一種誘變菌株Bb5911v及其應用
【專利摘要】本發(fā)明屬于植物生防菌研發(fā)技術領域，具體涉及的是一種誘變菌株Bb5911v及其應用。一種誘變菌株Bb5911v，其分類學命名為短短芽孢桿菌Brevibacillus brevis，于2016年03月03日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為CGMCC No.12158。本發(fā)明以野生短短芽孢桿菌菌株Bb5911作為出發(fā)菌株，經過紫外線?亞硝酸鈉復合誘變，得到對香蕉炭疽病菌抑菌活性較高的突變株Bb5911v菌株，其抑菌活性比出發(fā)菌株提高了112.41％，防病效果亦顯著提高。CGMCC No.1215820160303
【專利說明】
-種誘變菌株化5911V及其應用
技術領域
[0001] 本發(fā)明屬于植物生防菌研發(fā)技術領域，具體設及的是一種誘變菌株化5911V及其 應用。
【背景技術】
[0002] 香蕉炭痘病由芭蕉炭痘菌Colletotrichum musae侵染引起，在香蕉大田生長期間 就潛伏在果皮內，膽運期間隨果實成熟逐漸顯現(xiàn)癥狀，造成蕉果嚴重腐爛，是香蕉采后膽 藏、運輸過程中發(fā)生的主要病害之一。該病的防治目前仍主要依靠化學藥劑，然而長期大量 使用化學藥劑，不僅會使病原菌產生抗藥性，也會造成農藥殘留和環(huán)境污染。因此，利用對 環(huán)境友好的生防菌防治該病逐漸引起人們的重視。
[0003] 近年來已有不同種類生防菌被篩選用于香蕉炭痘病防治的研究報道。Peeran等報 道巧光假單胞菌Pseudomonas fluorescens FP7W水包油型狀態(tài)培養(yǎng)后，可有效抑制芭蕉 炭痘菌菌絲的生長，李靜等從小白菜分離的假單胞菌Pseudomonas sp.XBC-PS對芭蕉炭痘 菌有較強的抑制作用。de Costa等采用50°C熱水處理與洋蔥伯克霍爾德菌Burkholderia cepacia菌液浸泡來綜合防治香蕉炭痘病。Lassois等報道畢赤酵母菌Pichia anomala和梭 子蟹假絲酵母化ndida oleophilastrain對芭蕉炭痘菌具有較強的括抗作用。Alvindia和 化tsuaki發(fā)現(xiàn)哈茨木霉化ichoderm harzianum通過寄生作用抑制芭蕉炭痘菌的菌絲生長 和抱子萌發(fā)。李振華等報道鏈霉菌Str邱tomyces SP.發(fā)酵液對香蕉炭痘病表現(xiàn)出較好的防 病作用。譚志瓊等發(fā)現(xiàn)海洋青霉菌化nicillium SP.T03產生的括抗物質對芭蕉炭痘菌具有 明顯的抑制作用。劉興慕等報道吸水鏈霉菌Streptomyces hygroscopicus 618菌株發(fā)酵液 對香蕉炭痘病菌有較好的抑制作用。何紅等報道辣椒體內的枯草芽抱桿菌Bacillus subtilis BS-2和BS-1對芭蕉炭痘菌菌絲生長、抱子形成及萌發(fā)等有較強的抑制作用；陳弟 等發(fā)現(xiàn)香蕉內生枯草芽抱桿菌B215對香蕉炭痘病病原菌有較強的括抗作用;李敏等發(fā)現(xiàn)枯 草芽抱桿菌C71經紫外誘變處理后，其對香蕉炭痘病的防效顯著提高;Alvindia等發(fā)現(xiàn)解淀 粉芽抱桿菌B.amyloliquefaciens可抑制芭蕉炭痘菌的菌絲生長和抱子萌發(fā)。此外，本研究 室也獲得了對香蕉炭痘病有較好括抗作用的短短芽抱桿菌化evibacillus brevis。
[0004] 本發(fā)明是W從香蕉根際±壤篩選得到的短短芽抱桿菌化5911菌株作為出發(fā)菌株， 對其進行紫外線-亞硝酸鋼復合誘變，篩選出對香蕉炭痘病抑菌活性高、傳代穩(wěn)定的正誘變 菌株抓5911V，并提供了其在微生物保鮮劑的研制和香蕉炭痘病的無害化處理中的應用。
[0005] 公開于該【背景技術】部分的信息僅僅旨在增加對本發(fā)明的總體背景的理解，而不應 當被視為承認或W任何形式暗示該信息構成已為本領域一般技術人員所公知的現(xiàn)有技術。

【發(fā)明內容】

[0006] 本發(fā)明解決的問題在于提供一種誘變菌株化5911V及其應用，該菌是從香蕉根際 ±壤篩選得到的短短芽抱桿菌化5911菌株作為出發(fā)菌株，對其進行紫外線-亞硝酸鋼復合 誘變，篩選出對香蕉炭痘病抑菌活性高、傳代穩(wěn)定的正誘變菌株抓5911V。
[0007] 本發(fā)明的目的通過如下技術方案實現(xiàn)：
[0008] 本發(fā)明公開了一種誘變菌株Bb591 IV，其分類學命名為短短芽抱桿菌 Brevibacillus brevis,于2016年03月03日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微 生物中屯、，保藏號為CGMCC No. 12158。
[0009] 本發(fā)明提供了所述的誘變菌株抓5911V的復合誘變方法，包括W下步驟：
[0010] (1)先將20w紫外燈預熱20min，取15mL濃度為108CFU/mL的菌株化5911種子液至滅 菌的培養(yǎng)皿，放置在磁力攬拌器上攬拌，調整照射距離為50cm，打開皿蓋，攬拌照射5s;誘變 后所有操作均在紅光下進行；
[0011] (2)再將菌株化5911種子液中加入滅菌的3mol/L化N02溶液，使化N02濃度達到 300mmol/L，充分混勻后反應60min，即得到誘變菌株抓5911V。
[0012] 本發(fā)明還提供了所述的誘變菌株抓5911V在抑制植物病原真菌尖抱鑲抱菌西瓜專 化型、新月彎抱霉、細鏈格抱菌、串珠鑲抱、尖抱鑲抱菌古己?；?、香蕉鏈格抱、膠抱炭痘 菌、彌澤那擬盤多毛抱、芭蕉炭痘菌、香蕉大莖點霉、瞭突廝蠕抱、小竇氏霉和多主棒抱霉中 的用途。
[0013] 本發(fā)明還提供了所述的誘變菌株抓5911V在防治香蕉炭痘病中的用途。
[0014] 與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明具有W下有益的技術效果：
[0015] 1.本發(fā)明W野生短短芽抱桿菌菌株化5911作為出發(fā)菌株，經過紫外線-亞硝酸鋼 復合誘變，得到對香蕉炭痘病菌抑菌活性較高的突變株化5911V菌株，其抑菌活性比出發(fā)菌 株提局了 112.41 %，防病效果亦顯著提局。
[0016] 2.本發(fā)明的誘變菌株化5911V在抑制植物病原真菌尖抱鑲抱菌西瓜?；汀⑿略?彎抱霉、細鏈格抱菌、串珠鑲抱、尖抱鑲抱菌古己專化型、香蕉鏈格抱、膠抱炭痘菌、彌澤那 擬盤多毛抱、芭蕉炭痘菌、香蕉大莖點霉、瞭突廝蠕抱、小竇氏霉和多主棒抱霉中的用途，其 中，突變株化5911V對多主棒抱霉、小竇氏霉和瞭突廝蠕抱的抑菌作用最強，其抑菌圈直徑 分別為 75.03mm、52.82mm 和 51.53mm。
[0017] 3.本發(fā)明提供的菌株化5911v對香蕉炭痘病膽藏15d的防效達66.55%，雖然與香 蕉采后防腐保鮮所使用的333.33yg/mL咪鮮胺溶液相比存在差距，但該菌株與10.4化g/mL 咪鮮胺溶液復配后表現(xiàn)出較好的防治效果，香蕉膽藏15d后其防效與333.33yg/mL咪鮮胺溶 液差異不顯著；至17d，其防效仍顯著高于10.4化g/mL咪鮮胺溶液。表明該菌株與低濃度咪 鮮胺復配后，對香蕉炭痘病的防治具有一定的增效作用，在生產上應用時可達到減少農藥 使用量的目的。
[001引保藏信息說明
[0019] 短短芽抱桿菌化日￥化日(^11118 13'日￥18 5911￥，保藏編號為〔610：齡.12158，保藏 日期為2016年03月03日，保藏單位為中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中屯、 (CGMCC)，保藏地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所。
【附圖說明】
[0020] 圖1為紫外誘變時間對抓5911菌株致死率的影響；
[0021] 圖2為NaN〇2濃度對抓5911菌株2地致死率的影響；
[0022] 圖3為NaN〇2誘變時間對抓5911菌株致死率的影響；
[0023] 圖4為誘變菌株抓591 Iv的遺傳穩(wěn)定性；
[0024] 圖5為誘變菌株抓5911V對13種植物病原真菌的抑制作用；
[0025] 有關附圖標記的說明：
[0026] 1-尖抱鑲抱菌西瓜?；?；2-新月彎抱霉;3-細鏈格抱菌;4-串珠鑲抱;5-尖抱鑲 抱菌古己專化型;6-香蕉鏈格抱;7-膠抱炭痘菌;8-彌澤那擬盤多毛抱;9-芭蕉炭痘菌；10- 香蕉大莖點霉；11-瞭突廝蠕抱;12-小竇氏霉；13-多主棒抱霉。
【具體實施方式】
[0027] 下面結合具體的實施例對本發(fā)明做進一步的詳細說明，所述是對本發(fā)明的解釋而 不是限定。
[0028] 下述實施例中所用的材料和試劑，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。下述實施 例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0029] 實施例1:
[0030] 1材料與方法
[00川 1.1供試材料
[0032] 括抗菌短短芽抱桿菌化ev化acillus brevis化5911菌株，從香蕉根圍分離篩選 得到。菌株化5911V、5B38-1、5B38-4、5B36-4和5B40-6為由菌株化5911經復合誘變所得突變 株。
[0033] 病原菌芭蕉炭痘菌Colletotrichum.musae、新月彎抱霉Curvularia lunata、瞭突 廝蠕抱Ex serohi lum rostra turn、小竇氏霉Dei ghtonie 11a torn losa、香蕉鏈格抱 Alte;rna;riamusae、彌澤那擬盤多毛抱Pestalotiopsismenezesiana、多主棒抱霉 Corynespora cassi i cola、香蕉大莖點霉Macrophoma musae、串珠鑲抱Fusarium moniliforme、尖抱鑲抱菌西瓜專化型F'usarium o巧sporum f.sp.niveum、尖抱鑲抱菌古己 ?；虵'usarium ο巧sporum f.sp.cubense、細鏈格抱菌Alternaria alternata、膠抱炭痘 菌Colletotrichum gloeosporioides，W上菌株均由廣西農業(yè)科學院微生物研究所生物防 治研究室分離保存。
[0034] 試驗香蕉品種為"威廉斯B6"，采自廣西南寧市武鳴縣香蕉園，采收前3個月內未噴 施殺菌劑。450g/L施?？薊C，有效成分為咪鮮胺，美國富美實公司生產，推薦香蕉采后防腐 保鮮使用的稀釋倍數(shù)為900~1800倍液，即有效成分含量為250~5(K)yg/mL。
[0035] 1.2括抗菌株種子液、發(fā)酵液及病原菌抱子液的制備
[0036] 1.2.1括抗菌種子液的制備將括抗菌株接入NA液體培養(yǎng)基(牛肉膏3g，蛋白腺lOg， 化Cl 5g，瓊脂15g，水lOOOmUpH 7.0~7.2;w不加瓊脂作為液體培養(yǎng)基），置28°C，120r/m 振蕩培養(yǎng)16h，5000r/m離屯、3min，棄上清液，沉淀用無菌水洗涂3次，制成108CFU/mL的菌懸 液，4°C保存?zhèn)溆谩?br>[0037] 1.2.2括抗菌發(fā)酵液的制備將括抗菌株的種子液按1 % (V/V)接種量移入NA液體培 養(yǎng)基，28°C，120r/m振蕩培養(yǎng)72h，即得發(fā)酵液，加無菌水調整菌液濃度為109C即/血，備用。
[0038] 1.2.3病原菌抱子液的制備將所有供試病原菌分別接入PSA試管斜面(新鮮馬鈴馨 200g，切成小塊煮沸30min，紗布過濾，加入薦糖20g，瓊脂15g，充分溶解，補水至lOOOmL，pH 自然。），28°C恒溫培養(yǎng)lOd，每管力日5mL無菌水，輕微振蕩將抱子洗下，收集后即得病原菌的 抱子液，加無菌水調整抱子濃度為1 ο6個/mL，4 °C保存?zhèn)溆谩?br>[0039] 1.3菌株抓5911的紫外線-亞硝酸鋼復合誘變和遺傳穩(wěn)定性測試
[0040] 1.3.1紫外誘變條件的確定20*紫外燈預熱2〇111111，取151^濃度為10化。1]/1^的菌株 化5911種子液至滅菌的培養(yǎng)皿，放置在磁力攬拌器上攬拌，調整照射距離為50cm，打開皿 蓋，分別攬拌照射5、10、15、20、25、30和35s ; W未經紫外照射的菌液為對照，每處理3次重 復。用無菌水將照射后的菌液進行10倍濃度梯度稀釋，分別取10化L涂布至NA平板，28°C避 光培養(yǎng)，誘變后所有操作均在紅光下進行。24h后，對平皿上的單菌落進行計數(shù)，計算致死 率。選擇致死率90 %左右的條件為紫外誘變的最適條件。
[004。 致死率（％ )=(對照活菌數(shù)一誘變后活菌數(shù))/對照活菌數(shù)X 100%
[0042] 1.3.2亞硝酸鋼誘變條件的確定分別取5mL濃度為10化FU/mL的菌株化5911種子 液，測定亞硝酸鋼誘變的最適濃度時，加入滅菌的3mol/L化N02溶液，使化N02濃度分別為 25、50、100、150、200、250、300和350111111〇1/1，充分混勻后反應30111111;而測定亞硝酸鋼誘變的 最適時間時，則加入60化L滅菌的3mol/L NaM)2溶液和40化L無菌水，充分混勻后反應10、 20、30、40、50、60和70min。最后分別加入300μL5.6mol/L的化抽P04緩沖液(pH8.6)終止反 應，W未經化N02處理的菌液為對照，每處理3次重復。用無菌水將處理后的菌液進行10倍濃 度梯度稀釋，分別取1(Κ)化涂布至NA平板，28Γ培養(yǎng)2地，對平皿上的單菌落進行計數(shù)，計算 致死率。致死率計算同1.3.1。選擇致死率90%左右的條件為亞硝酸鋼誘變的最適條件。
[0043] 1.3.3紫外線-亞硝酸鋼復合誘變將濃度為108CFU/mL的菌株化5911種子液W紫外 誘變的最適條件進行誘變，對誘變后平皿上的單菌落進行抑菌活性測定。選取抑菌活性最 高的5株誘變菌株W亞硝酸鋼誘變的最適條件再進行誘變，對誘變后平皿上的單菌落再進 行抑菌活性測定，保存抑菌活性最高的5株誘變菌株。菌株化5911的紫外線-亞硝酸鋼復合 誘變共進行2次。
[0044] 1.3.4括抗菌株抑菌活性的測定在直徑9cm培養(yǎng)皿中加入5mL烙化的2 %水瓊脂，冷 凝后在平板上距中央2.5cm處對稱放置3個滅菌牛津杯。將烙化的PSA培養(yǎng)基冷卻至45Γ，將 1.2.3小節(jié)中制得的濃度為106個/mL的芭蕉炭痘菌抱子液按1 % (V/V)的量加入培養(yǎng)基中， 振蕩搖勻，迅速加入至瓊脂平板，凝固后取出牛津杯，形成直徑7mm的小孔，28°C培養(yǎng)化。將 制備好的濃度為109CRJ/mL的待測括抗菌株發(fā)酵液5000r/m離屯、3min，上清液用細菌過濾器 過濾后，分別取20化加入每個小孔，W無菌水為對照，每處理重復3次，每重復3皿。28°C恒溫 培養(yǎng)4她，測量抑菌圈直徑d(mm)。
[0045] 計算誘變菌株的抑菌活性提高率：抑菌活性提高率（％ ) = ((1諒麵株一dtti發(fā)菌株)/ 7) X 100%
[0046] 1.3.5誘變菌株的遺傳穩(wěn)定性測試經紫外線-亞硝酸鋼復合誘變得到的抑菌活性 最高的誘變菌株化5911v，4°C保存于NA試管斜面。取3支化5911V菌株斜面每7d轉接1次，每 次轉接后28Γ培養(yǎng)24h，測定其抑菌活性;共轉接測試10次，方法參照1.3.4。
[0047] 1.4抓5911野生菌株和誘變菌株的抑菌譜測試
[0048] W菌株化5911和抑菌活性最高的誘變菌株化5911V作為測試菌株，分別測定其對 供試的13種植物病原真菌的抑菌活性，方法參照1.3.4。
[0049] 1.5咪鮮胺對抓5911野生菌株和誘變菌株最低抑菌濃度(MIC)的測定
[0050] 采用試管二倍稀釋法，用NA液體培養(yǎng)基將咪鮮胺對倍稀釋成系列濃度，使咪鮮胺 的濃度分別為666.67、333.33、166.67、83.33、41.67、20.83、10.42、5.21、2.60、1.30和0.65 yg/mL，各取ImL至試管中，然后加入1(Κ)化供試菌株的種子液，每濃度3次重復。W加菌液但 不加咪鮮胺的試管為陽性對照，W不加菌液和咪鮮胺的試管為空白對照。置28°C，120r/m振 蕩培養(yǎng)24h，W渾濁度為指標檢查管中是否有細菌生長。管內無細菌生長而咪鮮胺濃度最低 者，即為咪鮮胺對該試驗菌株的MIC。
[0051 ] 1.6香蕉炭痘病的防治試驗
[0052] 田間采收八成熟的蕉果，落梳后分成每梳5~6個蕉果，抹去花器，并除去傷病的蕉 果，洗凈驚干。共設置7個處理：處理1，菌株化5911發(fā)酵液的10倍稀釋液；處理2,突變株 Bb591 Iv發(fā)酵液的10倍稀釋液;處理3，333.33yg/mL咪鮮胺溶液;處理4，10.4化g/mL咪鮮胺 溶液;處理5，菌株抓5911的發(fā)酵液用清水進行10倍稀釋后，加入咪鮮胺，至混合液中咪鮮胺 終濃度為10.4化g/mU處理6，突變株化591 Iv的發(fā)酵液用清水進行10倍稀釋后，加入咪鮮 胺，至混合液中咪鮮胺終濃度為10.4化g/mL處理7,清水。每處理設3次重復，每重復化g蕉 果。將蕉果在W上各處理中浸泡2min后取出，室溫下驚干，用厚度0.04mm的聚乙締袋按不同 處理分別密封包裝后，放入紙箱，置25 °C，畑78 %放置。
[0053] 在蕉果開始發(fā)病時進行第1次病情調查，蕉果完全成熟后進行第2次調查;香蕉炭 痘病的病情分級標準如下W]:〇級，無??；1級，病斑占果皮面積的10% W下；3級，病斑占果 皮面積的11~25 % ; 5級，病斑占果皮面積的26~50 % ; 7級，病斑占果皮面積的51~75 % ; 9 級，病斑占果皮面積的76 % W上。
[0054] 病情指數(shù)=Σ (各級病果數(shù)X相對級數(shù)值）/(調查總果數(shù)X 9) X 100;防治效果 (% )=(對照區(qū)病情指數(shù)一處理區(qū)病情指數(shù))/對照區(qū)病情指數(shù)X 100。
[0化日]1.7數(shù)據統(tǒng)計與分析
[0056] 所得數(shù)據用Excel 2003進行匯總、平均值計算和作圖，差異顯著性采用DPS 7.05 軟件的Duncan'S新復極差法進行分析。
[0057] 2結果與分析
[005引 2.1紫外誘變時間對抓5911菌株致死率的影響
[0059] 如圖1所示，紫外線對化5911菌株的致死率隨著其照射時間的增加而提高。當照射 時間為15s時，Bb5911菌株的致死率為90.36%;當照射時間大于25s時，Bb5911菌株的致死 率趨于平緩并接近100%。
[0060] 2.2亞硝酸鋼濃度對菌株抓5911致死率的影響
[OOW] 如圖2所示，化N02對菌株化5911的致死率隨著其濃度的增加而提高。當化N02的濃 度為300mmol/L時，其對菌株抓5911的致死率為88.44%。
[0062] 2.3亞硝酸鋼誘變時間對菌株抓5911致死率的影響
[0063] 如圖3所示，化M)2對菌株化5911的致死率隨著其誘變時間的增加而提高。當化N02 誘變的時間為60min時，其對抓5911菌株的致死率為90.99%。
[0064] 2.4菌株抓5911的紫外線-亞硝酸鋼復合誘變
[0065] 通過兩次紫外線-亞硝酸鋼復合誘變，W菌株抓5911為出發(fā)菌株共得到135株正誘 變菌株。經過抑菌活性的測定，最終得到5株對香蕉炭痘病抑菌活性最高的誘變菌株。
[0066] 如表1所示，5株誘變菌株的抑菌圈直徑為37.53~42.88mm，其抑菌活性均比菌株 抓5911提高了80.72 % W上。其中，菌株抓591 Iv的抑菌活性最高，提高了 112.41 %。
[0067]表1出發(fā)菌株抓5911與誘變菌株的抑菌活性 [006引
[0069] 注:表中同列數(shù)據后不同大、小寫字母分別表示在1%和5%水平下的差異顯著性， 下同。
[0070] 2.6誘變菌株抓591 Iv的遺傳穩(wěn)定性
[0071] 誘變菌株化5911V在NA斜面上連續(xù)轉接10次后，測定所有轉接菌株對香蕉炭痘病 菌的抑菌活性。
[0072] 結果如圖4所示，隨著轉接次數(shù)的增加，該菌株的抑菌活性逐漸降低，但7次內其抑 菌活性無明顯變化，表明菌株抓591IV在轉接7次內具有較好的遺傳穩(wěn)定性。
[0073] 2.7出發(fā)菌株抓5911及突變株抓5911V的抑菌譜
[0074] 出發(fā)菌株抓5911及其突變株抓5911V對13種植物病原真菌均有較強的抑菌活性。
[0075] 如圖5所示，出發(fā)菌株Bb5911菌株的抑菌圈直徑為8.84~57.26mm，而突變株 Bb591 Iv為11.19~75.03mm。突變株化591 Iv的抑菌活性均比出發(fā)菌株化5911有所提高，其 提高率在18.20%~239.27%。其中，突變株化5911V對多主棒抱霉、小竇氏霉和瞭突廝蠕抱 的抑菌作用最強，其抑菌圈直徑分別為75.03mm、52.82mm和51.53mm。
[0076] 2.8咪鮮胺對抓5911菌株及其誘變菌株抓591 Iv的MIC
[0077] 最低抑菌濃度的測試結果表明，咪鮮胺對化5911菌株及其誘變菌株化5911V菌株 的MIC值相同，均為20.8化g/mL。當咪鮮胺的濃度小于10.4化g/mL時，其對2株菌株的生長無 影響。
[0078] 2.9誘變菌株對香蕉炭痘病的防治效果
[0079] 香蕉膽藏15d開始發(fā)病，各處理區(qū)的病情指數(shù)在13.61~54.15之間；而各處理區(qū)的 防效在51.72% W上，其中，突變株化591 Iv發(fā)酵液與10.4化g/mL咪鮮胺溶液復配后，其防效 為72.76%，與333.33yg/mL咪鮮胺溶液差異不顯著。
[0080] 表2誘變菌株抓591 Iv對香蕉炭痘病的防治效果
[0081]
[0083] 注:表中同列數(shù)據后不同大、小寫字母分別表示在1%和5%水平下的差異顯著性， 下同。
[0084] 如表2所示，膽藏至17d香蕉完全成熟，各處理區(qū)的病情指數(shù)均有增長，對照區(qū)的病 情指數(shù)達到95.05,其他各處理區(qū)在27.82~61.57之間；而各處理區(qū)的防效在35.22%?上， 其中，突變株抓5911V發(fā)酵液與10.4化g/mL咪鮮胺溶液復配后，其防效雖然顯著低于333.33 yg/mL咪鮮胺溶液，但未達到極顯著差異，且仍顯著高于10.4化g/mL咪鮮胺溶液。15d和17d 兩次調查結果顯示，誘變菌株化5911V的防效均顯著高于出發(fā)菌株化5911，其最高防效為 66.55%。
[0085] 綜上所述，本發(fā)明的誘變菌株抓591 Iv菌株，其抑菌活性比出發(fā)菌株化5911提高了 112.41%，防病效果亦顯著提高。
[0086] 本發(fā)明的菌株化5911V對香蕉炭痘病膽藏15d的防效達66.55%，雖然與香蕉采后 防腐保鮮所使用的333.33yg/mL咪鮮胺溶液相比存在差距，但該菌株與10.4化g/mL咪鮮胺 溶液復配后表現(xiàn)出較好的防治效果，香蕉膽藏15d后其防效與333.33yg/mL咪鮮胺溶液差異 不顯著;至17d，其防效仍顯著高于10.4化g/mL咪鮮胺溶液。表明該菌株與低濃度咪鮮胺復 配后，對香蕉炭痘病的防治具有一定的增效作用，在生產上應用時可達到減少農藥使用量 的目的。
[0087] 常見的香蕉采后真菌病害有Colletotrichum musae引起的香蕉炭痘病、Fusarium sp.引起的香蕉冠腐病和Macrophoma musae引起的香蕉黑星病。本發(fā)明誘變篩選得到的菌 株化5911V對W上巧巾病原真菌均具有較強抑制作用，對其余供試的10株植物病原真菌也表 現(xiàn)出不同程度的抑菌活性，尤其對多主棒抱霉的抗菌活性最高。此外，誘變菌株化5911V對 引起香蕉葉斑病的多種病原真菌也具有較強的抗菌作用。較寬的抑菌譜為菌株化5911V在 香蕉生產上的應用奠定了基礎，因此，利用該菌株開發(fā)高效、對環(huán)境友好的生物農藥，對香 蕉產業(yè)的發(fā)展具有重要的意義。
[0088]前述對本發(fā)明的具體示例性實施方案的描述是為了說明和例證的目的。運些描述 并非想將本發(fā)明限定為所公開的精確形式，并且很顯然，根據上述教導，可W進行很多改變 和變化。對示例性實施例進行選擇和描述的目的在于解釋本發(fā)明的特定原理及其實際應 用，從而使得本領域的技術人員能夠實現(xiàn)并利用本發(fā)明的各種不同的示例性實施方案W及 各種不同的選擇和改變。本發(fā)明的范圍意在由權利要求書及其等同形式所限定。
【主權項】
1. 一種誘變菌株Bb5911 v，其分類學命名為短短芽抱桿菌Brevibaci 1 lusbrevis，于 2016年03月03日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為CGMCC Νο·12158〇2. 根據權利要求1所述的誘變菌株Bb5911v的復合誘變方法，其特征在于，包括以下步 驟： (1) 先將20w紫外燈預熱20min，取15mL濃度為108CFU/mL的菌株Bb5911種子液至滅菌的 培養(yǎng)皿，放置在磁力攪拌器上攪拌，調整照射距離為50cm，打開皿蓋，攪拌照射5s;誘變后所 有操作均在紅光下進行； (2) 再將菌株Bb5911種子液中加入滅菌的3mol/L NaN〇2溶液，使NaN〇2濃度達到 300mmol/L，充分混勾后反應60min，即得到誘變菌株Bb5911v。3. 根據權利要求1所述的誘變菌株Bb5911v在抑制植物病原真菌尖孢鐮孢菌西瓜?；?型、新月彎孢霉、細鏈格孢菌、串珠鐮孢、尖孢鐮孢菌古巴?；?、香蕉鏈格孢、膠孢炭疽菌、 彌澤那擬盤多毛孢、芭蕉炭疽菌、香蕉大莖點霉、喙突臍蠕孢、小竇氏霉和多主棒孢霉中的 用途。4. 根據權利要求1所述的誘變菌株Bb5911v在防治香蕉炭疽病中的用途。
【文檔編號】C12N1/20GK106011031SQ201610601664
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年7月27日
【發(fā)明人】付崗, 杜嬋娟, 葉云峰, 潘連富
【申請人】廣西壯族自治區(qū)農業(yè)科學院微生物研究所