專利名稱：：用于鼻內(nèi)遞送的氰鈷胺低粘度水性制劑的制作方法用于鼻內(nèi)遞送的氰鈷胺低粘度水性制劑
背景技術(shù)：
：維生素B12是膳食必需成分，它的缺乏將導(dǎo)致進(jìn)行染色體復(fù)制和分裂的所有細(xì)胞中DNA的缺陷合成。由于細(xì)胞更新速率最快的組織顯示了最顯著的變化，造血系統(tǒng)將對(duì)維生素B12缺乏特別敏感。B12缺乏的早期信號(hào)是巨幼細(xì)胞性貧血。膳食中的B12在胃酸和胰腺蛋白酶的存在下從食物和唾液結(jié)合蛋白中釋放，并結(jié)合至胃的內(nèi)因子。當(dāng)該維生素B12-內(nèi)因子復(fù)合物到達(dá)回腸時(shí)，它與粘膜細(xì)胞表面的受體相互作用，并被主動(dòng)運(yùn)輸進(jìn)入循環(huán)。足量的內(nèi)因子、膽汁和碳酸氫鈉(適當(dāng)?shù)膒H)均為維生素B12的回腸運(yùn)輸所必需。維生素B12在成年體內(nèi)的缺乏極少是由于食物缺乏，而是其通常反映了這種吸收的復(fù)雜順序中某個(gè)方面的缺陷。在胃萎縮或胃手術(shù)后繼發(fā)的胃酸缺乏癥和胃壁細(xì)胞中內(nèi)因子分泌減少是成年體內(nèi)維生素B12缺乏的常見原因。對(duì)胃壁細(xì)胞或內(nèi)因子復(fù)合物的抗體同樣是形成缺乏的主要原因。一些腸道疾病可能會(huì)干擾吸收。維生素B12吸收不良可見于胰腺病癥(喪失胰腺蛋白酶分泌)，細(xì)菌過度繁殖、腸道寄生蟲、腹瀉、由疾病或手術(shù)引起的回腸粘膜細(xì)胞局部損傷。對(duì)成年人推薦的維生素B12每日攝入量為2,4卩-g。維生素B,2共有四種主要的形式氰鈷胺、鞋鈷胺、甲鈷胺和腺普鈷胺。甲鈷胺和腺苷鈷胺不穩(wěn)定且被光破壞。因此它們不適于膳食補(bǔ)充劑或藥物，并且由于它們可在體內(nèi)由氰鈷胺或羥鈷胺形成，因此并非必需。在食物中發(fā)現(xiàn)的維生素B12的主要形式是羥鈷胺。在治療和營養(yǎng)補(bǔ)充劑中使用的主要形式為氰鈷胺，選擇其的原因在于其是最穩(wěn)定的形式，且因此最易于合成和配制。由于維生素B12缺乏的原因通常在于因?yàn)榫S生素B12-內(nèi)因子復(fù)合物運(yùn)輸機(jī)制破壞導(dǎo)致該維生素?zé)o法在小腸中吸收，因此維生素B12必須進(jìn)行全身施用。目前，治療量的氰鈷胺通過肌肉內(nèi)或深度皮下注射氰鈷胺進(jìn)行施用。然而，患者必須定期回到醫(yī)院接受額外的注射以維持他們的維生素B12水平。但是，鼻內(nèi)凝膠氰鈷胺制劑NASCOBAL⑧目前已經(jīng)上市，其中氰鈷胺通過鼻內(nèi)施用以進(jìn)行維生素B12維持性治療。然而，許多患者發(fā)現(xiàn)該鼻內(nèi)凝膠的粘稠度令人不適，并且更愿意施用包含氰鈷胺的低粘度噴霧?，F(xiàn)有技術(shù)提示對(duì)于待通過鼻內(nèi)吸收的治療有益量的維生素B12，B12在溶液中的濃度必須大于1%重量(參見Merkus的美國專利5,801,161,以下稱為"Merkus")，或者以粘性凝膠的方式施用(參見Wenig的美國專利4,724,231，以下稱為"Wenig")，從而使該凝膠在鼻孔內(nèi)停留延長的時(shí)間段。事實(shí)上Wenig聲稱以低粘度溶液鼻內(nèi)施用的B12未能與鼻粘膜接觸足夠長時(shí)間來允許有用的吸收。Wenig聲稱如果溶液具有低粘度，則大部分B12均會(huì)^皮浪費(fèi)。Merkus開發(fā)了羥鈷胺濃度大于1%的幾鈷胺的鼻內(nèi)制劑，然而羥鈷胺不是非常穩(wěn)定，因此它的保質(zhì)期短。Merkus之所以選擇羥鈷胺是因?yàn)榍桠挵吩跐舛却笥?%時(shí)不溶于水性溶液。Wenig的教導(dǎo)是明確的，其主題披露未能教導(dǎo)如本文以下所述的適合并有效用于鼻內(nèi)施用的水性形式的氰鈷胺制劑。Wenig毫無疑義地否定了粘度低于Wenig教導(dǎo)的、明確說明的臨界粘度范圍2500-6000cPs的所有氰鈷胺制劑。特別地，Wenig指出鼻內(nèi)氰鈷胺制劑"將包含足量的增稠劑，從而使其粘度介于約2500至6500cps，盡管也可采用高達(dá)10,000cps的更具粘性的組合物"。(第2欄，第37-39行，重點(diǎn)強(qiáng)調(diào))。Wenig未教導(dǎo)或暗示任何調(diào)整或選擇以如本申請(qǐng)人所披露的降低鼻內(nèi)氰鈷胺制劑的粘度。相反地，Wenig的披露直接否定了具有小于約1000cPs的鼻內(nèi)氰鈷胺制劑。Wenig所描述的氰鈷胺凝膠組合物在所有的實(shí)施方式中顯示了遠(yuǎn)高于此的粘度。因此，Wenig教導(dǎo)"本發(fā)明的典型組合物"具有"約4500cps"的粘度(第3欄，第41-51行)。Wenig所提供的每個(gè)工作實(shí)施方式(對(duì)于這些實(shí)施方式提供了粘度值，且通過測(cè)定血漿氰鈷胺水平對(duì)確認(rèn)了這些實(shí)施方式的生物利用度)分別具有4000cps、3500-4000cps和4000cps的祐度(例如，參見，實(shí)施例1;制劑A，B和C)。如上文指出，Wenig進(jìn)一步強(qiáng)調(diào)了"可采用高達(dá)10,000cps的更高粘度的組合物"。相應(yīng)地，Wenig顯然并沒有教導(dǎo)或暗示以水性液體(噴霧或滴劑)氰鈷胺制劑來取代Wenig所披露的鼻內(nèi)凝膠制劑。此外，Wenig在該披露的
背景技術(shù)：
部分明確地教導(dǎo)了氰鈷胺的非凝膠(粉末和水性)制劑對(duì)于鼻內(nèi)施用以治療維生素B12缺乏是無效的。針對(duì)水性制劑，Wenig引用了由Monto等人報(bào)道提議的維生素B12的水性等張氯化鈉溶液。(Am.J.Med,Sci.223:113，1953;Arch.Int.Med.93:219，1954)。Wenig聲稱該溶液以及粉末狀的氰鈷胺制劑對(duì)于鼻內(nèi)使用以治療維生素B12缺乏是無效的，因?yàn)榇蟛糠諦12迅速進(jìn)入咽喉。它沒有與鼻粘膜接觸足夠長的時(shí)間以允許有用的和均勻的吸收。事實(shí)上，這樣施用的大部分B12均被浪費(fèi)了。(第1欄，第63-68行)。因此，Wenig不僅否定了將鼻內(nèi)氰鈷胺制劑的粘度降低至2500-6500cps的臨界最小范圍以下，還明確否定了使用水性(噴霧或滴劑)組合物取代Wenig描述的鼻內(nèi)凝膠制劑的前景。Wenig提供了明確的證據(jù)和理由來否定這樣的改進(jìn)提議。特別地，Wenig教導(dǎo)了有效的鼻內(nèi)氰鈷胺制劑必須具有"足量的增稠劑以使其粘度介于約2500至6500cps"(同上)一Wenig將其描述為關(guān)鍵的參數(shù)，它可使該制劑"足夠粘稠，從而使其本身在鼻部通道內(nèi)停留足夠長的時(shí)間，以讓大部分B12被吸收"。(第2欄，第24-29行)。Wenig將這些屬性與非凝膠(液體和粉末)氰鈷胺組合物進(jìn)行了直接對(duì)比，根據(jù)Wenig的明確教導(dǎo)，后者未能顯示足夠的鼻粘膜停留時(shí)間，從而不能實(shí)現(xiàn)氰鈷胺的有效的鼻內(nèi)遞送/生物利用度。在其它開發(fā)可用于鼻內(nèi)施用的氰鈷胺制劑的嘗試中，Garcia-Arieta等人描述了(Biol.Pharm.Bull.24:1411-1416，2001;以下稱為"Garcia-Arieta等人")"作為氰鈷胺鼻部吸收增強(qiáng)劑的噴霧干燥粉末(Spray-DriedPowdersasNasalAbsorptionEnhancersofCyanocobalamin)，，(標(biāo)題)。Garcia-Arieta等人對(duì)任何氰鈷胺噴霧和滴劑的唯一描述來自于比較實(shí)驗(yàn)，通過該實(shí)驗(yàn)，作者明確報(bào)道了液體(噴霧和滴劑)氰鈷胺組合物無法用于鼻內(nèi)使用。更具體而言，Garcia-Arieta等人測(cè)試了三種噴霧干燥的鼻內(nèi)氰鈷胺劑型和兩種實(shí)驗(yàn)性氰鈷胺鼻部溶液(含0.1%氰鈷胺的滴劑和噴霧；未指明其它制劑參數(shù))(第142頁，右欄)。Garcia-Arieta等人明確報(bào)道了氰鈷胺的實(shí)驗(yàn)性鼻部噴霧和滴劑未產(chǎn)生任何可測(cè)得的生物利用度。如第1415頁左欄所述，Garcia-Arieta等人從他們的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)"不論是滴劑還是噴霧劑的鼻部溶液均不能將兔的血清鈷胺的基礎(chǔ)水平提高至統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的水平。這抑或意味著氰鈷胺在不采用吸收增強(qiáng)劑進(jìn)行施用時(shí)難以通過鼻途徑吸收，抑或意味著由于沒有粘度增強(qiáng)劑，這些制劑不能在鼻腔內(nèi)停留足以使其吸收的時(shí)間。(重點(diǎn)強(qiáng)調(diào))。"這些報(bào)道明確地描述了水性、低粘度氰鈷胺制劑的不可操作性，這與上述Wenig的結(jié)論非常接近。相應(yīng)地，Wenig和Garcia-Arieta等人均教導(dǎo)了氰鈷胺的非凝膠、液體鼻內(nèi)制劑被認(rèn)為不能有效實(shí)現(xiàn)有用的治療結(jié)果。Wenig明確地描述了有用的氰鈷胺鼻內(nèi)凝膠制劑的臨界粘度值為2500cps以上，以及所有工作實(shí)施方式中3500-4500cps的更高范圍。Garcia-Arieta等人進(jìn)一步提供直接的實(shí)驗(yàn)證據(jù)證明簡單的1%氰鈷胺水性噴霧和滴劑不能得到可測(cè)的生物利用度。為了嘗試提供有用的鼻內(nèi)制劑來治療維生素B12缺乏，Slot等人，Gastroenterology113:430-433,1997(以下稱為"Slot等人")報(bào)道了鞋鈷胺的鼻內(nèi)制劑。特別地，Slot等人明確地教導(dǎo)了羥鈷胺是用于治療維生素B12缺乏的維生素B12的優(yōu)選形式，且氰鈷胺不是用于液體鼻內(nèi)遞送制劑或方法的有效或可用治療劑。如同上文Wenig討論的那樣，Slot等人對(duì)前述的氰鈷胺等張鹽溶液進(jìn)行了評(píng)價(jià)，并聲稱"這些方案在臨床實(shí)踐中均未能繼續(xù)。顯然其結(jié)果并不非常實(shí)用。"(第432頁，右欄)。Slot等人進(jìn)一步否定了鼻內(nèi)氰鈷胺制劑和治療維生素B12缺乏的方法，其披露如下"幾鈷胺較氰鈷胺更廣泛地與血漿蛋白結(jié)合，且在體內(nèi)具有更長的半衰期。因此，幾鈷胺可更好地保留在體內(nèi)，因而需要更少的給藥頻率。此外，氰鈷胺對(duì)于患有熱帶性弱視和同時(shí)使用煙草的患者以及患有附帶視神經(jīng)病的惡性貧血的患者具有使用禁忌；因此，羥鈷胺是改善維生素B12缺乏的選擇藥物(第432頁，右欄)。"否定了選擇氰鈷胺作為鼻內(nèi)制劑和方法中鈷胺的有用形式的另一現(xiàn)有技術(shù)參考文獻(xiàn)為上述討論的Merkus，USPN5,801,161。與Slot等人的教導(dǎo)類似，Merkus明確表示羥鈷胺與氰鈷胺相比是治療維生素B12缺乏的優(yōu)選治療劑。在有關(guān)鼻部劑型的部分，Merkus強(qiáng)調(diào)"在用于鼻部施用的制劑中最有效的維生素B12的濃度大于1%。氰鈷胺可達(dá)到的最大濃度為約1%。僅羥鈷胺能達(dá)到1%以上的濃度，因?yàn)樗谒芯哂辛己玫娜芙舛?。羥鈷胺物質(zhì)的溶解度可高達(dá)10%，這意味著在使用羥鈷胺時(shí)，每單位體積可具有大約多10倍的維生素B12被施用并隨后被鼻部吸收。(第3欄，第43-53行)"基于前述教導(dǎo)，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將不會(huì)對(duì)開發(fā)低粘度氰鈷胺制劑和方法(特別是作為有效的鼻內(nèi)施用治療工具來治療維生素B12缺乏)產(chǎn)生實(shí)踐動(dòng)機(jī)。將現(xiàn)有技術(shù)作為整體考慮，均沒有合理預(yù)期到此處以下所述的氰鈷胺制劑和方法可被開發(fā)并用于成功實(shí)現(xiàn)氰鈷胺的治療有效遞送/生物利用度，其足以減輕維生素B12缺乏，如本文所7>開的。Wenig和Garcia-Arieta等人均否定了低粘度液體氰鈷胺制劑。Wenig明確教導(dǎo)了有效的鼻內(nèi)氰鈷胺的臨界最低粘度為2500-4000cps。Wenig和Garcia-Arieta等人教導(dǎo)了非凝膠、液體氰鈷胺制劑將無法停留足夠時(shí)間以實(shí)現(xiàn)鼻內(nèi)吸收。Garcia-Arieta等人特別報(bào)道了如下實(shí)驗(yàn)結(jié)果在鼻部施用1%簡單水性氰鈷胺制劑后未檢測(cè)到明顯的生物利用度。類似地，對(duì)于選擇氰鈷胺作為用于鼻內(nèi)液體制劑的鈷胺的活性形式及氰鈷胺濃度，Slot等人和Merkus共同教導(dǎo)了在用于治療維生素B12缺乏的鼻內(nèi)制劑中(不考慮粘度問題)，氰鈷胺預(yù)期是無效的，或者至少與羥鈷胺相比絕對(duì)不受推薦。作為這些教導(dǎo)的例證，Merkus強(qiáng)調(diào)"維生素B12的高度和有效鼻內(nèi)吸收對(duì)于醫(yī)學(xué)治療非常有益，且其僅能通過使用比氰鈷胺具有明顯更高的水溶性的羥鈷胺實(shí)現(xiàn)。只有通過羥鈷胺才能制備水性介質(zhì)中的理想的鼻部組合物，其具有絕對(duì)最高的維生素B12濃度，且因此具有更為有效的維生素B12鼻部吸收。該種鼻部制劑可減少患者的給藥頻率，使得治療更為簡單和便宜。(第2欄，第27-37行)。"在有關(guān)本發(fā)明總體領(lǐng)域的其它現(xiàn)有技術(shù)中，Deihl的美國專利4,525,341披露了鼻內(nèi)施用維生素的方法，但未描述或?qū)崿F(xiàn)僅包含氰鈷胺的具體制劑。公開號(hào)為WO86/05987的國際專利申請(qǐng)PCT/US86/00665披露了包含氰鈷胺為維生素B,2的鼻部噴霧組合物。然而，這些具體的噴霧制劑均包含汞化合物作為防腐劑，且該披露要求汞化合物的存在。此外還提及了其它防腐劑，包括苯扎氯銨和氯丁醇。如上文指出，包含氰鈷胺的鼻內(nèi)凝膠NASCOBAL⑧目前已由Bothell，Washington的NastechPharmaceuticalCompanyInc.生產(chǎn)并銷售。它對(duì)于一些過去缺乏維生素B12，但通過肌肉內(nèi)注射恢復(fù)B12水平的患者可非常有效地維持其維生素B12水平。然而，許多患者發(fā)現(xiàn)該凝膠的粘稠度在他們的鼻中非常令人不適，因此更希望具有更低粘度且不含汞化合物的鼻內(nèi)制劑。因此需要生產(chǎn)藥學(xué)穩(wěn)定的氰鈷胺水性溶液，該溶液具有低粘度，可選地不含汞化合物，且具有足以用作維生素B12維持療法的生物利用度。發(fā)明綜迷本發(fā)明通過才是供具有低于約1000cPs的粘度、適于鼻內(nèi)施用的氰鈷胺穩(wěn)定藥物溶液滿足了該需求，其中所述的氰鈷胺鼻內(nèi)溶液具有肌肉內(nèi)注射的氰鈷胺的生物利用度的至少5%、在特定實(shí)施方式中至少6%或7%的生物利用度。在替代性的實(shí)施方式中，本發(fā)明的治療或藥學(xué)有效制劑可包含氰鈷胺、檸檬酸、檸檬酸鈉和水，其中粘度小于1000cPs，且其中該氰鈷胺溶液具有氰鈷胺肌肉內(nèi)注射液的生物利用度的至少約5%、在特定實(shí)施方式中至少約6%或7%的生物利用度。在特定的實(shí)施方式中，如本發(fā)明所述的氰鈷胺溶液具有肌肉內(nèi)注射的氰鈷胺的生物利用度的至少約8%、9%、10%、11%或12%的生物利用度。在特定的實(shí)施方式中，該溶液基本不含汞和含汞化合物。本發(fā)明范圍內(nèi)的特定組合物將包含潤濕劑以抑制粘膜的干燥并防止刺激?？墒褂枚喾N潤濕劑，包括但不限于山梨糖醇、丙二醇或丙三醇。示范性的有用濕潤劑為丙三醇。采用防腐齊'j來3是高所述組合物的寸呆質(zhì)期。防腐劑的范例包括-但不限于苯甲醇、氯丁醇和苯扎氯銨。在示范性的實(shí)施方式中，防腐劑為苯扎氯銨。適用的防腐劑濃度為總重的0.002%至2.0%，并可根據(jù)所選的藥劑進(jìn)行合適的變化。示范性的制劑中各物質(zhì)濃度為(總重的百分比)氰鈷胺0.5%、檸檬酸0.12%、檸檬酸鈉0.32%、丙三醇2.23%、苯扎氯銨0.02%和水96.79%。在其它具體的實(shí)施方式中，氰鈷胺的鼻部噴霧溶液提供在噴霧器中，其中包含了2.3mL的500mcg/0.1mL氰鈷胺溶液及溶解于純凈水中的檸檬酸鈉、檸檬酸、丙三醇和苯扎氯銨。在本文中的示范性噴霧溶液的pH值介于4.5和5.5。在初始啟動(dòng)后，噴霧泵的示范性噴霧可遞送平均500mcg的氰鈷胺，且含于該瓶中的2.3mL噴霧溶液可遞送8劑鼻部噴霧。本發(fā)明的另一實(shí)施方式為施用氰鈷胺的方法，該方法包括鼻部輸注氰鈷胺水性溶液，其中該氰鈷胺溶液具有小于1000cPs的粘度，且其中所述的氰鈷胺溶液具有肌肉內(nèi)注射的氰鈷胺的生物利用度的至少約5%、在特定實(shí)施方式中至少約6%或7%的生物利用度。在特定的實(shí)施方式中，如本發(fā)明所迷的氰鈷胺溶液具有肌肉內(nèi)注射的氰鈷胺的生物利用度的至少約8%、9%、10%、11%或12%的生物利用度。在更具體的實(shí)施方式中，根據(jù)本發(fā)明的方法施用的氰鈷胺溶液基本不含汞和含汞化合物。在本文中，"基本不含"通常表示溶液中含有小于2%重量的特定物質(zhì)，而在其它方面，溶液含有小于1%重量、0.05%重量、0.01%重量或完全不含該物質(zhì)，由此，例如，通過常規(guī)檢測(cè)方法無法在該溶液中觀'j得汞或含汞化合物。本發(fā)明進(jìn)一步涉及提高腦脊液(CSF)中維生素B12水平的方法，其包括鼻內(nèi)施用氰鈷胺溶液，從而將CSF中的維生素B12相比于血清中的維生素B12的平均比例(B12CSF/B12血清xlOO)提高至約1.1，其中所述的氰鈷胺溶液的生物利用度至少為肌肉內(nèi)注射的氰鈷胺的7%。在更具體的實(shí)施方式中，提高B12CSF水平，使得CSF中的B12與血清中B12的水平的比例至少為1.9。本發(fā)明的方法進(jìn)一步包括通過制動(dòng)器尖端將氰鈷胺溶液作為噴霧施用至個(gè)體的鼻部，其中在某些實(shí)施方式中該噴霧具有如下一種或多種屬性在自該制動(dòng)器尖端3.0cm的高度進(jìn)行測(cè)量時(shí)，具有約1.0至約1.4的噴霧形態(tài)橢圓度比；或者噴霧生成液滴，少于約5%的液滴的大小小于10pm;該噴霧具有長軸約35.3mm而短軸約30.8mm的噴霧形態(tài)；噴霧所生成的液滴中50%的液滴大小等于或小于26.9|im;噴霧所生成的液滴中卯％的液滴大小等于或小于55.3|im;或者噴霧所生成的液滴中10%的液滴大小等于或小于12.5(im。圖1A顯示了包含本發(fā)明的氰鈷胺溶液并具有制動(dòng)器的鼻部噴霧泵試劑盒，該制動(dòng)器未工作。圖1B顯示了包含本發(fā)明的氰鈷胺溶液、并具有工作中的制動(dòng)器，且排出了本發(fā)明的氰鈷胺溶液的噴霧流的鼻部噴霧泵試劑盒。圖2顯示了由噴霧泵試劑盒的制動(dòng)器生成的噴霧形態(tài)。發(fā)明詳述以下定義可幫助理解本發(fā)明。"約"是一個(gè)相對(duì)的術(shù)語，表示對(duì)其所指向的名義值的加或減20%的近似值。對(duì)于藥理學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)領(lǐng)域以及本公開所涉及的類似領(lǐng)域，這種近似是被許可的，除非特別說明該值是關(guān)鍵的或需要嚴(yán)格的范圍。"鼻粘膜"鼻粘膜指血管化的鼻前庭內(nèi)村，并向內(nèi)延伸至口咽和竇的邊界。"水性的"指在水中形成的溶液，但可包含更少量的其它共溶劑。"生物利用度"定義為從藥物產(chǎn)品吸收活性成分或活性部分并在作用位點(diǎn)被利用的速率和程度[21CFR§320.1(a)]。"鼻內(nèi)噴霧相對(duì)于肌肉內(nèi)注射的氰鈷胺的生物利用度"指與同等數(shù)量注射的氰鈷胺相比，鼻內(nèi)劑量被全身血管系統(tǒng)攝取的百分比數(shù)量。例如，假設(shè)包含100嗎氰鈷胺的氰鈷胺肌肉內(nèi)注射溶液具有100%的生物利用度，如果氰鈷胺鼻內(nèi)劑量含100嗎且具有肌肉內(nèi)注射的氰鈷胺的至少5%，在特定實(shí)施方式中至少約6%或7%的生物利用度，則至少5嗎、6|ig或7嗎氰鈷胺被攝入血管系統(tǒng)。同樣地，如果該氰鈷胺的鼻內(nèi)劑量含有500jig，且如果該鼻內(nèi)制劑具有至少7%的生物利用度，則至少35pg氰鈷胺^皮4聶入血管系統(tǒng)。"穩(wěn)定性"在貯存過程中，以參數(shù)度量的任何被認(rèn)為會(huì)隨時(shí)間顯著影響產(chǎn)品質(zhì)量屬性的組成性變化均表示不穩(wěn)定性，參數(shù)的例子包括但不限于濃度、降解、粘度、pH或粒度。同樣地，被認(rèn)為不會(huì)明顯影響產(chǎn)品的質(zhì)量屬性的變化意味著穩(wěn)定性。測(cè)量穩(wěn)定性的時(shí)間期間相對(duì)取決于該組合物的目標(biāo)用途。有時(shí)可將更高溫度下的加速穩(wěn)定性作為推斷比實(shí)際測(cè)量的時(shí)間更長的期限內(nèi)的穩(wěn)定性的快速方法。"藥學(xué)可接受"指組合物，其在通過指定的施用途徑施用至人或哺乳動(dòng)物時(shí)，不會(huì)引發(fā)與所述化合物施用所得益處不成比例的副反應(yīng)。"哺乳動(dòng)物"應(yīng)當(dāng)包括任意類別的溫血高級(jí)脊推動(dòng)物，其通過哺乳動(dòng)物腺體分泌的乳汁哺育幼代，皮膚或多或少覆蓋毛發(fā)，且非限制性地包括了人和非人靈長動(dòng)物，其子代(包括雌性或雄性的嬰兒和青少年)，牲畜物種(例如馬、牛、綿羊和山羊)，以及研究用和家養(yǎng)物種(包括狗、貓、小鼠、大鼠、豚鼠和兔)。本文的"患者"或"個(gè)體"可與"哺乳動(dòng)物"互換使用。"鼻內(nèi)遞送"表示主要通過鼻腔粘膜進(jìn)行的藥物遞送。這包括上、中和下鼻甲以及鼻咽。應(yīng)注意嗅區(qū)集中于鼻甲的上部(上方1/3)。纖毛作用(cilialaction)將材料向后推向口咽，因此沉積在鼻前庭的材料在進(jìn)入咽喉前經(jīng)過鼻粘膜。"基本不含"指特定活性成分在本發(fā)明的組合物中的水平，其中該特定的活性成分以重量計(jì)構(gòu)成該組合物的活性成分的總重量的小于20%，優(yōu)選小于10%，更優(yōu)選小于5%,最優(yōu)選小于1%。在此處有用的遞送載體包括常用于鼻部溶液和凝膠的制動(dòng)分配器。該技術(shù)的實(shí)施方式包括多劑量的、單劑量的、計(jì)量劑量的、兒童安全的和一次性的分配器，及其試劑盒。此處所用的"氰鈷胺在血漿中的峰值濃度(Cmax)"，"時(shí)間曲線下的面積(AUC)vs.血漿中的氰鈷胺的濃度"，"維生素在血漿中達(dá)到最大血漿濃度的時(shí)間(tmax)，，為本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)[Laursen等人，Eur.J.Endocrinology,135:309-315，(1996)]。"濃度vs.時(shí)間曲線，，測(cè)量了個(gè)體的血清中的氰鈷胺濃度vs.通過鼻內(nèi)、皮下或其它腸胃外施用途徑向個(gè)體施用一定劑量的氰鈷胺后的時(shí)間。"Cmax"為向個(gè)體施用單個(gè)劑量的氰鈷胺后該個(gè)體血清中氰鈷胺的最大濃度。術(shù)語"tmax"指向個(gè)體施用單個(gè)劑量的氰鈷胺后該個(gè)體血清中的氰鈷胺達(dá)到最大濃度的時(shí)間。22本文所用的"時(shí)間曲線下的面積(AUC)VS.血漿中氰鈷胺的濃度"根據(jù)線性梯形法并加上剩余面積來計(jì)算。有90%的概率將在兩個(gè)劑量之間檢測(cè)到23%的下降或30%的提高(11類誤差卩=10%)。"遞送率"或"吸收率"可通過比較達(dá)到最大濃度(C,)的時(shí)間(t腿)進(jìn)行估算。Cmax和t麗均通過非參數(shù)法進(jìn)行分析。皮下、靜脈和鼻內(nèi)氰鈷胺施用的藥代動(dòng)力學(xué)可通過方差分析(ANOVA)進(jìn)行比較。3于于逐只十比專交，可^f吏用Bonferroni-Holmes序貫禾呈序(sequentialprocedure)評(píng)估顯著性。在三個(gè)鼻部劑量之間的劑量應(yīng)答關(guān)系可通過回歸分析進(jìn)行估計(jì)。PO.05被認(rèn)為具有顯著性。結(jié)果以平均值+ASEM的形式給出。(Laursen等人，1996)上述的氰鈷胺溶液經(jīng)設(shè)計(jì)以液滴或噴霧形式施用至鼻粘膜。然而，優(yōu)選的施用模式為噴霧形式，即，以細(xì)小液滴的形式。合適噴霧泵的例子為由PfeifferGmbH,Radolfzell，Germany生產(chǎn)的63385型Pfeiffer噴霧泵。氰鈷胺的鼻部施用根據(jù)本發(fā)明，使用鼻部噴霧通過鼻內(nèi)施用氰鈷胺。在此方面，以下定義是有用的。氣溶膠——在壓力下包裝并包含治療活性成分的產(chǎn)品，所述活性成分在適當(dāng)?shù)拈y系統(tǒng)激活后釋放。計(jì)量氣溶"交——包含計(jì)量劑量閥的受壓劑型，其允許在每次激活時(shí)遞送相同數(shù)量的噴霧。粉末氣溶膠——在壓力下包裝并包含粉末形式的治療活性成分的產(chǎn)品，所述活性成分在適當(dāng)?shù)拈y系統(tǒng)激活后釋放。噴霧氣溶膠——采用壓縮氣體作為推進(jìn)劑以提供將產(chǎn)品作為濕潤噴霧排出所需的力的氣溶膠產(chǎn)品；它通常適用于水性溶劑中的藥劑溶液。噴霧——被噴射空氣或氣流細(xì)分的液體。計(jì)量噴霧——由閥組成的非加壓劑型，所述閥允許在每次激活時(shí)分配特定數(shù)量的噴霧。懸浮噴霧——包含分散于液體運(yùn)載體中的固體顆粒的液體制劑，且其呈流動(dòng)液滴(coursedroplet)或細(xì)小固體形態(tài)。以計(jì)量鼻部噴霧泵作為藥物遞送設(shè)備("DDD")排出的氣溶膠噴霧的流體動(dòng)力學(xué)特征。噴霧特征是就新型和現(xiàn)有鼻部噴霧泵的研發(fā)、質(zhì)量保證和穩(wěn)定性試驗(yàn)程序向食品藥品管理局("FDA")申請(qǐng)批準(zhǔn)所提交內(nèi)容的必要部分。據(jù)發(fā)現(xiàn)噴霧幾何學(xué)的完全特征是鼻部噴霧泵整體性能的最佳指示。特別地，據(jù)發(fā)現(xiàn)，對(duì)噴霧離開設(shè)備時(shí)的噴霧發(fā)散角(噴霧流幾何學(xué)，plumegeometry)，噴霧的橫截面橢圓度比、均應(yīng)性和顆粒/液滴分布(噴霧形態(tài))以及形成噴霧隨時(shí)間的演化的測(cè)量在鼻部噴霧泵的表征中是最具代表性的性能數(shù)量。在質(zhì)量保證和穩(wěn)定性試驗(yàn)中，噴霧流幾何學(xué)和噴霧形態(tài)測(cè)量是用于驗(yàn)證與批準(zhǔn)的鼻部噴霧泵的數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)的一致性和合規(guī)性的關(guān)鍵指標(biāo)。定義噴霧流高度——從制動(dòng)器尖端到由于線性流的破壞導(dǎo)致噴霧流角度變得非線性的點(diǎn)的測(cè)量值。根據(jù)對(duì)數(shù)字圖象的視覺檢查，且為了建立與噴霧形態(tài)的最遠(yuǎn)測(cè)量點(diǎn)一致的寬度測(cè)量點(diǎn)，本研究中指定了30mm的高度。長軸--以基本單位(mm)表示的在擬合的噴霧形態(tài)中經(jīng)過COMw可畫的最長的弦。短軸——以基本單位(mm)表示的在擬合的噴霧形態(tài)中經(jīng)過COMw可畫的最短的弦。橢圓度比——長軸與短軸的比例。D10——液滴的直徑Oim)，其中樣本總液體體積的10%由具有比之更小直徑的液滴組成。D50——液滴的直徑(iim)，其中樣本總液體體積的50%由具有比之更小直徑的液滴組成，該^t也稱為質(zhì)量中位直徑。D90——液滴的直徑(pm)，其中樣本總液體體積的90%由具有比之更小直徑的液滴組成。跨矩——分布的寬度的測(cè)量值，該值越小，分布越窄。跨距計(jì)算為Ds)。%RSD——相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差的百分比，標(biāo)準(zhǔn)偏差除以該系列的平均值再乘以100，也稱為Q/oCV。氰鈷胺鼻部噴霧試劑盒本發(fā)明進(jìn)一步包括了氰鈷胺鼻部噴霧試劑盒以及使用鼻部噴霧試劑盒施用氰鈷胺溶液的方法。圖1A、1B和圖2示例了鼻部噴霧試劑盒。圖1A和1B顯示了工作前(圖1A)和工作后(圖IB)的鼻部噴霧設(shè)備IO。該氰鈷胺鼻部噴霧試劑盒IO包含容器和制動(dòng)器14，在本實(shí)例中該容器為瓶12,其中放置了氰鈷胺制劑，制動(dòng)器14接附在瓶12上，并與瓶12中的氰鈷胺溶液流體連通。當(dāng)制動(dòng)器14被制動(dòng)或工作時(shí)，它通過制動(dòng)器的尖端15推動(dòng)氰鈷胺的噴霧流16。噴霧流包含氰鈷胺溶液的液滴。噴霧形態(tài)可通過對(duì)該噴霧流16的預(yù)定高度上的橫截面拍照得到。該噴霧流在離開制動(dòng)器14時(shí)還具有噴射角度20。圖2顯示了噴霧流16的噴霧形態(tài)。圖2的噴霧形態(tài)是橢圓且具有長軸24和短軸26。在一個(gè)示范性的實(shí)施方式中，在離制動(dòng)器尖端3.0cm的高度測(cè)量時(shí)，制動(dòng)器生成具有橢圓度比為約1.0至約1.4的噴霧形態(tài)的氰鈷胺噴霧。在某些實(shí)施方式中，氰鈷胺溶液的液滴中5%以下具有小于10pm的大小，噴霧形態(tài)的長軸和短軸分別為40和25mm,50%的液滴大小為26.9(im或更小，90%的液滴大小為55.3|im或更小，10%的液滴大小為12.5nm或更小。如上文指出，本發(fā)明提供了用于鼻內(nèi)遞送氰鈷胺至哺乳動(dòng)物個(gè)體以治療或預(yù)防多種疾病、紊亂和癥狀的改良方法和組合物?？筛鶕?jù)本發(fā)明的方法治療和預(yù)防的適當(dāng)哺乳動(dòng)物個(gè)體的例子包括但不限于人和非人靈長動(dòng)物，牲畜物種(例如馬、牛、綿羊和山羊)，以及研究用和家養(yǎng)物種(包括狗、貓、小鼠、大鼠、豚鼠和兔)。在示范性的治療方法中，本發(fā)明的氰鈷胺鼻噴霧可針對(duì)維持患者的血液狀態(tài)，該患者處于肌肉內(nèi)維生素B12治療后的緩解狀態(tài)中。例如，初始治療方案可包括該患者在約1至2周中每天肌肉內(nèi)注射100(ig的氰鈷胺，同時(shí)施用l至5mg的葉酸。氰鈷胺的肌肉內(nèi)注射不應(yīng)超過IOO嗎，因?yàn)槌^100昭的劑量會(huì)迅速從血漿中清除進(jìn)入尿液，施用更大量的維生素B12不會(huì)導(dǎo)致更大量的維生素的更長保留。使用本發(fā)明的方法和組合物的治療可參照如下方式在該初始治療的療程后進(jìn)行。耳又代每月一次注射100pg的氰鈷胺，通過采用此處所述的氰鈷胺噴霧，患者可每周一次或兩次自助施用含有例如500(ig的氰鈷胺的一劑鼻部噴霧。該種鼻內(nèi)氰鈷胺的維持療法適用于任何已被診斷為維生素B12缺乏的患者，但特別適用于對(duì)惡性貧血和在嚴(yán)格素食者(不吃任何動(dòng)物產(chǎn)品的所謂素食者)中發(fā)生的維生素B12膳食缺陷進(jìn)行治療的患者。使用本發(fā)明的氰鈷胺溶液的維持氰鈷胺療法還適用于由于胃(其向回腸分泌內(nèi)因子，而內(nèi)因子在回腸促進(jìn)B12吸收)的結(jié)構(gòu)或功能損傷導(dǎo)致的維生素B12吸收不良的患者。這些癥狀包括熱帶口炎性腹瀉和非熱帶口炎性腹瀉(特發(fā)性脂瀉，谷膠所致腸病)。使用本發(fā)明的氰鈷胺溶液的維持氰鈷胺療法還適用于由于破壞胃粘膜的損傷(吞食腐蝕物、廣泛的瘤)以及與不同程度胃萎縮有關(guān)的若干癥狀(例如多發(fā)性硬化、人免疫缺陷性病毒(HIV)感染、某些內(nèi)分泌紊亂、鐵缺乏以及胃大部切除術(shù))導(dǎo)致的內(nèi)因子分泌不足所引起的維生素B12吸收不良的患者。導(dǎo)致B12缺乏的結(jié)構(gòu)性損傷包括回腸炎、回腸切除、Crohn病以及惡性胂瘤。維生素B12缺乏還可能由腸寄生蟲的竟?fàn)幩鶎?dǎo)致，且如果在肝瘤治療中采用該維生素的抗代謝物，則也可能是因?yàn)榘l(fā)生維生素B12的不充分利用所導(dǎo)致。本發(fā)明的鼻內(nèi)氰鈷胺溶液還可用于因?yàn)槔鐟言?、甲狀腺毒癥、溶血性貧血、出血、惡性腫瘤、肝病和腎病等原因，需要高于正常維生素B12水平的個(gè)體。如上文指出，本發(fā)明4是供了適合鼻內(nèi)施用的穩(wěn)定的氰鈷胺藥物溶液，其具有小于約1000cPs的粘度，其中所述的氰鈷胺鼻內(nèi)溶液在鼻內(nèi)施用時(shí)具有肌肉內(nèi)注射的氰鈷胺的生物利用度的至少5%、6%或7%的生物利用度。除了水和氰鈷胺外，該鼻內(nèi)制劑通?？砂彌_劑以將pH維持在4和6之間并優(yōu)選維持在大約5、任選的潤濕劑以抑制祐膜千燥以及任選的防腐劑。在某些示范性實(shí)施方式中，本發(fā)明的組合物包含氰鈷胺、檸檬酸、檸檬酸鈉和水，其中粘度小于1000cPs,且其中氰鈷胺溶液具有肌肉內(nèi)注射的氰鈷胺的生物利用度的至少約5%、6%或7%，在某些實(shí)施方式中為至少約8%、9%、10%、11%、或12%或更高的生物利用度。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的組合物將包含潤濕劑以抑制粘膜的干燥和防止刺激。各種潤濕劑均可使用，包括例如山梨糖醇、丙二醇或丙三醇。示例性濕潤劑是丙三醇。通?？刹捎梅栏瘎┮蕴岣呓M合物的保質(zhì)期。防腐劑的例子包括苯甲醇、對(duì)幾苯甲酸酯疏汞撒、氯丁醇、氯化千乙氧銨和苯扎氯銨。可用于本發(fā)明的制劑和方法的示范性防腐劑為苯扎氯銨。適用的防腐劑濃度為總重的0.002%至2%，盡管可根據(jù)所選的試劑進(jìn)行合適的變化。在某些示范性實(shí)施方式中，本發(fā)明所述的制劑中各物質(zhì)濃度為(總重量的百分比)氰鈷胺0.5%、檸檬酸0.12%、檸檬酸鈉0.32%、丙三醇2.23%、苯扎氯銨0.02%和水96.79%。其它可用于本發(fā)明的緩沖劑組合物包括但不限于磷酸二氫鉀和磷酸氫二鈉、苯二甲酸氫《甲和氫氧化鈉；以及醋酸鈉和醋酸。本發(fā)明的另一實(shí)施方式為施用氰鈷胺的方法，其包括向鼻部輸注氰鈷胺水性溶液，其中該氰鈷胺溶液具有小于1000cPs的粘度，且其中所述氰鈷胺溶液相對(duì)肌肉內(nèi)注射的氰鈷胺具有至少約5%、6%或7%的生物利用度。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的氰鈷胺溶液的生物利用度相對(duì)肌肉內(nèi)注射的氰鈷胺的生物利用度至少約為8%、9%、10%、11%直至12%或更高。本發(fā)明進(jìn)一步涉及提高腦脊液(CSF)中維生素B12水平的方法，其包括鼻內(nèi)施用氰鈷胺溶液，從而將CSF中維生素B12相對(duì)于血清中維生素B12的平均比例(B12CSF/B12血清xlOO)提高至約1.1,其中所述的氰鈷胺溶液具有相對(duì)于肌肉內(nèi)注射的氰鈷胺至少7%的生物利用度。在某些實(shí)施方式中，可提高B12CSF水平，使得B12在CSF中的水平與在血清中的水平的比例至少為1:9。28這是本發(fā)明的重要實(shí)施方式，因?yàn)榫S生素B12缺乏可導(dǎo)致對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的不可逆損傷。有髓神經(jīng)元漸進(jìn)性腫脹、脫髓鞘和神經(jīng)元細(xì)胞死亡可見于脊柱和大腦皮層。這引起了多種神經(jīng)學(xué)癥兆和癥狀，包括手腳感覺異常、震動(dòng)和位置感覺減弱伴隨導(dǎo)致的不穩(wěn)定性、減少的深部腱反射以及在晚期的混亂、情緒無常、記憶喪失甚至中央視覺的喪失?；颊呖赡茱@示出錯(cuò)覺、幻覺或者甚至明顯的精神病。由于神經(jīng)損傷可能與造血的變化無關(guān)，必須考慮患有癡呆和神經(jīng)疾病的中老年患者缺乏維生素B12的可能性，即使他們并不貧血。因此，涉及提高CSF中的維生素B12水平的本發(fā)明的實(shí)施方式可對(duì)神經(jīng)病患者形成巨大的益處。因此，如本發(fā)明所述的維生素B12的鼻內(nèi)施用可用于治療例如阿爾茨海默病、癡呆和多發(fā)性石更化癥等疾病。本發(fā)明的示范性制劑包括如下成分氰鈷胺鼻部噴霧500mcg/0.1mL配方:<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>本發(fā)明的鼻內(nèi)制劑可通過使用任何噴霧瓶或注射器進(jìn)行施用。優(yōu)選的鼻部噴霧瓶為帶有安全夾的鼻部噴霧泵(NasalSprayPumpw/SafetyClip),PfeifferSAP#60548，其每次噴射遞送0.1mL的劑量，且汲取管(diptube)長度為36.05mm。該產(chǎn)品可從美國的Pfeiffer，Princeton,NJ購得。以示例而非限定的方式纟是供以下實(shí)施例。實(shí)施例1本發(fā)明的鼻內(nèi)氰鈷胺溶液與NASCOBAL和肌肉內(nèi)注射的氰鈷胺比較介紹Nascobaf(氰鈷胺，USP)是具有同等維生素B12活性的維生素B12的合成形式。其化學(xué)名稱為5,6-二甲基-苯并咪唑基氰鈷酰胺。目前，Nascobaf(氰鈷胺，USP)作為自助施用的鼻部凝膠進(jìn)行銷售。對(duì)在可注射維生素Bu治療后得到緩解的患有維生素B,2吸收不良的個(gè)體施用Nascobaf(氰鈷胺，USP)的推薦劑量為每周一次鼻內(nèi)施用500卞g。維生素B12缺乏具有多種成因，包括由于胃腸系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)或功能損傷引起的維生素B12的吸收不良和維生素B12的膳食缺乏。本研究的目的在于比較維生素B12鼻部凝膠相對(duì)于鼻部噴霧的生物等同性，并評(píng)估三種維生素B12的制劑在禁食狀態(tài)的正常健康男性和女性個(gè)體中的相對(duì)生物利用度。鼻內(nèi)氰鈷胺凝膠獲準(zhǔn)500|ig的劑量。本研究也使用相同的500(ig劑量的氰鈷胺鼻部噴霧和100嗎的肌肉內(nèi)劑量。研究目標(biāo)為了比較單獨(dú)鼻內(nèi)施用噴霧、單獨(dú)鼻內(nèi)施用凝膠(Nascobaf)和單獨(dú)肌肉內(nèi)施用維生素Bu在禁食狀態(tài)的正常健康男性和女性個(gè)體中的藥代動(dòng)力學(xué)特征。研究計(jì)劃整體研究設(shè)計(jì)和計(jì)劃本研究是維生素B12通過鼻內(nèi)(IN)噴霧(500卞g)、IN凝膠(Nascoba。(50(Hig)和肌肉內(nèi)(IM)注射(100-iig)在禁食狀態(tài)的正常健康男性和女性個(gè)體中的單點(diǎn)、開放的、3途徑(3治療，6序列)交叉的藥代動(dòng)力學(xué)研究，具體如下治療A:維生素B12的一次IN噴霧施用。該鼻內(nèi)制劑包含本發(fā)明的示范性實(shí)施方式并包含濃度為0.5%(總重量的百分比)的氰鈷胺、0.12%的檸檬酸、0.32%的種檬酸鈉、2.23%的丙三醇、0.04%的50%苯扎氯銨溶液以及96.79%的水。治療B:500卞g維生素B12的一次IN凝膠施用(Nascoba1⑧)。治療C:100-嗎維生素B,2的一次IM施用。在每次限制期中，個(gè)體均采用無維生素B,2的飲食。后續(xù)治療的給藥將不早于前一治療劑量施用后14天。治療施用的治療在i、n和m期中8小時(shí)禁食后的第一日，根據(jù)由ppd開發(fā)生物統(tǒng)計(jì)師生成的對(duì)六個(gè)序列之一的隨機(jī)選擇，個(gè)體接受500-嗎維生素B12的單次IN噴霧(治療A)或500-嗎維生素Bu的單次IN凝膠(Nascobar勺(治療B)或100卞g31維生素B,2的單次IM給藥(治療C)。在所有的周期后，所用的個(gè)體將以交叉方式接受每一種治療。三個(gè)給藥周期以14天的清除期進(jìn)行分隔。在第一天的早晨，分配給治療A的個(gè)體接受500卞g維生素B，2的單次IN噴霧給藥。分配給治療B的個(gè)體接受500-嗎維生素B12的單次IN凝膠(Nascobaf)給藥。分配給治療C的個(gè)體接受100卞g維生素B12的單次IM給藥。給藥在隔夜(即，至少8小時(shí))禁食(不包括水)后進(jìn)行，并在給藥后禁食(不包括水)至少4小時(shí)。當(dāng)限制在臨床中心時(shí)，個(gè)體在不與其它研究相關(guān)的活動(dòng)沖突的設(shè)定時(shí)間接受標(biāo)準(zhǔn)化的維生素B,2缺乏飲食。注冊(cè)營養(yǎng)師制定食譜，且負(fù)責(zé)食物的職員記錄飲食日志。該研究中不允許采用膳食補(bǔ)充劑。個(gè)體在進(jìn)組前72小時(shí)禁食含酒精、含葡萄柚或含咖啡因食物或飲料。研究變量對(duì)每個(gè)個(gè)體，在任何可能的時(shí)候根據(jù)模型獨(dú)立法(modelindependentapproach),根據(jù)治療A、B和C中的維生素B,2血清濃度計(jì)算如下藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)Cmax、T躍和AUQ。-t。藥代動(dòng)力學(xué)檢測(cè)通過留置插管和/或使用5-mL黃頂VacutainerHemogardTM排空血清分離器收集管通過直接的靜脈穿刺采集用于維生素B12水平PK分析的血液樣本。在第-1天的0、6和12小時(shí)以及第1天的0小時(shí)(即，給藥前)，每個(gè)周期給藥后30分鐘、1、1.5、2、4、6、8、10、12、18、24、36、48、60、72、84和96小時(shí)采集用于維生素B12水平PK分析的血液樣本。測(cè)量的適當(dāng)性本研究中所用的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)為通常用于評(píng)估生物等同性的參數(shù)。所有對(duì)生物等同性的評(píng)估基于AUCo-t、Tmax和Cmax的比較(測(cè)試相對(duì)于參考治療)。AUC是藥物生物利用度的程度的測(cè)量值，它反映了到達(dá)系統(tǒng)循環(huán)的藥物總量。cmax代表了藥物施用后得到的最大血清濃度，它^^共了關(guān)于足量藥物已進(jìn)入該全身循環(huán)從而提供治療應(yīng)答的指示。此外，Cmax提供了可能的毒性藥物水平的警示。Tmax經(jīng)計(jì)算并表示為中位值士范圍。藥代動(dòng)力學(xué)變量對(duì)于每個(gè)個(gè)體，在任何可能的時(shí)候根據(jù)模型獨(dú)立法(參考1)，根據(jù)治療A、B和C中的維生素B,2血清濃度計(jì)算如下藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)Cmax最大觀察濃度。Uax到達(dá)最大濃度的時(shí)間。AUQ)-t根據(jù)線性梯形法計(jì)算的，在濃度時(shí)間曲線下自時(shí)間0至最大可測(cè)濃度的時(shí)間之間的面積。藥代動(dòng)力學(xué)計(jì)算通過SAS(SASInst，8.02版)進(jìn)行。方案中計(jì)劃的統(tǒng)計(jì)方法以及樣本大小的確定統(tǒng)計(jì)和分析計(jì)劃/藥代動(dòng)力學(xué)分析血清樣本中的維生素B,2水平測(cè)量為pg/mL。在檢測(cè)的可量化極限以下的血清濃度值記為零。在藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)的所有計(jì)算中均使用實(shí)際取樣時(shí)間，而非計(jì)劃取樣時(shí)間。然而，為了便于表述，在表格、清單和圖中均使用計(jì)劃取樣時(shí)間來表示結(jié)果。參照8.4.3節(jié)所述，由濃度數(shù)據(jù)計(jì)算非房室(non-compartmental)藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)(AUCo-t、C腿、Tmax,o統(tǒng)計(jì)學(xué)分析除非另行指明，所有的統(tǒng)計(jì)學(xué)測(cè)試均在0.05顯著性水平進(jìn)行。連續(xù)參數(shù)的綜合統(tǒng)計(jì)由數(shù)值(N)、平均、中值、SD和范圍組成。獲取描述統(tǒng)計(jì)并根據(jù)治療對(duì)各時(shí)間點(diǎn)的維生素Bl2水平以及計(jì)算的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)進(jìn)行制表。對(duì)測(cè)試(治療A-鼻部噴霧)相對(duì)于參考(治療B-凝膠)的生物等同性進(jìn)行評(píng)估。進(jìn)行方差分析(ANOVA,參考2)并生成測(cè)試/參考比例的90%置信區(qū)間。C腿和AUQ).t在分析前進(jìn)行自然對(duì)數(shù)(loge)轉(zhuǎn)化。幾何平均比例的相應(yīng)90%置信區(qū)間可通過對(duì)對(duì)數(shù)尺度下的平均值之間的差異的90%置信區(qū)間取反對(duì)數(shù)獲得。當(dāng)由k)ge-轉(zhuǎn)化的C醒和AUC(M得到的90%置信區(qū)間的下限大于或等于80%時(shí)，則認(rèn)為測(cè)試(治療A)不劣于參考(治療B)。如果由loge-轉(zhuǎn)化的C匪和AUCo-t得到的90%置信區(qū)間的下限小于80%時(shí)，則認(rèn)為非劣性不成立。順序效應(yīng)可以用序列中個(gè)體的均方誤差(MSE)作為誤差項(xiàng)進(jìn)行測(cè)試。所有其它的主效應(yīng)可針對(duì)來自ANOVA模型的MSE進(jìn)行測(cè)試。評(píng)估測(cè)試組(治療A和B-分別為鼻部噴霧和凝膠)和參考組(治療C-IM)的生物利用度。相對(duì)生物利用度可通過檢查測(cè)試(治療A和B)組平均值相對(duì)于參考(治療C)組平均值的比例的90%置信區(qū)間進(jìn)行評(píng)估。對(duì)于Tmax，通過使用Wilcoxon配對(duì)法進(jìn)行分析以確定在測(cè)試組和各參考組之間是否存在差異?？偨Y(jié)-結(jié)論藥代動(dòng)力學(xué)結(jié)果兩種IN劑型之間的相對(duì)生物利用度為0.9715。當(dāng)將治療A(噴霧)與治療C(IM)比較時(shí)，生物利用度為0.6105，當(dāng)將治療B(凝膠)與治療C(IM)比較時(shí)，生物利用度為0.6284。噴霧制劑和凝膠制劑的藥代動(dòng)力學(xué)特征對(duì)于C,x(分別為1480pg/mL、1670pg/mL)和AUC(M(分別為92000pgxhr/mL、97000pgxhr/mL)是相似的。此外，噴霧和凝膠IN制劑之間Tmax的中值差異小于15分鐘(-0,24)。IM劑型的C隨明顯高于兩種IN制劑的C麗值(p〈0.0001)?；贑max和AUCG.t確定維生素B12IN噴霧相對(duì)于凝膠數(shù)據(jù)的生物等效性。對(duì)于噴霧和凝膠制劑，loge轉(zhuǎn)化的C薩和AUC。—t的90%置信區(qū)間落入80%至125%的范圍內(nèi)。此外，由于AUC(M和C,的置信區(qū)間的下限均大于80%,，當(dāng)比較兩種IN制劑時(shí)，可以認(rèn)為具有非劣性。結(jié)論兩種IN制劑之間的相對(duì)生物利用度為0.9715。治療A(噴霧)相對(duì)于治療C(IM)的生物利用度為0.6105，治療B(凝膠)相對(duì)于治療C(IM)的生物利用度為0.6284。噴霧制劑和凝膠制劑的藥代動(dòng)力學(xué)特征對(duì)于Cmax(分別為1480pg/mL、1670pg/mL)和AUCo.t(分別為92000pgxhr/mL,97000pgxhr/mL)是相似的。此外，噴霧和凝膠IN制劑之間Tmax的中值差異小于15分鐘(-0.24)。IM制劑的C隱明顯高于兩種IN制劑的C麵值(p〈0細(xì)l)。維生素B,2噴霧制劑和維生素B!2凝膠制劑之間的生物等同性可通過10ge-轉(zhuǎn)化的AUCo-t和Cmax的90%置信區(qū)間確立。對(duì)于噴霧和凝膠制劑，loge-轉(zhuǎn)化的Cmax和AUC0.t的90%置信區(qū)間落入0.80至1.25的范圍內(nèi)?？烧J(rèn)為兩種IN制劑(治療A相對(duì)于治療B)具有非劣性。所有的維生素B12制劑均是安全的，并被健康男性和女性志愿者很好地耐受。如上文指出，在本發(fā)明的某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的鼻內(nèi)氰鈷胺制劑的最低相對(duì)或比較生物利用度(例如，在并列測(cè)試中，對(duì)個(gè)體施用相當(dāng)劑量的肌肉內(nèi)氰鈷胺或鼻內(nèi)氰鈷胺，測(cè)試其血漿或CSF氰鈷胺濃度，與施用了假制劑或安慰劑的合適對(duì)照個(gè)體比較)將是肌肉內(nèi)注射實(shí)現(xiàn)的生物利用度的至少5%、6%或7%，在某些情況下至少8%、9%、10%、11%、或12%或更高。本披露提供了詳細(xì)的比較生物利用度研究和結(jié)果以證明本發(fā)明的方法和組合物的意想不到的性能特征。如上所述，兩種示范性鼻內(nèi)(IN)制劑的相對(duì)生物利用度為0.9715。當(dāng)比較治療A(噴霧)和治療C(肌肉內(nèi)二IM)時(shí)，相對(duì)生物利用度為0.6105，當(dāng)比較治療B(凝膠)和治療C(IM)時(shí)，相對(duì)生物利用度為0.6284。被比較的氰鈷胺噴霧制劑和凝膠制劑的藥代動(dòng)力學(xué)特征對(duì)于C^x(分別為1480pg/mL、1670pg/mL)和AUCo—t(分別為9200pgxhr/mL、9700pgxhr/mL)是相似的。此外，噴霧和凝膠IN制劑之間的T麗中值差異小于15分鐘(-0.24)。IM制劑的Cmax值顯著高于兩種IN制劑的C醒值(p〈0.0001)。盡管這些數(shù)據(jù)未直接表示為IN相對(duì)于IM的氰鈷胺生物利用度的比較AUC值的形式，但相對(duì)AUC值可由上述數(shù)據(jù)容易地、準(zhǔn)確地得出。特別地，上述比較生物利用度研究結(jié)果證實(shí)了示范性噴霧氰鈷胺制劑相對(duì)于IM氰鈷胺生物利用度以及示范性凝膠制劑相對(duì)于IM生物利用度的"相對(duì)生物利用度"比例分別為0.6105和0.6284。這些值代表了基于名義劑量的AUC幾何平均值36的自然對(duì)數(shù)的比例?；诒莾?nèi)給藥500嗎和IM給藥100昭的劑量將這些數(shù)據(jù)根據(jù)常規(guī)操作劑量歸一化至適當(dāng)?shù)膭┝勘稊?shù)。技術(shù)人員將能容易地理解這些數(shù)據(jù)并完全了解該劑量歸一化數(shù)據(jù)可產(chǎn)生本發(fā)明的IN氰鈷胺溶液和IM-施用之間的生物利用度比例，該比例合理地對(duì)應(yīng)于所披露的至少5%、6%或7%的相對(duì)最小的相對(duì)生物利用度?？赏ㄟ^標(biāo)準(zhǔn)的數(shù)學(xué)運(yùn)算進(jìn)行該測(cè)定以得到IN噴霧和IM注射的劑量歸一化相對(duì)AUC值。在以上提供的實(shí)施例中，該標(biāo)準(zhǔn)運(yùn)算/結(jié)果為0.6105x100jig/500[xgxlOO=12%;或者該IN噴霧和IM注射之間的AUC比例為0.12。此外，上述提供的示范性IN氰鈷胺噴霧和凝膠的實(shí)際計(jì)算AUC分別為92000和97000pgxhr/mL。根據(jù)本披露，該數(shù)據(jù)同樣證明了IM注射的研究對(duì)比(studycomparator)的相應(yīng)AUC。例如，針對(duì)IM的AUC的算術(shù)平均值計(jì)算為147155pgxhr/mL(可從上述給出的比例通過算術(shù)逆運(yùn)算簡單地得到-例如對(duì)于噴霧的比例92000/147155=0.62)。當(dāng)劑量歸一化時(shí)，這些數(shù)據(jù)直接對(duì)應(yīng)此處所述的與IM氰鈷胺生物利用度相比的IN氰鈷胺制劑至少7%，在其它實(shí)施方式中至少9%、10%、11%、或12%或更高的范圍內(nèi)的示范性相對(duì)生物利用度。實(shí)施例2本申請(qǐng)還提供了非盲、單劑量、平行組研究以比較在健康男性和未懷孕女性志愿者中鼻內(nèi)和肌肉內(nèi)施用后在腦脊液(CSF)中對(duì)維生素B12的攝取的結(jié)果。該研究比較了由兩種制劑產(chǎn)生的CSF水平與血漿水平。三十六位年齡18歲及以上的健康男性和非孕期女性個(gè)體加入本研究。十八位個(gè)體接受以0.1mL噴霧遞送的500meg的單次鼻內(nèi)劑量，十八位個(gè)體接受肌肉內(nèi)遞送的100meg的單次肌肉內(nèi)劑量。每位個(gè)體在一個(gè)月的期間內(nèi)訪問臨床中心三次。這些訪問由一次篩選訪問、一次^會(huì)藥訪問和一次最終訪問組成。每次給藥后，每個(gè)個(gè)體僅進(jìn)行一次腰推穿刺，取出總計(jì)4.0mL的CSF(4管，1.0mL/管)。三分之一的個(gè)體在給藥后60分鐘采集CSF樣本，三分之一的個(gè)體在給藥后90分鐘采集CSF樣本，三分之一的個(gè)體在給藥后120分鐘采集CSF樣本。除上述以外，在給藥當(dāng)天，于給藥前和給藥后5、10、15和20分鐘以及給藥后(排出前)0.5、1、1.5、2、3、4、6和8小時(shí)采集7mL血液樣本。評(píng)估腦脊液的總維生素B12含量。此處所述的研究目的在于測(cè)量肌肉內(nèi)(IM)和鼻部施用后血液和CSF中維生素B12的量。參考和測(cè)試產(chǎn)品參考產(chǎn)品:氰鈷胺100mcg肌肉內(nèi)注射劑。氰鈷胺注射劑，USP是用于肌肉內(nèi)或皮下注射的無菌氰鈷胺(維生素B,2)溶液。每mL注射劑含有1,000mcg氰鈷胺。測(cè)試產(chǎn)品:維生素B,2鼻部噴霧二500mcg/0.1mL噴霧。本研究中的氰鈷胺鼻內(nèi)水溶液含有濃度為0.5%(重量百分比)的氰鈷胺、0.12%的檸檬酸、0.32%的檸檬酸鈉、2.23%的丙三醇、0.04%的50%苯扎氯銨溶液以及96.79%的水。維生素B12鼻部噴霧在2.3mL瓶中供應(yīng)，以遞送一個(gè)劑量500mcg/0.1mL每劑量。在鼻內(nèi)給藥前，向所有的個(gè)體提供正確給藥技術(shù)以及本研究一般性行為的指導(dǎo)。指導(dǎo)個(gè)體輕柔地由他/她的鼻子吹氣。個(gè)體保持坐姿，并在研究人員的指導(dǎo)下將裝填的IN涂藥器插入該個(gè)體的鼻孔。在給藥時(shí)，以食指閉合另一側(cè)的38鼻孔。指導(dǎo)個(gè)體略微向后傾斜頭部以進(jìn)行給藥，并在給藥后立即將他們的頭部恢復(fù)豎直位置同時(shí)輕柔吸氣。根據(jù)該方案，將O.lmL劑量的維生素B,2噴霧釋放進(jìn)入每個(gè)個(gè)體的鼻腔(一個(gè)劑量為針對(duì)一個(gè)鼻孔的單次使用)。指導(dǎo)個(gè)體在IN治療后一個(gè)小時(shí)中不用鼻子吹氣。給藥后，對(duì)每個(gè)個(gè)體進(jìn)行腰推穿刺，取出4.0mL的CSF(4管，1.0mL/管)。每組中三分之一的個(gè)體在給藥后60分鐘采集CSF樣本，三分之一的個(gè)體在給藥后90分鐘采集CSF樣本，三分之一的個(gè)體在給藥后120分鐘采集CSF樣本。在給藥后適當(dāng)?shù)臅r(shí)間，研究人員將患者置于適當(dāng)位置以進(jìn)行腰推穿刺。以通常的無菌方式準(zhǔn)備并懸掛(drape)腰推區(qū)域(lumbararea)。進(jìn)行局部麻醉(l。/。利多卡因(xylocaine),l-5mL)。一旦達(dá)到足夠的麻醉狀態(tài)，將脊髓穿刺針(20或22G)導(dǎo)入脊推管至研究人員認(rèn)為合適的水平。在施用后60、90或120分鐘采集CSF樣本。從每位患者采集總計(jì)4.0mL的CSF,并分配進(jìn)入4個(gè)單獨(dú)的采集管。在管上適當(dāng)標(biāo)記患者身份，并進(jìn)行生物分析。在CSF采集完成后取走脊髓穿刺針。同時(shí)測(cè)定CSF和血液血清中的維生素B12水平?？刹捎媒?jīng)驗(yàn)證的TOSOHNex.lA程序分析CSF中的維生素B12濃度以確定維生素B12。結(jié)果和結(jié)論數(shù)據(jù)顯示，接受鼻內(nèi)施用維生素B12的個(gè)體與接受維生素B12肌肉內(nèi)注射的個(gè)體相比，維生素B12相對(duì)于血清的比例更高。接受鼻內(nèi)施用維生素B12的個(gè)體的平均比例(B12CSF/B12血清xl00)在1.1至1.9的范圍內(nèi)，而接受維生素B12肌肉內(nèi)注射的個(gè)體的平均比例在0.17至0.24的范圍內(nèi)。該結(jié)果是令人驚奇的，因?yàn)楸莾?nèi)施用在血清中的生物利用度僅為維生素B12肌肉內(nèi)注射液的生物利用度的7-12o/。。這意味著維生素B12鼻內(nèi)施用可比肌肉內(nèi)注射更有效地到達(dá)CSF。實(shí)施例3氰鈷胺溶液的制備制備了4000g批次的本發(fā)明的氰鈷胺溶液，其具有500mcg/0.1g的溶液濃度。原料I.配方記錄<table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table>將3871.6克水放入置于加熱板上的不銹鋼容器中。將水加熱至約3(TC并攪拌。向加熱的水中加入12.8g的檸檬酸鈉，同時(shí)將水以300rpm繼續(xù)攪拌5分鐘。然后加入4.8g的檸檬酸并攪拌10分鐘。向該混合物添加20.0g的氰鈷胺，并以300rpm在30°C下攪拌30分鐘。然后關(guān)閉該加熱板。添加89.2g的丙三醇，并以300rpm攪拌5分鐘。然后向氰鈷胺溶液添加1.6g的含50%重量的苯扎氯銨的水性溶液，并以300rpm攪拌5分鐘。然后測(cè)定pH，如果該pH不在4.5-5.5的范圍內(nèi)，調(diào)整pH。添加額外的水將該溶液的重量調(diào)整至4000g。實(shí)施例4本實(shí)施例描述了本發(fā)明的示范性藥物組合物，其包含濃度足以生成治療有效血漿濃度的鮭魚氰鈷胺水性溶液，其通過制動(dòng)器遞送以生成所述溶液的氣溶膠，其中當(dāng)從離制動(dòng)器尖端3.0cm高度進(jìn)行測(cè)量時(shí)，所述氣溶膠噴霧形態(tài)的橢圓度比介于1.00和1.40。該氣溶膠的體積可介于約5微升和1.0ml之間，優(yōu)選介于20和200微升之間。本測(cè)試方法描述了采用SprayViewNSP系統(tǒng)表征氰鈷胺鼻部溶液制劑的噴霧流幾何學(xué)的過程。參照美國專利6,665,421以及2003年1月23日公布的美國專利申請(qǐng)20030018416中所述的方法，使用具有IntegratedSprayViewNSx驅(qū)動(dòng)站的SprayView高速光學(xué)噴霧表征系統(tǒng)(SprayViewNSP)(ImageThermEngineering,Inc.,Sudbury,MA)表征噴霧流幾何學(xué)。采用表l中的配方，對(duì)包含在3mL瓶中的制劑進(jìn)行噴霧表征和液滴大小檢測(cè)，該瓶均具有帶有安全夾的鼻部噴霧泵，PfeifferSAP#65550，其每次噴射可遞送0.1mL的劑量，并具有36.05mm的汲取管長度。液滴大小數(shù)據(jù)顯示于下表中。鼻部噴霧瓶和PfeifferSAP#60548的液滴大小。%<10D10D50D90跨距micromet1mL鮭魚氰鈷胺12.526.955.31.65.1以下列舉了噴霧形態(tài)結(jié)果:噴霧形態(tài)長軸短軸橢圓度比激活的3mL35.3mm30.8mm1.144權(quán)利要求1.氰鈷胺的穩(wěn)定藥物水性溶液，其包含氰鈷胺和水，其中所述的氰鈷胺溶液適于鼻內(nèi)施用，具有小于約1000cPs的粘度，且其中所述的氰鈷胺溶液在鼻內(nèi)施用時(shí)的氰鈷胺生物利用度相對(duì)于肌肉內(nèi)注射的氰鈷胺至少為約5％。2.如權(quán)利要求l所述的氰鈷胺的水性溶液，其中該溶液包含檸檬酸、檸檬酸鈉和水，并具有約為4-6的pH。3.如權(quán)利要求2所述的水性溶液，其中該溶液的pH約為5。4.如權(quán)利要求2所述的水性溶液，其進(jìn)一步包含濕潤劑。5.如權(quán)利要求4所述的水性溶液，其中該濕潤劑選自山梨糖醇、丙二醇和丙三醇。6.如權(quán)利要求5所述的水性溶液，其中該濕潤劑為丙三醇。7.如權(quán)利要求6所述的水性溶液，其中該丙三醇以約2.23%的濃度存在。8.如權(quán)利要求2所述的水性溶液，其中該溶液進(jìn)一步包含防腐劑。9.如權(quán)利要求8所述的水性溶液，其中該防腐劑選自苯甲醇、氯丁醇和苯扎氯銨。10.如權(quán)利要求9所述的水性溶液，其中該防腐劑為苯扎氯銨。11.如權(quán)利要求10所述的水性溶液存在于溶液中。12.如權(quán)利要求2所述的水性溶液，度存在，檸檬酸以約0.12%的濃度存在，13.如權(quán)利要求12所述的水性溶液，14.如權(quán)利要求12所述的水性溶液，15.如權(quán)利要求14所述的水性溶液醇和丙三醇。16.如權(quán)利要求15所述的水性溶液，17.如權(quán)利要求16所述的水性溶液于溶液中。18.如權(quán)利要求12所述的水性溶液，19.如權(quán)利要求18所述的水性溶液和苯扎氯銨。20.如權(quán)利要求19所述的水性溶液，其中該苯扎氯銨以約0.02%的濃度其中氰鈷胺以占總重量約0.5%的濃檸檬酸鈉以約0.32%的濃度存在。其中該溶液的pH。其進(jìn)一步包含濕潤劑。其中該濕潤劑選自山梨糖醇、丙二其中該濕潤劑為丙三醇。其中丙三醇以約2.23%的濃度存在其進(jìn)一步包含防腐劑。其中該防腐劑選自苯甲醇、氯丁醇其中該防腐劑為苯扎氯銨。21.如權(quán)利要求20所述的水性溶液，其中該苯扎氯銨以約0.02%的濃度存在于溶液中。22.如權(quán)利要求1所述的水性溶液，其中該氰鈷胺溶液相對(duì)于肌肉內(nèi)注射的氰鈷胺具有至少約7%的生物利用度。23.氰鈷胺的穩(wěn)定藥物水性溶液，其包含濃度約占溶液總重量0.5%的氰鈷胺、0.12%的檸檬酸、0.32%的檸檬酸鈉、2.23%的丙三醇、0.02%的苯扎氯銨、和水，其中所述氰鈷胺溶液適于鼻內(nèi)施用，具有小于約1000cPs的粘度，且其中所述氰鈷胺溶液在鼻內(nèi)施用時(shí)相對(duì)于肌肉內(nèi)注射的氰鈷胺具有至少約5%的氰鈷胺生物利用度。24.施用氰鈷胺的方法，其包括向鼻部輸注氰鈷胺水性溶液，其中該氰鈷胺溶液具有小于1000cPs的粘度，且其中所述氰鈷胺溶液相對(duì)于肌肉內(nèi)注射的氰鈷胺具有約5%的氰鈷胺生物利用度。25.如權(quán)利要求24所述的方法，其中該氰鈷胺溶液進(jìn)一步包含檸檬酸和檸檬酸鈉，其中該溶液具有約4-6的pH。26.如權(quán)利要求25所述的方法，其中該溶液的pH約為5。27.如權(quán)利要求25所述的方法，其中氰鈷胺以約0.5-1%之間的重量濃度存在于溶液中。28.如權(quán)利要求27所述的方法，其中氰鈷胺在溶液中的濃度約為0.5%。29.如權(quán)利要求28所述的方法，其中該檸檬酸以約0.12%的濃度存在于水溶液中，而該檸檬酸鈉以約0.32%的濃度存在于水溶液中。30.施用氰鈷胺的方法，其包括向鼻部輸注氰鈷胺水性溶液，其中所述氰鈷胺水性溶液包含濃度約占溶液總重0.5%的氰鈷胺、0.12%的檸檬酸、0.32%的檸檬酸鈉、2.23%的丙三醇、0.02%的苯扎氯銨、和水，其中所述氰鈷胺溶液適用于鼻內(nèi)施用，具有小于約1000cPs的粘度，且其中所述氰鈷胺溶液在鼻內(nèi)施用時(shí)相對(duì)于肌肉內(nèi)注射的氰鈷胺具有至少約5%的氰鈷胺生物利用度。31.提高腦脊液(CSF)中維生素B12水平的方法，其包括鼻內(nèi)施用足量的氰鈷胺溶液，從而將CSF中的維生素B12相對(duì)于血清中的維生素B12的平均比例(B12CSF/B12血清xlOO)提高至約1.1，其中所述氰鈷胺水性溶液包含濃度占溶液總重量約0.5%的氰鈷胺、0.12%的檸檬酸、0.32%的檸檬酸鈉、2.23%的丙三醇、0.02%的苯扎氯銨、和水，其中所述氰鈷胺溶液適于鼻內(nèi)施用，具有小于約1000cPs的粘度，且其中所述氰鈷胺溶液在鼻內(nèi)施用時(shí)相對(duì)于肌肉內(nèi)注射的氰鈷胺具有至少約5%的氰鈷胺生物利用度。32.用于鼻部給藥的藥物試劑盒，其包含容器中的氰鈷胺水性溶液和賦形劑；以及接附在所述容器上且與該容器中的所述氰鈷胺溶液流體連通的液滴生成制動(dòng)器；其中所述制動(dòng)器在工作時(shí)通過該制動(dòng)器尖端生成該氰鈷胺溶液的噴霧，其中從距該制動(dòng)器尖端3.0cm高度處進(jìn)行測(cè)量時(shí)，所述氰鈷胺溶液的噴霧具有橢圓度比為約1.0至約1.4的噴霧形態(tài)。33.如權(quán)利要求32所述的試劑盒，其中所述的噴霧包含液滴，其中5%以下的所述液滴的大小小于10|im。34.如權(quán)利要求32所述的試劑盒，其中所述的氰鈷胺水性溶液具有小于1000cPs的粘度，且其中所述的氰鈷胺溶液相對(duì)于肌肉內(nèi)注射的氰鈷胺具有約5%的氰鈷胺生物利用度。35.如權(quán)利要求34所述的試劑盒，其中該噴霧包含該氰鈷胺溶液的液滴，其中5%以下的液滴的大小小于10(am。36.如權(quán)利要求32所述的試劑盒，其中該噴霧具有長軸和短軸各自介于25和40mm的噴霧形態(tài)。37.如權(quán)利要求34所述的試劑盒，其中該氰鈷胺溶液進(jìn)一步包含檸檬酸和檸檬酸鈉，其中該溶液具有約4-6的pH。38.如權(quán)利要求37所述的試劑盒，其中該溶液的pH約為5。39.如權(quán)利要求34所述的試劑盒，其中氰鈷胺以0.5-1%之間的重量濃度存在于溶液中。40.如權(quán)利要求39所述的試劑盒，其中該氰鈷胺在溶液中的濃度約為0.5%重量。41.如權(quán)利要求37所述的試劑盒，其中該檸檬酸以約0.12%的濃度存在于水溶液中，且該檸檬酸鈉以約0.32%的濃度存在于水溶液中。42.如權(quán)利要求34所述的試劑盒，其中該氰鈷胺噴霧包含該氰鈷胺溶液的液滴，其中50%的液滴的大小為26.9pm或更小。43.如權(quán)利要求34所述的試劑盒，其中該氰鈷胺噴霧包含該氰鈷胺溶液的液滴，其中90%的液滴的大小為55.3|im或更小。44.如權(quán)利要求34所述的試劑盒，其中該氰鈷胺噴霧生成該溶液的液滴，且其中10%的液滴的大小為12.5iim或更小。45.用于鼻內(nèi)施用氰鈷胺溶液的試劑盒，其包含容器，該容器中的氰鈷胺溶液，以及接附在所述容器上的制動(dòng)器，其中當(dāng)所述制動(dòng)器工作時(shí)，氰鈷胺溶液的噴霧經(jīng)由所述制動(dòng)器的尖端排出，其中所述的氰鈷胺水性溶液包含濃度約為占溶液總重量0.5%的氰鈷胺、0.12%的檸檬酸、0.32%的檸檬酸鈉、2.23%的丙三醇、0.02%的苯扎氯銨、和水，其中所述氰鈷胺溶液適于鼻內(nèi)施用，具有小于約1000cPs的粘度，且其中所述氰鈷胺溶液在鼻內(nèi)施用時(shí)相對(duì)于氰鈷胺肌肉內(nèi)注射具有至少約5%的氰鈷胺生物利用度，且其中當(dāng)從距該制動(dòng)器尖端3.0cm高度處進(jìn)行測(cè)量時(shí)，該噴霧具有橢圓度比為約1.0至約1.4的噴霧形態(tài)。46.如權(quán)利要求45所述的試劑盒，其中該氰鈷胺噴霧包含氰鈷胺溶液的液滴，其中5%以下的該氰鈷胺噴霧液滴的大小小于10|im。47.如權(quán)利要求45所述的試劑盒，其中該氰鈷胺噴霧包含氰鈷胺溶液的液滴，且其中50%的該氰鈷胺噴霧液滴的大小為26.9pm或更小。48.如權(quán)利要求45所述的試劑盒，其中該氰鈷胺噴霧生成該溶液的液滴，且其中90%的該液滴的大小為55.3(im或更小。49.如權(quán)利要求45所述的試劑盒，其中該氰鈷胺噴霧生成該溶液的液滴，且其中10%的該液滴的大小為12.5,或更小。50.如權(quán)利要求45所述的試劑盒，其中該噴霧具有長軸約為35.3mm且短軸約為30.8mm的噴霧形態(tài)。51.鼻內(nèi)施用氰鈷胺的方法，其包括4是^"氰鈷胺的水性溶液，其中該氰鈷胺的溶液具有小于約1000cPs的粘度，且其中所述的氰鈷胺溶液相對(duì)于肌肉內(nèi)注射的氰鈷胺具有約5%的生物利用度，其中該氰鈷胺制劑通過制動(dòng)器尖端作為噴霧被施用至個(gè)體的鼻內(nèi)，其中當(dāng)從距該制動(dòng)器尖端3.0cm高度處進(jìn)行測(cè)量時(shí)，該噴霧具有橢圓度比為約1.0至約1.4的噴霧形態(tài)。52.如權(quán)利要求51所述的方法，其中該噴霧生成液滴，其中5%以下的該-液滴的大小小于10fxm。53.如權(quán)利要求51所述的方法，其中該噴霧具有長軸和短軸各自介于25和40mm的噴霧形態(tài)。54.如權(quán)利要求51所述的方法，其中該氰鈷胺溶液進(jìn)一步包含檸檬酸和檸檬酸鈉，其中該溶液具有約4-6的pH。55.如權(quán)利要求51所述的方法，其中該溶液的pH約為5。56.如權(quán)利要求51所述的方法，其中氰鈷胺以0.5-1%之間的重量濃度存在于溶液中。57.如權(quán)利要求56所述的方法，其中氰鈷胺在溶液中的濃度約為0.5%。58.如權(quán)利要求51所述的方法，其中該檸檬酸以約0.12%的濃度存在于水溶液中，而該檸檬酸鈉以約0.32%的濃度存在于水溶液中。59.如權(quán)利要求51所述的方法，其中該氰鈷胺噴霧生成該溶液的液滴，且其中50%的該液滴的大小為26.9(im或更小。60.如權(quán)利要求51所述的方法，其中該氰鈷胺噴霧生成該溶液的液滴，且其中90%的該液滴的大小為55.3|im或更小。61.如權(quán)利要求51所述的方法，其中該氰鈷胺噴霧生成該溶液的液滴，且其中10%的該液滴的大小為12.5pni或更小。62.施用氰鈷胺的方法，其包括^是供氰鈷胺的水性溶液，其中所述的氰鈷胺的水性溶液包含濃度約占溶液總重量0.5%的氰鈷胺、0.12%的檸檬酸、0.32%的檸檬酸鈉、2.23%的丙三醇、0.02%的苯扎氯銨、和水，其中所述氰鈷胺溶液適于鼻內(nèi)施用，具有小于約IOOOcPs的粘度，且其中所述氰鈷胺溶液在鼻內(nèi)施用時(shí)相對(duì)于肌肉內(nèi)注射的氰鈷胺具有至少約5%的氰鈷胺生物利用度，且其中該氰鈷胺制劑通過制動(dòng)器尖端作為噴霧被施用至個(gè)體的鼻內(nèi)，其中當(dāng)從距該制動(dòng)器尖端3.0cm高度處進(jìn)行測(cè)量時(shí)，該噴霧具有橢圓度比為約1.0至約1.4的噴霧形態(tài)。63.如權(quán)利要求62所述的方法，其中該氰鈷胺噴霧生成該溶液的液滴，其中5%以下的液滴的大小小于10|im。64.如權(quán)利要求62所述的方法，其中該氰鈷胺噴霧生成該溶液的液滴，且其中50%的液滴的大小為26.9pm或更小。65.如權(quán)利要求62所述的方法，其中該氰鈷胺噴霧生成該溶液的液滴，且其中90。/。的液滴的大小為55.3pm或更小。66.如權(quán)利要求62所述的方法，其中該氰鈷胺噴霧生成該溶液的液滴，且其中10%的液滴的大小為12.5|im或更小。67.如權(quán)利要求62所述的方法，其中該噴霧具有長軸和短軸各自介于約25-40mm的噴霧形態(tài)。68.提高腦脊液(CSF)中維生素B12水平的方法，其包括鼻內(nèi)施用足量的氰鈷胺溶液，從而將CSF中維生素B12相對(duì)于血清中維生素B12的平均比例(B12CSF/B12血清xlOO)提高至約1.1，其中所述氰鈷胺的水性溶液包含濃度約占溶液總重量0.5%的氰鈷胺、0.12%的檸檬酸、0.32%的檸檬酸鈉2.23%的丙三醇、0.02%的苯扎氯銨、和水，其中所述氰鈷胺溶液適于鼻內(nèi)施用，具有小于約1000cPs的粘度，且其中所述氰鈷胺溶液在鼻內(nèi)施用時(shí)相對(duì)于肌肉內(nèi)注射的氰鈷胺具有至少約5%的氰鈷胺生物利用度，且其中該氰鈷胺制劑通過制動(dòng)器尖端作為噴霧被施用至個(gè)體的鼻內(nèi)，其中當(dāng)從距該制動(dòng)器尖端3.0cm高度處進(jìn)行測(cè)量時(shí)，該噴霧具有橢圓度比為約1.0至約1.4的噴霧形態(tài)。69.如權(quán)利要求68所述的方法，其中該氰鈷胺噴霧生成該溶液的液滴，其中5%以下的液滴的大小小于10pm。70.如權(quán)利要求68所述的方法，其中該氰鈷胺噴霧生成該溶液的液滴，且其中50%的該液滴的大小為26.9pm或更小。71.如權(quán)利要求68所述的方法，其中該氰鈷胺噴霧生成該溶液的液滴，且其中90%的該液滴的大小為55.3nm或更小。72.如權(quán)利要求68所述的方法，其中該氰鈷胺噴霧生成該溶液的液滴，且其中10%的該液滴的大小為12.5nm或更小。73.如權(quán)利要求68所述的方法，其中該噴霧具有長軸和短軸各自介于25-40mm的噴霧形態(tài)。全文摘要氰鈷胺的穩(wěn)定藥物水溶液，其包含氰鈷胺和水，其中所述的氰鈷胺溶液適于鼻內(nèi)施用，具有小于約1000cPs的粘度，并在鼻內(nèi)施用時(shí)可產(chǎn)生相對(duì)于氰鈷胺的肌肉內(nèi)注射至少約5％的氰鈷胺生物利用度。本發(fā)明還涉及提高腦脊液(CSF)中維生素B12水平的方法，其包括鼻內(nèi)施用足量的氰鈷胺溶液，從而將CSF中維生素B12相對(duì)于血清中維生素B12的平均比例(B12CSF/B12血清×100)提高至約1.1，其包括鼻內(nèi)施用氰鈷胺的水性溶液，其中所述的氰鈷胺溶液具有相對(duì)于氰鈷胺肌肉內(nèi)注射至少為5％的生物利用度。文檔編號(hào)G01N33/567GK101600729SQ200680055658公開日2009年12月9日申請(qǐng)日期2006年6月23日優(yōu)先權(quán)日2006年6月23日發(fā)明者史蒂文·C·夸伊,塞奈達(dá)·O·古,安東尼·P·西來諾,彼得·C·艾普瑞爾申請(qǐng)人:帕爾醫(yī)療公司