專利名稱：三氮唑糖苷、酶化學(xué)法合成方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及三氮唑糖苷、合成方法制備和用途。
背景技術(shù)：
近幾十年來，隨著免疫缺陷患者增多、器官移植和介入性診斷與治療的廣泛 開展、以及抗菌藥物和化療藥物的廣泛應(yīng)用，真菌感染的發(fā)生率正逐年上升。與 此同時，臨床上抗真菌藥物的大量使用，使真菌的耐藥性也迅速發(fā)展。有效的抗 真菌藥物品種，尤其是對系統(tǒng)性真菌感染有效的品種非常有限。目前抗真菌藥物 按結(jié)構(gòu)主要有以下幾類1)多烯類抗真菌抗生素的代表藥物有制霉菌素、兩性 霉素B、甲帕霉素、曲古霉素等，主要用于治療深部真菌感染。2)咪唑類和三 氮唑類。其中，咪唑類抗真菌藥物有克霉唑、咪康唑、益康唑、酮康唑、噻康唑、 布康唑、硫康唑、奧昔康唑和聯(lián)苯芐唑等；三氮唑類抗真菌藥物有氟康唑、伊曲 康唑和特康唑等。3)烯丙胺類抗生真菌藥物代表藥物為萘替芬。相對于抗細(xì)菌 藥物的開發(fā)，新品抗真菌藥物的開發(fā)速度似乎比較緩慢。
據(jù)報道，植物中的70%的有效藥物成分均為糖苷化合物。糖在藥物分子不僅 可以增加水溶性，還可以達(dá)到與藥物靶標(biāo)識別的作用。另外，直鏈醇(C8-C12) 的糖苷具有廣譜的抗菌活性(Matsumura， S.; Imai, K.; Yoshikawa， S.; Kawada, K.; Uchibori， T. J v4肌CW. C/ze附.1990, 67, 996~1001 )。含三氮唑的糖苷兼有糖 苷和三氮唑的結(jié)構(gòu)單元，是很有潛力的抗真菌藥物的先導(dǎo)化合物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的問題是提供一類含三氮唑糖苷化合物，提供上述化合物的制 備和用途。
本發(fā)明提供了一種三氮唑糖苷，其結(jié)構(gòu)式如下所示糖基-o^^K^ 或糖基-0、N、n二
W和R2是任意有機(jī)官能團(tuán)；推薦所述的R1、 R2分別選自芐基、C廣C20 0
的烷基、、 CT 0 v 、苯基、c00Me或雜環(huán)化合物。 n選自從l到10的整數(shù)；k代表l或2。
所述的糖基是單糖基、二糖基。推薦所述的單糖基為葡萄糖基，半乳 糖基或甘露糖基；所述的二糖基為纖維二糖基或乳糖基。
本發(fā)明還提供了上述的三氮唑糖苷的中間體，即含末端炔基或疊氮的糖
苷化合物，其結(jié)構(gòu)式如下所示
糖基-Q，R
其中，R代表三、 R3 、 CH2N3或-PhN3， m代表0 10的整數(shù)，
W代表OH、 Ph或d~C6的垸基，Ph代表苯基、d~C6的垸基取代的苯基或鹵
素取代的苯基，式中糖基、n如前所述。
本發(fā)明提供了一種兩步法合成三氮唑糖苷化合物方法。該方法可采取兩 步法或一鍋法。首先，含炔基和疊氮基的醇在糖苷酶催化下生成糖苷化合物；含 末端炔基/疊氮的糖苷化合物和有機(jī)疊氮/炔在一價銅的催化下加成環(huán)化生成三氮 唑糖苷。
所述的含炔基或疊氮基的醇為, R代表e、 R3 、 CH藥或
-PhN3， m代表0 10的整數(shù)，R3代表OH、 Ph或C廣Q的垸基，Ph代表苯基、
CrQ的烷基取代的苯基或鹵素取代的苯基；所述的含末端炔基或疊氮的糖苷化 :一0"^\懇廿據(jù)其一o
合物為糖基—u \r，推薦糖基—、或糖基—u "n ，所述的糖基為如前 所述的單糖基、二糖基；R如前所述，n如前所述；所述的有機(jī)疊氮或炔為R1—n3、 一r2或r2^^r2 ，式中R， R2如前所述。推薦所述的糖苷酶活力單位與糖與含炔基/疊氮基醇的毫摩爾比為60~600 U:l:2 20，反應(yīng)溫度為15 50°C，反應(yīng)時間4 72小時;所述的含末端炔基或疊 氮的糖苷化合物、有機(jī)疊氮或炔、 一價銅用量摩爾比依次為1:U 2:0.1 0.2，反 應(yīng)溫度為20 100。C，反應(yīng)時間4 24小時。
所述的糖苷酶推薦為葡萄糖苷酶、半乳糖苷酶或甘露糖苷酶。推薦所述的 糖苷酶為桃仁糖苷酶、蘋果種子糖苷酶、巴達(dá)木種子糖苷酶、杏仁糖苷酶或枇杷 種子糖苷酶。
所述的一價銅推薦二價銅與抗壞血酸鈉或銅粉反應(yīng)生成。
所述的反應(yīng)式推薦表示如下
<formula>formula see original document page 7</formula>
其中，單糖為葡萄糖，半乳糖或甘露糖；二糖為纖維二糖或乳糖；糖苷為苯 基葡萄糖苷、對-硝基苯基葡萄糖苷、苯基半乳糖苷、對-硝基苯基半乳糖苷、苯 基甘露糖苷或?qū)ο趸?苯基甘露糖苷。糖苷酶為葡萄糖苷酶、半乳糖苷酶或甘露 糖苷酶。
R'和R2如前所述。
n可以是從I到IO的整數(shù)。
所述的葡萄糖的糖苷化反應(yīng)表示如下
表1葡萄糖苷的合成 力H
<formula>formula see original document page 7</formula>本發(fā)明的糖苷酶系采用桃仁、蘋果種子或巴達(dá)木種子作或枇杷種子為酶源， 經(jīng)破碎、有機(jī)溶劑脫脂后獲得糖苷酶，也可以經(jīng)破碎、水溶性溶劑浸出或提取、 浸出液或提取液經(jīng)濃縮，或者浸出液或提取液經(jīng)透析或柱層析分離后再濃縮制 得。本反應(yīng)的糖苷酶也可以是經(jīng)過桃仁，蘋果破碎，脫脂，丙酮脫水的丙酮干粉。 也可以是從商品購買的糖苷酶(如杏仁糖苷酶)。
該反應(yīng)推薦在有機(jī)溶劑如丙酮、乙腈、叔丁醇、叔戊醇、二氧六環(huán)、四氫呋 喃或乙二醇二乙酯中進(jìn)行，優(yōu)選溶劑為乙腈或叔丁醇。
該反應(yīng)的體系的推薦含水量為5-15% (體積百分比)，優(yōu)選含水量為10%。
該反應(yīng)中的R為含炔基或疊氮的有機(jī)官能團(tuán)。
所述的半乳糖的糖苷化反應(yīng)表示如下
表2.轉(zhuǎn)糖苷化合成半乳糖苷
乳糖+ HO^R，,. a +葡萄糖
3a-31
條目底物產(chǎn)率(％)
1la36
2lb18
3lc17
4ld11
5le21
6lf5
7lg14
8lh16
9li15
10lj12
8
1
2
3
4
6
7
8
9
10
11
12
la lb lc ld le lf
lg lh li
lj lk 11
32
30 17 15
31 12
9 15 39 53
/
35 31 18 16 27 12 12 14 16 45 51 /
淳淳
膚主目主H膚ttl, |&
乙乙乙乙 ^
主目主目旨SB旨力
I l-l 4 I』甲l " T ，vd I l一l " I l一l " 一-lfc^1
乙乙乙乙乙備<formula>formula see original document page 9</formula>
該轉(zhuǎn)糖苷化反應(yīng)在緩沖溶液中進(jìn)行，優(yōu)選緩沖溶液為醋酸鈉-醋酸,20毫摩 爾每升，pH4.5)。該反應(yīng)中的R為含炔基或疊氮的有機(jī)官能團(tuán)。
所述的炔基/疊氮的糖苷化合物和有機(jī)疊氮/炔在一價銅的催化下加成環(huán)化反 應(yīng)表示如下
表3.三氮唑糖苷的合成
r
Glycosyl—0'
,1
! Cu+
N3_R' -Glycosyl'
,N3
N3
力
5 6
其中Glycosyl代表糖基。
條目糖苷疊氮時間(h)產(chǎn)物產(chǎn)率(％)
la441196
266241289
3a33561390
6241485
Glycosyl_0^>^N3Cu+ 'Glycosy卜 R2
-R2
MeOOO
-COOMe
條目糖苷疊氮時間(h)產(chǎn)物產(chǎn)率(％)
2j781595
2k781692
/3k8121795
8C319121886
a硫酸銅，抗壞血酸鈉；A硫酸銅，銅粉；e甲醇，回流。 化合物2a、 3a 、 2j、 2k如實(shí)施例l中所述，3k、 31如實(shí)施例2中所述'
本發(fā)明的三氮唑糖苷可用于制備藥物尤其是抗真菌的藥物。所得的炔基糖苷
9化合物含三氮唑糖苷具有廣譜的抗真菌活性，例如化合物炔基2d， 2f，含三氮 唑糖苷13， 15，和17，具有抑制光滑念珠菌，近平滑念珠菌,熱帶念珠菌，白色 念珠菌，克柔念珠菌，新型隱珠菌等。最低抑菌濃度(MIC)可達(dá)到4微克/毫 升。可用作抗真菌藥物的先導(dǎo)化合物。而且本發(fā)明的制備方法簡便，產(chǎn)物活性好。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1含炔基/疊氮的葡萄糖苷合成
1. 1糖苷酶粉的制備
桃仁或蘋果籽經(jīng)水浸泡2小時，精選完整無霉變的種子，除皮，兩倍體積丙 酮洗去種子表面浮水，在乙酸乙酯的存在下組織粉碎機(jī)粉碎，破碎物用乙酸乙酯 脫脂三次，丙酮脫脂脫水二次。酶粉保存于4。C冰柜儲存?zhèn)溆谩?br> 1.2含炔基/疊氮的葡萄糖苷通用合成方法
25毫升蛋瓶加0.54克葡萄糖溶解，1毫升水溶解，注入5毫升含炔基/疊氮醇， 5毫升乙腈，加0.6克蘋果糖苷酶或桃仁糖苷酶，翻口塞封口，水泵真空，氬氣 球保護(hù)，5(TC下攪拌72小時，硅膠助濾，甲醇洗滌(5毫升X4)，減壓蒸去溶劑， 快速柱層析(乙酸乙酯/甲醇=10/1)，得白色固體或無色糖漿，產(chǎn)率5-55%。
1.3含炔基/疊氮的葡萄糖苷的波譜數(shù)據(jù) 炔丙基/ -葡萄糖苷(2a):
<oh 白色固體；[a產(chǎn)d —91.9 (c 0.66, CH3OH); & NMR (300 MHz,
HO^""^i^0 、 D20) S: 2.92(t， 2.4 Hz， 1H), 3.29 (dd, Jj = 8.1 Hz, /2 = 9.0 Hz, 1H), 3.34-3.53 (m, 4H)， 3.71 (dd, 12.3, 5.7 Hz， 1H)， 3.91 (dd，《/= 12.3， 1.8 Hz， 1H), 4.47 (t, /= 1.8 Hz, 2H), 4.50 ((!， /= 8.1 Hz, 1H); 13C NMR (75 MHz, D20) S 56.6, 60.8, 69.6, 72.9, 75.7, 76.0, 76.4, 78.9， 100.6; MS(ESI) m/z: 241.0 [M+Na+]. 3-炔-丁基/ -葡萄糖苷(2b):
,oh 白色固體;[a]260 —30.0 (c 1.35, CH3OH); & NMR (300
H0^***"^0 固z, d2。) S 2.39 (t， ■/= 2.4 Hz， IH)， 2.56 (dt, /= 6.1， 2.7
Hz, 2H), 3.29 (t, /= 8.4 Hz, 1H), 3.38-3.52 (m, 3H)， 3.69-3.85 (m, 2H), 3.90-4.04 (m,2H), 4.51 (d， /= 7.8 Hz, 1H); 13C NMR (75 MHz, D20) S 19.3， 60.9， 68.3,69.8, 70.6， 73.2, 75.9， 76.1, 82.5， 102.4; HRMS (ESI):計算值(calcd for) Ci0H16O6Na+ (M+Na+) 255.0839;實(shí)測值(found) 255.0839
4- 炔-戊基/ -葡萄糖苷(2c):
<formula>formula see original document page 11</formula> 白色固體；[a]23D — 32.6 (c 0.75， CH3OH);丄H NMR (300
H0^^i^Q \ MHz， CD3OD) 5 1.75 (p， /= 6.9 Hz, 2H), 2.16 (t, ■/= 2.4 Hz, IH), 2.25 (dt， 《/= 9.3, 2.4 Hz, 2H), 3.11 (t, /= 8.4 Hz, IH)， 3.22-3.28 (m， 3H), 3.55-3.64 (m, 2H), 3.81 ((!(!,■/= 18.0， 1.5 Hz， IH), 3.88-3.95 (m， IH)， 4.20 ( /= 8.1 Hz, IH); 13C NMR (75 MHz， CD3OD) S 16.1, 30.3， 63.0， 69.6， 69.9, 71.9, 75.4， 78.1, 75.4， 78.1, 78.3， 85.0, 104.7; HRMS (ESI):計算值(calcd for) CuH1806Na+ (M+Na+) 269.0996;實(shí)測值(found) 269.0998.
5- 炔-己基/ -葡萄糖苷(2d):
<formula>formula see original document page 11</formula> 白色固體；[a]26D —32.9 (c 0.68， CH3OH); !H NMR (300 MHz,
H0^"**^^Q 、 D20) S 1.57-1.66 (m, 2H)， 1.70-1.76 (m, 2H)， 2.20-2.24 (m, 3H)， 3.17 (t, /= 8.1 Hz， IH), 3.27-3.38 (m, 3H), 3.53-3.60 (m， IH), 3.64-3.70 (m， IH), 3.85-3.97 (m， 2H)， 4.25 (d, /= 8.1 Hz, IH); 13C NMR (75 MHz, CD3OD) S 18.8, 26.2, 29.7， 62.7， 69.2， 70.1， 70.6， 75.0, 77.8, 78.0, 84.9， 104.3; HRMS (ESI):計算值 (calcd for) C12H2o06Na+(M+Na+) 283.1152;實(shí)測值(found) 283.1146. 2-炔-4-羥基丁基/ -葡萄糖苷(2e):
<formula>formula see original document page 11</formula> 白色固體；[a]24D —71.5 (c 1.55, CH3OH); ^ NMR (300
ho^^^0 ^^oh MHz, D20) S 3.29 (t, /= 8.1 Hz, IH), 3.39 (t， /= 9.3 Hz, IH), 3.45-3.54 (m, 2H)， 3.72 (dd， /= 12.3, 6.0 Hz， IH), 3.92 (dd， 《/= 12.3, 0.9 Hz,
IH), 4.29 (s, 2H), 4.52 (s, 2H)， 4.64 (d， /= 8.1 Hz, IH); 13C NMR (75 MHz, D2。) S 49.4, 56.6, 60.6, 69.5， 72.8， 75.6， 75.9, 80.2, 85.2, 100.4; HRMS (ESI):計算值 (calcd for) C10H16O7Na+ (M+Na+) 271.0788;實(shí)測值(found) 271.0785. 2-炔-3-苯-丙基/ -葡萄糖苷(2f):<formula>formula see original document page 11</formula> 白色固體；[a]23D — 91.5 (c O.卯，CH3OH); 'H NMR (300
、h
IH), 3.85 (d, /= 9.3 Hz， IH)， 4.49 (d, /= 7.8 Hz, IH), 4.61 (dd， 《/= 16.9, 15.6 Hz:
h。一 、oTT"、h MHz， CD3OD) 5 (dd, / = 9.0, 7.5 Hz， IH), 3.62-3.67 (m,
IH)， 7.26-7.31 (m， 3H)， 7.36-7.40 (m, 2H); 13C NMR (75 MHz, CD3OD) S 57.7, 63.0,71.9, 75.2, 78.3， 85.8, 87.6, 102.7, 124.2, 129.7, 129.9， 132.9; HRMS (ESI):計算值 (calcd for) C15H1806Na+(M+Na+) 317.0091;實(shí)測值(found) 317.0096. 2-炔-丁基/ -葡萄糖苷(2g):
白色固體；[a]23D — 30.1 (c 0.73， CH3OH); !H NMR (300 10^*^^^^ MHz, D20) S 1.78 (s, 3H)， 3.21 (t, J = 2.7 Hz, 1H),
ho'
3.28-3.46 (m, 3H), 3.64 (dd, /= 16.9， 15.6 Hz， IH)， 3.85 (d, /= 12.0 Hz, 1H), 4.35 (s, 2H)， 4.56 (d, (t， /= 8.1 Hz, 1H); & NMR (300 MHz， D20) S 2.5, 57.1, 60.6, 69.5， 72.9， 73.8， 75.7， 75.9， 84.9， 102.2; HRMS (ESI):計算值(calcd for) C10H16O6Na+ (M+Na+) 255.0839;實(shí)測值(found) 255.0839. 2-炔-己基/ -葡萄糖苷(2h):
_^^0 白色固體；[a產(chǎn)d — 26.7 (c 0.95， CH3OH); ^ NMR
H0^*"**^^0^Vc3h7 (300 MHz， CD3OD) S 1.00 (t, /= 7.2 Hz, 3H), 1.47 (m，
ho'
2H), 2.18-1.24 (m, 2H)， 3.20 (dd, /= 9.0， 8.1 Hz， 1H), 3.30-3.40 (m, 3H), 3.64-3.70 (m， 1H), 3.87 (dd， /= 12.3, 1.8 Hz, 1H), 4.41 (dd， /= 4.8, 2.1 Hz, 2H)， 4.47 ((!， / = 7.5 Hz， 1H); 13C NMR (75 MHz, CD3OD) S 13.8, 21.4, 23.1, 57.2, 62.7, 71.6, 74.9, 78.00， 78.02, 87.9， 101.9; HRMS (ESI):計算值(calcd for) C12H20O6Na+ (M+Na+) 283.1152;實(shí)測值(found) 283.1148. 3-炔-己基/ -葡萄糖苷(2i):
,oh c2h5白色固體；[a]23D —21.2 (c 0.83, CH3OH); & NMR
ho^"""""^0 (， MHz， CD3OD) S 1.13 (t, / = 9.0 Hz, 3H)，
2.14-2.20 (m, 2H), 2.48-2.54 (m， 2H)， 3.23 (t, /= 8.4 Hz, 1H), 3.32-3.41 (m, 3H)， 3.67-3.75 (m, 2H), 3.89-3.97 (m， 2H)， 3.35 ((!， /= 8.1 Hz, 1H); 13C NMR (75 MHz, CD3OD) S 13.0, 14.6, 20.8, 62.6， 69.5, 71.4, 74.9. 76.6, 77.80, 77.85, 83.5， 104.2; HRMS (ESI):計算值(calcd for) C12H20O6Na+(M+Na+) 283.1152;實(shí)測值(found) 283.1144.
2-疊氮乙基/ -葡萄糖苷(2j):
,h 無色糖漿；[a產(chǎn)d — 38.9 (c 0.91, CH3OH); !H NMR (300
H0^*^^0 MHz, D20) S 3.30 (dd， 《/= 9.0, 8.1 Hz， IH)， 3.39-3.53 (m,
3H), 3.56 (t， /= 5.1 Hz, 2H), 3.73 (dd, /= 12.3, 5.4 Hz, 1H), 3.84 11.4， 5.1
Hz， 1H), 3.92 (dd, /= 12.3, 2.1 Hz, 1H), 4.06 (dt, /= 11.4, 5.1 Hz, IH)， 4.50 (d， / =8.1 Hz， 1H); 13C NMR (75 MHz， D20) 50.5， 60.7， 68.5, 69.6， 73.1， 75.7， 75.9, 102.3; HRMS (ESI):計算值(calcd for) C8H15N306Na+(M+Na+) 272.0853;實(shí)測值(found) 272.0852.
3-疊氮丙基/ -葡萄糖苷(2k):
,oh 無色糖漿；[a]23D —26.1 (c 1.20, CH3OH); & NMR (300
ho^"^^0/v^n3 mhz， 。2。) S 1.89 (p， /= 6.6 Hz, 2H), 3.25 (dd, /= 8.4, 8.4 Hz， IH)， 3.33-3.50 (m, 6H), 3.66-3.77 (m, 2H)， 3.88-4.00 (m, 2H)， 4.43 (d, /= 8.1 Hz, 1H); 13C NMR (75 MHz, D20) S 28.3, 47.9， 60.8, 67.3, 69.7， 73.2, 75.8, 75.9, 102.3; HRMS (ESI):計算值(calcd for) C9H17N306Na+(M+Na+) 286.1010;實(shí)測值 (found) 286.1008.
實(shí)施例2含炔基/疊氮的半乳糖苷合成
2.1轉(zhuǎn)糖苷化合成半乳糖苷的通用方法
2.5克乳糖溶于5毫升緩沖溶液(醋酸鈉，20mM,pH4.5)加入炔丙醇。體 系中加入0.1克(900 U)米曲霉半乳糖苷酶25 °C室溫攪拌12小時。反應(yīng)液 過濾除去酶和乳糖，濾液真空濃縮的淡黃色糖漿，甲醇溶解，吸附于粗硅膠，柱 層析(乙酸乙酯/甲醇=15~10/1或二氯甲垸/甲醇=5/1)洗脫。得到目標(biāo)化合物 半乳糖苷。
2.1含炔基/疊氮的半乳糖苷的波譜數(shù)據(jù) 2-炔-丙基/ -半乳糖苷(3a):
白色固體；[a]26D — 30.2 (c 0.71， CH30H);111 NMR (300 MHz, D20) S 2.91 (s， 1H)， 3.53 (dd, /= 9.9, 8.1 Hz， 1H), 3.64-3.79
(m, 4H), 3.93 (d, /= 2.7 Hz， 1H), 4.48 (s, 2H), 4.57 (d, ■/= 7.8 Hz， 1H); "C NMR (75 MHz, D20) S 56.4, 60.8， 68.5, 70.4， 72.6， 75.2, 76.2, 78.9, 101.0; MS(ESI) w/z: 241.0 [M+Na+].
3-炔-丁基/ -半乳糖苷(3b):
白色固體；[a]26D — 24.6 (c 0.85, CH3OH);巾NMR (300MHz, D20) S 2.35 (t, /= 2.1 Hz， IH)， 2.53 (dt, /= 6.3， 2.1 Hz, 2H), 3.50 (dd, /= 9.6, 7.8 Hz， IH)， 3.60-3.82 (m, 5H), 3.90 (d， 《/= 3.0 Hz, 1H), 3.95-4.02 (m, 1H), 4.42 (d, / =7.8 Hz, 1H); 13C NMR (75 MHz, D20) S 21.79， 21.82, 63.6, 70.7, 71.3， 73.0, 75.4, 77.8， 105.5; HRMS (ESI):計算值(calcd for) C10H16O6Na+ (M+Na+) 255.0839;實(shí) 測值(found) 255.0834. 4-炔-戊基/ -半乳糖苷(3c): h oh 白色固體；[a]26D —18.5 (c 0.55, CH3OH); & NMR (300
3.50 (dd, /= 9.6, 7.8 Hz, 1H), 3.62-3.70 (m， 2H), 3.73-3.81 (m, 3H)， 3.92 (d, J= 3.3 Hz, IH)， 3.97-4.05 (m, 1H), 4.39 (d， /= 7.8 Hz, 1H); 13C NMR (75 MHz, D20) S 14.2, 27.7, 60.9, 68.6, 68.8， 69.6, 70.8， 72.8, 75.1, 85.1, 102.8; HRMS (ESI):計算值 (calcd for) CuH1806Na+(M+Na+) 269.0982;實(shí)測值(found) 269.0996. 5-炔-己基/ -半乳糖苷(3d): h,oh 白色固體；[a]26D -26.3 (c 0.59, CH3OH); !H NMR (300
2.16-2.21 (m, 3H), 3.41-3.58 (m， 4H), 3.70 (d, </= 1.5 Hz, IH)， 3.76 (dd, /= 24.9, 3.0 Hz, 2H), 3.86-3,94 (m, 1H), 4.18 ((!， /= 7.2 Hz, 1H); 13C NMR (75 MHz, CD3OD) S 19.0, 26.5， 30.0， 62.7， 69.9, 70.4, 70.5, 72.8， 75.3， 76.8, 105.2; HRMS (ESI):計算值 (calcd for) C12H20O6Na+(M+Na+) 283.1152;實(shí)測值(found) 283.1142. 2-炔-4-羥基丁基/ -半乳糖苷(3e): h,oh 白色固體；[a]22D —78.6 (c 0.63, CH30H);!H NMR (300
3.65-3.80 (m, 4H)， 3.93 (d, 3.3 Hz, 1H), 4.30 (s， 2H), 4.53 (s, 2H), 4.58 (d， /= 7.5 Hz, 1H); 13C NMR (75 MHz, D20) S 49.5, 56.7, 60.9， 68.6, 70.6, 72.7, 75.3, 80.4， 85.2, 101.0; HRMS (ESI):計算值(calcd for) C10H16O7Na+ (M+Na+) 271.0788;實(shí) 測值(found) 271.0786. 2-炔-3-苯丙基/ -半乳糖苷(3f):
fhoh O 白色固體；[a產(chǎn)d —104.3 (c 0.31， CHsOH);1!! NMR (300
ho^^T0^^^^^ MHz, D20) S 3.55 (dd， J= 9.6， 7.8 Hz, IH)， 3.63-3.80 (m: 4H), 3.92 (d， /= 3.3 Hz， 1H), 4.63 (d， 《/= 7.2 Hz, 1H), 4.68 (s， 2H), 7.39-7.43 (m,
、MHz, D20) 5 1.84 (p, / = 6.6 Hz， 2H), 2.31-2.37 (m， 3H>
MHz, CD3OD) S 1.54-1.63 (m， 2H), 1.67-1.73 (m， 2H):
0H MHz, D20) S 3.53 (dd，力=7.8 Hz， ^ = 9.6 Hz, 1H):3H), 7.51-7.54 (m， 2H); 13C NMR (75 MHz, D20) S 57.3, 60.9， 68.6， 70.6, 72.8, 75.3， 84.2， 86.9, 101.3, 121.6, 128.6， 129.1, 131.7; HRMS (ESI):計算值(calcd for) C15H1806Na+ (M+Na+) 317.0096;實(shí)測值(found) 317.1010. 2-炔-丁基/ -半乳糖苷(3g):
^^oh o 白色固體；[a]23D ~68.3 (c 0.57， CH3OH); ^ NMR (300 MHz,
HO^^^fO^X^ D20) S 1.79 (t， 《/= 2.4 Hz, 3H)， 3.45-3.49 (m, 3H), 3.68-3.79 (m， 3H), 4.32-4.35 (m, 2H)， 4.37 (d, J= 7.5 Hz， 1H); 13C NMR (75 MHz， CD3OD) S 3.6, 57.9， 62.3， 70.2， 74.7, 75.5, 76.7， 85.0, 102.6; HRMS (ESI):計算值(calcd for) C10H16O6Na+(M+Na+) 255.0839;實(shí)測值(found) 255.0839.
2- 炔-己基/ -半乳糖苷(3h):
白色固體；[a產(chǎn)d "43.5 (c 0.63, CH3OH); & NMR (300 H0^""^T0^VC3H7 MHz， CD3OD) S 0.98 (t， J= 7.2 Hz， 3H), 1.51 (h, /= 7.2
Hz， 2H)， 2.18 (tt， /= 9.0, 2.1 Hz, 2H), 3.43-3.54 (m， 3H), 3.67-3.78 (m, 2H)， 3.81 ((!， /= 7.2 Hz, IH)， 4.38 (dd, /= 4.8, 2.7 Hz， 2H), 4.40 (d, =7.2 Hz, 1H); 13C NMR (75 MHz, CD3OD) S 14.0， 21.7， 23.4， 57.4, 62.8, 70.6， 72.6， 75.3, 76.9, 77.1, 88.1, 102.9; HRMS (ESI):計算值(calcd for) C12H20O6Na+ (M+Na+) 283.1152;實(shí)測值(found) 283.1143.
3- 炔-己基/ -半乳糖苷(3i):
:oh c h白色固體；[a產(chǎn)d —18.1 (c 0.98, CH3OH); & NMR (300
ho^^^T0 固z, CD3OD) S 1.11 (t, /= 7.5 Hz, 3H), 2.12-2.20 (m,
2H), 2.46-2.52 (m， 2H)， 3.51-3.57 (m, 3H), 3.63-3.71 (m, 1H), 3.76-3.79 (m, 2H), 3.86 (d, /= 2.4 Hz， IH)， 3.89-3.95 (m, IH)， 4.28 (d， J= 6.6 Hz， 1H); 13C NMR (75 MHz, CD3OD) 13.0, 14.6, 20.8, 62.4, 69.5, 71.2, 72.4, 74.8， 76.59, 75.65, 83.5， 104.9; HRMS (ESI):計算值(calcd for) C12H2()06Na+(M+Na+) 283.1152;實(shí)測值(found) 283.1142.
2-疊氮乙基/ -半乳糖苷(3j):
oh o 無色糖漿；[a]23D —24.6 (c 0.14， CH3OH); & NMR (300 MHz,
H0^^Sr0^^N3 D20) S 3.49-3.57 (m, 3H)， 3.62-3.72 (m, 2H), 3.76 (d， 3.81-3.86 (m, 2H)， 3.92 (d, /= 3.0 Hz， 1H), 4.02-4.09 (m, 1H), 4.42 (d, /= 7.8 Hz, 1H); 13C NMR (75 MHz, D20) S 50.5, 60.8， 68.3, 68.5, 70.6， 72.6， 75.1, 102.8;HRMS (ESI):計算值(calcd for) C8H15N306Na+(M+Na+) 272.0853;實(shí)測值(found) 272.0858.
3-疊氮丙基/ -半乳糖苷(3k):oh。 無色糖漿；[a]23D —15.9 (c 0.90， CH3OH); !H NMR (300
HO^"^T。 N3 MHz, D20) S: 1.93 (p, / = 6.6 Hz, 2H)， 3.48 (t, / = 6.9 Hz, 2H), 3.52-3.55 (m， IH)， 3.63-3.80 (m, 5H)， 3.94 ((!， /= 3.3 Hz， IH)， 3.98-4.06 (m, IH)， 4.40 (d, ■/= 7.8Hz， 1H); 13C NMR (75 MHz， D20) S: 28.3， 47.9， 60.9, 67.2, 68.6, 70.7, 72.8, 75.1, 102.9; HRMS (ESI):計算值(calcd for) C9H17N306Na+ (M+Na+) 286.1010;實(shí)測值(found) 286.1005. 4-疊氮苯甲基/ -半乳糖苷(31):
(jh oh 黃色固體；[a產(chǎn)D —30.0 (c 1.30， CH3OH); NMR (300
ho^^r0^^(^ MHz, CD3OD) S 3.43-3.58 (m， 3H)， 3.74-3.83 (m, 3H),
N3 4.29 (d, /= 7.5 Hz， IH)， 4.76 ((!(!， /= 77.1, 12.0 Hz， IH)， 7.02 (d， / = 8.4 Hz, 2H), 7.44 (d, / = 8.4 Hz, 2H); 13C NMR (75 MHz, CD3OD) S 62.2, 70.1, 71.1, 72.3， 74.6， 76.5, 103.6, 119.8， 131.0, 135.7, 140.7; HRMS (ESI):計 算值(calcd for) C13H17N306Na+(M+Na+) 334.1010;實(shí)測值(found) 334.1006.
實(shí)施例3含三唑糖苷的合成
3.1合成含三唑糖苷的通用方法
含炔基/疊氮的糖苷(0.5毫摩爾)，有機(jī)疊氮/炔化合物(0.6毫摩爾)，硫酸銅 (9毫克，0.05毫摩爾)抗壞血酸鈉(20毫克，0.1毫摩爾)或銅粉(200毫克) 加到叔丁醇/水(1:1， 4.0毫升)。室溫攪拌4到24小時，柱層析得到含三氮 唑糖苷(洗脫劑乙酸乙酯/甲醇/水=12~8/1/0.2)。 3.2含三唑糖苷的波譜數(shù)據(jù) 11:
,oh 無色糖漿；[a產(chǎn)D -29.4 (c 2.30， CH3OH); & NMR
HO^^i^0 一 (300 MHz, CD3OD) S 3.15 (t, /= 7.8 Hz， IH)，
3.23-3.28 (m， 4H), 3.62 (dd， J= 11.7, 4.8 Hz， IH)， 3.83 (d, /= 11.7, 1H), 4.32 (d, / =8.1 Hz， 1H)， 4.72 (d， 《/= 12.3 Hz， 1H)， 4.92 ((!， /= 12.3 Hz， 1H)， 7.26-7.37 (m, 5H)，7.97 (s， IH); 13C NMR (75 MHz， CD3OD) S 54.9， 62.7， 63.0, 71.6, 75.0, 77.8, 78.0,103.6， 125.3, 129.1, 129.6， 130.0, 136.7, 146.1; HRMS (ESI):計算值(calcd for)C16H21N306Na+(M+Na+) 374.1323;實(shí)測值(found) 374.1325.12:
HzOH ？c12h25白色固體；[a]25D — 24.6 (c 1.20， CH3OH); & NMR
H0^^i^0 n-n (300 MHz, CD3OD) S 0.85 (t, / = 6.6 Hz, 3H),
I. 23-1.27 (m, 18H), 1.84 (p, J= 6.6 Hz, 3H), 3.26 (W= 6.6 Hz, 2H)， 3.41 (dd， / =9.6， 3.0 Hz, IH), 3.47-3.53 (m, 2H), 3.65-3.75 (m, 2H), 3.78 ((!， /= 3.0 Hz, IH), 4.28(d, /= 7.5 Hz, IH), 4.34 (t， /= 7.2 Hz， 2H)， 4.82 (dd， 《/= 27.6, 12.6 Hz, 2H), 7.96 (s,IH); 13C NMR (75 MHz, CD3OD) S 14.7, 24.0, 27.7， 30.4， 30.7， 30.8， 30.9, 31.0， 31.5,33.3, 51.6， 62.8, 63.3, 70.6， 72.7, 75.1， 77.1, 104.5, 125.5, 146.0; HRMS (ESI):計算值(calcd for)C2iH39N306Na+(M+Na+) 452.2731;實(shí)測值(found) 452.2728;
13:
,oh 無色糖漿；[a]25D - 35.6 (c 1.05, CH3OH); NMR
H0^"*"^Q (300 MHz, CD3OD) S 1.83 (s， 6H), 2.25 (s, 9H)，
3.19-3.25 (m， IH), 3.28-3.38 (m, 3H)， 3.67 ((!(!, /= 12.0, 5.4 Hz, IH), 3.90 ((!, / =
II. 4 Hz, IH), 4.38 (d，J= 7.8 Hz, IH), 4.77 ((!， /= 12.3 Hz, IH), 4.96 (d, J = 12.3 Hz，IH), 8.12 (s, IH); 13C NMR (75 MHz, CD3OD) S 30.9， 36.9, 43.9, 61.1， 62.8， 63.2,71.6， 75.0, 77.9, 78.0, 103.6， 122.0, 144.9; HRMS (ESI):計算值(calcd for)C19H29N306Na+(M+Na+) 418.1949;實(shí)測值(found) 418.1947.
14:
:oh 白色固體；[a產(chǎn)d —18.6 (c 0.95, CH3OH);力NMR
h《S,
ho^*^0 VN ^\ (300 MHz, CD3OD) S 1.84 (s, 6H)， 2.25 (s， 9H)， 3.47(dd, /= 9.6, 3.3 Hz, IH)， 3.52-3.58 (m, 2H)， 3.73-3.80 (m, 2H), 3.83 (d， /= 3.0 Hz,IH)， 4.33 8.1 Hz, IH)， 4.78 (d， /= 12.0 Hz, IH), 4.96 (d, 12.0 Hz, IH),
8.12 (s， IH); 13C NMR (75 MHz, CD3OD) S 29.6， 35.5, 42.5, 59.7， 61.2， 61.8, 68.9,71.0, 73.4， 75.4， 102.9, 120.6; HRMS (ESI):計算值(calcd for) C19H29N306Na+(M+Na+) 418.1949;實(shí)測值(found) 418.1945.15:
17<oh n-n 無色糖漿；[a]25D — 33.2 (c 1.10， CH3OH); ^
ho"^^^T0 固R (300 MHz, CD3OD) S 3.20 (t, IH),
3.28-3.35 (m, 3H), 3.65 (dd, J= 12.0， 5.1 Hz, IH)， 3.86 (dd, /= 12.0, 1.2 Hz， IH)，
4.02- 4.08 (m, IH)， 4.26-4.32 (m, IH), 4.33 (d， /= 7.5 Hz， IH)， 4.69 (t, /= 5.1 Hz，2H), 7.30-7.35 (m, IH), 7.29-7.44 (m， 2H), 7.80-7.83 (m, 2H), 8.45 (s, IH); 13C NMR(75 MHz， CD3OD) 5 50.6, 61.5， 67.9， 70.3, 73.8, 76.8, 76.9, 103.4, 122.3, 125.5,128.2, 128.8， 130.6， 147.5; HRMS (ESI):計算值(calcd for) C16H21N306Na+(M+Na+) 374.1323;實(shí)測值(found) 374.1318.
16:
/^^o 白色固體；[a產(chǎn)D —26.3 (c 1.20, CH3OH); ^
HO^-^fO^^VNj^j^畫R (300 MHz, CD3OD) S 3.47-3.59 (m, 3H),
Q Q 3.70-3.82 (m, 2H), 3.85 (d, / = 3.0 Hz, IH),
4.03- 4.11 (m， IH), 4.26-4.33 (m, 2H)， 4.74 (t, /= 5.4 Hz， 2H), 5.44 (s, 2H)， 6.07-6.08(m， IH), 7.35-7.38 (m, 2H), 7.61-7.67 (m, IH)， 7.83-7,88 (m, IH)， 8.42 (s， IH); 13CNMR (75 MHz， DMSO) S 55.1, 65.6, 68.0, 72.4， 73.2， 73.2， 75.5, 78.3， 80.5， 96.4，108.7， 120.2， 121.5, 128.1, 129.4， 131.2， 137.9， 145.9, 157.9， 166.8, 169.6; HRMS(ESI):計算值(calcd for) C20H23N3O9Na+ (M+Na+) 472.1327;實(shí)測值(found)472.1331.
17:
ho^<^o ^ 白色固體；[a產(chǎn)o — 30.8 (c 1.25, CH3OH); &
oh 、n-n NMR (300 MHz, CD3OD) S 2.24 (p, / = 6.3
0" 、"Hz， 2H), 3.24-3.34 (m, 3H), 3.43 (t， /= 9.0Hz, IH), 3.54-3.62 (m， IH), 3.66-3.74 (m, IH), 3.88-3.97 (m， 2H), 4.31 (d, /= 8.1 Hz,IH), 4.65 (t， /= 6.6 Hz， 2H), 5.42 (s, 2H), 6.02 (s， IH)， 7.25-7.30 (m, 2H), 7.55-7.61(m, IH), 7.75 (dd， /= 7.8 1.5 Hz, IH), 8.36 (s， IH); 13C NMR (75 MHz， CD3OD) 531.4, 62.7, 63.7, 66.8， 71.5, 75.0, 77.90, 77.95， 91.8, 104.3， 116.6， 117.5， 124.2， 125.5，126.9, 133.9， 142.5, 154.4, 164.8, 166.8; HRMS (ESI):計算值(calcd for)C21H25N309Na+(M+Na+) 486.1483;實(shí)測值(found) 486.1479.18:白色固體；[a產(chǎn)D 41.3 (c 1.10， CH3OH); &
COOMeN-N
雨R (300 MHz, CD3OD) S 3.46-3.65 (m, 3H>
3.75-3.81 (m, 2H), 3.85 (d, J = 3.3 Hz， 1H):
3.87 (s, 3H)， 3.95 (s， 3H), 4.36 (d, /= 8.1 Hz, IH)， 4.79 (d, /= 12.6 Hz， IH)， 5.04 (d, /= 12.6 Hz， 1H), 7.54 ((!， /= 8.7 Hz， 2H), 7.67 (d, J= 8.7 Hz， 2H); 13C NMR (75MHz, CD3OD) S 53.2, 54.4， 62.5， 70.3， 70.6， 72.5, 74.9, 76.8, 104.3, 125.3, 130.0，133.8, 135.9, 139.5， 142.7, 160.5, 161.4; HRMS (ESI):計算值(calcd for)C21H39N306H+(M+H+) 454.1456;實(shí)測值(found) 454.1462.
含炔基/疊氮醇的糖苷化按照實(shí)施例1或2描述。反應(yīng)完成后，硅膠助濾，甲醇洗，濾液減壓蒸去溶劑得淡黃色糖漿。所得的糖漿加入叔丁醇/水(1:1， 4.0毫升)溶解，加入有機(jī)疊氮/炔(1.5當(dāng)量，根據(jù)糖苷化反應(yīng)的產(chǎn)率估算)，硫酸銅(0.1當(dāng)量，根據(jù)糖苷化反應(yīng)的產(chǎn)率估算)銅粉(0.2當(dāng)量，根據(jù)糖苷化反應(yīng)的產(chǎn)率估算)，和室溫攪拌4-24小時。溶液硅膠助濾，濾液減壓蒸去溶劑，柱層析(洗脫劑乙酸乙酯/甲醇/水=12-8/1/0.2)得到目標(biāo)產(chǎn)物。
實(shí)施例4類一鍋法合成含三唑糖苷
19
權(quán)利要求
1. 一種三氮唑糖苷，其結(jié)構(gòu)式如下所示R1和R2是分別選自芐基、C1～C20的烷基、苯基、COOMe或雜環(huán)化合物；n選自從1到10的整數(shù)；k代表1或2；所述的糖基是單糖基或二糖基；所述的雜環(huán)化合物是吡啶、呋喃或噻吩。
2.如權(quán)利要求1所述的三氮唑糖苷，其特征是所述的單糖基為葡萄糖基，半乳 糖基或甘露糖基；所述的二糖基為纖維二糖基或乳糖基。如權(quán)利要求1所述的三氮唑糖苷的制備方法，其特征是采用兩步法或一鍋法， 在15 5(TC溫度下和有機(jī)溶劑中，由糖和含炔基或疊氮基的醇在糖苷酶催化 下發(fā)生糖苷化反應(yīng)4 72小時生成含末端炔基的糖苷化合物或疊氮的糖苷化 合物，所述的糖苷酶活力單位與糖與含炔基/疊氮基醇的毫摩爾比為60~600 U:l:2 20;上述反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)分離或未分離的含末端炔基的糖苷化合物或疊氮 的糖苷化合物、有機(jī)疊氮或炔在20 10(TC下和有機(jī)溶劑中、和一價銅的催 化下加成環(huán)化反應(yīng)4 24小時，生成如權(quán)利要求1所述的三氮唑糖苷；所述 的含末端炔基的糖苷化合物或疊氮的糖苷化合物、有機(jī)疊氮或炔、 一價銅的 摩爾比依次為1:1.1 2:0.1 0.2;
3.所述的含炔基或疊氮基的醇為HO^R ，所述的含末端炔基的糖苷化合n，物或疊氮的糖苷化合物為糖 人R，R代表三、 RS、CH2N3或 -PhN3; m代表0 10的整數(shù)；R3代表OH、 Ph或C廣Q的垸基；Ph代表苯基、Q~C6的烷基取代的苯基或鹵素取代的苯基；所述的有機(jī)疊氮或炔為 R1_N3、 一R2或R2^^R2;所述的糖基、n、 R'和R2如權(quán)利要求1所述；所述的糖為單糖、二糖或糖苷。
4. 如權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征是所述的單糖為葡萄糖，半乳糖或甘 露糖；二糖為纖維二糖或乳糖；糖苷為苯基葡萄糖苷、對-硝基苯基葡萄糖苷、 苯基半乳糖苷、對-硝基苯基半乳糖苷、苯基甘露糖苷或?qū)ο趸?苯基甘露糖 苷；糖苷酶為葡萄糖苷酶、半乳糖苷酶或甘露糖苷酶。
5. 如權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征是所述的糖苷酶為葡萄糖苷酶、半乳 糖苷酶或甘露糖苷酶。
6. 如權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征是所述的糖苷酶系桃仁糖苷酶、蘋果 種子糖苷酶、巴達(dá)木種子糖苷酶、杏仁糖苷酶或枇杷種子糖苷酶。
7. 如權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征是所述的糖苷酶系采用桃仁、蘋果種 子或巴達(dá)木種子或枇杷種子作為酶源，經(jīng)破碎、有機(jī)溶劑脫脂后獲得糖苷酶； 或經(jīng)破碎、水溶性溶劑浸出或提取、浸出液或提取液經(jīng)濃縮，或者浸出液或 提取液經(jīng)透析或柱層析分離后再濃縮制得；或者是經(jīng)過桃仁或蘋果籽破碎， 脫脂，丙酮脫水獲得丙酮干粉；或者是從商品購買的上述糖苷酶或杏仁糖苷 酶。
8. 如權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征是所述的有機(jī)溶劑是丙酮、乙腈、叔 丁醇、叔戊醇、二氧六環(huán)、四氫呋喃或乙二醇二乙酯。
9. 如權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征是所述的反應(yīng)為葡萄糖糖苷酶催化反 應(yīng)時，反應(yīng)的體系中含水量體積百分比為5-15%。
10. 如權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征是當(dāng)所述的糖為半乳糖時，所述的糖 苷化反應(yīng)，采用的糖為半乳糖時，該反應(yīng)在pH4.5的緩沖溶液中進(jìn)行。
11.如權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征是所述的含炔基或疊氮基的醇為:<formula>formula see original document page 4</formula>
12. —種如權(quán)利要求1所述的三氮唑糖苷用于制備抗真菌的藥物。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種三氮唑糖苷及其合成方法和用途。本發(fā)明提供的三氮唑糖苷系采用兩步法或一鍋法合成由糖和含炔基或疊氮基的醇在糖苷酶催化下發(fā)生糖苷化反應(yīng)生成含末端炔基或疊氮的糖苷化合物；含末端炔基或疊氮的糖苷化合物和有機(jī)疊氮或炔在一價銅的催化下加成環(huán)化生成目標(biāo)產(chǎn)物三氮唑糖苷。本發(fā)明的三氮唑糖苷可用于制備藥物尤其是抗真菌的藥物。
文檔編號C12P19/58GK101531691SQ20091004910
公開日2009年9月16日 申請日期2009年4月10日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月10日
發(fā)明者盧文芽, 林國強(qiáng) 申請人:中國科學(xué)院上海有機(jī)化學(xué)研究所