固定化芽孢桿菌對克百威污染土壤的修復方法
【技術領域】：
[0001] 本發(fā)明涉及固定化芽孢桿菌對克百威污染土壤的修復方法，屬于土壤修復領域。
【背景技術】：
[0002] 芽孢桿菌（Bacillaceae)是能形成（內生孢子）的桿菌或球菌。在孢子狀態(tài)下 穩(wěn)定性好，能耐氧化，耐擠壓，耐高溫，耐酸堿，繁殖速度快，抵抗力強，分布廣，存在于土壤、 水、空氣及動物腸道等處。芽孢桿菌的有機分解力強，增殖的同時會釋放出高活性的分解酵 素，將難分解的大分子物質分解成可利用的小分子物質；且可以產(chǎn)生豐富的代謝生成物，可 以合成多種有機酸、酶、生理活性等物質及其它多種被利用的養(yǎng)分。芽孢桿菌在固定化技術 領域有著重要的應用價值。
[0003] 與直接利用微生物處理污染物相比：固定化芽孢桿菌桿菌擁有以下優(yōu)點：①降解 效率高。②適應性強。固定化芽孢桿菌可以在較寬的溫度、pH、污染物初始濃度及鹽濃度范 圍內處理污染物，一般微生物僅適合處理較低濃度的污染物。③毒性小，易操作。固定化芽 孢桿菌的反應產(chǎn)物在環(huán)境中及易進一步被生物分解，且對環(huán)境友好。④可反復使用。微生 物一般降解一次后降解效果會降低或失去降解能力，但固定化芽孢桿菌可進行多次降解， 效果仍比較好。

【發(fā)明內容】
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[0004] 發(fā)明目的：
[0005] 本發(fā)明涉及一種固定化芽孢桿菌對克百威污染土壤的修復方法，其目的是利用固 定化芽孢桿菌來降解土壤中的克百威，通過兩種不同固定化芽孢桿菌的方法，探求在不同 的溫度，不同的PH和不同的鹽度條件下，來考查污染物的降解效果。
[0006] 技術方案：
[0007] -種固定化芽孢桿菌對克百威污染土壤的修復方法，其特征在于：具體步驟如下： 將固定化芽孢桿菌用于克百威污染土壤進行修復；土壤采用泥漿，水土比為3:1，溶液部分 為pH=7的細菌培養(yǎng)液，克百威污染物的初始濃度為IOOmg · I71 ;固定化蠟狀芽孢桿菌投入 土壤中的量3g/100ml，溫度為15~35°C，pH值為5~10,時間為72h。
[0008] 對蠟狀芽孢桿菌固定的方法如下：
[0009] 載體為：10. 0%的聚乙烯醇、1. 0%的海藻酸鈉或10. 0%的聚乙烯醇、1. 0%的海藻酸 鈉和0. 3%的高嶺土；交聯(lián)劑為：6%的硼酸，1%的氯化鈣和1%的氯化鐵，先包埋后交聯(lián)的固 定化方法。
[0010] 載體為10. 〇%的聚乙烯醇和1. 〇%的海藻酸鈉時，先包埋后交聯(lián)的固定化方法，具 體操作是：
[0011] 準確稱取10.0 Og聚乙烯醇，1.0 Og海藻酸鈉，放置在IOOmL的燒杯中，加入60mL的 蒸餾水；另外準備一個2000mL的錐形瓶，加入300mL蒸餾水和6%硼酸，1%氯化鈣，1%氯化 鐵；將裝有載體的燒杯與交聯(lián)劑的錐形瓶在ll〇°C，I. 01325*105Pa條件下滅菌30分鐘，待 溫度下降至40°C左右；再在IOOmL燒杯中加入20mL菌液，輕輕地沿同一個方向均勻攪拌， 加無菌水至IOOmL刻度線；將液體通過滅菌后的制粒器流入裝有交聯(lián)劑2000mL的錐形瓶 中，制成直徑為4. Omm的固定化小球；交聯(lián)24h，然后在滅菌后裝有10%的硫酸鈉溶液中固 定24h，再增殖三次備用；取固定化蠟狀芽孢桿菌小球放入含有克百威的泥漿中，降解。
[0012] 載體為10. 0%的聚乙烯醇、1. 0%的海藻酸鈉和0. 30g高嶺土時，先包埋后交聯(lián)的固 定化方法，具體操作是：
[0013] 準確稱取10.0 Og聚乙烯醇，1.0 Og海藻酸鈉，0. 30g高嶺土，放置在IOOmL的燒杯 中，加入60mL的蒸餾水；另外準備一個2000mL的錐形瓶，加入300mL蒸餾水和6%硼酸，1% 氯化鈣，1%氯化鐵；將裝有載體的燒杯與交聯(lián)劑的錐形瓶在ll〇°C，I. 01325*105Pa條件下 滅菌30分鐘，待溫度下降至40°C左右；再在IOOmL燒杯中加入20mL菌液，輕輕地沿同一 個方向均勻攪拌，加無菌水至IOOmL刻度線；將液體通過滅菌后的制粒器流入裝有交聯(lián)劑 2000mL的錐形瓶中，制成直徑為4. Omm的固定化小球；交聯(lián)6h，然后在滅菌后裝有10%的硫 酸鈉溶液中固定l〇h，再增殖三次備用；取固定化蠟狀芽孢桿菌小球放入含有克百威的泥 漿中，降解。
[0014] 優(yōu)點及效果：
[0015] 本發(fā)明提出了一種固定化芽孢桿菌對克百威污染土壤的修復方法，具有如下優(yōu) 占 ·
[0016] 1.成本低：選擇聚乙烯醇，海藻酸鈉，高嶺土作為固定化載體是基于它來源豐富、 具有親水性、生物相容性以及抗微生物分解特性等。選用其作為芽孢桿菌固定化載體是基 于它在自然界中資源豐富，價格低廉，化學性質穩(wěn)定，與其它天然材料相比更抗拒微生物分 解，具有良好的熱穩(wěn)定性和機械操作性等優(yōu)點。采用硼酸、氯化鐵和氯化鈣作交聯(lián)劑，反應 條件溫和，操作簡便，因而應用廣泛。硫酸鈉做固化劑，使載體具有體型或網(wǎng)狀結構，性質比 較穩(wěn)定。
[0017] 2.效果好：固定化芽孢桿菌可以在較寬的pH、溫度、鹽濃度、污染物初始濃度范圍 內處理污染物，而一般微生物僅適用于處理較低濃度的污染物。
【具體實施方式】：
[0018] 本發(fā)明采用兩種方式對芽孢桿菌進行固定化，在不同的初始濃度，不同的溫度，不 同的PH下，用于克百威污染土壤的修復，目的是通過固定芽孢桿菌對克百威的降解，為農 藥污染土壤的修復開辟一條新的途徑。
[0019] 一種固定化芽孢桿菌對克百威污染土壤的修復方法，其特征在于具體方法如下： 將固定化芽孢桿菌用于克百威污染土壤進行修復；土壤采用泥漿，水土比為3:1，溶液部分 為細菌培養(yǎng)液（pH=7)，污染物的初始濃度為IOOmg · Γ1 ;固定化芽孢桿菌投入土壤中的量 3g/100ml，溫度為15~35°C，pH值為5~10,時間為72h。同時以游離的芽孢桿菌作為對 照?？紤]到固定化芽孢桿菌在環(huán)境中應用時，可能會遇到的一些環(huán)境影響因子進行研究。
[0020] 首先是不同的溫度，包括15°C和35°C，此時pH為4 ;其次為不同的pH值，設定為4 和6,溫度為35°C。實驗的運行時間為72h。