專利名稱：一種水稻種子的真?zhèn)闻c新舊鑒定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及水稻種子領(lǐng)域，特別涉及一種水稻種子的鑒定方法。
背景技術(shù)：
目前，判斷水稻種子的真?zhèn)?、新舊時，主要通過測量發(fā)芽率，如高滲發(fā)芽法，或采用同功酶譜分析法等。高滲發(fā)芽法的原理是種子在高滲溶液中的發(fā)芽能力與其活力呈顯著正相關(guān)，據(jù)此通過檢測種子活力來鑒定水稻種子新舊。同功酶譜分析法的原理是同工酶是基因表達的產(chǎn)物，直接反映生物間的遺傳差異和系統(tǒng)發(fā)育過程中的遺傳變異，據(jù)此用同工酶電泳分析技術(shù)進行種子的真?zhèn)舞b定。但是這兩種方法存在如下缺點一是時間長，例如用高滲發(fā)芽法測量種子的新舊程度需要一個星期，同功酶譜分析法有時需長達一個星期以上；二是種子用量較大，進行單一指標(biāo)測量，不利于稀有種子的鑒定。
專利號為00117133.X的發(fā)明專利“水稻種子的鑒定方法”中公開了一種通過測量水稻種子吸水后的超微弱發(fā)光強度來鑒定水稻種子的新與舊、真與偽的方法。但這種鑒定水稻種子的測量時間較長，所需時間約1小時左右；而且測量的是水稻種子吸水后所發(fā)出的微弱光，所以測量準(zhǔn)確性較差、靈敏度也較低。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺點，提供一種測量速度快、方法簡單、測量靈敏度高和準(zhǔn)確性高的水稻種子的鑒定方法。
本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實現(xiàn)本發(fā)明提出了一種水稻種子的真?zhèn)舞b定方法，即將待測水稻種子吸脹初期在化學(xué)發(fā)光探針試劑介導(dǎo)下的化學(xué)發(fā)光強度變化曲線與已知水稻種子在同一條件下測得的化學(xué)發(fā)光強度變化曲線比較，鑒定待測水稻種子的真?zhèn)巍?br> 本發(fā)明提出了一種水稻種子的新舊鑒定方法，即將待測水稻種子吸脹初期在化學(xué)發(fā)光探針試劑介導(dǎo)下的化學(xué)發(fā)光強度的平均值與已知值相比，鑒定待測水稻種子的新舊。
測量水稻種子吸脹初期在化學(xué)發(fā)光試劑介導(dǎo)下化學(xué)發(fā)光強度變化曲線包括下述步驟(1)將水稻種子去殼研磨成粉末，放入透光容器，置于暗箱中；(2)然后將水稻種子粉末浸沒在化學(xué)發(fā)光探針試劑溶液中，測量水稻種子的化學(xué)發(fā)光強度。
測量10～20分鐘得到的水稻種子化學(xué)發(fā)光強度變化曲線的特異性最明顯。
在18～30℃下測量水稻種子化學(xué)發(fā)光強度變化曲線的準(zhǔn)確性較高。
所述化學(xué)發(fā)光探針試劑可采用魯米諾、光澤精、海螢熒光素類似物(CLA)或其衍生物(MCLA、FCLA)；優(yōu)選海螢熒光素類似物或其衍生物；更優(yōu)選海螢熒光素衍生物。海螢熒光素類似物(CLA)或其衍生物(MCLA、FCLA)只與超氧陰離子(·O2-)或者單線態(tài)氧(1O2)發(fā)生特異性的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，不與生物機體內(nèi)的過氧化氫(H2O2)或者羥自由基(·OH)發(fā)生反應(yīng)，可有效降低酶、·OH等干擾物質(zhì)的影響，而且海螢熒光素衍生物的化學(xué)發(fā)光效率更高。
測量水稻種子的化學(xué)發(fā)光強度可采用自制或市售的單光子計數(shù)測量裝置，比如日本“HAMAMATSU”公司制造的單光子計數(shù)儀、美國“EG&G”公司制造的單光子計數(shù)儀。
本發(fā)明的原理植物的細胞膜上存在著NADPH氧化酶，這種酶能催化NADPH與氧氣反應(yīng)產(chǎn)生超氧陰離子，是種子萌發(fā)早期的活性氧自由基的主要來源。加水后，不同的水稻種子產(chǎn)生的活性氧數(shù)量隨時間的變化不同；相同的水稻種子如果代謝越旺盛，產(chǎn)生的活性氧就越多?；瘜W(xué)發(fā)光探針試劑可與水稻種子代謝過程中產(chǎn)生的活性氧發(fā)生化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，因此這種化學(xué)發(fā)光的強度即可反映水稻種子的活性氧含量，從而反映出水稻種子的真?zhèn)魏托屡f。
將不同水稻種子去殼研磨成粉末，在加水吸脹的最初幾分鐘內(nèi)，水稻種子在化學(xué)發(fā)光探針試劑介導(dǎo)下的化學(xué)發(fā)光強度有明顯特異性，所以利用這種化學(xué)發(fā)光特異性可以快捷地、定性和定量地鑒定水稻種子的真?zhèn)闻c新舊。
同一品種的水稻種子，吸脹初期其化學(xué)發(fā)光探針試劑介導(dǎo)的化學(xué)發(fā)光強度變化曲線有一致性，依據(jù)這一特異性可將待測水稻種子的化學(xué)發(fā)光強度變化曲線特性與已知樣品對比，從而判斷未知水稻種子的真?zhèn)巍?br> 同一品種但新舊程度不同的水稻種子，其化學(xué)發(fā)光探針試劑介導(dǎo)的化學(xué)發(fā)光強度不同，即新舊程度不同的同品種水稻種子的加水后幾分鐘內(nèi)化學(xué)發(fā)光強度的平均值不同，依據(jù)這一特異性可判斷水稻種子的新舊；水稻種子愈新，活力越高，其加水后化學(xué)發(fā)光探針試劑介導(dǎo)的化學(xué)發(fā)光強度越大。
化學(xué)發(fā)光強度平均值Iavr=1t∫0tptdt,]]>pt為化學(xué)發(fā)光強度(單位為計速率即cps)，t為時間。在正常的儲存條件(即相對濕度40～50％，溫度10～25℃)下，儲存6個月的水稻種子化學(xué)發(fā)光強度的平均值Iavr的正常范圍為150～180cps；儲存12個月的水稻種子化學(xué)發(fā)光強度的平均值Iavr的正常范圍為100～130cps；儲存18個月的水稻種子化學(xué)發(fā)光強度的平均值Iavr的正常范圍為50～80cps。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下優(yōu)點1、本發(fā)明利用了吸脹期最初幾分鐘內(nèi)水稻種子在化學(xué)發(fā)光探針試劑介導(dǎo)下化學(xué)發(fā)光的明顯特異性，簡便、快速、定量地測定水稻種子活力，判斷其真?zhèn)魏托屡f。
2、本發(fā)明所使用的化學(xué)發(fā)光測定法，靈敏度很高；而且由于本方法所選用的化學(xué)發(fā)光探針試劑只發(fā)生特異性的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，所以測量的準(zhǔn)確性也很高。
3、本發(fā)明所利用的測量裝置簡單，投資較少，實現(xiàn)容易，操作簡便。
4、本發(fā)明種子用量極少。
5、本發(fā)明的鑒定時間短，僅需10～20分鐘。


圖1是儲存6個月的水稻種子在以海螢熒光素衍生物MCLA為化學(xué)發(fā)光試劑介導(dǎo)下的化學(xué)發(fā)光強度變化曲線圖。
圖2是儲存6個月、12個月和18個月的水稻種子在以海螢熒光素衍生物MCLA為化學(xué)發(fā)光試劑介導(dǎo)下的化學(xué)發(fā)光強度變化曲線圖。
具體實施例方式
下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進一步詳細的描述，但本發(fā)明的實施方式不限于此。
實施例1鑒定1號、2號水稻種子的真?zhèn)问紫冗x取所要檢測的大小一致、種皮完好的干水稻種子，測量前存儲期間相對濕度50％。測量時，將水稻種子去殼研磨成粉末放入2毫升石英比色皿，置于暗箱中，然后加海螢熒光素衍生物(MCLA)溶液1毫升，使種子粉末全部被水浸沒，再用自制的單光子計數(shù)儀測量其化學(xué)發(fā)光強度20分鐘，測量溫度為30(±2)℃，相對濕度50(±5)％；得到圖1所示的化學(xué)發(fā)光強度變化曲線1(對應(yīng)1號種子)、曲線2(對應(yīng)2號種子)。
將圖1的曲線與已知曲線比較，鑒定出曲線1代表豐絲占種子，曲線2代表豐秀占種子。
實施例2鑒定3號、4號、5號豐絲占水稻種子的儲存時間(即新舊程度)首先選取所要檢測的大小一致、種皮完好的干水稻種子，測量前存儲期間相對濕度45％。測量時，將水稻種子去殼研磨成粉末放入2毫升石英比色皿，置于暗箱中，然后加海螢熒光素衍生物(MCLA)溶液1毫升，使種子粉末全部被水浸沒，再用自制的單光子計數(shù)儀測量其化學(xué)發(fā)光20分鐘，測量溫度25(±2)℃，相對濕度45(±5)％；得到圖2所示的化學(xué)發(fā)光強度變化曲線3(對應(yīng)3號種子)、曲線4(對應(yīng)4號種子)、曲線5(對應(yīng)5號種子)。
對開始測量后5分鐘的化學(xué)發(fā)光強度取平均值，則有3號種子的化學(xué)發(fā)光強度的平均值為167cps，由此鑒定出該種子存儲時間是6個月；4號種子的化學(xué)發(fā)光強度的平均值為121cps，由此鑒定出該種子存儲時間是12個月；5號種子的化學(xué)發(fā)光強度的平均值為58cps，由此鑒定出該種子存儲時間是18個月。
權(quán)利要求
1.一種水稻種子的真?zhèn)舞b定方法，其特征在于將待測水稻種子吸脹初期在化學(xué)發(fā)光探針試劑介導(dǎo)下的化學(xué)發(fā)光強度變化曲線與已知水稻種子在同一條件下測得的化學(xué)發(fā)光強度變化曲線比較，鑒定待測水稻種子的真?zhèn)巍?br> 2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的水稻種子的真?zhèn)舞b定方法，其特征在于測量水稻種子吸脹初期在化學(xué)發(fā)光試劑介導(dǎo)下的化學(xué)發(fā)光強度變化曲線包括下述步驟(1)將水稻種子去殼研磨成粉末，放入透光容器，置于暗箱中；(2)然后將水稻種子粉末浸沒在化學(xué)發(fā)光探針試劑溶液中，測量水稻發(fā)種子的化學(xué)發(fā)光強度。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的水稻種子的真?zhèn)舞b定方法，其特征在于所述的化學(xué)發(fā)光強度變化曲線是測量10～20分鐘得到曲線。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的水稻種子的品種鑒定方法，其特征在于測量溫度為18～30℃。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的水稻種子的真?zhèn)舞b定方法，其特征在于所述化學(xué)發(fā)光探針試劑為魯米諾、光澤精、海螢熒光素類似物或其衍生物。
6.一種水稻種子的新舊鑒定方法，其特征在于將待測水稻種子吸脹初期在化學(xué)發(fā)光探針試劑介導(dǎo)下的化學(xué)發(fā)光強度的平均值與已知值相比，鑒定待測水稻種子的新舊。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的水稻種子的新舊鑒定方法，其特征在于測量水稻種子吸脹初期在化學(xué)發(fā)光試劑介導(dǎo)下的化學(xué)發(fā)光強度變化曲線包括下述步驟(1)將水稻種子去殼研磨成粉末，放入透光容器，置于暗箱中；(2)然后將水稻種子粉末浸沒在化學(xué)發(fā)光探針試劑溶液中，測量水稻發(fā)種子的化學(xué)發(fā)光強度。
8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的水稻種子的新舊鑒定方法，其特征在于所述的化學(xué)發(fā)光強度變化曲線是測量10～20分鐘得到曲線。
9.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的水稻種子的新舊鑒定方法，其特征在于測量溫度為18～30℃。
10.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的水稻種子的新舊鑒定方法，其特征在于所述化學(xué)發(fā)光探針試劑為魯米諾、光澤精、海螢熒光素類似物或其衍生物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種水稻種子的真?zhèn)闻c新舊鑒定方法，通過測量水稻種子吸脹初期在化學(xué)發(fā)光探針試劑介導(dǎo)下的化學(xué)發(fā)光強度變化曲線特性和平均強度來鑒定種子的真?zhèn)魏托屡f。本方法能簡便、快速、定量地測定水稻種子活力，判斷其真?zhèn)魏托屡f；測量裝置簡單，投資較少，實現(xiàn)容易，操作簡便。
文檔編號G01N1/28GK1865938SQ20061003589
公開日2006年11月22日 申請日期2006年6月12日 優(yōu)先權(quán)日2006年6月12日
發(fā)明者邢達, 黎堅 申請人:華南師范大學(xué)