專利名稱：：一種氯霉素分子印跡聚合物固相萃取柱及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種氯霉素萃取柱及其制備方法。
背景技術(shù)：
：氯霉素(Chlommphenicol,CAP)是一種殺菌力極強的廣譜抗生素，因其優(yōu)良的抗菌性、穩(wěn)定的藥性、低廉的價格，而被廣泛作為詞料添加劑用于治療細菌性疾病。但研究發(fā)現(xiàn)CAP對骨髓和新生兒有較大的毒性，易引起人體血中毒，導(dǎo)致不可逆的再生障礙性貧血等嚴重的毒副作用，對人類的健康構(gòu)成巨大的潛在威脅。因此，歐盟、美國均在法規(guī)中規(guī)定CAP的殘留限量標準為"零容許量"。我國農(nóng)業(yè)部規(guī)定CAP及其鹽、脂等在食用動物的所有可食組織中不得檢出。目前痕量CAP檢測的確證方法(如微生物法、免疫分析法、色譜法、色譜質(zhì)譜聯(lián)用法、超臨界流體色譜法等)已經(jīng)比較成熟；但由于樣品中CAP殘留濃度低，基體成分復(fù)雜，加之常規(guī)樣品前處理方法步驟繁瑣、檢出率低，嚴重限制了常規(guī)快速檢測方法和儀器分析方法對樣品中CAP殘留的有效檢
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是為了解決目前氯霉素檢測中樣品前處理方法步驟繁瑣、檢出率低，導(dǎo)致樣品中殘留的低濃度CAP不能有效檢出的問題，而提供的一種氯霉素分子印跡聚合物固相萃取柱及其制備方法。本發(fā)明氯霉素分子印跡聚合物固相萃取柱以氯霉素分子印跡聚合物作為固相萃取柱填料，氯霉素分子印跡聚合物由lmmol的氯霉素、2mmo1的甲基丙烯酸二乙氨基乙酯、5mL的四氫呋喃、26mmol的乙二醇二甲基丙烯酸酯、40.0mg的偶氮二乙丁腈制成。上述氯霉素分子印跡聚合物固相萃取柱按以下步驟制備一、將lmmol氯霉素和2mmo1甲基丙烯酸二乙氨基乙酯溶于5mL的四氫呋喃，然后在震蕩頻率為100120Hz的條件下震蕩預(yù)作用0.5h，然后加入26mmo1的乙二醇二甲基丙烯酸酯和40.0mg的偶氮二乙丁腈混勻；二、對步驟一獲得的液體進行超聲處理，再充入氮氣除氧，然后密封置于60"環(huán)境中恒溫加熱48±0.211，制備氯霉素分子印跡聚合物；三、冷卻至室溫，然后將步驟二制備的氯霉素分子印跡聚合物取出研磨；四、將經(jīng)過研磨的氯霉素分子印跡聚合物粉末置于索氏提取器中，用甲醇洗脫游離的氯霉素，至洗脫液中無氯霉素檢出；五、干燥氯霉素分子印跡聚合物粉末，然后均勻裝填于固相萃取柱中，即得到氯霉素分子印跡聚合物固相萃取柱。本發(fā)明氯霉素分子印跡聚合物固相萃取柱的填料(氯霉素分子印跡聚合物)是以氯霉素(CAP)為模板、甲基丙烯酸二乙氨基乙酯(DEAEM)為功能單體、四氫呋喃為溶劑、偶氮二乙丁腈(AIBN)為引發(fā)劑、乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)為交聯(lián)劑。本發(fā)明氯霉素分子印跡聚合物固相萃取柱的填料(氯霉素分子印跡聚合物)對氯霉素具有高特異性吸附能力，因此對樣品中殘留的低濃度氯霉素仍具有優(yōu)異的吸附率(94.5%105.2%)和高吸附量(最高吸附量為4670pg/g)。本發(fā)明氯霉素分子印跡聚合物固相萃取柱的填料對氯霉素的衍生物(氯霉素的鹽及氯霉素脂)具有與氯霉素同樣的吸附效果。本發(fā)明氯霉素分子印跡聚合物固相萃取柱的制備方法中填料(氯霉素分子印跡聚合物)采用本體聚合法合成。本發(fā)明氯霉素分子印跡聚合物固相萃取柱的填料(氯霉素分子印跡聚合物)以甲基丙烯酸二乙氨基乙酯做為功能單體，采用本體聚合法制備氯霉素分子印跡聚合物，具有吸附特異性和高效性，解決了目前固相萃取柱吸附普遍性和洗脫復(fù)雜性的缺點，集分子印跡聚合物和固相萃取柱的優(yōu)點為一身。采用本發(fā)明制備的氯霉素分子印跡聚合物固相萃取柱進行樣品前處理，具有步驟簡單，分離、富集、凈化效果好的優(yōu)點，方便快捷。而且，采用本發(fā)明制備的氯霉素分子印跡聚合物固相萃取柱進行樣品前處理還具有有機溶劑使用量少的特點，復(fù)合當前環(huán)保的要求。圖1是具體實施方式一中氯霉素分子印跡聚合物的掃描電鏡顯微照片；圖2是具體實施方式六中加入氯霉素待測樣品的檢測結(jié)果圖；圖3是具體實施方式六中加入氟甲砜霉素或甲砜霉素待測樣品的檢測結(jié)果圖，其中、"曲線表示氟甲砜霉素檢測結(jié)果，"令"曲線表示甲砜霉檢測結(jié)果。具體實施例方式本發(fā)明技術(shù)方案不局限于以下所列舉具體實施方式，還包括各具體實施方式間的任意組合。具體實施方式一本實施方式氯霉素分子印跡聚合物固相萃取柱以氯霉素分子印跡聚合物作為固相萃取柱填料，氯霉素分子印跡聚合物由lmmol的氯霉素、2mmol的甲基丙烯酸二乙氨基乙酯、5mL的四氫呋喃、26mmo1的乙二醇二甲基丙烯酸酯、40.0mg的偶氮二乙丁腈制成。本實施方式中氯霉素分子印跡聚合物對氯霉素和氯霉素衍生物具有高特異性吸附能力，對樣品中殘留的低濃度氯霉素具有優(yōu)異的吸附率(吸附率為94.5%105.2%)和高吸附量(氯霉素最高吸附量為4670jxg/g)。由于目前的固相萃取法常用的吸附劑存在選擇性差的問題，所以在富集分析物的同時大量基體和干擾物質(zhì)也被富集，導(dǎo)致洗脫液中仍含有基體和雜質(zhì)，干擾最后的色譜分析。本實施方式中的氯霉素分子印跡聚合物是具有較強分子識別能力的新型高分子仿生材料，具有預(yù)定性、識別性和實用性等特點，所以具有優(yōu)異的吸附特異性。本實施方式中氯霉素分子印跡聚合物的掃描電鏡顯微照片如圖1所示。具體實施方式二本實施方式氯霉素分子印跡聚合物固相萃取柱按以下步驟制備一、將lmmol氯霉素和2mmo1甲基丙烯酸二乙氨基乙酯溶于5mL的四氫呋喃，然后在震蕩頻率為100120Hz的條件下震蕩預(yù)作用0.5h,然后加入26mmo1的乙二醇二甲基丙烯酸酯和40.0mg的偶氮二乙丁腈混勻；二、對步驟一獲得的液體進行超聲處理，再充入氮氣除氧，然后密封置于6(TC環(huán)境中恒溫加熱48士0.2h，制備氯霉素分子印跡聚合物；三、冷卻至室溫，然后將步驟二制備的氯霉素分子印跡聚合物取出研磨；四、將經(jīng)過研磨的氯霉素分子印跡聚合物粉末置于索氏提取器中，用甲醇洗脫游離的氯霉素，至洗脫液中無氯霉素檢出；五、干燥氯霉素分子印跡聚合物粉末，然后均勻裝填于固相萃取柱中，即得到氯霉素分子印跡聚合物固相萃取柱。本實施方式中作為模板分子的氯霉素分子可以回收利用，減少了生產(chǎn)成本。采用本發(fā)明制備的氯霉素分子印跡聚合物固相萃取柱進行樣品前處理，具有步驟簡單，分離、富集、凈化效果好的優(yōu)點，方便快捷。具體實施方式三本實施方式與具體實施方式二的不同點是步驟二中超聲處理的頻率為40KHz、超聲功率為150W、超聲處時間為10min。其它步驟及參數(shù)與實施方式二相同。具體實施方式四本實施方式與具體實施方式二或三的不同點是步驟三中將步驟二制備的高聚物研磨成粒徑〈88Hm的顆粒。其它步驟及參數(shù)與實施方式二或三相同。具體實施方式五本實施方式與具體實施方式二的不同點是步驟四中用高效液相色譜檢測洗脫液。其它步驟及參數(shù)與實施方式二相同。具體實施方式六本實施方式用具體實施方式二制備出的氯霉素分子印跡聚合物固相萃取柱進行牛乳樣品預(yù)處理a、向100mL牛乳中加入2mL質(zhì)量濃度為10%的高氯酸，混勻后以3500r/min的轉(zhuǎn)速離心10min;b、棄去脂肪層，精密移取上清液lOmL加入具體實施方式二制備出的氯霉素分子印跡聚合物固相萃取柱；c、用2ml質(zhì)量濃度為40%的甲醇分別洗脫2次，收集甲醇洗脫液用溫度為60'C的氮氣吹干，然后采用高效液相色譜檢測氯霉素。對比試驗l:在3組空白樣品(不含氯霉素、氟甲砜霉素或甲砜霉素)中分別加入氯霉素、氟甲砜霉素、甲砜霉素，保證待測樣品中試劑(氯霉素、氟甲砜霉素、甲砜霉素)的濃度都為l|ig/mL;采用本實施方式方法進行檢測，加入氯霉素待測樣品的檢測結(jié)果如圖2所示，加入氟甲砜霉素或甲砜霉素待測樣品的檢測結(jié)果如圖3所示。雖然氟甲砜霉素和甲砜霉素都是氯霉素的類似物，但是對比檢測結(jié)果有著巨大差別，達到吸附平衡時氯霉素吸附量為165pg/g、氟甲砜霉素吸附量平均為1.44pg/g、甲砜霉素吸附量平均為1.44pg/g，說明具體實施方式二制備出的氯霉素分子印跡聚合物固相萃取柱具有明顯的吸附特異性。對比試驗2:在2組空白樣品中加入相伺劑量的氯霉素，待測樣品中氯霉素的濃度均為lpg/mL，分別采用具體實施方式二制備出的氯霉素分子印跡聚合物固相萃取柱和非印跡聚合物固相萃取柱進行進行檢測，檢測結(jié)果如表1所示。6<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>表1中的檢測數(shù)據(jù)說明具體實施方式二制備出的氯霉素分子印跡聚合物固相萃取柱具有吸附率高、吸附量大的優(yōu)點。權(quán)利要求1、一種氯霉素分子印跡聚合物固相萃取柱、其特征在于氯霉素分子印跡聚合物固相萃取柱以氯霉素分子印跡聚合物作為固相萃取柱填料，氯霉素分子印跡聚合物由1mmol的氯霉素、2mmol的甲基丙烯酸二乙氨基乙酯、5mL的四氫呋喃、26mmol的乙二醇二甲基丙烯酸酯、40.0mg的偶氮二乙丁腈制成。2、如權(quán)利要求1所述氯霉素分子印跡聚合物固相萃取柱的制備方法，其特征在于氯霉素分子印跡聚合物固相萃取柱按以下步驟制備一、將lmmol氯霉素和2mmo1甲基丙烯酸二乙氨基乙酯溶于5mL的四氫呋喃，然后在震蕩頻率為100120Hz的條件下震蕩預(yù)作用0.5h，然后加入26mmo1的乙二醇二甲基丙烯酸酯和40.0mg的偶氮二乙丁腈混勻；二、對步驟一獲得的液體進行超聲處理，再充入氮氣除氧，然后密封置于60°。環(huán)境中恒溫加熱48±0.211，制備氯霉素分子印跡聚合物；三、冷卻至室溫，然后將步驟二制備的氯霉素分子印跡聚合物取出研磨；四、將經(jīng)過研磨的氯霉素分子印跡聚合物粉末置于索氏提取器中，用甲醇洗脫游離的氯霉素，至洗脫液中無氯霉素檢出；五、干燥氯霉素分子印跡聚合物粉末，然后均勻裝填于固相萃取柱中，即得到氯霉素分子印跡聚合物固相萃取柱。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的氯霉素分子印跡聚合物固相萃取柱的制備方法，其特征在于步驟二中超聲處理的頻率為40KHz、超聲功率為150W條件下超聲處理10min。4、根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的氯霉素分子印跡聚合物固相萃取柱的制備方法，其特征在于步驟三中將步驟二制備的高聚物研磨成粒徑<88拜的顆粒。5、根據(jù)權(quán)利要求2所述的氯霉素分子印跡聚合物固相萃取柱的制備方法，其特征在于步驟四中用高效液相色譜檢測洗脫液。全文摘要一種氯霉素分子印跡聚合物固相萃取柱及其制備方法，它涉及一種氯霉素萃取柱及其制備方法。它為了解決目前氯霉素檢測中樣品前處理方法步驟繁瑣、檢出率低，導(dǎo)致樣品中殘留的低濃度CAP不能有效檢出的問題。氯霉素分子印跡聚合物固相萃取柱以氯霉素分子印跡聚合物作為固相萃取柱填料。制備方法一、CAP與DEAEM預(yù)作用，再加入EGDMA和AIBN混勻；二、制氯霉素分子印跡聚合物；三、冷卻、研磨；四、甲醇洗脫；五、干燥裝柱。本發(fā)明氯霉素分子印跡聚合物固相萃取柱的填料對氯霉素具有高特異性吸附能力，對樣品中殘留的低濃度氯霉素仍具有優(yōu)異的吸附率和高吸附量。采用本發(fā)明制備的氯霉素分子印跡聚合物固相萃取柱進行樣品前處理，步驟簡單，分離、富集、凈化效果好，方便快捷。文檔編號B01J20/285GK101564681SQ200910072168公開日2009年10月28日申請日期2009年6月3日優(yōu)先權(quán)日2009年6月3日發(fā)明者佘永新,靜王,王培龍,王榮艷申請人:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標準與檢測技術(shù)研究所