專利名稱：卡巴拉汀對映異構(gòu)體的高效液相色譜法拆分方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種高效液相分析分離方法，尤其是一種卡巴拉汀的對映異構(gòu)體 的分析與分離測定方法。
技術(shù)背景卡巴拉汀是一種氨基甲酸類藥物，腦選擇性乙酰膽堿抑制劑，可改善阿爾茨 海默病患者膽堿介導的認知功能障礙，其結(jié)構(gòu)式為^H3 CH3化學名N-乙基-3-[(lS)-二甲氨基乙酰]-N-甲基氨基甲酸苯酯(2R，3R)-2，3-二羥基 丁酸鹽，該分子中含l個手性碳原子。作為治療人類疾病的藥品，其療效和安全 性與雜質(zhì)含量有直接的關(guān)系，有必要控制卡巴拉汀原料藥和制劑中卡巴拉汀對映 異構(gòu)體雜質(zhì)，因此有必要發(fā)現(xiàn)并一個檢測卡巴拉汀對映異構(gòu)體，控制卡巴拉汀及 含有卡巴拉汀的藥物制劑的質(zhì)量。申請人發(fā)現(xiàn)，以環(huán)糊精類手性柱，采用緩沖液(pH為3~7) —有機改性劑 組成的反相流動相系統(tǒng)，或以含有弱酸或弱堿的正已垸與異丙醇組成的正相流動 相系統(tǒng)，流速為0.8 mL/min，檢測波長為240 nm,采用該方法可以快速的拆分 卡巴拉汀對映異構(gòu)體、可用于卡巴拉汀的質(zhì)量控制。本發(fā)明的目的在于提供一種分析分離卡巴拉汀對映異構(gòu)體雜質(zhì)的高效液相 色譜方法，從而實現(xiàn)快速卡巴拉汀對映異構(gòu)體雜質(zhì)的分離測定。本發(fā)明所說的用高效液相色譜法分析分離卡巴拉汀對映異構(gòu)體雜質(zhì)的方法， 色譜條件為以環(huán)糊精類手性柱，以緩沖液(pH為3~7) —有機改性劑組成的反 相流動相系統(tǒng)或以含有弱酸或弱堿的正已烷與異丙醇組成的正相流動相系統(tǒng)，流 速為0.8 mL/min，檢測波長為240 nm。環(huán)糊精類手性色譜柱可為Cyclobond 12000 (250 mmx4.6 mm)手性柱。本發(fā)明所述的反相流動相系統(tǒng)中緩沖鹽選自庚烷磺酸鈉-磷酸氫二鈉、辛

發(fā)明內(nèi)容
垸磺酸鈉-磷酸氣二鈉、十二烷基硫酸鈉-磷酸氫二鈉、磷酸氫二鈉、醋酸鹽。
本發(fā)明的反相及正相流動相系統(tǒng)中有機改性劑選自乙腈、甲醇、乙醇、正 丙醇、異丙醇，優(yōu)選甲醇或異丙醇，最優(yōu)選異丙醇。
本發(fā)明的正相及反相流動相系統(tǒng)中有機改性劑所占混合流動相溶液的體積
百分比為20% 5%，優(yōu)選15% 5%，最優(yōu)選10%。
本發(fā)明所述的拆分方法中流動相緩沖液的pH值為3~7,優(yōu)選pH值為4-~6， 最優(yōu)選pH值為4。
本發(fā)明所述的分析分離方法，可按照以下方法實現(xiàn)
(1) 取消旋卡巴拉汀樣品適量，用甲醇溶解樣品，配制成每lmL含卡巴 拉汀0.05 0.2 mg的樣品溶液。
(2) 設(shè)置流動相流速為0.8 mL/min，檢測波長為240 nm，色譜柱柱溫箱 為30。C。
(3) 取(1)的樣品溶液2-50 ixL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。 采用本發(fā)明方法，能夠有效拆分卡巴拉汀對映異構(gòu)體，使兩者的分離度達到《中國藥典》有關(guān)要求，本發(fā)明的方法能簡便、快速、準確地分析分離卡巴拉汀 對映異構(gòu)體。


圖1:保留時間7.00min為卡巴拉汀，保留時間9.20min為其對映異構(gòu)體(雜 質(zhì))，兩者的分離度為3.667;
圖2:保留時間5.55 min為卡巴拉汀，保留時間7.150 miri為其對映異構(gòu)體 (雜質(zhì)),兩者的分離度為1.940;
圖3:保留時間9.55min為卡巴拉汀，保留時間14.100 min為其對映異構(gòu)體 (雜質(zhì))，兩者的分離度為2.354;
圖4:保留時間9.23 min為卡巴拉汀，保留時間5.875 min為其對映異構(gòu)體 (雜質(zhì))，兩者的分離度為5.166;
圖5:保留時間14.10 min為卡巴拉汀，保留時間9.450min為其對映異構(gòu)體 (雜質(zhì))，兩者的分離度為2.583;
圖6:保留時間16.76 min為卡巴拉汀，保留時間15.325 min為其對映異構(gòu) 體(雜質(zhì))，兩者的分離度為0.882;
圖7:保留時間為12.89min為卡巴拉汀消旋體。
具體實施例方式實施例l儀器與條件高效液相色譜儀島津，LC-10ATv/ ， SPD-M10Av/ ， SCL-10Avp, DGU-12A; 色譜柱Cyclobond 12000 (250 mmx4.6 mm);流動相水一乙腈=80 : 20 (v/v);流速0.8mL/min;檢測波長240nm;柱溫30°C;進樣體積10 U L。實驗步驟(1) 取卡巴拉汀外消旋體10mg，置100mL容量瓶中，加甲醇溶解稀釋置 刻度，搖勻，作為供試品溶液。(2) 分別取試劑空白溶液和供試品溶液，按上述條件進行髙效液相色譜分 析，記錄色譜圖。結(jié)果見附圖l,保留時間7.00min為卡巴拉汀，保留時間9.20 min為其對映 異構(gòu)體(雜質(zhì))，兩者的分離度為3.667;實施例2儀器與條件高效液相色譜儀島津，LC-10ATvp， SPD-M10Avp， SCL-10Av; ， DGU-12A; 色譜柱Cyelobond 12000 (250 mmx4.6 mm);流動相水一甲醇=80 : 20(v/v); 流速0.8mL/min;檢測波長240 nm;柱溫30°C;進樣體積10 y L。實驗步驟(1) 取卡巴拉汀外消旋體10mg，置100mL容量瓶中，加甲醇溶解稀釋置 刻度，搖勻，作為供試品溶液。(2) 分別取試劑空白溶液和供試品溶液，按上述條件進行高效液相色譜分 析，記錄色譜圖。結(jié)果見附圖2，保留時間5.550min為卡巴拉汀，保留時間7.150min為其對 映異構(gòu)體(雜質(zhì))，兩者的分離度為1.940; 實施例3儀器與條件高效液相色譜儀島津，LC-10ATv; ， SPD-M10Ayp， SCL-10Av/ ， DGU-12A;
色譜柱Cyclobond 12000 (250mmx4.6mm);流動相辛垸磺酸鈉卜磷酸氫二鈉 (pH4)—乙腈=80:20 (v/v);流速0.8mL/min;檢測波長240nm;柱溫 30'C;進樣體積10 UL。 實驗步驟
(1) 取卡巴拉汀外消旋體10mg，置100mL容量瓶中，加甲醇溶解稀釋置 刻度，搖勻，作為供試品溶液。
(2) 分別取試劑空白溶液和供試品溶液，按上述條件進行高效液相色譜分 析，記錄色譜圖。
結(jié)果見附圖3，保留時間9.550 min為卡巴拉汀，保留時間14.100 min為其 對映異構(gòu)體(雜質(zhì))，兩者的分離度為2.354;
實施例4
儀器與條件-
高效液相色譜儀島津，LC-10ATvp, SPD-M10Av/7, SCL-10Av/ , DGU-12A; 色譜柱Cyclobond12000 (250mmx4.6mm);流動相正已烷-異丙醇=90 : 10 (v/v);流速0.8mL/min;檢測波長240 ran;柱溫30'C;進樣體積10 U L。
實驗步驟
(1) 取卡巴拉汀外消旋體10mg，置100mL容量瓶中，加甲醇溶解稀釋置 刻度，搖勻，作為供試品溶液。
(2) 分別取試劑空白溶液和供試品溶液，按上述條件進行高效液相色譜分 析，記錄色譜圖。
結(jié)果見附圖4，保留時間9.233 min為卡巴拉汀，保留時間5.875 min為其對 映異構(gòu)體(雜質(zhì))，兩者的分離度為5.166; 實施例5
儀器與條件
高效液相色譜儀島津，LC-10ATv/ ， SPD-M10Av; , SCL-10Avp, DGU-12A; 色譜柱Cyelobond I 2000 (250 mmx4.6 mm);流動相正已垸-甲醇=80 : 20 (v/v);流速0.8mL/min;檢測波長240 nm;柱溫30°C;進樣體積10 n L。
實驗步驟(1) 取卡巴拉汀外消旋體10mg，置100mL容量瓶中，加甲醇溶解稀釋置 刻度，搖勻，作為供試品溶液。(2) 分別取試劑空白溶液和供試品溶液，按上述條件進行高效液相色譜分 析，記錄色譜圖。結(jié)果見附圖5，保留時間14.10 min為卡巴拉汀，保留時間9.450 min為其對 映異構(gòu)體(雜質(zhì))，兩者的分離度為2.583; 實施例6儀器與條件-高效液相色譜儀島津，LC-10ATv; ， SPD-M10Avp， SCL-10Avp, DGU-12A; 色譜柱Cyclobond I 2000 (250 mmx4.6 mm);流動相正已烷-乙腈=90 : 10 (v/v);流速0.8mL/min;檢測波長240 nm;柱溫30'C;進樣體積10 U L。實驗步驟(1) 取卡巴拉汀外消旋體10mg，置100mL容量瓶中，加甲醇溶解稀釋置 刻度，搖勻，作為供試品溶液。(2) 分別取試劑空白溶液和供試品溶液，按上述條件進行高效液相色譜分 析，記錄色譜圖。結(jié)果見附圖6，保留時間16.758 min為卡巴拉汀，保留時間15.325 min為其 對映異構(gòu)體(雜質(zhì))，兩者的分離度為0.882。 實施例7對比實施例儀器與條件高效液相色譜儀島津，LC-10ATv; ， SPD-M10Av/ ， SCL-10Avp, DGU-12A; 色譜柱AGP手性色譜柱(150mmx4.6mm);流動相正已烷-異丙醇=95 : 5 (v/v);流速0.8mL/min;檢測波長240 nm;柱溫3(TC;進樣體積10 u L。實驗步驟(1) 取卡巴拉汀外消旋體10mg，置100mL容量瓶中，加甲醇溶解稀釋置 刻度，搖勻，作為供試品溶液。(2) 分別取試劑空白溶液和供試品溶液，按上述條件進行高效液相色譜分析，記錄色譜圖。結(jié)果見附圖7，保留時間為12.5min，兩者未得到分離。
權(quán)利要求
1.一種高效液相色譜法拆分卡巴拉汀對映異構(gòu)體的方法，其特征在于以環(huán)糊精類手性柱為固定相，采用緩沖液與有機改性劑組成的反相流動相系統(tǒng)或含有弱酸或弱堿的正已烷與有機改性劑組成的正相流動相系統(tǒng)。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的拆分方法，所述環(huán)糊精類手性柱選自Cyclobond 12000。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的拆分方法，所述的反相流動相系統(tǒng)中緩沖鹽選自庚烷 磺酸鈉-磷酸氫二鈉、辛烷磺酸鈉-磷酸氫二鈉、十二垸基硫酸鈉-磷酸氫二鈉、 磷酸氫二鈉、醋酸鹽，優(yōu)選辛烷磺酸鈉-磷酸氫二鈉、磷酸氫二鈉或醋酸鹽甲 醇，最優(yōu)選辛烷磺酸鈉-磷酸氫二鈉。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的拆分方法，所述有機改性劑選自乙腈、甲醇、乙醇、 正丙醇、異丙醇，優(yōu)選甲醇或異丙醇，最優(yōu)選異丙醇。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的拆分方法，所述有機改性劑所占混合流動相溶液的體 積百分比為5% 20%，優(yōu)選5% 15%,最優(yōu)選10%。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的拆分方法，所述反相流動相系統(tǒng)組成部分之一的緩沖 液的pH值為3-7，優(yōu)選pH值為4一6，最優(yōu)選pH值為4。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的分析分離方法，其特征在于包括以下步驟(1) 取消旋卡巴拉汀樣品適量，用甲醇溶解樣品，配制成每lmL含卡巴 拉汀0.05 0.2 mg的樣品溶液。(2) 設(shè)置流動相流速為0.8 mL/min，檢測波長為240 nm，色譜柱柱溫箱 為30。C。(3)取(1)的樣品溶液2-50 uL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種高效液相色譜法拆分卡巴拉汀對映異構(gòu)體的方法，以環(huán)糊精類手性柱為固定相，采用反相或正相流動相系統(tǒng)，設(shè)置流速為0.8ml/min，檢測波長240nm，該方法可用作卡巴拉汀的質(zhì)量控制。
文檔編號G01N30/06GK101153865SQ20061011347
公開日2008年4月2日 申請日期2006年9月29日 優(yōu)先權(quán)日2006年9月29日
發(fā)明者寧美英 申請人:北京德眾萬全藥物技術(shù)開發(fā)有限公司