專利名稱：一種檢測空調濾網和吸塵器灰塵中塵螨變應原的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及塵螨變應原檢測的方法，具體地說是一種運用納米磁性粒子酶聯免疫測定技術檢測空調空氣過濾網灰塵和吸塵器收集灰塵中塵螨變應原Der pII和Der fII含量的方法。
背景技術：
過敏性疾病(如哮喘、過敏性鼻炎、過敏性皮炎等)是臨床上的常見病、多發(fā)病，據2000年WHO/IAACI報告指出近些年來哮喘的發(fā)病率和死亡率呈上升趨勢。全國部分城市對青少年哮喘流行病學統(tǒng)計(ISSAC調查)哮喘發(fā)病率為3.3％-5.1％，遠較10年前(約1％)升高；目前全國至少有一千萬以上兒童患哮喘。
過敏性疾病是由于各種接觸或吸入變應原引起的，變應原大部分為蛋白質，也可為多肽或糖類以及人工合成的物質如藥物等。最常見的變應原是塵螨。塵螨是強烈的變應原之一，可引起的全身性變態(tài)反應疾病包括變應性哮喘、變應性鼻球結膜炎、特應性濕疹/皮炎、變應性蕁麻疹等。螨性變應疾病占各種變態(tài)反應疾病的70％左右。在我國和世界的大部分地區(qū)，分布最廣泛的、研究最深入的兩種引起全身性變態(tài)反應疾病的塵螨包括戶塵螨和粉塵螨。它們喜好在溫暖、潮濕環(huán)境中繁衍，經深圳大學生命科學院劉志剛教授領導的課題組調查發(fā)現空調空氣濾網也是它們嗜好的棲居場所之一。空調使用一段時間后，空氣濾網上就會有許多絮狀的附著物，這些附著物來源于人體脫落的皮屑、棉質纖維、打掃衛(wèi)生、花粉、脫換衣服、吸煙等產生的懸浮物集聚而成。粉塵螨和戶塵螨喜歡生長在這種溫暖、潮濕并且有皮屑等食物的環(huán)境中。如果不定期或從未清洗空氣濾網，那么，空調一開，空氣濾網上的塵螨以及塵螨分泌排泄物等致敏物就會吹出來，附在人體皮膚上或吸入后沉積在呼吸道中，從而產生皮膚瘙癢、鼻塞、打噴嚏或哮喘等過敏性疾病。人們在密封空調室內工作、生活和學習時間越來越多，因而室內空調空氣濾網灰塵中塵螨變應原也可成為室內主要的致敏因素之一。
室內環(huán)境一般泛指人們的生活居室、勞動、工作的辦公室和室內場所、進行其他室內活動的公共場所等。室內環(huán)境已成為現代人類生活、工作和進行其他活動的主要場所。近年的國內外研究資料表明，城市居民每天約70％-90％的時間在各種室內環(huán)境中度過，因此，室內空氣環(huán)境質量的好壞，對人體健康的影響越來越大。
室內生物性污染主要有生物性過敏原和病原微生物等。生物性過敏原主要是塵螨、真菌、細菌和花粉等室內的空氣微生物，誘發(fā)人體出現過敏性變態(tài)反應疾病，如過敏性鼻炎、哮喘等。其中塵螨是最主要的過敏原之一。
為了預防和控制室內塵螨生物性過敏原污染，深圳大學生命科學學院劉志剛教授領導的課題組進行了新一代健康家電的研制，主要包括防治塵螨的空調和帶HEPA濾網的除螨吸塵器。
為了監(jiān)控空調和室內其它地方塵螨污染狀況，并能定量反映出來，本發(fā)明運用納米磁性粒子酶聯免疫測定技術檢測空調空氣濾網灰塵和吸塵器收集灰塵中塵螨變應原Der p II和Der fII的含量。
塵螨II組過敏原(Der p II和Der fII)是分子量為15KDa，有幾乎相同的N-端氨基酸序列的蛋白，也是通過螨蟲的胃腸道排泄的最主要的塵螨過敏原之一。
本發(fā)明通過納米磁性粒子酶聯免疫測定技術，測定空調空氣濾網灰塵和吸塵器收集灰塵中塵螨變應原Der p II和Der fII的含量來時室內塵螨污染狀況進行監(jiān)控。具有地說通過PBS緩沖液提取空調空氣濾網灰塵和吸塵器收集灰塵中Der p II和Der fII作為檢測樣品。分別采用Der p II和Der fII單克隆抗體包裹納米磁性粒子，與待測樣品結合，再加入堿性磷酸酶標記的Der p II、Der fII多抗，經37℃溫育后形成固相包被抗體-抗原-酶標記二抗復合物。洗滌、分離后加入底物AMPPD作為化學發(fā)光劑，AMPPD在堿性磷酸酶的催化作用下，迅速去磷酸，生產中介體AMPD。AMPD很快分解，從高能激發(fā)狀態(tài)，回到低能量的穩(wěn)定態(tài)，同時發(fā)射光子，這種發(fā)光穩(wěn)定、持續(xù)時間可長達1小時。通過光量子閱讀系統(tǒng)記錄發(fā)光強度，并從標準曲線上計算出待測過敏原Der p II和Der fII的含量。通過灰塵總量分別計算出空調空氣濾網灰塵和吸塵器收集灰塵中塵螨變應原Der p II和Der fII總含量。
本發(fā)明不僅提供了室內塵螨污染狀況的檢測的技術手段，而且為健康家電包括空調和吸塵器的研制提供技術基礎。

發(fā)明內容
本發(fā)明通過納米磁性粒子酶聯免疫測定技術，測定空調空氣濾網灰塵和吸塵器收集灰塵中塵螨變應原Der p II和Der fII的含量來對室內塵螨污染狀況進行監(jiān)控。具有地說通過PBS緩沖液提取空調空氣濾網灰塵和吸塵器收集灰塵中Der p II和Der fII作為檢測樣品。分別采用Der p II和Der fII單克隆抗體包裹納米磁性粒子，與待測樣品結合，再加入堿性磷酸酶標記的Der p II、Der fII多抗，經37℃溫育后形成固相包被抗體-抗原-酶標記二抗復合物。洗滌、分離后加入底物AMPPD作為化學發(fā)光劑，AMPPD在堿性磷酸酶的催化作用下，迅速去磷酸，生產中介體AMPD。AMPD很快分解，從高能激發(fā)狀態(tài)，回到低能量的穩(wěn)定態(tài)，同時發(fā)射光子，這種發(fā)光穩(wěn)定、持續(xù)時間可長達1小時。通過光量子閱讀系統(tǒng)記錄發(fā)光強度，并從標準曲線上計算出待測過敏原Der p II和Der fII的含量。通過灰塵總量分別計算出空調空氣濾網灰塵和吸塵器收集灰塵中塵螨變應原Der p II和Der fII總含量。
本發(fā)明不僅提供了室內塵螨污染狀況檢測的技術手段，而且為健康家電包括空調和吸塵器的研制提供技術基礎。
具體實施例方式
本發(fā)明的內容，通過以下的實施例作具體說明實施例1空調空氣濾網灰塵的收集及其塵螨過敏原Der p II和Der fII的提取打開家用分體空調室內進氣口蓋子，輕輕取出空氣濾網，將其放在一張大的干凈的白紙上，用干凈的刷子將濾網上的灰塵刷下，收集并稱量總重量。先將總收集的灰塵研磨，再按每毫克灰塵加入200ulPBS(pH7.4)緩沖液，攪拌30分鐘，將其轉入收集管中，在8℃條件按每分鐘200轉振蕩24小時，按5000g離心20分鐘，收集離心上清，用0.45μm膜過濾除去漂浮物。過濾后液體即為待測樣品。
實施例2吸塵器收集灰塵中塵螨過敏原Der p II和Der fII的提取用帶HEPA濾網的家用吸塵器對室內地面、墻面、床下、床被、家具表面等地方進行吸塵，輕輕取出灰塵收集裝置并將其中的灰塵收集一起稱量其總重量。先將總收集的灰塵研磨，再按每毫克灰塵加入200ul PBS(pH7.4)緩沖液，攪拌30分鐘，將其轉入收集管中，在8℃條件按每分鐘200轉振蕩24小時，按5000g離心20分鐘，收集離心上清，用0.45μm膜過濾除去漂浮物。過濾后液體即為待測樣品。
實施例3空調空氣濾網灰塵提取樣品中Der p II和Der fII含量的測定取實施例1提取的待測樣品100ul進行測定。分別采用Der p II、Der fII單抗包裹納米磁性粒子，與待測樣品結合，再加入堿性磷酸酶標記的Der p II、Der fII多抗，經37℃溫育后形成固相包被抗體-抗原-酶標記二抗復合物。洗滌、分離后加入底物AMPPD作為化學發(fā)光劑，AMPPD在堿性磷酸酶的催化作用下，迅速去磷酸，生產中介體AMPD。AMPD很快分解，從高能激發(fā)狀態(tài)，回到低能量的穩(wěn)定態(tài)，同時發(fā)射光子，這種發(fā)光穩(wěn)定、持續(xù)時間可長達1小時。通過光量子閱讀系統(tǒng)記錄發(fā)光強度，并從標準曲線上計算出待測過敏原Derp II和Der fII的含量。標準曲線繪制采用深圳大學生命科學學院劉志剛教授領導的課題組通過基因工程表達的Der p II和Der fII重組蛋白作標準品。通過灰塵總量分別計算出空調空氣濾網灰塵中塵螨變應原Der p II和Der fII總含量。
實施例4吸塵器收集灰塵提取樣品中Der p II和Der fII含量的測定取實施例2提取的待測樣品100ul進行測定。分別采用Der p II、Der fII單抗包裹納米磁性粒子，與待測樣品結合，再加入堿性磷酸酶標記的Der p II、Der fII多抗，經37℃溫育后形成固相包被抗體-抗原-酶標記二抗復合物。洗滌、分離后加入底物AMPPD作為化學發(fā)光劑，AMPPD在堿性磷酸酶的催化作用下，迅速去磷酸，生產中介體AMPD。AMPD很快分解，從高能激發(fā)狀態(tài)，回到低能量的穩(wěn)定態(tài)，同時發(fā)射光子，這種發(fā)光穩(wěn)定、持續(xù)時間可長達1小時。通過光量子閱讀系統(tǒng)記錄發(fā)光強度，并從標準曲線上計算出待測過敏原Derp II和Der fII的含量。標準曲線繪制采用深圳大學生命科學學院劉志剛教授領導的課題組通過基因工程表達的Der p II和Der fII重組蛋白作標準品。通過灰塵總量分別計算出吸塵器收集灰塵中塵螨變應原Der p II和Der fII總含量。
權利要求
1.一種檢測空調空氣濾網灰塵和吸塵器收集灰塵中塵螨變應原的方法。具體地說通過PBS緩沖液提取收集的灰塵作為檢測樣品。分別采用Der p II、Der f II單抗包裹納米磁性粒子，與待測樣品結合，再加入堿性磷酸酶標記的Der p II、Der f II多抗，經37℃溫育后形成固相包被抗體-抗原-酶標記二抗復合物。洗滌、分離后加入底物AMPPD作為化學發(fā)光劑，AMPPD在堿性磷酸酶的催化作用下，迅速去磷酸，生產中介體AMPD。AMPD很快分解，從高能激發(fā)狀態(tài)，回到低能量的穩(wěn)定態(tài)，同時發(fā)射光子，這種發(fā)光穩(wěn)定、持續(xù)時間可長達1小時。通過光量子閱讀系統(tǒng)記錄發(fā)光強度，并從標準曲線上計算出待測樣品中過敏原Der p II和Der f II的含量。
2.根據權利要求1所述的方法檢測空調空氣濾網灰塵中塵螨變應原Der p II和Der f II含量的方法。
3.根據權利要求1所述的檢測吸塵器收集灰塵中塵螨變應原Derp II和Der f II含量的方法。
4.根據權利要求1和2所述的方法應用于評估空調防治塵螨功效的測試。
5.根據權利要1和3所述的方法應用于評估吸塵器清除室內塵螨功效的測試。
全文摘要
過敏性疾病是由于吸入或接觸各種變應原引起的，其中，屋塵螨和粉塵螨引起的變應疾病約占70％。本發(fā)明運用納米磁性粒子酶聯免疫測定技術檢測空調空氣過濾網灰塵和吸塵器收集灰塵中塵螨變應原的含量。具體地說通過PBS提取收集的灰塵作為檢測樣品。分別采用Der p II、Der fII單抗包裹納米磁性粒子，與待測樣品結合，再加入堿性磷酸酶標記的Der p II、Der fII多抗，經溫育后形成固相包被的復合物。洗滌、分離后加入底物AMPPD作為化學發(fā)光劑，AMPPD在堿性磷酸酶的催化作用下，迅速去磷酸，生產中介體AMPD。AMPD分解后發(fā)射光子。通過閱讀系統(tǒng)記錄發(fā)光強度，并從標準曲線上計算出待測樣品的濃度。
文檔編號G01N33/546GK1614420SQ20041005139
公開日2005年5月11日 申請日期2004年9月9日 優(yōu)先權日2004年9月9日
發(fā)明者劉志剛, 吉坤美, 劉曉宇, 王廣偉, 蔡成郁, 喻海瓊, 高波, 黃志堅, 康敏雄 申請人:深圳大學