專(zhuān)利名稱(chēng)：一種目視檢測(cè)尿液中無(wú)機(jī)磷的方法及其試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種無(wú)機(jī)磷的檢測(cè)方法，具體屬于一種臨床上目視檢測(cè)尿液中無(wú)機(jī)磷的方法及其試劑盒。
背景技術(shù)：
無(wú)機(jī)磷參與各種重要的生物礦化過(guò)程，諸如骨骼的形成以及腎結(jié)石的起源等病理過(guò)程。因此，生物液體中無(wú)機(jī)磷的檢測(cè)是很重要的。我們知道尿液在臨床事件中有很重要的診斷價(jià)值，所以檢測(cè)人體尿液中無(wú)機(jī)磷是很有必要的。尿液中無(wú)機(jī)磷過(guò)多或過(guò)少會(huì)引起結(jié)石病、前列腺疾病、甲狀旁腺機(jī)能減退或亢進(jìn)、晚期慢性腎炎、多發(fā)性骨髓瘤、佝僂病或軟骨病等，如果不及時(shí)治愈，甚至引起更大的其它疾病。因此維持尿液中一定濃度的無(wú)機(jī)磷很關(guān)鍵。由此看來(lái)定期的監(jiān)測(cè)尿液中的無(wú)機(jī)磷是必不可少的。我們可以通過(guò)定期監(jiān)測(cè)尿液中的無(wú)機(jī)磷的含量，了解生物體的代謝狀況及有關(guān)病變狀態(tài)。目前，大型醫(yī)院基本普及用各種類(lèi)型的半自動(dòng)、全自動(dòng)臨床生化分析儀，并使用無(wú)機(jī)磷試劑盒(鉬試劑)通過(guò)直接紫外法去測(cè)定尿液中無(wú)機(jī)磷的含量。我們也發(fā)明了使用鄰苯二酚紫-HEPES-Yb3+這個(gè)體系，并通過(guò)紫外可見(jiàn)儀去檢測(cè)尿液中無(wú)機(jī)磷的方法(專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)?00410012448.1)。需要指出，以上臨床檢驗(yàn)包括我們發(fā)明的方法都是基于試劑盒與紫外可見(jiàn)光譜儀配套使用，無(wú)法實(shí)現(xiàn)試劑盒的目視使用。小型醫(yī)院及診所由于缺乏大型設(shè)備，而無(wú)法把測(cè)定病人尿液中無(wú)機(jī)磷作為臨床上的一個(gè)常規(guī)檢驗(yàn)。因此，以上的臨床檢驗(yàn)法缺乏方便和普及性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服試劑盒和大型儀器配套測(cè)定尿液中的無(wú)機(jī)磷的昂貴和不方便，使得小型醫(yī)院和小診所無(wú)法實(shí)現(xiàn)對(duì)尿液中無(wú)機(jī)磷的測(cè)定的現(xiàn)實(shí)，發(fā)明一種在任何醫(yī)院及家庭中可以隨時(shí)目視檢測(cè)尿液中無(wú)機(jī)磷的方法，這種方法廉價(jià)、簡(jiǎn)單、快速、而且裝置可以隨身攜帶，可以普及使用。
本發(fā)明提供一種目視檢測(cè)尿液中無(wú)機(jī)磷的方法，該方法基于鐿離子、以鄰苯二酚紫為顯色劑在pH為6.5-7.5的HEPES緩沖溶液中直接滴加一定體積的尿液，然后與標(biāo)準(zhǔn)色階對(duì)照，得出尿液中的無(wú)機(jī)磷含量的范圍，此方法適合于大、中、小型醫(yī)院，診所及家庭中使用。
標(biāo)準(zhǔn)色階的制定在含有50μM的鄰苯二酚紫、100μM的YbCl3、pH＝7.0且濃度為10mM的HEPES緩沖溶液中，從左起第二個(gè)比色管到第六個(gè)比色管中分別加入HPO42-溶液，使得HPO42-的濃度分別為20、40、60、80、100μM，得到標(biāo)準(zhǔn)的色階圖(見(jiàn)圖1)，即從左到右的顏色依次為，蘭色、淡蘭、蘭綠、黃綠、淡黃、深黃，代表相應(yīng)的尿樣濃度范圍為＜5mM、5～12mM、12～20mM，20～30mM、30～42mM、42～50mM。具體檢測(cè)步驟如下(1)、稱(chēng)取HEPES，用蒸餾水溶解，再用NaOH溶液調(diào)pH6.5-7.5，最后定容，得到10mM的HEPES緩沖溶液，標(biāo)記為R1；稱(chēng)取鄰苯二酚紫，用蒸餾水溶解，得到2mM的鄰苯二酚紫溶液，標(biāo)記為R2；稱(chēng)取YbCl3，用蒸餾水溶解，得到2mM的Yb3+溶液，標(biāo)記為R3；(2)、按照R1、R2、R3體積比為40∶1∶2，加入比色管中，此時(shí)溶液為藍(lán)色；(3)、取體積為R3體積1/25的尿樣，用進(jìn)樣器加到上述比色管中，搖振20-30s后，與標(biāo)準(zhǔn)色階進(jìn)行對(duì)照，得出尿樣中無(wú)機(jī)磷濃度范圍。
所述的Yb3+溶液是YbCl3溶液或Yb(ClO4)3的溶液。
所述的Yb3+可以用Nd3+、Sm3+、Gd3+、Er3+或Ho3+代替。
按照上述方法可進(jìn)一步制成目視檢測(cè)尿液中無(wú)機(jī)磷的試劑盒。該試劑盒的組成包括試劑R1濃度為10mM，pH＝7.0的HEPES緩沖溶液；試劑R2濃度為2mM的鄰苯二酚紫溶液；試劑R3濃度為2mM的YbCl3溶液；一張標(biāo)準(zhǔn)的色階圖紙；還有包裝。
試劑盒的使用方法1.按照R1、R2、R3試劑體積比為40∶1∶2，加入比色管中，此時(shí)溶液為藍(lán)色；2.取體積為R3試劑體積1/25的尿樣，用進(jìn)樣器加到上述比色管中，搖振20-30s后，與色階圖紙進(jìn)行對(duì)照，得出尿樣中無(wú)機(jī)磷濃度范圍。
本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)1、我們的檢測(cè)對(duì)象是未稀釋的尿樣，省去預(yù)處理程序，在臨床上帶來(lái)很大的方便；2、相對(duì)鉬試劑測(cè)定的取樣體積20μl，反應(yīng)時(shí)間是2min，我們的取樣體積更少(4μl)，反應(yīng)時(shí)間更短(20-30s)；3、我們的測(cè)定是通過(guò)肉眼比色確定其濃度范圍，能脫離大型一起單獨(dú)使用，檢測(cè)過(guò)程簡(jiǎn)單、效果明顯；4、我們的裝置和試劑廉價(jià)、簡(jiǎn)單、便于攜帶，適合與任何大、小型醫(yī)院，診所及家庭中使用，有很廣泛的普及性和社會(huì)價(jià)值性。


圖1是本發(fā)明標(biāo)準(zhǔn)色階圖。
圖2至圖10是相應(yīng)實(shí)施例1至實(shí)施例9的檢測(cè)尿液中無(wú)機(jī)磷濃度的顏色圖。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1稱(chēng)取HEPES(C8H18N2O4S，F(xiàn)W＝238.30)0.238g，用蒸餾水95ml溶解，再用0.1M的NaOH調(diào)pH7.0，最后定容為100ml，得到10mM的HEPES緩沖溶液，標(biāo)記為R1；稱(chēng)取鄰苯二酚紫(C19H14O7S，F(xiàn)W＝386.30)0.0386g，用蒸餾水溶解并定容為25ml，得到2mM的鄰苯二酚紫溶液，標(biāo)記為R2；稱(chēng)取YbCl3(FW＝279.5)，用蒸餾水溶解并定容為25ml，得到2mM的Yb3+溶液，標(biāo)記為R3。把2ml的R1溶液加到干凈的比色管中，用微量進(jìn)樣器吸取R250μl和R3100μl，加到此比色管中，此時(shí)溶液藍(lán)色。在上述的比色管中，取成人尿樣4μl，用微量進(jìn)樣器加到此比色管中，搖振后，顏色為蘭綠色，與標(biāo)準(zhǔn)的色階對(duì)照，發(fā)現(xiàn)此尿樣無(wú)機(jī)磷濃度在12-20mM之間。結(jié)果見(jiàn)圖2。
按實(shí)施例1測(cè)10個(gè)健康成人尿樣，得尿液中無(wú)機(jī)磷含量范圍為12-30mM。與醫(yī)學(xué)上統(tǒng)計(jì)的尿中無(wú)機(jī)磷的正常排出濃度(12～42mM)穩(wěn)合。
實(shí)施例2配制pH6.5的HEPES(10mM)緩沖溶液，其余同實(shí)施例1，得尿液中無(wú)機(jī)磷含量范圍為12-20mM。結(jié)果見(jiàn)圖3。
實(shí)施例3取一周歲健康小孩尿液，其余同實(shí)施例1，但得到的顏色為淡黃色，與標(biāo)準(zhǔn)色階對(duì)照，發(fā)現(xiàn)小孩尿樣中無(wú)機(jī)磷的含量范圍為42-50mM。結(jié)果見(jiàn)圖4。從上述實(shí)施例中，我們看出小孩尿液中的無(wú)機(jī)磷含量偏高，這是因?yàn)樾『⑴c大人相比而言，由于小孩處于成骨旺盛期，堿性磷酸酶活性較高以及代謝速度相當(dāng)快等原因所造成。
實(shí)施例4用Yb(ClO4)3的溶液，取另一成人的尿液，其余同實(shí)施例1，此尿樣無(wú)機(jī)磷濃度在12-20mM之間。結(jié)果見(jiàn)圖5。
實(shí)施例5用ErCl3的溶液，其余其余同實(shí)施例1，此尿樣無(wú)機(jī)磷濃度在12-20mM之間，結(jié)果見(jiàn)圖6。
實(shí)施例6用Nd(ClO4)3的溶液，其余同實(shí)施例1，此尿樣無(wú)機(jī)磷濃度在12-20mM之間，結(jié)果見(jiàn)圖7。
實(shí)施例7用Sm(ClO4)3的溶液，其余同實(shí)施例1，此尿樣無(wú)機(jī)磷濃度在12-20mM之間，結(jié)果見(jiàn)圖8。
實(shí)施例8用GdCl3的溶液，其余同實(shí)施例1，此尿樣無(wú)機(jī)磷濃度在12-20mM之間，結(jié)果見(jiàn)圖9。
實(shí)施例9用HoCl3的溶液，其余同實(shí)施例1，此尿樣無(wú)機(jī)磷濃度在12-20mM之間，結(jié)果見(jiàn)圖10。
權(quán)利要求
1.一種目視檢測(cè)尿液中無(wú)機(jī)磷的方法，其特征在于，該方法包括如下步驟(1)、稱(chēng)取HEPES，用蒸餾水溶解，再用NaOH溶液調(diào)pH6.5-7.5，最后定容，得到10mM的HEPES緩沖溶液，標(biāo)記為R1；稱(chēng)取鄰苯二酚紫，用蒸餾水溶解，得到2mM的鄰苯二酚紫溶液，標(biāo)記為R2；稱(chēng)取YbCl3，用蒸餾水溶解，得到2mM的Yb3+溶液，標(biāo)記為R3；(2)、按照R1、R2、R3體積比為40∶1∶2，加入比色管中，此時(shí)溶液為藍(lán)色；(3)、取體積為R3體積1/25的尿樣，用進(jìn)樣器加到上述比色管中，搖振20-30s后，與色階進(jìn)行對(duì)照，得出尿樣中無(wú)機(jī)磷濃度范圍。
2.按權(quán)利要求1所述的一種檢測(cè)尿液中無(wú)機(jī)磷的方法，其特征在于所述的Yb3+溶液是YbCl3溶液或Yb(ClO4)3的溶液。
3.按權(quán)利要求1或2所述的一種檢測(cè)尿液中磷酸根的方法，其特征在于所述的Yb3+用Nd3+、Sm3+、Gd3+、Er3+或Ho3+代替。
4.一種目視檢測(cè)尿液中無(wú)機(jī)磷方法的試劑盒，該試劑盒包括濃度為10mM，pH＝7.0的HEPES緩沖溶液；濃度為2mM的鄰苯二酚紫溶液；濃度為2mM的YbCl3溶液和標(biāo)準(zhǔn)色階圖。
全文摘要
本發(fā)明提供一種目視檢測(cè)尿液中無(wú)機(jī)磷的方法及其試劑盒，該方法使用鐿離子、以鄰苯二酚紫為顯色劑在pH為6.5－7.5的HEPES緩沖溶液中直接滴加一定體積的尿液，然后與色階對(duì)照，得出尿液中的無(wú)機(jī)磷含量的范圍，此方法適合于大、中、小型醫(yī)院，診所及家庭中使用。
文檔編號(hào)G01N33/84GK1687787SQ20051001244
公開(kāi)日2005年10月26日 申請(qǐng)日期2005年4月8日 優(yōu)先權(quán)日2005年4月8日
發(fā)明者陰彩霞, 楊頻, 霍方俊 申請(qǐng)人:山西大學(xué)