣5次，測定峰面積積分值，試驗結(jié)果請見表3。
表3精密度試驗及結(jié)果

試驗結(jié)果表明，本方法具有良好的精密度。
穩(wěn)定性試驗精密吸取同一批(批號010110)供試品溶液，按0、2、4、8小時時間間隔，分別注入液相色譜儀進行測定，試驗結(jié)果請分別見表4。
表4穩(wěn)定性考察試驗與結(jié)果

試驗結(jié)果表明，樣品溶液在8小時內(nèi)，積分值穩(wěn)定。
重現(xiàn)性試驗取同一批(批號010121)樣品5份，按正文方法重復(fù)進行處理測定，結(jié)果請見表5。
表5樣品重復(fù)性試驗及結(jié)果

試驗結(jié)果表明，本方法5次重復(fù)測定的相對標準偏差RSD＝1.77％，說明其重現(xiàn)性較好。
回收率試驗采用加樣回收試驗法，精密稱取同一批(批號010114)樣品0.5g，精密稱定，分別精密加入對照品溶液，揮干，依法測定，試驗結(jié)果請見表6。
表6加樣回收試驗及結(jié)果

試驗結(jié)果表明，本方法具有較高的回收率，其平均回收率為99.42％，相對標準偏差為RSD＝1.58％。
5、樣品中鹽酸小檗堿含量測定分別精密吸取供試品溶液及對照品溶液5μl，按正文方法進行含量測定，結(jié)果請見表7。
表7十批樣品含量測定結(jié)果

7、含量限度的確定從十批樣品測定結(jié)果來看，含量有一定變化，考慮到不同產(chǎn)地丹參藥材中所含丹參素有一定差異及提取率等方面的影響，暫定本品含丹參以丹參素計，每片不得少于0.2mg。
權(quán)利要求
1.一種治療眼底出血中藥制劑和血明目的質(zhì)量檢測方法，將菊花、黃芩、半量的車前子、半量的蒲黃，混合粉碎成細粉，備用；剩余車前子、蒲黃與其余丹參、地黃、墨旱蓮、決明子、茺蔚子、女貞子、夏枯草、龍膽、郁金、木賊、赤芍、牡丹皮、山楂、當(dāng)歸、川芎加水浸泡30分鐘，煎煮二次，每次2小時，合并煎液，濾過；濾液減壓濃縮至60℃時相對密度為1.35～1.39的稠膏，加入上述細粉混合均勻，60℃烘干，粉碎成細粉，加入糊精，用85％乙醇制成顆粒，60℃烘干，整粒，加入硬脂酸鎂，混勻，即得成品，其特征在于包括以下步驟(1)取本品0.3g，研細，加乙醇20ml，浸漬1小時后，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加無水乙醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取墨旱蓮對照藥材1g，加乙醇20ml，同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以9∶1環(huán)己烷-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，置碘蒸氣中熏至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；(2)取本品0.3g，研細，加甲醇20ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取黃芩對照藥材1g，加甲醇20ml，同法制成對照藥材溶液；再取黃芩苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以5∶3∶1∶1乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1％三氯化鐵乙醇溶液；供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；(3)取本品0.3g，研細，加甲醇20ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10ml使溶解，再加鹽酸1ml，加熱30分鐘，立即冷卻，用乙醚振搖提取2次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，殘渣加三氯甲烷1ml使溶解，作為供試品溶液；另取決明子對照藥材1g，加甲醇20ml，同法制成對照藥材溶液；再取大黃素、大黃酚對照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各3μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以15∶5∶1的60～90℃石油醚-乙酸乙酯-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；(4)取本品0.6g，研細，加熱水30ml使溶解，用稀鹽酸調(diào)節(jié)PH值為2-3，離心，取上清液用乙酸乙酯振搖提取二次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取原兒茶醛對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以5∶6∶3∶1的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲苯-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％三氯化鐵乙醇溶液，105℃加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；(5)丹參素的含量測定對照品溶液的制備取丹參素對照品5mg，精密稱定，置50ml量瓶中，用50％甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取1ml，置10ml量瓶中，加50％甲醇至刻度，搖勻，即得每1ml中含丹參素0.01mg的對照品溶液；供試品溶液的制備取本品0.6g，精密稱定，研細，取1g，精密稱定，置100ml量瓶中，加50％甲醇適量，超聲處理30分鐘，放冷，加50％甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；用高效液相色譜法測定以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以10∶90的甲醇-0.5％醋酸為流動相；檢測波長為281nm；理論板數(shù)按丹參素峰計算應(yīng)不低于1500；分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，計算樣品中丹參素的含量。
2.如權(quán)利要求1所述的一種治療眼底出血中藥制劑和血明目的質(zhì)量檢測方法，其特征在于所述的中藥制劑每0.3g含丹參以丹參素計，不得少于0.25mg。
3.如權(quán)利要求1或2所述的一種治療眼底出血中藥制劑和血明目的質(zhì)量檢測方法，其特征在于所述中藥制劑的劑型包括丸劑、片劑、膠囊劑、顆粒劑常規(guī)劑型。
全文摘要
本發(fā)明屬中藥成方制劑領(lǐng)域，具體來說是涉及一種治療眼底出血中藥制劑和血明目的質(zhì)量檢測方法。本發(fā)明提供了對黃芩苷、大黃素、大黃酚、原兒茶醛的定性鑒別，制定出了最佳的供試品制備方法，找到了合適的展開劑，能對該制劑進行有效的定性鑒別。此外本發(fā)明改進了丹參中主要成分的含量測定方法，采用高效液相色譜法對丹參素進行含量測定，制定出了最佳的供試品制備方法和流動相配制方法，克服了原測定丹參中主要成分丹參酮IIA方法步驟多、時間長、有機溶劑用量多的缺點，大大提高含量檢測的準確度。本方法的建立，有利于市場上對治療眼底出血中藥制劑和血明目的真?zhèn)蝺?yōu)劣進行鑒別。
文檔編號G01N30/90GK101028487SQ20071001758
公開日2007年9月5日 申請日期2007年4月4日 優(yōu)先權(quán)日2007年4月4日
發(fā)明者黃小華, 付彬, 張 浩, 王敏 申請人:西安碑林藥業(yè)股份有限公司