專利名稱：一種黃芪皂苷注射液指紋圖譜的質(zhì)量檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種注射液的質(zhì)量檢測(cè)方法，特別涉及黃芪皂苷注射液的指紋圖譜質(zhì)量檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
中藥指紋圖譜是指一種中藥材或中成藥所共有的，具有特征性的一類成分的色譜或光譜的圖譜。指紋圖譜技術(shù)是評(píng)價(jià)中藥質(zhì)量的關(guān)鍵手段，有利于中藥現(xiàn)代化。日本、美國、德國、法國等國先后已開始使用指紋圖譜對(duì)天然藥物進(jìn)行質(zhì)量控制，能有效的控制藥物的質(zhì)量，保證藥物的安全有效，目前已為國際所共識(shí)。今天，我國的一些制藥企業(yè)在國家的倡導(dǎo)下，已對(duì)一些中藥產(chǎn)品進(jìn)行了指紋圖譜研究，特別是對(duì)中藥注射劑的研究。然而，現(xiàn)在的研究并未涉及黃芪皂苷注射劑指紋圖譜，相關(guān)研究也較少。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供一種黃芪皂苷注射液的質(zhì)量檢測(cè)方法。
本發(fā)明目的是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。
本發(fā)明黃芪皂苷注射液指紋圖譜的質(zhì)量檢測(cè)方法，該方法包括如下步驟色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈—水的比例為0.1～0.5∶1作為流動(dòng)相，進(jìn)行梯度洗脫0至20分鐘，乙腈濃度為10～30％，繼后15分鐘，乙腈濃度從10～30％至30～40％，30～40％乙腈濃度維持至60分鐘；流速0.5～1.0ml/min；柱溫20～40℃；檢測(cè)器為蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，漂移管溫度95～125℃，氣體流速2.5～3.2SLPM；參照品溶液的制備，精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品適量，加甲醇溶解制成每1ml含0.5mg的溶液，作為參照品溶液；供試品溶液的制備，精密吸取黃芪皂苷注射液100ml，水浴濃縮至約25ml，定量轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取2～6次，每次10～50ml，合并正丁醇提取液，用正丁醇飽和的水洗滌1～4次，每次5～30ml，棄去水層，正丁醇提取液在水浴上蒸干，殘?jiān)儆眉状既芙獠⒍ㄈ葜?ml量瓶中，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為黃芪皂苷注射液指紋圖譜檢測(cè)供試液；供試液指紋圖譜檢測(cè)，用高效液相色譜對(duì)黃芪皂苷注射液指紋圖譜檢測(cè)供試液進(jìn)行檢測(cè)，進(jìn)樣量為5～50μl，記錄60分鐘的色譜圖，得黃芪皂苷注射液的指紋圖譜；供試品指紋圖譜應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相似度應(yīng)大于0.90；黃芪皂苷注射液指紋圖譜共有6個(gè)共有指紋峰，參照峰S為黃芪甲苷色譜峰，6個(gè)共有指紋峰的相對(duì)保留時(shí)間分別為1號(hào)峰0.800±0.080，2號(hào)峰0.850±0.085，3號(hào)峰0.873±0.087，4號(hào)峰0.908±0.091，S峰1.000±0.000，5號(hào)峰1.031±0.010。
本發(fā)明黃芪皂苷注射液的指紋圖譜質(zhì)量檢測(cè)方法，優(yōu)選如下檢測(cè)方法色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈—水的比例為0.22∶1作為流動(dòng)相，進(jìn)行梯度洗脫0至20分鐘，乙腈濃度為22％，繼后15分鐘，乙腈濃度從22％至33％，33％乙腈濃度維持至60分鐘；流速0.8ml/min；柱溫30℃；檢測(cè)器為蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，漂移管溫度110℃，氣體流速2.90SLPM；參照品溶液的制備，精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品適量，加甲醇溶解制成每1ml含0.5mg的溶液，作為參照品溶液；供試品溶液的制備，精密吸取黃芪皂苷注射液100ml，水浴濃縮至約25ml，定量轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取4次，每次30ml，合并正丁醇提取液，用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次15ml，棄去水層，正丁醇提取液在水浴上蒸干，殘?jiān)儆眉状既芙獠⒍ㄈ葜?ml量瓶中，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過，取繼濾液作為黃芪皂苷注射液指紋圖譜檢測(cè)供試液；供試液指紋圖譜檢測(cè)，用高效液相色譜對(duì)黃芪皂苷注射液指紋圖譜檢測(cè)供試液進(jìn)行檢測(cè)，進(jìn)樣量為20μl，記錄60分鐘的色譜圖，得黃芪皂苷注射液的指紋圖譜；供試品指紋圖譜應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相似度應(yīng)大于0.90；黃芪皂苷注射液指紋圖譜共有6個(gè)共有指紋峰，參照峰S為黃芪甲苷色譜峰，6個(gè)共有指紋峰的優(yōu)選相對(duì)保留時(shí)間分別為1號(hào)峰0.800，2號(hào)峰0.850，3號(hào)峰0.873，4號(hào)峰0.908，S峰1.000，5號(hào)峰1.031；1號(hào)峰0.730，2號(hào)峰0.934，3號(hào)峰0.787，4號(hào)峰0.998，S峰1.000，5號(hào)峰1.022或1號(hào)峰0.879，2號(hào)峰0.766，3號(hào)峰0.959，4號(hào)峰0.818，S峰1.000，5號(hào)峰1.040。
注射用黃芪皂苷指紋圖譜的質(zhì)量檢測(cè)方法，該方法包括如下步驟色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈—水的比例為0.1～0.5∶1作為流動(dòng)相，進(jìn)行梯度洗脫0至20分鐘，乙腈濃度為10～30％，繼后15分鐘，乙腈濃度從10～30％至30～40％，30～40％乙腈濃度維持至60分鐘；流速0.5～1.0ml/min；柱溫20～40℃；檢測(cè)器為蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，漂移管溫度95～125℃，氣體流速2.5～3.2SLPM；參照品溶液的制備，精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品適量，加甲醇溶解制成每1ml含0.5mg的溶液，作為參照品溶液；供試品溶液的制備，精密稱取注射用黃芪皂苷0.2g，加水25ml使溶解，定量轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取2～6次，每次10～50ml，合并正丁醇提取液，用正丁醇飽和的水洗滌1～4次，每次5～30ml，棄去水層，正丁醇提取液在水浴上蒸干，殘?jiān)儆眉状既芙獠⒍ㄈ葜?ml量瓶中，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為注射用黃芪皂苷指紋圖譜檢測(cè)供試液；供試液指紋圖譜檢測(cè)，用高效液相色譜對(duì)注射用黃芪皂苷指紋圖譜檢測(cè)供試液進(jìn)行檢測(cè)，進(jìn)樣量為5～50μl，記錄60分鐘的色譜圖，得注射用黃芪皂苷的指紋圖譜；注射用黃芪皂苷供試品指紋圖譜應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相似度應(yīng)大于0.90；注射用黃芪皂苷指紋圖譜共有6個(gè)共有指紋峰，參照峰S為黃芪甲苷色譜峰，6個(gè)共有指紋峰的相對(duì)保留時(shí)間分別為1號(hào)峰0.807±0.081，2號(hào)峰0.857±0.086，3號(hào)峰0.883±0.088，4號(hào)峰0.925±0.092，S峰1.000±0.000，5號(hào)峰1.023±0.010。
注射用黃芪皂苷指紋圖譜的質(zhì)量檢測(cè)方法，優(yōu)選如下檢測(cè)方法色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈—水的比例為0.2∶1作為流動(dòng)相，進(jìn)行梯度洗脫0至20分鐘，乙腈濃度為20％，繼后15分鐘，乙腈濃度從20％至35％，35％乙腈濃度維持至60分鐘；流速0.9ml/min；柱溫25℃；檢測(cè)器為蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，漂移管溫度105℃，氣體流速2.80SLPM；參照品溶液的制備，精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品適量，加甲醇溶解制成每1ml含0.5mg的溶液，作為參照品溶液；供試品溶液的制備，精密稱取注射用黃芪皂苷0.2g，加水25ml使溶解，定量轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取4次，每次30ml，合并正丁醇提取液，用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次15ml，棄去水層，正丁醇提取液在水浴上蒸干，殘?jiān)儆眉状既芙獠⒍ㄈ葜?ml量瓶中，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為注射用黃芪皂苷指紋圖譜檢測(cè)供試液；供試液指紋圖譜檢測(cè)，用高效液相色譜對(duì)注射用黃芪皂苷指紋圖譜檢測(cè)供試液進(jìn)行檢測(cè)，進(jìn)樣量為20μl，記錄60分鐘的色譜圖，得注射用黃芪皂苷的指紋圖譜；供試品指紋圖譜應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相似度應(yīng)大于0.90；注射用黃芪皂苷指紋圖譜共有6個(gè)共有指紋峰，參照峰S為黃芪甲苷色譜峰，6個(gè)共有指紋峰的優(yōu)選相對(duì)保留時(shí)間分別為1號(hào)峰0.807，2號(hào)峰0.857，3號(hào)峰0.883，4號(hào)峰0.925，S峰1.000，5號(hào)峰1.023；1號(hào)峰0.887，2號(hào)峰0.772，3號(hào)峰0.970，4號(hào)峰0.834，S峰1.000，5號(hào)峰1.033或1號(hào)峰0.727，2號(hào)峰0.942，3號(hào)峰0.796，4號(hào)峰1.026，S峰1.000，5號(hào)峰1.014。
本發(fā)明使用指紋圖譜技術(shù)有效的控制了黃芪皂苷注射液、注射用黃芪皂苷的質(zhì)量采用本發(fā)明指紋圖譜質(zhì)量檢測(cè)方法對(duì)黃芪皂苷注射液及其注射用黃芪皂苷進(jìn)行質(zhì)量控制后，共有峰相對(duì)保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于1％，一致性好；非共有峰總面積占總峰面積的比例均小于5％，而且本發(fā)明指紋圖譜測(cè)定方法操作起來具有簡便、重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)；本發(fā)明提供的指紋圖譜技術(shù)，可作為評(píng)價(jià)中藥質(zhì)量的關(guān)鍵手段，有利于中藥現(xiàn)代化。
下述實(shí)驗(yàn)例和實(shí)施例用于進(jìn)一步說明但不限于本發(fā)明。
實(shí)驗(yàn)例1 黃芪皂苷注射液指紋圖譜共有峰的確定1、指紋圖譜根據(jù)3批供試品HPLC圖譜所給出的相關(guān)參數(shù)，黃芪皂苷注射液按前述制備方法進(jìn)行測(cè)定所得的主要色譜峰均在60分鐘內(nèi)出現(xiàn)；2小時(shí)的供試品溶液色譜圖表明60分鐘以后未出現(xiàn)色譜峰。比較各批樣品的色譜峰發(fā)現(xiàn)其中6個(gè)峰是各批共有的，由此建立標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。
2、共有指紋峰的標(biāo)定根據(jù)3批供試品指紋圖譜有關(guān)數(shù)據(jù)的計(jì)算結(jié)果，各共有峰平均相對(duì)保留時(shí)間(峰號(hào))依次為0.800(1)、0.850(2)、0.873(3)、0.908(4)、1.000(S)、1.031(5)，以此作為共有指紋峰標(biāo)定的依據(jù)，允許相對(duì)偏差為±10％。
3、共有指紋峰相對(duì)保留時(shí)間3批供試品指紋圖譜中共有指紋峰相對(duì)保留時(shí)間表1。
表1黃芪皂苷注射液共有指紋峰相對(duì)保留時(shí)間(n＝3)

由以上結(jié)果可以看出，共有峰相對(duì)保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于1％，一致性非常好。
4、非共有峰面積除不經(jīng)柱保留的峰，計(jì)算了3批樣品的非共有峰總面積占總峰面積的比例，結(jié)果見表2。
表2黃芪皂苷注射液樣品的非共有峰總面積占總峰面積的百分比(n＝3)

各批注射液樣品非共有峰總面積占總峰面積的比例均小于5％，均符合《中藥注射劑指紋圖譜研究的技術(shù)要求(暫行)》的規(guī)定。
5、黃芪皂苷注射液指紋圖譜相似性評(píng)價(jià)取黃芪皂苷注射液三批，按上述方法進(jìn)行檢測(cè)，得出三批樣品的指紋圖譜，采用中國藥典委員會(huì)推薦的計(jì)算機(jī)輔助相似度評(píng)價(jià)軟件(中南大學(xué)中藥現(xiàn)代化研究中心編制)計(jì)算，相似度見表3。
表3

實(shí)驗(yàn)例2 注射用黃芪皂苷指紋圖譜共有峰的確1、指紋圖譜根據(jù)3批供試品HPLC圖譜所給出的相關(guān)參數(shù)，注射用黃芪皂苷按前述制備方法進(jìn)行測(cè)定所得的主要色譜峰均在60分鐘內(nèi)出現(xiàn)；2小時(shí)的供試品溶液色譜圖表明60分鐘以后未出現(xiàn)色譜峰。比較各批樣品的色譜峰發(fā)現(xiàn)其中6個(gè)峰是各批共有的，由此建立標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。
2、共有指紋峰的標(biāo)定根據(jù)3批供試品指紋圖譜有關(guān)數(shù)據(jù)的計(jì)算結(jié)果，各共有峰平均相對(duì)保留時(shí)間(峰號(hào))依次為0.807(1)、0.857(2)、0.883(3)、0.925(4)、1.000(S)、1.023(5)，以此作為共有指紋峰標(biāo)定的依據(jù)，允許相對(duì)偏差為±10％。
3、共有指紋峰相對(duì)保留時(shí)間3批供試品指紋圖譜中共有指紋峰相對(duì)保留時(shí)間表4。
表4 注射用黃芪皂苷共有指紋峰相對(duì)保留時(shí)間(n＝3)

由以上結(jié)果可以看出，共有峰相對(duì)保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于1％，一致性非常好。
4、非共有峰面積除不經(jīng)柱保留的峰，計(jì)算了3批樣品的非共有峰總面積占總峰面積的比例，結(jié)果見表5。
表5注射用黃芪皂苷樣品的非共有峰總面積占總峰面積的百分比(n＝3)

各批樣品非共有峰總面積占總峰面積的比例均小于5％，均符合《中藥注射劑指紋圖譜研究的技術(shù)要求(暫行)》的規(guī)定。
5、注射用黃芪皂苷指紋圖譜相似性評(píng)價(jià)取注射用黃芪皂苷三批，按上述方法進(jìn)行檢測(cè)，得出三批樣品的指紋圖譜，采用中國藥典委員會(huì)推薦的計(jì)算機(jī)輔助相似度評(píng)價(jià)軟件計(jì)算，相似度見表6。
表6

實(shí)驗(yàn)例3 黃芪皂苷注射液供試品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)取本發(fā)明黃芪皂苷注射液供試品溶液為測(cè)定對(duì)象，分別在0小時(shí)、2小時(shí)、6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)依照前述色譜條件測(cè)定(4℃保存)，記錄各共有色譜峰保留時(shí)間和峰面積。以參照物黃芪甲苷的保留時(shí)間為參照，計(jì)算出各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間，結(jié)果見表7～8。
表7 穩(wěn)定性試驗(yàn)相對(duì)保留時(shí)間

表8 穩(wěn)定性試驗(yàn)參照峰占總峰面積百分比

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示各共有峰相對(duì)保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于1％，十分穩(wěn)定；參照峰的峰面積百分比的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.25％，結(jié)果表明供試品溶液在24小時(shí)內(nèi)基本保持穩(wěn)定。
實(shí)驗(yàn)例4 黃芪皂苷注射液重現(xiàn)性試驗(yàn)取本發(fā)明黃芪皂苷注射液供試品6份，依照實(shí)驗(yàn)例3的方法制備測(cè)定，記錄各共有色譜峰保留時(shí)間和積分峰面積。以參照物黃芪甲苷的保留時(shí)間為參照，計(jì)算出各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間，統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表9～10。
表9 重現(xiàn)性試驗(yàn)相對(duì)保留時(shí)間(n＝6)

表10 重現(xiàn)性試驗(yàn)參照峰占總峰面積百分比

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示各共有峰相對(duì)保留時(shí)間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于1％；參照峰的峰面積百分比的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.28％，結(jié)果顯示方法的重現(xiàn)性良好。
實(shí)驗(yàn)例5 注射用黃芪皂苷供試品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)取本發(fā)明注射用黃芪皂苷供試品溶液為測(cè)定對(duì)象，分別在0小時(shí)、2小時(shí)、6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)依照前述色譜條件測(cè)定(4℃保存)，記錄各共有色譜峰保留時(shí)間和峰面積。以參照物黃芪甲苷的保留時(shí)間為參照，計(jì)算出各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間，結(jié)果見表11～12。
表11 穩(wěn)定性試驗(yàn)相對(duì)保留時(shí)間

表12 穩(wěn)定性試驗(yàn)參照峰占總峰面積百分比

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示各共有峰相對(duì)保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于1％，十分穩(wěn)定；參照峰的峰面積百分比的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.26％；結(jié)果表明供試品溶液在24小時(shí)內(nèi)基本保持穩(wěn)定。
實(shí)驗(yàn)例6 注射用黃芪皂苷重現(xiàn)性試驗(yàn)取本發(fā)明注射用黃芪皂苷供試品6份，依照實(shí)驗(yàn)例5的方法制備測(cè)定，記錄各共有色譜峰保留時(shí)間和積分峰面積。以參照物黃芪甲苷的保留時(shí)間為參照，計(jì)算出各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間，統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表13～14。
表1本發(fā)明鋼的拉力及硬度試驗(yàn)結(jié)果

表2本發(fā)明鋼在不同溫度下沖擊韌性試驗(yàn)結(jié)果

實(shí)施例2黃芪皂苷注射液質(zhì)量檢測(cè)方法采用指紋圖譜質(zhì)量檢測(cè)方法色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈—水(0.22∶1)為流動(dòng)相，進(jìn)行梯度洗脫0至20分鐘，乙腈濃度為22％，繼后15分鐘，乙腈濃度從22％至33％，33％乙腈濃度維持至60分鐘；流速0.6ml/min；柱溫35℃；檢測(cè)器為蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，漂移管溫度100℃，氣體流速3.00SLPM；參照品溶液的制備，精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品適量，加甲醇溶解制成每1ml含0.5mg的溶液，作為參照品溶液；供試品溶液的制備，精密吸取黃芪皂苷注射液100ml，水浴濃縮至約25ml，定量轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取5次，每次45ml，合并正丁醇提取液，用正丁醇飽和的水洗滌3次，每次25ml，棄去水層，正丁醇提取液在水浴上蒸干，殘?jiān)儆眉状既芙獠⒍ㄈ葜?ml量瓶中，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為黃芪皂苷注射液指紋圖譜檢測(cè)供試液；供試液指紋圖譜檢測(cè)，用高效液相色譜對(duì)黃芪皂苷注射液指紋圖譜檢測(cè)供試液進(jìn)行檢測(cè)，進(jìn)樣量為10μl，記錄60分鐘的色譜圖，得黃芪皂苷注射液的指紋圖譜；供試品指紋圖譜應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相似度應(yīng)大于0.90；黃芪皂苷注射液指紋圖譜共有6個(gè)共有指紋峰，參照峰S為黃芪甲苷色譜峰，6個(gè)共有指紋峰的相對(duì)保留時(shí)間分別為1號(hào)峰0.800，2號(hào)峰0.850，3號(hào)峰0.873，4號(hào)峰0.908，S峰1.000，5號(hào)峰1.031。
實(shí)施例3黃芪皂苷注射液質(zhì)量檢測(cè)方法采用指紋圖譜質(zhì)量檢測(cè)方法色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈—水(0.22∶1)為流動(dòng)相，進(jìn)行梯度洗脫0至20分鐘，乙腈濃度為22％，繼后15分鐘，乙腈濃度從22％至33％，33％乙腈濃度維持至60分鐘；流速0.8ml/min；柱溫30℃；檢測(cè)器為蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，漂移管溫度110℃，氣體流速2.90SLPM；參照品溶液的制備，精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品適量，加甲醇溶解制成每1ml含0.5mg的溶液，作為參照品溶液；供試品溶液的制備，精密吸取黃芪皂苷注射液100ml，水浴濃縮至約25ml，定量轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取4次，每次30ml，合并正丁醇提取液，用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次15ml，棄去水層，正丁醇提取液在水浴上蒸干，殘?jiān)儆眉状既芙獠⒍ㄈ葜?ml量瓶中，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過，取繼濾液作為黃芪皂苷注射液指紋圖譜檢測(cè)供試液；供試液指紋圖譜檢測(cè)，用高效液相色譜對(duì)黃芪皂苷注射液指紋圖譜檢測(cè)供試液進(jìn)行檢測(cè)，進(jìn)樣量為20μl，記錄60分鐘的色譜圖，得黃芪皂苷注射液的指紋圖譜；供試品指紋圖譜應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相似度應(yīng)大于0.90；黃芪皂苷注射液指紋圖譜共有6個(gè)共有指紋峰，參照峰S為黃芪甲苷色譜峰，6個(gè)共有指紋峰的相對(duì)保留時(shí)間分別為1號(hào)峰0.730，2號(hào)峰0.934，3號(hào)峰0.787，4號(hào)峰0.998，S峰1.000，5號(hào)峰1.022。
實(shí)施例4黃芪皂苷注射液質(zhì)量檢測(cè)方法采用指紋圖譜質(zhì)量檢測(cè)方法色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈—水(0.15∶1)為流動(dòng)相，進(jìn)行梯度洗脫0至20分鐘，乙腈濃度為15％，繼后15分鐘，乙腈濃度從15％至38％，38％乙腈濃度維持至60分鐘；流速0.9ml/min；柱溫25℃；檢測(cè)器為蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，漂移管溫度120℃，氣體流速2.6SLPM；參照品溶液的制備，精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品適量，加甲醇溶解制成每1ml含0.5mg的溶液，作為參照品溶液；供試品溶液的制備，精密吸取黃芪皂苷注射液100ml，水浴濃縮至約25ml，定量轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取3次，每次15ml，合并正丁醇提取液，用正丁醇飽和的水洗滌4次，每次8ml，棄去水層，正丁醇提取液在水浴上蒸干，殘?jiān)儆眉状既芙獠⒍ㄈ葜?ml量瓶中，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為黃芪皂苷注射液指紋圖譜檢測(cè)供試液；供試液指紋圖譜檢測(cè)，用高效液相色譜對(duì)黃芪皂苷注射液指紋圖譜檢測(cè)供試液進(jìn)行檢測(cè)，進(jìn)樣量為45μl，記錄60分鐘的色譜圖，得黃芪皂苷注射液的指紋圖譜；供試品指紋圖譜應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相似度應(yīng)大于0.90；黃芪皂苷注射液指紋圖譜共有6個(gè)共有指紋峰，參照峰S為黃芪甲苷色譜峰，6個(gè)共有指紋峰的相對(duì)保留時(shí)間分別為1號(hào)峰0.879，2號(hào)峰0.766，3號(hào)峰0.959，4號(hào)峰0.818，S峰1.000，5號(hào)峰1.040。
實(shí)施例5注射用黃芪皂苷質(zhì)量檢測(cè)方法采用指紋圖譜質(zhì)量檢測(cè)方法色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈—水為流動(dòng)相，進(jìn)行梯度洗脫0至20分鐘，乙腈濃度為20％，繼后15分鐘，乙腈濃度從20％至35％，35％乙腈濃度維持至60分鐘；流速0.9ml/min；柱溫25℃；檢測(cè)器為蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，漂移管溫度105℃，氣體流速2.80SLPM；參照品溶液的制備，精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品適量，加甲醇溶解制成每1ml含0.5mg的溶液，作為參照品溶液；供試品溶液的制備，精密稱取注射用黃芪皂苷0.2g，加水25ml使溶解，定量轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取3次，每次30ml，合并正丁醇提取液，用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次20ml，棄去水層，正丁醇提取液在水浴上蒸干，殘?jiān)儆眉状既芙獠⒍ㄈ葜?ml量瓶中，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液即得；測(cè)定法，分別精密吸取參照物溶液20μl和供試品溶液20μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，記錄60分鐘的色譜圖。
實(shí)施例6注射用黃芪皂苷質(zhì)量檢測(cè)方法采用指紋圖譜質(zhì)量檢測(cè)方法色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈—水為流動(dòng)相，進(jìn)行梯度洗脫0至20分鐘，乙腈濃度為20％，繼后15分鐘，乙腈濃度從20％至35％，35％乙腈濃度維持至60分鐘；流速0.7ml/min；柱溫28℃；檢測(cè)器為蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，漂移管溫度120℃，氣體流速3.10SLPM；參照品溶液的制備，精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品適量，加甲醇溶解制成每1ml含0.5mg的溶液，作為參照品溶液；供試品溶液的制備，精密稱取注射用黃芪皂苷0.2g，加水25ml使溶解，定量轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取5次，每次15ml，合并正丁醇提取液，用正丁醇飽和的水洗滌4次，每次10ml，棄去水層，正丁醇提取液在水浴上蒸干，殘?jiān)儆眉状既芙獠⒍ㄈ葜?ml量瓶中，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液即得；供試液指紋圖譜檢測(cè)，用高效液相色譜對(duì)注射用黃芪皂苷指紋圖譜檢測(cè)供試液進(jìn)行檢測(cè)，進(jìn)樣量為10μl，記錄60分鐘的色譜圖，得注射用黃芪皂苷的指紋圖譜；供試品指紋圖譜應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相似度應(yīng)大于0.90；注射用黃芪皂苷指紋圖譜共有6個(gè)共有指紋峰，參照峰S為黃芪甲苷色譜峰，6個(gè)共有指紋峰的相對(duì)保留時(shí)間分別為1號(hào)峰0.727，2號(hào)峰0.942，3號(hào)峰0.796，4號(hào)峰1.026，S峰1.000，5號(hào)峰1.014。
實(shí)施例7注射用黃芪皂苷質(zhì)量檢測(cè)方法色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈—水(0.2∶1)為流動(dòng)相，進(jìn)行梯度洗脫0至20分鐘，乙腈濃度為20％，繼后15分鐘，乙腈濃度從20％至35％，35％乙腈濃度維持至60分鐘；流速0.9ml/min；柱溫25℃；檢測(cè)器為蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，漂移管溫度105℃，氣體流速2.80SLPM；參照品溶液的制備，精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品適量，加甲醇溶解制成每1ml含0.5mg的溶液，作為參照品溶液；供試品溶液的制備，精密稱取注射用黃芪皂苷0.2g，加水25ml使溶解，定量轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取4次，每次30ml，合并正丁醇提取液，用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次15ml，棄去水層，正丁醇提取液在水浴上蒸干，殘?jiān)儆眉状既芙獠⒍ㄈ葜?ml量瓶中，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為注射用黃芪皂苷指紋圖譜檢測(cè)供試液；供試液指紋圖譜檢測(cè)，用高效液相色譜對(duì)注射用黃芪皂苷指紋圖譜檢測(cè)供試液進(jìn)行檢測(cè)，進(jìn)樣量為20μl，記錄60分鐘的色譜圖，得注射用黃芪皂苷的指紋圖譜；供試品指紋圖譜應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相似度應(yīng)大于0.90；注射用黃芪皂苷指紋圖譜共有6個(gè)共有指紋峰，參照峰S為黃芪甲苷色譜峰，6個(gè)共有指紋峰的相對(duì)保留時(shí)間分別為1號(hào)峰0.807，2號(hào)峰0.857，3號(hào)峰0.883，4號(hào)峰0.925，S峰1.000，5號(hào)峰1.023。
實(shí)施例8注射用黃芪皂苷質(zhì)量檢測(cè)方法色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈—水(0.12∶1)為流動(dòng)相，進(jìn)行梯度洗脫0至20分鐘，乙腈濃度為12％，繼后15分鐘，乙腈濃度從12％至32％，32％乙腈濃度維持至60分鐘；流速0.6ml/min；柱溫38℃；檢測(cè)器為蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，漂移管溫度110℃，氣體流速2.6SLPM；參照品溶液的制備，精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品適量，加甲醇溶解制成每1ml含0.5mg的溶液，作為參照品溶液；供試品溶液的制備，精密稱取注射用黃芪皂苷0.2g，加水25ml使溶解，定量轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取6次，每次45ml，合并正丁醇提取液，用正丁醇飽和的水洗滌3次，每次25ml，棄去水層，正丁醇提取液在水浴上蒸干，殘?jiān)儆眉状既芙獠⒍ㄈ葜?ml量瓶中，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為注射用黃芪皂苷指紋圖譜檢測(cè)供試液；供試液指紋圖譜檢測(cè)，用高效液相色譜對(duì)注射用黃芪皂苷指紋圖譜檢測(cè)供試液進(jìn)行檢測(cè)，進(jìn)樣量為40μl，記錄60分鐘的色譜圖，得注射用黃芪皂苷的指紋圖譜；注射用黃芪皂苷供試品指紋圖譜應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相似度應(yīng)大于0.90；注射用黃芪皂苷指紋圖譜共有6個(gè)共有指紋峰，參照峰S為黃芪甲苷色譜峰，6個(gè)共有指紋峰的相對(duì)保留時(shí)間分別為1號(hào)峰0.887，2號(hào)峰0.772，3號(hào)峰0.970，4號(hào)峰0.834，S峰1.000，5號(hào)峰1.033。
權(quán)利要求
1.一種黃芪皂苷注射液的指紋圖譜質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于該方法包括如下步驟色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水的比例為0.1～0.5∶1作為流動(dòng)相，進(jìn)行梯度洗脫0至20分鐘，乙腈濃度為10～30％，繼后15分鐘，乙腈濃度從10～30％至30～40％，30～40％乙腈濃度維持至60分鐘；流速0.5～1.0ml/min；柱溫20～40℃；檢測(cè)器為蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，漂移管溫度95～125℃，氣體流速2.5～3.2SLPM；參照品溶液的制備，精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品適量，加甲醇溶解制成每1ml含0.5mg的溶液，作為參照品溶液；供試品溶液的制備，精密吸取黃芪皂苷注射液100ml，水浴濃縮至約25ml，定量轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取2～6次，每次10～50ml，合并正丁醇提取液，用正丁醇飽和的水洗滌1～4次，每次5～30ml，棄去水層，正丁醇提取液在水浴上蒸干，殘?jiān)儆眉状既芙獠⒍ㄈ葜?ml量瓶中，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為黃芪皂苷注射液指紋圖譜檢測(cè)供試液；供試液指紋圖譜檢測(cè)，用高效液相色譜對(duì)黃芪皂苷注射液指紋圖譜檢測(cè)供試液進(jìn)行檢測(cè)，進(jìn)樣量為5～50μl，記錄60分鐘的色譜圖，得黃芪皂苷注射液的指紋圖譜；供試品指紋圖譜應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相似度應(yīng)大于0.90；黃芪皂苷注射液指紋圖譜共有6個(gè)共有指紋峰，參照峰S為黃芪甲苷色譜峰，6個(gè)共有指紋峰的相對(duì)保留時(shí)間分別為1號(hào)峰0.800±0.080，2號(hào)峰0.850±0.085，3號(hào)峰0.873±0.087，4號(hào)峰0.908±0.091，S峰1.000±0.000，5號(hào)峰1.031±0.010。
2.如權(quán)利要求1所述的黃芪皂苷注射液的指紋圖譜質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于該方法包括如下步驟色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水的比例為0.22∶1作為流動(dòng)相，進(jìn)行梯度洗脫0至20分鐘，乙腈濃度為22％，繼后15分鐘，乙腈濃度從22％至33％，33％乙腈濃度維持至60分鐘；流速0.8ml/min；柱溫30℃；檢測(cè)器為蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，漂移管溫度110℃，氣體流速2.90SLPM；參照品溶液的制備，精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品適量，加甲醇溶解制成每1ml含0.5mg的溶液，作為參照品溶液；供試品溶液的制備，精密吸取黃芪皂苷注射液100ml，水浴濃縮至約25ml，定量轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取4次，每次30ml，合并正丁醇提取液，用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次15ml，棄去水層，正丁醇提取液在水浴上蒸干，殘?jiān)儆眉状既芙獠⒍ㄈ葜?ml量瓶中，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過，取繼濾液作為黃芪皂苷注射液指紋圖譜檢測(cè)供試液；供試液指紋圖譜檢測(cè)，用高效液相色譜對(duì)黃芪皂苷注射液指紋圖譜檢測(cè)供試液進(jìn)行檢測(cè)，進(jìn)樣量為20μl，記錄60分鐘的色譜圖，得黃芪皂苷注射液的指紋圖譜；供試品指紋圖譜應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相似度應(yīng)大于0.90；黃芪皂苷注射液指紋圖譜共有6個(gè)共有指紋峰，參照峰S為黃芪甲苷色譜峰，6個(gè)共有指紋峰的相對(duì)保留時(shí)間分別為1號(hào)峰0.800，2號(hào)峰0.850，3號(hào)峰0.873，4號(hào)峰0.908，S峰1.000，5號(hào)峰1.031。
3.注射用黃芪皂苷的指紋圖譜質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于該方法包括如下步驟色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水的比例為0.1～0.5∶1作為流動(dòng)相，進(jìn)行梯度洗脫0至20分鐘，乙腈濃度為10～30％，繼后15分鐘，乙腈濃度從10～30％至30～40％，30～40％乙腈濃度維持至60分鐘；流速0.5～1.0ml/min；柱溫20～40℃；檢測(cè)器為蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，漂移管溫度95～125℃，氣體流速2.5～3.2SLPM；參照品溶液的制備，精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品適量，加甲醇溶解制成每1ml含0.5mg的溶液，作為參照品溶液；供試品溶液的制備，精密稱取注射用黃芪皂苷0.2g，加水25ml使溶解，定量轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取2～6次，每次10～50ml，合并正丁醇提取液，用正丁醇飽和的水洗滌1～4次，每次5～30ml，棄去水層，正丁醇提取液在水浴上蒸干，殘?jiān)儆眉状既芙獠⒍ㄈ葜?ml量瓶中，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為注射用黃芪皂苷指紋圖譜檢測(cè)供試液；供試液指紋圖譜檢測(cè)，用高效液相色譜對(duì)注射用黃芪皂苷指紋圖譜檢測(cè)供試液進(jìn)行檢測(cè)，進(jìn)樣量為5～50μl，記錄60分鐘的色譜圖，得注射用黃芪皂苷的指紋圖譜；注射用黃芪皂苷供試品指紋圖譜應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相似度應(yīng)大于0.90；注射用黃芪皂苷指紋圖譜共有6個(gè)共有指紋峰，參照峰S為黃芪甲苷色譜峰，6個(gè)共有指紋峰的相對(duì)保留時(shí)間分別為1號(hào)峰0.807±0.081，2號(hào)峰0.857±0.086，3號(hào)峰0.883±0.088，4號(hào)峰0.925±0.092，S峰1.000±0.000，5號(hào)峰1.023±0.010。
4.如權(quán)利要求3所述的注射用黃芪皂苷的指紋圖譜質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于該方法包括如下步驟色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水的比例為0.2∶1作為流動(dòng)相，進(jìn)行梯度洗脫0至20分鐘，乙腈濃度為20％，繼后15分鐘，乙腈濃度從20％至35％，35％乙腈濃度維持至60分鐘；流速0.9ml/min；柱溫25℃；檢測(cè)器為蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，漂移管溫度105℃，氣體流速2.80SLPM；參照品溶液的制備，精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品適量，加甲醇溶解制成每1ml含0.5mg的溶液，作為參照品溶液；供試品溶液的制備，精密稱取注射用黃芪皂苷0.2g，加水25ml使溶解，定量轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取4次，每次30ml，合并正丁醇提取液，用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次15ml，棄去水層，正丁醇提取液在水浴上蒸干，殘?jiān)儆眉状既芙獠⒍ㄈ葜?ml量瓶中，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為注射用黃芪皂苷指紋圖譜檢測(cè)供試液；供試液指紋圖譜檢測(cè)，用高效液相色譜對(duì)注射用黃芪皂苷指紋圖譜檢測(cè)供試液進(jìn)行檢測(cè)，進(jìn)樣量為20μl，記錄60分鐘的色譜圖，得注射用黃芪皂苷的指紋圖譜；供試品指紋圖譜應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相似度應(yīng)大于0.90；注射用黃芪皂苷指紋圖譜共有6個(gè)共有指紋峰，參照峰S為黃芪甲苷色譜峰，6個(gè)共有指紋峰的相對(duì)保留時(shí)間分別為1號(hào)峰0.807，2號(hào)峰0.857，3號(hào)峰0.883，4號(hào)峰0.925，S峰1.000，5號(hào)峰1.023。
全文摘要
本發(fā)明公開一種黃芪皂苷注射液的指紋圖譜質(zhì)量檢測(cè)方法。該方法用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈一水為流動(dòng)相，進(jìn)行梯度洗脫；流速0.5～1.0ml/min；柱溫20～40℃；取黃芪甲苷對(duì)照品適量，加甲醇溶解，作為參照品溶液；取黃芪皂苷注射液濃縮，以水飽和的正丁醇為提取溶劑，以正丁醇飽和的水除雜，待水飽和的正丁醇提取物揮干后，在殘留物中加入甲醇溶解，取甲醇溶解作為黃芪皂苷注射液指紋圖譜檢測(cè)供試液。供試液指紋圖譜檢測(cè)，用高效液相色譜對(duì)黃芪皂苷注射液指紋圖譜檢測(cè)供試液進(jìn)行檢測(cè)，供試品指紋圖譜應(yīng)與對(duì)照指紋圖譜有良好的相似性，相似度＞0.90。本發(fā)明還提供了注射用黃芪皂苷指紋圖譜的質(zhì)量檢測(cè)方法。
文檔編號(hào)G01N30/86GK1844913SQ20061006528
公開日2006年10月11日 申請(qǐng)日期2006年3月22日 優(yōu)先權(quán)日2006年3月22日
發(fā)明者程志鵬, 梁隆, 胡思玉, 張德奎, 余啟波 申請(qǐng)人:四川科倫藥業(yè)股份有限公司