異丙基三唑并吡啶化合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了下式(I)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、使用所述化合物治療糖尿病的方法和用于制備所述化合物的方法，其中R1選自H、CH3、CN、CH2CN、C(CH3)2CN和F；R2選自H、O(C1?C3烷基)R5、CH2CN和CN；R3選自H、OCH3、CN、C(CH3)2CN和CH2CN；R4選自H和CH3；R5選自H、CN、C(CH3)2CN、OCH3、S(O)2CH3和C(CH3)2OH；條件是，選自R1、R2、R3和R4中的至少一個(gè)是H。(I)。
【專利說明】異丙基三唑并吡啶化合物
[0001] 本發(fā)明涉及三唑并吡啶化合物或者它們的藥學(xué)上可接受的鹽，以及化合物在治療 中的用途。本發(fā)明的三唑并吡啶化合物是GPR-40的激活劑。
[0002] GPR-40也稱為游離脂肪酸受體1(FFA1或者FFAR1)，據(jù)報(bào)道主要在嚙齒動(dòng)物胰腺β 細(xì)胞、胰島瘤細(xì)胞系和人體胰島中以高水平表達(dá)。胰島素分泌的葡萄糖調(diào)節(jié)是激活GPR-40 的重要特征。實(shí)現(xiàn)GPR-40激活的化合物與刺激患有II型糖尿病(T2D)的患者中的胰島素分 泌相關(guān)。作為GPR-40激活劑的化合物期望在GPR-40介導(dǎo)的病況的治療中使用。
[0003] W02004/041266公開了 GPR-40受體功能調(diào)節(jié)劑，其包括具有芳環(huán)和能夠釋放陽離 子的基團(tuán)的化合物。
[0004] 本發(fā)明提供下式I的化合物，或者其藥學(xué)上可接受的鹽：
其中 R1選自 Η、CH3、CN、CH2CN、C (CH3) 2CN和 F; R2選自 Η、0( Ci-C3烷基)R5、CH2CN 和CN; R3選自 Η、0CH3、CN、C (CH3) 2CN 和CH2CN; R4選自H和CH3;并且 R5選自 11、^(：((：!13)2^0013、3(0)2〇13和(：((：!13)2〇11;條件是，選自1?1、1?2、1?和1?4中的至 少一個(gè)是Η。
[0005] 本發(fā)明的化合物具有在上述結(jié)構(gòu)中用星號(hào)(*)標(biāo)識(shí)的手性碳。優(yōu)選的化合物具有 上述所示的構(gòu)型，其按慣例被稱為S構(gòu)型。為了免生疑問，本發(fā)明包括所有手性碳構(gòu)型，如由 式la所示：
[0006] 在一個(gè)實(shí)施方案中，R1選自H、CH3和F。在一個(gè)實(shí)施方案中，R 1選自Η和CH3。
[0007] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，R2選自Η和-(KQ-G烷基)R5。在一個(gè)實(shí)施方案中，R2選自Η和 0CH 3。在一個(gè)實(shí)施方案中，R5選自 Η、-S (0) 2CH3和-C (CH3) 2〇Η。
[0008] 另一個(gè)實(shí)施方案是其中R3是Η、!?1是CH3并且R4是CH 3的化合物。在另一個(gè)實(shí)施方案 中，R3 是Η，R1 是 CH3，R4 是 CH3 并且 R2 是-〇CH3。
[0009] 在一個(gè)實(shí)施方案中，R3選自Η和0CH3。在一個(gè)實(shí)施方案中，R3是H。
[0010]在一個(gè)實(shí)施方案中，R4是CH3。一個(gè)實(shí)施方案是其中R1是CH 3、R2是Η或-〇CH3、R3是Η并 且R4是CH3的化合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，R1是CH3并且R 4是CH3。
[0011] 本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的化合物是⑶-3-{4-[2-異丙基-8-(4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸，或者其藥學(xué)上可接受 的鹽。本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的化合物是(S)-3-{4-[8-(2,6-二甲基-苯基)-2-異丙基_[1，2,4] 三唑并[l，5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸，或者其藥學(xué)上可接受的鹽。
[0012] 本發(fā)明還提供藥物組合物，其包含如上所述的式I的化合物或者其藥學(xué)上可接受 的鹽，以及一種或多種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或者賦形劑。
[0013] 本發(fā)明還提供藥物組合物，其包含如上所述的式I的化合物或者其藥學(xué)上可接受 的鹽，以及一種或多種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或者賦形劑，以及任選的一種或多種治 療劑。附加的治療劑包括例如二甲雙胍和/或捷諾維(Januvia)。
[0014] 本發(fā)明還提供在哺乳動(dòng)物中治療糖尿病的方法。所述方法包括對(duì)需要治療的哺乳 動(dòng)物給藥有效量的如上式I所述的化合物或者其藥學(xué)上可接受的鹽。更優(yōu)選地，本發(fā)明提供 在需要治療的哺乳動(dòng)物中治療II型糖尿病的方法，其包括給藥有效量的如上式I所述的化 合物或者其藥學(xué)上可接受的鹽。
[0015] 本發(fā)明提供用于治療的如上所述的根據(jù)式I的化合物或者其藥學(xué)上可接受的鹽。
[0016] 在又一個(gè)形式中，本發(fā)明提供用于在需要糖尿病治療的哺乳動(dòng)物中治療糖尿病的 如上所述的根據(jù)式I的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽或者藥物組合物。優(yōu)選所述用途是用于 治療II型糖尿病并且所述哺乳動(dòng)物是人。
[0017] 本發(fā)明提供根據(jù)式I的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制造用于治療糖尿病的藥 物中的用途。優(yōu)選所述藥物是用于治療II型糖尿病。
[0018] 在又一個(gè)形式中，本發(fā)明提供式II的中間體化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：
II 其中，R1選自 Η、CH3、CN、CH2CN、C (CH3) 2CN和 F; R2選自 H、0( CrCs烷基)R5、CH2CN 和CN; R3選自 Η、OCH3、CN、C (CH3) 2CN 和CH2CN; R4選自H和CH3; R5選自 11、^(：((：!13)2^0013、3(0)2〇13和(：((：!13)2〇11;條件是，選自1?1、1?2、1?和1?4中的至 少一個(gè)是H;并且 R選自Cl-4烷基、Cl-4鹵代烷基、C3_6環(huán)烷基、Cl-4烷基 -C3_6環(huán)烷基、苯基和Cl-5燒 基苯基，從而提供式I的化合物或者其藥學(xué)上可接受的鹽。優(yōu)選的R基團(tuán)包括d-2烷基、&-2 鹵代烷基、苯基和&-2烷基苯基。特別優(yōu)選的R基團(tuán)包括甲基、乙基、苯基和苯甲基。
[0019] 本發(fā)明還提供用于制備上式I所述的化合物的過程或者方法。所述方法包括使根 據(jù)式II的中間體化合物去保護(hù)(de-protect)或者去酯化(de-esterify)，從而制備式I的化 合物或者其藥學(xué)上可接受的鹽。
[0020] 本領(lǐng)域技術(shù)人員將容易地理解并且能夠?qū)崿F(xiàn)去保護(hù)反應(yīng)而無需過度實(shí)驗(yàn)。將被本 領(lǐng)域技術(shù)人員認(rèn)識(shí)到的是，除了羧酸和被保護(hù)的羧酸之外，可以使用其它能容易地轉(zhuǎn)化為 羧酸的官能團(tuán)代替羧酸或者被保護(hù)的酸。這樣的官能團(tuán)、制備和這些官能團(tuán)向羧酸的轉(zhuǎn)化 可以在下述文獻(xiàn)中找到：Larock. R.C的 "Comprehensive Organic Transformations: A Guide to Functional Group Preparations"，Wiley VCH，1999和Smith.， Μ·Β·與March, J.的"March's Advanced Organic Chemistry, Reactions, Mechanisms and Structure"，Wiley-Interscience，第六版，2007。
[0021] 本發(fā)明的化合物可以作為藥學(xué)上可接受的鹽提供。"藥學(xué)上可接受的鹽"是指被認(rèn) 為對(duì)于臨床和/或獸醫(yī)用途而言可接受的本發(fā)明的化合物的鹽。藥學(xué)上可接受的鹽和用于 制備它們的常規(guī)方法是本領(lǐng)域公知的。參見例如：P. Stahl等人，Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use,(VCHA/ffiley-VCH,2002)； S.M. Berge等人，〃Pharmaceutical Salts," Journal of Pharmaceutical Sciences，第 66卷，第1期，1977年1月。
[0022] 個(gè)別異構(gòu)體、對(duì)映體或者非對(duì)映體可以在式I的化合物的合成中任何方便的點(diǎn)處 通過例如手性色譜法的方法進(jìn)行分離。此外，在下述方案和制備中所述的中間體包含多個(gè) 氮、羥基和酸保護(hù)基團(tuán)如酯。在每次出現(xiàn)中，取決于特定的反應(yīng)條件和待實(shí)施的特定轉(zhuǎn)換， 所述可變的保護(hù)基團(tuán)可以相同或者不同。保護(hù)和去保護(hù)條件對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員是公知的并 且被描述于文獻(xiàn)中。參見例如，Greene 和Wuts，Pro ieci ire Grot/i/3 Orga/jic Greene和P. Wuts編著，第二版，1991)。
[0023] 在本文中使用的縮寫根據(jù)dcia，第17卷，第1期，1984所定義。其它 的縮寫定義如下："ADDP"是指1-(偶氮二羰基)二哌啶；"BSA"是指牛血清白蛋白；"n-BuLi" 是指正丁基鋰；"DIBAL"是指二異丁基氫化鋁；"DCM"是指二氯甲烷；"DMEM"是指達(dá)爾伯克氏 改良伊格爾氏培養(yǎng)基(Dulbecco's Modified Eagle's Medium) ;"DMF"是指二甲基甲酰胺； "DEAD"是指偶氮二甲酸二乙酯；"DMF"是指二甲基甲酰胺；"DMS0"是指二甲基亞砜；"EC 5q"是 指在最大響應(yīng)的一半時(shí)的有效濃度；"EtOAc"是指乙酸乙酯；"EtOH"是指乙基醇或者乙醇； "F12"是指Ham's F12培養(yǎng)基；"FA"是指脂肪酸；"FBS"是指胎牛血清；"HEK"是指人胚腎； "IC5Q"是指產(chǎn)生對(duì)藥劑(agent)而言可能的最大抑制響應(yīng)的50%的該藥劑的濃度；"MeOH"是 指甲基醇或者甲醇；"MTBE"是指甲基叔丁基醚；"NBS"是指N-溴代丁二酰亞胺；"Pd(amph 〇S) Cl2"是指雙(二叔丁基(4-二甲基氨基苯基)膦)二氯鈀（II);"Pd(dppf)Cl2"是指[1，Γ-雙 (二苯基膦基）二茂鐵-二氯化鈀（II); "Pd(PPh3)2Cl2"是指雙（三苯基膦）氯化鈀（II); "PPAR"是指過氧化物酶體增殖物激活受體；"PPRE"是指過氧化物酶體增殖物響應(yīng)元件； "RFU"是指相對(duì)熒光單位；"RPMI"是指洛斯維?帕克紀(jì)念研究所(Roswell Park Memorial Institute); "TFA"是指三氟乙酸；"THF"是指四氫呋喃；"TK"是指胸苷激酶;并且"TAK875" 是指被稱為fasiglifam的Takeda化合物。
[0024]如在文本中使用的術(shù)語烷基是直鏈烷基，例如乙基或正丙基;或者支鏈烷基，例如 異丙基或叔丁基。術(shù)語&-4鹵代烷基是指具有1、2、3或更多個(gè)連接至烷基鏈的碳的鹵素基 團(tuán)的烷基基團(tuán)。如果存在兩個(gè)或多個(gè)鹵素，鹵素不必連接至相同的碳。該術(shù)語還包括全鹵代 烷基，其中所述烷基基團(tuán)的所有氫原子都被鹵素替代。
[0025] 在下述方案中，除非另有說明，所有的取代基都如上文所定義。試劑和起始材料通 常對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員是容易獲得的。其它試劑和起始材料可以通過類似于合成已知 結(jié)構(gòu)相似的化合物的有機(jī)和雜環(huán)化學(xué)的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)以及下述包括任何新程序的制備和實(shí)施 例中描述的程序來制造。
[0026] 方案 1
式I的化合物可以根據(jù)如方案1所描述的反應(yīng)來制備。PG是開發(fā)用于酸的保護(hù)基團(tuán)，例 如酯，參見上文。方案1(步驟1)描述了苯磺酸取代的二氨基吡啶季銨鹽(quaternary salt) 的形成。可以使單甲基或者三甲基苯基氨基磺酸鹽（1)與取代的2-氨基吡啶（2)反應(yīng)，從而 提供二氨基吡啶季銨鹽(3)。然后，可以使用極性質(zhì)子溶劑如MeOH在有機(jī)堿如三乙胺中使該 季銨鹽（3)與2-甲基丙醛（4,步驟2a)反應(yīng)，從而形成取代的[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶 (6)。替代地，可以在堿性有機(jī)溶劑如吡啶中使2-甲基丙酰氯(5,步驟2b)與所述季銨鹽(3) 反應(yīng)，從而形成取代的[1，2，4 ]三唑并[1，5-a ]吡啶(6)?？梢栽跇?biāo)準(zhǔn)條件下使用還原劑如二 異丁基氫化鋁(DIBAL)在溫度如-78°C下在極性非質(zhì)子溶劑如DCM中，將化合物(6)的酯還原 成甲基羥基，從而獲得羥基化合物(7,步驟3)。本領(lǐng)域公知的其它還原劑是氫化鋁鋰或者硼 氫化鈉。可以將化合物(7)在Mitsunobu條件下烷基化成醚（10,步驟5b) Jitsunobu條件是 本領(lǐng)域公知的，并且涉及使用膦(例如三苯基膦、三丁基膦或者三乙基膦)和偶氮二甲酸酯 (例如偶氮二甲酸二乙酯(DEAD)或偶氮二甲酸二異丙酯(DIAD))或偶氮二羰基化物(例如 ADDP)使醇(7)與親和試劑如酚(9)反應(yīng)。替代地，可以將醇(7)轉(zhuǎn)化成鹵素(8,步驟4)如溴代 物或者氯代物，其使用氯化亞砜從而形成氯代物或者在DCM中使用三溴化磷從而形成溴代 物。然后，可以在堿性條件下使用無機(jī)堿如碳酸銫或者乙酸鉀在極性非質(zhì)子溶劑如乙腈中， 用酚(9)將所述鹵代化合物(8)烷基化，從而獲得化合物（10,步驟5a)。8_鹵素取代的[1，2， 4]三唑并[1，5-a]吡啶（10)可以在Suzuki-Miyaura交叉偶聯(lián)條件下用硼酸試劑偶聯(lián)。本領(lǐng) 域技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到，存在多種可用于促進(jìn)這樣的交叉偶聯(lián)反應(yīng)的條件。因此，合適的鈀試 劑包括雙(三苯基膦)二氯化鈀（11)1(1( &111?11〇8)(：12、三(二亞芐基丙酮)二鈀(0)與三環(huán)己 基膦、雙(二苯基膦基)二茂鐵)氯化鈀（II)、四（三苯基膦)鈀、或者乙酸鈀（II)。合適 的堿包括在合適的非極性溶劑如1，4_二氧雜環(huán)己烷中的碳酸銫、碳酸鈉、碳酸鉀、或者磷酸 三鉀一水合物，從而獲得8-取代的[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡啶（II，步驟6)?？梢栽诒绢I(lǐng)域 公知的標(biāo)準(zhǔn)堿性條件下使II的被保護(hù)的酸去保護(hù)，從而獲得式I的化合物(步驟7)。用于酯 的去保護(hù)的條件是本領(lǐng)域公知的，其使用在極性質(zhì)子溶劑如乙醇或者M(jìn)eOH或者水/THF溶劑 混合物中的堿如氫氧化鈉或者氫氧化鋰。其它替代的去保護(hù)條件包括在二氯乙烷或者THF 中使用三甲基氫氧化錫或者三甲基娃醇鉀(potassium trimethylsilanolate)作為堿從而 獲得式I的化合物。
[0027]方案 2
在方案2中顯示的另一個(gè)變體中，如方案1，步驟6中所述的，8-溴取代的[1，2，4]三唑 并[1，5-a]P比啶(7,步驟1)可以在Suzuki-Miyaura交叉偶聯(lián)條件下使用硼酸試劑偶聯(lián)，從而 獲得化合物（12)。然后，如在上述方案1，步驟5b中所述的，可以在Mitsunobu條件下使該醇 (12)與酚(9)反應(yīng)，從而在步驟2a中獲得化合物II。替代地，如方案1，步驟4中所述的，可以 將化合物12的醇鹵代從而獲得化合物13。然后，可以在如方案1，步驟5b中所述的堿性條件 下將鹵代的化合物（13)烷基化，從而獲得化合物11(步驟2b)。然后，如方案1，步驟7中所述 的，使式II的化合物去保護(hù)，從而獲得式I的化合物。
[0028] 制備和實(shí)施例 下述制備和實(shí)施例進(jìn)一步舉例說明了本發(fā)明并代表了式（I)的化合物的典型合成。除 非相反地說明，本文中所述的化合物是使用Accelrys Draw 4.0，IUPACNAME A⑶LABS或者 1?1^1313，版本2.5 3?2進(jìn)行命名和編號(hào)。
[0029] 制備 1 6-氨基-煙酸甲酯
在〇°C下，向攪拌的6-氨基-煙酸(25 g，181.1 mmol)在MeOH (200 mL)中的溶液中添加 濃H2SO4 (7 mL)，并且將反應(yīng)混合物在80 °C下加熱過夜。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫并用飽和 的NaHC03溶液（100 mL)中和。將沉淀的固體過濾并在真空下干燥，從而獲得作為黃色固體 的標(biāo)題化合物（22 gJlf/ohLCMS m/z 153 (M+H) +。
[0030] 制備 2 6-氨基煙酸乙酯
向攪拌的6-氨基煙酸（3 Kg，21.61 mol)在乙醇（30 L)中的溶液中添加濃H2S〇4 (3 L)，并且將反應(yīng)混合物在78°C下加熱16小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫并在減壓下蒸發(fā)。使 用飽和的NaHC03溶液將殘留物中和至pH~7.5，并且將其用Et0A C(3X5L)萃取。將合并的 有機(jī)萃取物用水(2X5 L)、鹽水溶液(brine s〇lution)(5 L)洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，并將其 蒸發(fā)，從而獲得作為近白色固體的標(biāo)題化合物(3.4敁，93.87%)。^1^ m/z 167 (M+H) +。 [0031 ]基本上通過制備2的方法來制備下述化合物。
[0033]制備 4 6_氨基-5-溴-煙酸甲酯
在〇°C下，向攪拌的6-氨基煙酸甲酯(22 g，143.7 mmol)在THF (500 mL)中的溶液中添 加 NBS (27.9 g，158.1 mmol)，并且將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。將氯化銨（100 mL)添 加至反應(yīng)混合物，并用EtOAc (2X100 mL)萃取混合物。將合并的有機(jī)萃取物用鹽水溶液 (100 mL)洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，過濾并在減壓下蒸發(fā)。將粗材料通過硅膠柱色譜法 (combiflash)純化，并將其用己烷中的35% EtOAc洗脫從而獲得作為淺棕色固體的標(biāo)題化 合物（28 gJtSQ/ohLCMS m/z (79Br/81Br) 231/233 (M+H) +。
[0034]基本上通過制備4的方法來制備下述化合物。
[0036] 制備 6 (E)-N-(對(duì)甲苯磺?；┭趸襾啺匪嵋阴ィǎ‥)-Ethyl N- (p-toluene sulfonyl) oxyacetimidate)
在室溫下，向攪拌的（E)-N-羥基乙亞胺酸乙酯(47.2 g，458.7 mmol)在DMF (300 mL) 中的溶液中添加三乙胺（128 ml，917.4 mmol)，并且將混合物攪拌20分鐘。添加對(duì)甲苯磺酰 氯（100 g，458.7 mmol )，并且將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌16小時(shí)。將反應(yīng)混合物用水(200 mL)稀釋，并用EtOAc (3X150 mL)萃取。將合并的有機(jī)萃取物經(jīng)硫酸鈉干燥、過濾并蒸發(fā)， 從而獲得作為白色固體的標(biāo)題化合物（94 gJOUACMS m/z 258 (M+H) +。
[0037] 制備 7 (E)-N-(2,4,6-三甲基苯磺?；?氧基乙亞胺酸乙酯
在〇°C下，向攪拌的N-羥基乙亞胺酸乙酯(42 g，183 mmol)在DMF (100 mL)中的溶液中 添加三乙胺(49.2 ml，366 mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌10分鐘，并再次冷卻至0°C。 分批添加2，4,6-三甲基-苯磺酰氯(40 g，183 mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。將 反應(yīng)混合物用EtOAc (100 mL)稀釋，用冰水(2X500 mL)、鹽水溶液(50 mL)洗滌，經(jīng)無水硫 酸鈉干燥，過濾并蒸發(fā)，從而獲得不需要進(jìn)一步純化即可使用的作為淺黃色固體的標(biāo)題化 合物(40 g，粗品 hLC-MS m/z 286.1 [M+H] +。
[0038] 制備 8 (2，4，6-三甲基苯磺?；?氧基氨基甲酸叔丁酯
向攪拌的2,4,6_三甲基苯-1-磺酰氯（5.5 Kg，25.14 mol)在MTBE (55 L)中的溶液中 添加羥基氨基甲酸叔丁酯(4 Kg，30.17 mo 1 )，并將其冷卻至0 °C。經(jīng)1小時(shí)的時(shí)間將三乙胺 (3.05 Kg，30.17 mol)添加至反應(yīng)混合物，并且將反應(yīng)混合物在0°C下攪拌2小時(shí)。將反應(yīng)混 合物過濾并用MTBE (2x5 L)洗滌。將濾液濃縮至12 L的體積并添加正己烷(6 L)，并且將混 合物再蒸餾至高至12 L的體積。向粗化合物中添加 MTBE在正己烷中的5%溶液(60 L)，并且 將混合物攪拌2小時(shí)。過濾反應(yīng)混合物，從而獲得作為近白色固體化合物的第一產(chǎn)物(6.13 Kg)。將濾液濃縮至干燥并添加 MTBE在正己烷中的5%溶液（10 L)。將反應(yīng)混合物攪拌30分鐘 并過濾，從而獲得標(biāo)題化合物的第二產(chǎn)物(0.86 Kg)，將其與第一產(chǎn)物合并從而獲得標(biāo)題化 合物(6.99 g，88%)。
[0039] 制備 9 0-(對(duì)甲苯磺?；?羥胺
在〇°C下，向攪拌的（E)-N-(對(duì)甲苯磺?；?氧基乙亞胺酸乙酯（10 g，38.9 mmol)在1， 4-二氧雜環(huán)己烷(40 mL)中的溶液中添加 HC104(3.0 mL)，并且將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌 1小時(shí)。將反應(yīng)混合物用水稀釋，并用DCM (2 X 10 mL)萃取。將合并的有機(jī)萃取物經(jīng)硫酸鈉 干燥并過濾。不需要濃縮即可直接使用溶液（9 g，100%粗品）。
[0040] 制備 10 0- (2，4，6-三甲基苯磺?；?羥胺
在〇°C下，向攪拌的（E)-N-(2,4,6-三甲基苯磺?；?氧基乙亞胺酸乙酯（16 g，62.167 mmol)在1,4-二氧雜環(huán)己燒(200 mL)中的溶液中添加高氯酸(8 mL)，并且將反應(yīng)混合物在 室溫下攪拌1.5小時(shí)。將反應(yīng)混合物用水(30 mL)稀釋，并用DCM (2X20 mL)萃取。將合并的 有機(jī)層用鹽水溶液(20 mL)洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾，并且不需要濃縮即可使用濾液。 [0041 ] 替代制備10 在〇°C下，經(jīng)45分鐘的時(shí)間向包含三氟乙酸（19.74 L)的100 L反應(yīng)器中添加(2,4,6_三 甲基苯磺?；?氧基氨基甲酸叔丁酯(6.99 Kg，22.18 mol)，并且將反應(yīng)混合物在0°C下攪 拌2小時(shí)。將反應(yīng)混合物用碎冰(8 L)然后用冰水(16 L)淬滅，并且將其攪拌15分鐘。添加額 外的冰水(24 L)，并將混合物攪拌15分鐘。將固體沉淀過濾、用水洗滌并干燥，從而獲得不 需要進(jìn)一步純化即可使用的白色固體(4.77 Kg，100%)。
[0042]制備 11 1，2-二氨基-3-溴-5-甲氧基羰基-吡啶鑰4-甲基苯磺酸鹽
在室溫下，向攪拌的〇(對(duì)甲基苯磺?；?輕胺(9 g，48.1 mmol)在DCM (50 mL)中的溶 液中添加6-氨基-5-溴-煙酸甲酯（11.1 g，48.1 mmol)，并將混合物攪拌16小時(shí)。將反應(yīng)混 合物冷卻至〇°C，并添加二乙基醚。將沉淀的固體過濾并在真空下干燥，從而獲得作為近白 色固體的標(biāo)題化合物（9 8,45%)</Η MMR (400 MHz, d6-DMS0) δ 9.09 (bs, 2H), 8.69 (d, /= 1.6 Hz, 1H), 8.46 (q, /= 8.0 Hz, 1H), 7.06 (s, 3H), 6.71 (s, 2H), 4.31 (q, /= 11.6 Hz, 2H), 2.14 (s, 3H), 1.25-1.32 (m, 4H)〇
[0043] 基本上通過制備11的方法來制備下述化合物。
[0044] 表 3
a. ΧΗ NMR (400 MHz, d6-DMS0) δ 9.09 (bs, 2H), 8.69 (d, /= 1.6 Hz, 1H), 8.46 (q, /= 8.0 Hz, 1H), 7.06 (s, 3H), 6.71 (s, 2H), 4.31 (q, /= 11.6 Hz, 2H), 2.14 (s, 3H), 1.25-1.32 (m, 4H)〇
[0045] 替代制備12
將作為濕濾餅的0-(2,4,6-三甲基苯磺酰基)羥胺（假定4.77 Kg，22.17 mol)溶解于 DCM (25 L)中，并分離出水層，將有機(jī)層用水(2X10 L)和鹽水溶液（10 L)洗滌。將有機(jī)層 轉(zhuǎn)移至100 L反應(yīng)器中并用額外的DCM (45 L)稀釋。將反應(yīng)混合物冷卻至10°C_15°C，并經(jīng) 15分鐘的時(shí)間分批添加6-氨基-5-溴-煙酸乙酯(4.24 Kg，17.29 mol)。將反應(yīng)混合物在室 溫下攪拌16小時(shí)。過濾反應(yīng)混合物，并且將固體濾餅用DCM (3X10 L)洗滌并干燥，從而獲 得作為白色固體的第一產(chǎn)物(2.7 Kg)。濃縮濾液，從而獲得厚的團(tuán)塊，將其在DCM(20 L)中 磨碎2小時(shí)。過濾固體，并且將濕濾餅用DCM (2X5 L)洗滌并干燥，從而獲得作為近白色固 體的第二產(chǎn)物（1.1 Kg)，將其與第一產(chǎn)物合并從而獲得標(biāo)題化合物(3.8 Kg，37.25%) 1CMS m/z (79Br/81Br) 260/262 (M+H) +。
[0046] 制備 13 3-(4,4,5,5-四甲基_[1，3,2]二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-苯甲腈
在0°C下，向攪拌的3-氨基-苯甲腈(0.5 g，4.23 mmol)在乙腈(30 mL)中的溶液中添加 亞硝酸叔丁酯和雙(頻哪醇合）二硼（13丨8。;[1^。0131:0(1;[1301'011)(1.29 8,5.076 1]11]1〇1)。將混 合物在80 °C下加熱2小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫并在減壓下濃縮。將粗材料通過硅膠柱 色譜法(combiflash)來純化，用4% EtOAc/己烷洗脫從而獲得標(biāo)題化合物(0.35 g，99.8%)。 LCMS m/z 294 (M+H)+〇
[0047] 基本上通過制備13的方法來制備下述化合物。
[0049] 制備 15 3,5_二甲基-4-(4,4,5,5-四甲基_[1，3,2]二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-苯甲腈
向攪拌的4-溴-3,5-二甲基-苯甲腈(0.5 g，2.38 mmol)和雙(頻哪醇合)二硼(0.9 g， 3.57 mmol)在DMF (20 mL)中的溶液中添加 CH3C00K (1.051 g，10.71 mmol)。將混合物用 氬氣吹掃30分鐘，然后添加 Pd(dppf)2Cl2.DCM (0.097 g，0.119 mmol)并將混合物在100°C 下加熱過夜。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫并通過硅藻土過濾。將濾液用水(30 mL)稀釋，并用 EtOAc (2X30 mL)萃取。將合并的有機(jī)萃取物用飽和鹽水溶液（20 mL)洗滌，經(jīng)硫酸鈉干 燥，過濾并濃縮。將粗材料通過硅膠柱色譜法(combiflash)來純化，用6% EtOAc/己燒洗脫 從而獲得作為褐色液體的標(biāo)題化合物(0.4 gJSyohLCMS m/z 288(M+H) +。
[0050] 制備 16 2-(4-溴-苯基)-2-甲基-丙腈
在〇°C下，向（4-溴-苯基)-乙腈(1 g，5.10 mmol)在DMF (10 mL)中的溶液中添加氫化 鈉(0.408 g，10.20 mmo 1，礦物油中60%)。將反應(yīng)混合物在0°C下攪拌15分鐘，然后在0 °C下 添加碘甲烷(0.69 ml，11.22 mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。將反應(yīng)混合物用氯 化銨水溶液(5 mL)淬滅，并用EtOAc (2X20 mL)萃取。將合并的有機(jī)萃取物用水(20 mL)和 鹽水（20 mL)洗滌，經(jīng)無水Na2S04干燥，過濾并蒸發(fā)。將粗材料通過硅膠柱色譜法 (combif lash)來純化，用己烷中的5-10%Et0Ac洗脫從而獲得近白色固體(0.9 g，78%)。4 匪R (400 MHz、CDC13) δ 7.51 (d， / = 8.4 Hz, 1H)， 7.34 (d， / = 8.4 Hz, 1H)， 1.77 (s， 3H)。
[0051 ]基本上通過制備16的方法來制備下述化合物。
[0053] 制備 18 4-氯-2，2-二甲基丁臆
在-60°(：下，向攪拌的二異丙胺(2.43 1111，17.36臟〇1)在干燥的1'冊(cè)（2〇1^)中的溶液 中逐滴添加 n-BuLi (14.4 ml，17.36 mmol)，并逐漸使其加溫至0°C，并攪拌20分鐘。將反應(yīng) 混合物冷卻至_78°C，并添加無水乙腈（1.42 ml，14.47 mmol )，并且將反應(yīng)在相同的溫度下 攪拌45分鐘。在-78°C下添加1-溴-4-氯丁烷（1.3 ml，15.91 mmol)，使其加溫至室溫并攪 拌3小時(shí)。將反應(yīng)混合物用飽和的NH4C1溶液(25 mL)淬滅，用EtOAc (2X50 mL)萃取。將合 并的有機(jī)萃取物用水(50 mL)和鹽水(50 mL)洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，并蒸發(fā)至干燥。將粗 產(chǎn)物通過硅膠柱色譜法(combiflash)來純化，用己燒中的5% EtOAc洗脫從而獲得標(biāo)題化合 物（0.5 8,25.2%)。咕 NMR (400 MHz、CDC13);3.67-3.63 (m， 2H), 2.06-2.02 (m， 2H)， 1.45-1.36 (m， 6H)〇
[0054] 制備 19 4-溴-2-甲基-丁-2-醇
在0°C下，向攪拌的4-溴-丁酸甲酯（2 g，12.27 mmol)在二乙基醚(20 mL)中的溶液中 添加甲基溴化鎂（16.4 ml，49.08 mmol )，并且將混合物在室溫下攪拌2小時(shí)。將反應(yīng)混合物 用1 N HC1淬滅，并用二乙基醚(2X20 mL)萃取。將合并的有機(jī)萃取物用飽和鹽水溶液(20 mL)洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。將粗材料通過硅膠柱色譜法(combi flash)純化，用 20% EtOAc/己烷洗脫從而獲得標(biāo)題化合物（1.3 8,65%)。咕 NMR (400 MHz、CDC13): δ 3.48 (t, /= 8.0 Hz, 2H), 2.16 (t, /= 7.4 Hz, 2H), 1.89 (s, 6H), 1.76 (s, 3H), 1.27 (s, 6H)〇
[0055] 制備 20 8_溴-2-異丙基-[1,2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-甲酸甲酯
在室溫下，向攪拌的1，2_二氨基-3-溴-5-甲氧基羰基-吡啶鑰4-甲基苯磺酸鹽(9 g， 21.4 mmol)在MeOH (35 mL)中的溶液中添加2-甲基丙醛(0.98 ml，10.7 mmol)和三乙胺 (8.6 ml，64.2 mmol)，并將混合物攪拌48小時(shí)。將反應(yīng)混合物蒸發(fā)至干燥，將殘留物用水 (50 mL)稀釋并用EtOAc (2X50 mL)萃取。將合并的有機(jī)萃取物用鹽水溶液(50 mL)洗滌， 經(jīng)硫酸鈉干燥，過濾并蒸發(fā)至干燥。將粗材料通過硅膠柱色譜法(comb if lash)來純化，用己 烷中的15-20%Et0Ac洗脫從而獲得作為淺黃色固體的標(biāo)題化合物（1.5 8，12%)兒01^ m/z (79Br/81Br) 298/300 (M+H) + 〇
[0056] 替代制備20 在〇 °C下，向攪拌的2，4，6-三甲基-苯磺酸1，2-二氨基-3-溴-5-甲氧基羰基-吡啶鑰鹽 (10 g，22.3 mmol)在 MeOH (100 mL)中的溶液中添加 2-甲基丙醛（0.8 g，l ml，ll.l mmol)和三乙胺（9 ml，66.9 mmol)，并將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌48小時(shí)。將反應(yīng)混合物 蒸發(fā)，用水稀釋，并用EtOAc (2X100 mL)萃取。將合并的有機(jī)萃取物用水(2X50 mL)、飽和 的氯化銨溶液(50 mL)、鹽水(50 mL)洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾并蒸發(fā)至干燥。將粗材 料通過硅膠柱色譜法(combiflash)來純化，用己烷中的20-40%Et0Ac洗脫從而獲得作為近 白色固體的標(biāo)題化合物(2.7 8,43.5%)兒〇]\^ m/z (79Br/81Br) 298/300 [M+H] +。
[0057] 制備 21 8-溴-2-異丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-甲酸乙酯
在室溫下，向攬摔的1，二氛基_3_漠_5_(乙氧基幾基)吡啶-1-鐵2，4，6_二甲基苯橫 酸鹽(2.2 Kg，4.78 mol)在吡啶（6.6 L)中的溶液中添加2-甲基丙酰氯（2.55 Kg，23.90 mol)，并將反應(yīng)混合物在100°C下加熱5小時(shí)。將反應(yīng)混合物蒸發(fā)至干燥，將殘留物用水(20 L)稀釋并攪拌1小時(shí)。將沉淀的固體過濾，用水(3X5 L)洗滌并干燥。將粗產(chǎn)物通過硅膠快 速色譜法來純化，用己烷:Et0Ac(8.0:2.0)洗脫從而獲得作為近白色固體的標(biāo)題化合物 (800 g,53.7%)〇LC-MS m/z (79Br/81Br) 312/314 [M+H] + 〇
[0058] 制備 22 (8-溴-2-異丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-基)-甲醇
在-78°C下，向8-溴-2-異丙基-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡啶-6-甲酸甲酯（1.4 g，4.70 mmol)在DCM (30 mL)中的溶液中添加二異丁基氫化錯(cuò)（9.5 ml，9 mmol，己燒中1 Μ)。將反 應(yīng)混合物加溫至〇°C并攪拌3小時(shí)。將反應(yīng)混合物用MeOH (20 mL)淬滅，并通過硅藻土過濾， 用EtOAc (30 mL)洗滌，并在減壓下蒸發(fā)，從而獲得標(biāo)題產(chǎn)物（1.8 g，100%粗品hLCMS m/z (79Br/81Br) 270/272 (M+H) + 〇
[0059] 基本上通過制備22的方法使用適當(dāng)?shù)聂人狨碇苽湎率龌衔铩?br>[0060] 表 6
[0061 ]制備 29 8_溴-6-氯甲基-2-異丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶
將(8-溴-2-異丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-基)-甲醇（1.8 g，0.57 mmol)和氯 化亞砜（10 mL)的混合物在室溫下攪拌2小時(shí)。將反應(yīng)混合物用飽和的碳酸氫鈉溶液（20 mL)淬滅，并用EtOAc (3X20 mL)萃取。將合并的有機(jī)萃取物經(jīng)硫酸鈉干燥、過濾并在真空 下蒸發(fā)，從而獲得標(biāo)題化合物（1.1 g^yohLCMSm/z (79Br/81Br) 288/290 [M+H] +。
[0062]基本上通過制備29的方法來制備下述化合物。
[0064] 制備 32 1-溴-3-溴甲基-2-甲基-苯
在〇°C下，向（3-溴-2-甲基-苯基)-甲醇(2 g，9.9 mmol)在DCM (25 mL)中的溶液中添 加三溴化磷（1.76 ml，14.9 mmol)，并使反應(yīng)混合物加溫至室溫并將其攪拌1小時(shí)。將反應(yīng) 混合物用DCM (20 mL)稀釋，用NaHC03水溶液淬滅，并用DCM (3X50 mL)萃取。將合并的有 機(jī)萃取物用水（10 mL)和鹽水（10 mL)洗滌，經(jīng)無水Na2S04干燥，過濾并蒸發(fā)至干燥，從而獲 得標(biāo)題化合物(2 8,77%)兒〇]\^ m/z 264 [M+H] +。
[0065] 基本上通過制備32的方法來制備下述化合物。
[0067] 制備 36 (3-溴-2-甲基-苯基)-乙腈
在室溫下，向溴-3-溴甲基-2-甲基-苯(0.2 g，7.6 mmol)在DMF (15 mL)中的溶液中添 加氰化鈉(0.55 g，11.4 mmol)。將反應(yīng)混合物在100°C下加熱12小時(shí)，并用高錳酸鉀溶液淬 滅，過濾，并且將濾液用水稀釋并用EtOAc (2X20 mL)萃取。將有機(jī)萃取物經(jīng)Na2S04干燥，過 濾并蒸發(fā)。將粗材料通過硅膠柱色譜法(combiflash)純化，用己燒中的10-25% EtOAc洗脫 從而獲得標(biāo)題化合物(0.8 8,28.2%)兒(：-]^ m/z 211 [M+H] +。
[0068] 制備 37 2-異丙基-8-(4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-甲酸甲酯
向攪拌的8-溴-2-異丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-甲酸甲酯（0.8 g，2.6 mmol)和4-甲氧基2,6-二甲基苯基硼酸（0.522 g，2.9 mmol)在甲苯（12 mL)和EtOH (3 mL)中的溶液中添加2 M K2C03溶液(3.9 ml，7.8 mmol)。將混合物用氬氣吹掃30分鐘，添加 Pd(PPh3)2Cl2 (0.182 g，0.26 mmol)并將反應(yīng)混合物在100°C下加熱16小時(shí)。將反應(yīng)混合物 冷卻至室溫，通過硅藻土過濾，將濾液用水(20 mL)稀釋并用EtOAc (2X20 mL)萃取。將合 并的有機(jī)萃取物用飽和鹽水溶液（1 〇 mL)洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥、過濾并濃縮。將粗材料通過 硅膠柱色譜法(combif lash)來純化，用己烷中的15-20%Et0Ac洗脫從而獲得作為黃色液體 的標(biāo)題化合物(0.26 g，27.4%) 1CMS m/z 354 (M+H) +。
[0069] 替代制備37 在室溫下，向攪拌的8-溴-2-異丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-甲酸甲酯（2.5 g，8.8 mmol)和4-甲氧基2,6_二甲基苯基硼酸（1.4 g，8.83 mmol)在甲苯（16 mL)中的溶 液中添加磷酸三鉀（5.3 g，12.4 mmol)，并將反應(yīng)混合物用氮?dú)獯祾?0分鐘，然后添加 Pd (amphos)Cl2 (0.57 g，0.802 mmol)。將反應(yīng)混合物在70°C下加熱過夜。將反應(yīng)混合物通過 硅藻土過濾，用EtOAc (2X20 mL)洗滌并將濾液蒸發(fā)。將粗材料通過硅膠柱色譜法 (combif lash)來純化，用己烷中的30%Et0Ac洗脫從而獲得作為褐色固體的標(biāo)題化合物（1.5 g,65.54%)〇LC-MS m/z 354 [M+H]+〇
[0070] 替代制備37 向攪拌的8-溴-2-異丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-甲酸甲酯（1.05 g，3.52 mmol)和4-甲氧基2,6_二甲基苯基硼酸(0.63 g，3.52 mmol)在1，4_二氧雜環(huán)己燒(20 mL) 中的溶液中添加2 M K2C03溶液（1.4 ml，2.9 mmol)。將混合物用氬氣吹掃30分鐘，然后添加 Pd(PPh3)2Cl2 (0.041 g，0.059 mmol)并將反應(yīng)混合物加熱至100°C進(jìn)行16小時(shí)。將反應(yīng)混 合物冷卻至室溫，通過硅藻土過濾，將濾液用水(20 mL)稀釋并用EtOAc (2X20 mL)萃取。 將合并的有機(jī)萃取物用鹽水（10 mL)洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥、過濾并濃縮。將粗材料通過硅膠 柱色譜法(combif lash)來純化，用己烷中的14% EtOAc洗脫從而獲得標(biāo)題化合物(0.13 g， 16%)〇LCMS m/z 354 (M+H)+〇
[0071] 制備 38 2-異丙基-8-(4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-[l，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-甲酸乙酯
向攪拌的8-溴-2-異丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-甲酸乙酯（400 g，1.28 mol)和4-甲氧基2,6-二甲基苯基硼酸（276.8 g，1.54 mol)在甲苯(8 L)中的溶液中添加 K3P〇4 (816 g，3.84 mol)在水(3.84 L)中的溶液，并且將反應(yīng)混合物用氮?dú)獯祾?小時(shí)，然 后添加 Pd(amphos)Cl2 (45.36 g，0.064 mol)，并且將反應(yīng)混合物用氮?dú)獯祾?0分鐘。將反 應(yīng)混合物在75 °C下加熱16小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，通過硅藻土過濾，并用EtOAc (3 XI L)洗滌。將濾液用水(5 L)稀釋，并用EtOAc (2X1.5 L)萃取。將合并的有機(jī)萃取物用 水(2.5 L)和鹽水(2.5 L)洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，過濾并濃縮至干燥。將粗產(chǎn)物(600 g)與另 一粗品批次(400 g)合并，并通過硅膠柱色譜法純化，用己烷中的15-20% EtOAc洗脫從而獲 得作為淡黃色固體的標(biāo)題化合物(901 g，95.68%)。
[0072] 制備 39 8-(2-氟-5-甲氧基-苯基)-2-異丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-甲酸乙酯
向攪拌的8-溴-2-異丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-甲酸乙酯（0.45 g，1.509 mmol)和2-氟4-甲氧基苯基硼酸(0.512 g，3.018 mmol)在1,4-二氧雜環(huán)己燒（6 mL)中的 溶液中添加2 M K2C03 (0.624 g，4.527 mmol)。將混合物用氬氣吹掃30分鐘，添加 Pd (PPh3)4 (0.087 g，0.075 mmol)，并且在微波中將混合物在100°C下加熱1小時(shí)。將反應(yīng)混合 物冷卻至室溫并通過硅藻土過濾。將濾液用水(20 mL)稀釋，并用EtOAc (2X10 mL)萃取。 將合并的有機(jī)層用鹽水（10 mL)洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥、過濾并濃縮。將粗材料通過硅膠柱色 譜法(comb if lash)來純化，用己烷中的15-20% EtOAc洗脫從而獲得標(biāo)題化合物(0.17 g， 33%)〇LCMS m/z 344 (M+H)+〇
[0073] 制備 40 6-氯甲基-2-異丙基-8-(4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-[l，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶
在〇°C下，向[2-異丙基-8-(4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡 啶-6-基]-甲醇(0.21 g，0.64 mmol)在DCM (10 mL)中的溶液中添加 SOCI2 (0.12 ml，1.61 mmol)。然后使混合物經(jīng)1小時(shí)加溫至室溫。將反應(yīng)混合物冷卻至0°C，用飽和的碳酸氫鈉溶 液(20 mL)淬滅，并用DCM (3X20 mL)萃取。將合并的有機(jī)萃取物用鹽水溶液洗滌，經(jīng)硫酸 鈉干燥、過濾并蒸發(fā)至干燥，從而獲得作為褐色固體的標(biāo)題化合物（0.06 gjgyc^LCMS m/ z；344 (M+H)+〇
[0074] 制備 41 2-[2-(6-羥基甲基-2-異丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-8-基)-苯基]-2-甲基-丙 腈
在0°C下，向攬摔的2_{2_[6_(叔丁基二甲基-娃烷基氧基甲基)_2_異丙基-[1，2,4]二 唑并[l，5-a]吡啶-8-基]-苯基}-2_甲基-丙腈（0.6 g，1.33 mmol)在THF (10 mL)中的溶 液中添加四正丁基氟化銨(0.52 g，2 mmol)，并將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌1小時(shí)。將反應(yīng) 混合物用水（10 mL)稀釋，并用EtOAc (2X20 mL)萃取。將合并的有機(jī)萃取物用水（10 mL) 和鹽水（10 mL)洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾并蒸發(fā)至干燥。將粗材料通過硅膠柱色譜法 (combif lash)來純化，用己烷中的40%Et0Ac洗脫從而獲得作為白色固體的標(biāo)題化合物(0.4 mg,50%)〇LC-MS m/z 335 [M+H]+〇
[0075] 制備 42 8-溴-6-(叔丁基二甲基-硅烷基氧基甲基)-2-異丙基-[1，2，4 ]三唑并[1，5-a ]吡啶
在〇°C下，向攪拌的8-溴-2-異丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-基)-甲醇(0.25 g， 0.92 mmol)在DMF (5 mL)中的溶液中添加咪唑（0.209 g，1.38 mmol)，并且將反應(yīng)混合物 在室溫下攪拌5分鐘，冷卻至0°C并添加叔丁基氯二甲基硅烷(0.209 g，l.38 mmol)。將反應(yīng) 混合物在室溫下攪拌12小時(shí)。將反應(yīng)混合物用水稀釋，并用EtOAc (2X25 mL)萃取。將合并 的有機(jī)萃取物用鹽水(20 mL)洗滌，經(jīng)Na2S04干燥，過濾并蒸發(fā)至干燥。將粗產(chǎn)物通過硅膠柱 色譜法(combiflash)來純化，用己烷中的10-30% EtOAc洗脫從而獲得標(biāo)題化合物(0.32 g， 90%)〇LCMS m/z 384/386 [M+H]+〇
[0076] 制備 43 {2-[6-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基甲基)-2-異丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-8-基]-苯基乙臆
在室溫下，向攬摔的8_漠_6_(叔丁基-二甲基-娃烷基氧基甲基)_2_異丙基-[1，2,4]二 唑并[l，5-a]吡啶（1.3 g，3.38 mmol)和[2-(4,4,5,5_四甲基_[1，3,2]二氧雜硼雜環(huán)戊 烷-2-基)-苯基]-乙腈（0.82 g，3.38 mmol)在二氧雜環(huán)己烷（10 mL)的溶液中添加乙酸 鉀（0.93 g，6.76 mmol)，并且將反應(yīng)混合物用氮?dú)獯祾?0分鐘。添加 Pd(PPh3)4 (0.195 g， 0.16 mmo 1)，然后在密封管中將反應(yīng)混合物在100 °C下加熱12小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻，并 通過娃藻土過濾，并將濾液蒸發(fā)至干燥。將粗產(chǎn)物通過硅膠柱色譜法(combi flash)來純化， 用己烷中的10-30% EtOAc洗脫從而獲得標(biāo)題化合物(0.6 8,42%)。^1^ m/z 421 [M+H] +。
[0077] 制備 44 2-(3-溴-2-甲基-苯基)-2-甲基-丙腈
在0°C下，向NaH (0.22 g，5.6 mmol，石蠟油中60%)在THF中的溶液中添加(3-溴-2-甲 基-苯基)-乙腈(0.6 g，2.8 mmol)在THF (4 mL)中的溶液。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌30 分鐘，然后添加碘甲烷（0.43 ml，7 mmo 1)。將反應(yīng)混合物室溫下攪拌12小時(shí)，用飽和的 NH4C1水溶液淬滅，并在EtOAc (2X25 mL)中萃取。將有機(jī)層用鹽水（10 mL)洗滌，經(jīng)Na2S〇4 干燥，過濾并蒸發(fā)。將另一批次的粗品與該批次合并，并通過硅膠柱色譜法(combiflash)純 化，用己烷中的10-30% EtOAc洗脫從而獲得標(biāo)題化合物（1.2 8,75.9%)兒01^ m/z 239 [M +H] + 〇
[0078] 基本上通過制備44的方法來制備下述化合物。
[0079] 表 9
[0080] 制備 47 2_異丙基-8-(4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-甲酸甲酯
向攪拌的8-溴-2-異丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-甲酸甲酯（0.8 g，2.6 mmol)和4-甲氧基2,6-二甲基苯基硼酸（0.522 g，2.9 mmol)在甲苯（12 mL)和EtOH (3 mL)中的溶液中添加2 M K2C03溶液(3.9 ml，7.8 mmol)。將混合物用氬氣吹掃30分鐘，添加 Pd(PPh3)2Cl2 (0.182 g，0.26 mmol)并將反應(yīng)混合物在100°C下加熱16小時(shí)。將反應(yīng)混合物 冷卻至室溫，通過硅藻土過濾，將濾液用水(20 mL)稀釋并用EtOAc (2X20 mL)萃取。將合 并的有機(jī)萃取物用飽和鹽水溶液（1 〇 mL)洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥、過濾并濃縮。將粗材料通過 硅膠柱色譜法(combiflash)來純化，用己烷中的15-20%Et0Ac洗脫從而獲得作為黃色液體 的標(biāo)題化合物(0.26 g，27.4%) 1CMS m/z 354 (M+H) +。
[0081 ] 替代制備47 在室溫下，向攪拌的8-溴-2-異丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-甲酸甲酯（2.5 g，8.8 mmol)和4-甲氧基2,6_二甲基苯基硼酸（1.4 g，8.83 mmol)在甲苯（16 mL)中的溶 液中添加磷酸三鉀（5.3 g，12.4 mmol)，并且將反應(yīng)混合物用氮?dú)獯祾?0分鐘，然后添加 Pd(amphos)Cl2 (0.57 g，0.802 mmol)。將反應(yīng)混合物在70°C下加熱過夜。將反應(yīng)混合物通 過硅藻土過濾，用EtOAc (2X20 mL)洗滌并將濾液蒸發(fā)。將粗材料通過硅膠柱色譜法 (combiflash)來純化，用己烷中的30%Et0Ac洗脫從而獲得作為褐色固體的標(biāo)題化合物（1.5 g,65.54%)〇LC-MS m/z 354 [M+H]+〇
[0082] 替代制備47 向攪拌的8-溴-2-異丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-甲酸甲酯（1.05 g，3.52 mmol)和4-甲氧基2,6_二甲基苯基硼酸(0.63 g，3.52 mmol)在1，4_二氧雜環(huán)己燒(20 mL) 中的溶液中添加2 M K2C03溶液（1.4 ml，2.9 mmol)。將混合物用氬氣吹掃30分鐘，然后添加 Pd(PPh3)2Cl2 (0.041 g，0.059 mmol)并將反應(yīng)混合物在100°C下加熱16小時(shí)。將反應(yīng)混合 物冷卻至室溫，通過硅藻土過濾，將濾液用水(20 mL)稀釋并用EtOAc (2X20 mL)萃取。將 合并的有機(jī)萃取物用鹽水（10 mL)洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥、過濾并濃縮。將粗材料通過硅膠柱 色譜法（combif lash)來純化，用己烷中的14% EtOAc洗脫從而獲得標(biāo)題化合物（0.13 g， 16%)〇LCMS m/z 354 (M+H)+〇
[0083] 制備 48 2-異丙基-8-(4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-[l，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-甲酸乙酯
向攪拌的8-溴-2-異丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-甲酸乙酯（400 g，1.281 mol)和4-甲氧基2,6-二甲基苯基硼酸(276.8 g，1.538 mol)在甲苯(8 L)中的溶液中添加 K3P〇4 (816 g，3.844 mol)在水(3.84 L)中的溶液，并且將反應(yīng)混合物用氮?dú)獯祾?小時(shí)，然 后添加 Pd(amphos)Cl2 (45.36 g，0.064 mol)，并且將反應(yīng)混合物用氮?dú)獯祾?0分鐘。將反 應(yīng)混合物在75 °C下加熱16小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，通過硅藻土過濾，并用EtOAc (3 XI L)洗滌。將濾液用水(5 L)稀釋，并用EtOAc (2X1.5 L)萃取。將合并的有機(jī)萃取物用 水(2.5 L)和鹽水(2.5 L)洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，過濾并濃縮至干燥。將粗產(chǎn)物(600 g)與另 一粗品批次(400 g)合并，并通過硅膠柱色譜法純化，用己烷中的15-20% EtOAc洗脫從而獲 得作為淡黃色固體的標(biāo)題化合物(901 g，95.68%)。
[0084] 制備 49 8_溴-2-異丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-甲酸甲酯
在室溫下，向攪拌的1，2_二氨基-3-溴-5-甲氧基羰基-吡啶鑰4-甲基苯磺酸鹽(9 g， 21.4 mmol)在MeOH (35 mL)中的溶液中添加異丁酸(0.98 ml，10.7 mmol)和三乙胺(8.6 ml，64.2 mmol)，并將混合物攪拌48小時(shí)。將反應(yīng)混合物蒸發(fā)至干燥，將殘留物用水(50 mL) 稀釋并用EtOAc (2X50 mL)萃取。將合并的有機(jī)萃取物用鹽水溶液(50 mL)洗滌，經(jīng)硫酸鈉 干燥，過濾并蒸發(fā)至干燥。將粗材料通過硅膠柱色譜法(comb if lash)來純化，用己燒中的 15-20%Et0Ac洗脫從而獲得作為淺黃色固體的標(biāo)題化合物（1.5 gMyohLCMS m/z (79Br/ 81Br) 298/300 (M+H) + 〇
[0085] 替代制備49 在〇 °C下，向攪拌的2，4，6-三甲基-苯磺酸1，2-二氨基-3-溴-5-甲氧基羰基-吡啶鑰鹽 (10 g，22.3 mmol)在 MeOH (100 mL)中的溶液中添加 2-甲基-丙醛（0.8 g，l ml，ll.l mmol)和三乙胺（9 ml，66.9 mmol)，并將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌48小時(shí)。將反應(yīng)混合物 蒸發(fā)，用水稀釋，并用EtOAc (2X100 mL)萃取。將合并的有機(jī)萃取物用水(2X50 mL)、飽和 的氯化銨溶液(50 mL)、鹽水(50 mL)洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥、過濾并蒸發(fā)至干燥。將粗材 料通過硅膠柱色譜法(combiflash)來純化，用己烷中的20-40%Et0Ac洗脫從而獲得作為近 白色固體的標(biāo)題化合物(2.7 8,43.5%)兒〇]\^ m/z (79Br/81Br) 298/300 [M+H] +。
[0086] 制備 50 8-溴-2-異丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-甲酸乙酯
在室溫下，向攬摔的1，二氛基_3_漠_5_(乙氧基幾基)吡啶-1-鐵2，4，6_二甲基苯橫 酸鹽（2.2 Kg，4.779 mol)在吡啶（6.6 L)中的溶液中添加異丁酰氯（2.546 Kg，23.895 mol)，并將反應(yīng)混合物在100°C下加熱5小時(shí)。將反應(yīng)混合物蒸發(fā)至干燥，將殘留物用水(20 L)稀釋并攪拌1小時(shí)。將沉淀的固體過濾，用水(3X5 L)洗滌并干燥。將粗產(chǎn)物通過硅膠快 速色譜法來純化，用己烷:Et0Ac(8.0:2.0)洗脫從而獲得作為近白色固體的標(biāo)題化合物 (800 g,53.7%)〇LC-MS m/z (79Br/81Br) 312/314 [M+H] + 〇
[0087] 制備 51 (8-溴-2-異丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-基)-甲醇
在-78°C下，向8-溴-2-異丙基-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡啶-6-甲酸甲酯（1.4 g，4.70 mmol)在DCM (30 mL)中的溶液中添加二異丁基氫化錯(cuò)（9.5 ml，9 mmol，己燒中1 Μ)。將反 應(yīng)混合物加溫至〇°C并攪拌3小時(shí)。將反應(yīng)混合物用MeOH (20 mL)淬滅，并通過硅藻土過濾， 用EtOAc (30 mL)洗滌，并在減壓下蒸發(fā)，從而獲得標(biāo)題產(chǎn)物（1.8 g，100%粗品hLCMS m/z (79Br/81Br) 270/272 (M+H) + 〇 [0088]基本上通過制備51的方法來制備下述化合物。
[0090]制備 588-溴-6-氯甲基-2-異丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶
將(8-溴-2-異丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-基)-甲醇（1.8 g，0.57 mmol)和氯 化亞砜（10 mL)的混合物在室溫下攪拌2小時(shí)。將反應(yīng)混合物用飽和的碳酸氫鈉溶液（20 mL)淬滅，并用EtOAc (3X20 mL)萃取。將合并的有機(jī)萃取物經(jīng)硫酸鈉干燥、過濾并在真空 下蒸發(fā)，從而獲得標(biāo)題化合物（1.1 g^yohLCMSm/z (79Br/81Br) 288/290 [M+H] +。
[0091 ]基本上通過制備58的方法來制備下述化合物。
[0093]制備 61 (S)-3-[4-(8-溴-2-異丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-基甲氧基)-苯基]-己-4-炔酸乙酯
向攪拌的（3)-3-(4-羥基-苯基)-己-4-炔酸乙酯（1.]^，3.8 1111]1〇1)和8-溴-6-氯甲 基-2-異丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶在乙腈(20 mL)中的溶液中添加碳酸銫(2.48 g， 7.62 mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。將反應(yīng)混合物通過娃藻土過濾，用EtOAc (20 mL)洗滌并蒸發(fā)至干燥。將殘留物溶解于EtOAc (30 mL)中，用水(2X30 mL)和鹽水溶 液（20 mL)洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，并在減壓下蒸發(fā)。將粗材料通過硅膠柱色譜法 (combif lash)來純化，用己烷中的35-40% EtOAc洗脫從而獲得標(biāo)題化合物（1.0 g，53.4%)。 LCMS m/z (79Br/81Br) 484/486 (M+H) +。
[0094]基本上通過制備61的方法來制備下述化合物。
[0096]制備 67 (S)-3-{4-[8-(4-氰基-苯基)-2-異丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-基甲氧基]_ 苯基}-己-4-炔酸乙酯
向攪拌的（S)-3-[4-(8-溴-2-異丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-基甲氧基)-苯 基]-己-4-炔酸乙酯（1.0 g，2.07 mmol)和4-氰基苯基硼酸(0.602 g，9.6 mmol)在1,4-二 氧雜環(huán)己燒（10 mL)中的溶液中添加2 Μ碳酸鉀(0.542 g，6.18 mmol)的溶液。將混合物 在氮?dú)夥諊麓祾?0分鐘，并添加 Pd(PPh3)4 (0.117 g，0.103 mmol)。在微波中將反應(yīng)混 合物在100°C下攪拌4小時(shí)。將反應(yīng)混合物用EtOAc (30 mL)稀釋，用水(2X30 mL)和鹽水溶 液（30 mL)洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾并在減壓下蒸發(fā)。將殘留物通過硅膠柱色譜法 (combif lash)來純化，用己燒中的30-40%Et0Ac洗脫從而獲得作為無色液體的標(biāo)題化合物 (0.500 g，47.8%)oLCMS m/z 507 (M-H)+。
[0097]基本上通過制備67的方法來制備下述化合物。
[0099] 制備 72 (S)-3-(4-{8-[4-(氰基-二甲基-甲基)-苯基]-2-異丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡 啶-6-基甲氧基}_苯基)_己-4-炔酸乙酯
在室溫下，向攪拌的2-甲基-2-[4-(4,4,5,5-四甲基_[1，3,2]二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-苯基]-丙腈（0.184 g，0.680 mmol)和(S)-3-[4-(8-溴-2-異丙基_[1，2,4]三唑并[1， 5_a]吡啶-6-基甲氧基)-苯基]-己-4-炔酸乙酯（0.3 g，0.619 mmol)在1,4-二氧雜環(huán)己燒 (10 mL)中的溶液中添加2 Μ碳酸鉀（0.619 ml，1.238 mmol)。將反應(yīng)混合物在氮?dú)夥諊?下吹掃20分鐘，并添加 Pd(PPh3)2Cl2 (0.021 g，0.0309 mmol)。將反應(yīng)混合物在100°C下加 熱16小時(shí)。將反應(yīng)混合物通過硅藻土過濾，并用Et0Ac(2 X 20 mL)洗滌。將濾液用冷水(2 X 10 mL)和鹽水（10 mL)洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾并蒸發(fā)至干燥。將粗材料通過硅膠柱 色譜法(combif lash)純化，用己燒中的30-50%Et0Ac洗脫從而獲得作為無色液體的標(biāo)題化 合物（0.13 gJS^/ohLC-MS m/z 547 [M+H] +。
[0100] 基本上通過制備72的方法來制備下述化合物。
[0102]制備 74 (S)-3-{4-[8-(2-氰基-苯基)-2-異丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-基甲氧基]_ 苯基}-己-4-炔酸乙酯
向攪拌的（S)-3-[4-[8-(8-溴-2-異丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-基甲氧基]_ 苯基}-己-4-炔酸乙酯（0.200 g，1.64mmol)和2-(4,4,5,5_四甲基_[1，3,2]二氧雜硼雜 環(huán)戊燒-2-基)-苯甲腈(0.110 g，l.96 mmol)在1,4-二氧雜環(huán)己燒（9 mL)中的溶液中添加 固體碳酸鉀(0.172 g，4.92 mmol)。將混合物在氮?dú)夥諊麓祾?0分鐘，并添加 Pd(PPh3)4 (0.024 g，0.800 mmol)。將反應(yīng)混合物在100°C下加熱過夜，通過娃藻土過濾，用EtOAc洗 滌，并在減壓下蒸發(fā)至干燥。將殘留物通過硅膠柱色譜法(combiflash)來純化，用己烷中的 29-32% EtOAc洗脫從而獲得標(biāo)題化合物（0.140 gjea/ohLCMS m/z 507 (M+H) +。
[0103] 制備 75 (S)-3-(4-{8-[3-(氰基-二甲基-甲基)-苯基]-2-異丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡 啶-6-基甲氧基}_苯基)_己-4-炔酸乙酯.
向攪拌的（S)-3-[4-(8-溴-2-異丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-基甲氧基)-苯 基]-己-4-炔酸乙酯（0.4 g，0.82 mmol)和2-甲基-2-[3-(4,4,5,5-四甲基_[1，3,2]二氧 雜棚雜環(huán)戊燒_2_基)-苯基]-丙臆（0.23 g，0.9 mmol)在1，4_二氧雜環(huán)己燒（40 mL)中的 溶液中添加 K2⑶3 (0.33 g，2.4 mmol)。將混合物用氮?dú)獯祾?0分鐘。然后，添加 Pd(dppf) 2C12.DCM (0.066 g，0.08 mmol)，并將混合物在100°C下加熱12小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至 室溫并通過娃藻土過濾。將濾液用EtOAc (2 X 30 mL)洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。 將粗材料通過硅膠柱色譜法(comb if lash)純化，用己燒中的15-20% EtOAc洗脫從而獲得標(biāo) 題化合物（0.1 8,22.22%)。1^1^ m/z 549.5 (M+H) +。
[0104] 制備 76 8- (4-羥基-2，6-二甲基-苯基)-2-異丙基-[1，2，4 ]三唑并[1，5-a ]吡啶-6-甲酸甲酯
在-40°C下，向2-異丙基-8-(4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡 啶-6-甲酸甲酯（1.25 g，3.5 mmol)在DCM (30 mL)中的溶液中添加三溴化硼(0.51 ml， 5.3 mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌1小時(shí)。將反應(yīng)混合物用碳酸氫鈉水溶液(5 mL)淬 滅，并用EtOAc (2X20 mL)萃取。將合并的有機(jī)萃取物用水（10 mL)和鹽水溶液（10 mL)洗 滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾并蒸發(fā)，從而獲得標(biāo)題化合物(0.9 8,76%)丄〇]\^ m/z 340 [M +H] +。
[0105] 制備 77 8-[4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-2,6-二甲基-苯基]-2-異丙基_[1，2,4]三唑并 [l，5-aM啶-6-甲酸甲酯
在0°C下，向攪拌的8-(4-羥基-2，6-二甲基-苯基)-2-異丙基-[1，2，4]三唑并[1，5-a] 吡啶-6-甲酸甲酯（0.9 g，2.65 mmol)在DMF (30 mL)中的溶液中添加咪唑（0.540 g， 7.96 mmol)和叔丁基二甲基氯硅烷（1.2 g，7.96 mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌16小 時(shí)。將反應(yīng)混合物用水(30 mL)稀釋，并用EtOAc (2X50 mL)萃取。將合并的有機(jī)萃取物用 水(30 mL)和鹽水溶液(30 mL)洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾并蒸發(fā)。將粗材料通過硅膠柱 色譜法(combif lash)來純化，用己烷中的8% EtOAc洗脫從而獲得標(biāo)題化合物（1.1 g，92%)。 LC-MS m/z 454 [M+H]+〇
[0106] 制備 78 ((S)-3-(4-{8-[4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-2,6-二甲基-苯基]-2-異丙基[1，2， 4 ]三唑并[1，5-a ]吡啶-6-基甲氧基}-苯基)-己-4-炔酸乙酯
向攪拌的{8-[ 4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-2，6-二甲基-苯基]-2-異丙基-[1，2， 4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-基}-甲醇(0.8 g，1.8 mmol)在DCM (20 mL)中的溶液中添加(S)-3-(4-羥基-苯基)-己-4-炔酸乙酯（0.655 g，2.8 mmol)、DEAD (0.43 ml，2.8 mmol)和三 苯基膦（0.566 g，2.16 mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌90分鐘。將反應(yīng)混合物蒸發(fā)，并 將粗材料通過硅膠柱色譜法(combiflash)來純化，用己燒中的18% EtOAc洗脫從而獲得標(biāo) 題化合物（1 gjia/ohLC-MS m/z 640 [M+H] +。
[0107] 制備 79 (S)-3-{4-[8-(4-羥基-2，6-二甲基-苯基)-2-異丙基-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸乙酯
在〇°C下，向攪拌的（S)-3-(4-{8-[4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-2,6_二甲基-苯 基]-2-異丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-基甲氧基}-苯基)-己-4-炔酸甲酯（0.1 g， 1.56 mmol)在THF (20 mL)中的溶液中添加四正丁基氟化銨（0.8 g，3.12mmol)。將反應(yīng)混 合物在室溫下攪拌1小時(shí)。將混合物用水（10 mL)稀釋，并用EtOAc (2X20 mL)萃取。將合并 的有機(jī)萃取物用水（10 mL)和鹽水(10 mL)洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾并蒸發(fā)至干燥。將 粗材料通過硅膠柱色譜法(comb if lash)來純化，用己燒中的40%Et0Ac洗脫從而獲得作為白 色固體的標(biāo)題化合物(0.4 gjOa/ohLC-MS m/z 526 [M+H] +。
[0108] 制備 80 2-異丙基-8-[4-(2-甲氧基-乙氧基)-2,6-二甲基-苯基]_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡 啶-6-甲酸甲酯
在室溫下，向攪拌的8-( 4-羥基-2，6-二甲基-苯基)-2-異丙基-[1，2，4 ]三唑并[1，5-a ] 吡啶-6-甲酸甲酯（0.40 g，l.185 mmol)和 1-溴-2-甲氧基-乙烷（0.82 ml，9.06 mmol)在 乙腈（15 mL)中的溶液中添加碳酸銫（0.734 g，2.26 mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌 過夜。將混合物通過硅藻土過濾，用EtOAc (20 mL)洗滌并濃縮，從而獲得殘留物。將殘留物 溶解于EtOAc (30 mL)中，用水（2X30 mL)、鹽水溶液(30 mL)洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，過濾并 在減壓下蒸發(fā)。將粗化合物通過硅膠柱色譜法(combif lash)純化，用己燒中的30%Et0Ac洗 脫從而獲得作為白色半固體的標(biāo)題化合物(0.350 g，87%)。LCMS m/z 397 (M+H) +。
[0109] 制備 81 8-(2,6-二甲基-4-(3-(甲基磺?；?丙氧基)苯基)-2-異丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a] P比啶-6-甲酸乙酯
在室溫下，向攪拌的8-(4-羥基-2，6_二甲基苯基)-2-異丙基-[1，2，4]三唑并[1，5-a] P比啶-6-甲酸乙酯（1.1 g，3.11 mmol)和3_(甲基磺酰基）丙基-4-甲基苯磺酸酯（1.09 g， 3.73 mmol)在DMF (15 mL)中的溶液中添加碳酸鉀（1.29 g，9.34 mmol)。將反應(yīng)混合物在 80 °C下加熱16小時(shí)。然后，將混合物用水淬滅，并用EtOAc (2X70 mL)萃取。將有機(jī)萃取物 用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，并在減壓下蒸發(fā)。將粗化合物通過硅膠柱色譜法(combiflash) 來純化，用正己烷中的45% EtOAc洗脫從而獲得標(biāo)題化合物（0.8 8,54.27%)丄01^ m/z 474.41 (M+H)+〇
[0110] 制備 82 ((S)-3-(4-{8-[4-(3-羥基-3-甲基-丁氧基)-2,6-二甲基-苯基]-2-異丙基 _[1，2,4] 三唑并[1，5-a ]吡啶-6-基甲氧基}-苯基)-己-4-炔酸乙酯
向攪拌的（S)-3-(4-{8-[4-(3-羥基-3-甲基-丁氧基)-2,6_二甲基-苯基]-2-異丙基-[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-基甲氧基}-苯基）-己-4-炔酸乙酯（0.09 g，0.17 mmol)在 乙腈（10 mL)中的溶液中添加4-溴-2-甲基-丁-2-醇（0.114 g，0.68 mmol)和碳酸銫 (0.168 g，0.51 mmol)。將反應(yīng)混合物在100°C下攪拌4小時(shí)。將反應(yīng)混合物溶解于水（10 mL)中，并用EtOAc (2X20 mL)萃取。將合并的有機(jī)萃取物用水（10 mL)和鹽水（10 mL)洗 滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾并蒸發(fā)。將粗材料通過硅膠柱色譜法來純化，用己烷中的40% EtOAc洗脫從而獲得作為褐色固體的標(biāo)題化合物(0.05 gjimhLC-MS m/z 612 [M+H] +。
[0111] 制備 83 (S)-3-(4-{8-[4-(3-氰基-3,3-二甲基-丙氧基)-2,6-二甲基-苯基]-2-異丙基-[1，2， 4 ]三唑并[1，5-a ]吡啶-6-基甲氧基}-苯基)-己-4-炔酸乙酯
向攪拌的（S)-3-{4-[8-(4-羥基-2,6-二甲基-苯基)-2-異丙基_[1，2,4]三唑并[1，5-a]P比啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸乙酯（0.16 g，0.304 mmol)和4-氯-2,2-二甲基丁 腈（0.047 g，0.364 mmol)在DMF (10 mL)中的溶液中添加碳酸銫(0.29 g，0.912 mmol)， 并在90°C下攪拌4小時(shí)。將反應(yīng)混合物通過硅藻土過濾，將濾液用水(30 mL)稀釋并用EtOAc (2X30 mL)萃取。將合并的有機(jī)萃取物用鹽水溶液(2 mL)洗滌，經(jīng)無水Na2S04干燥，并蒸發(fā) 至干燥。將粗化合物通過硅膠柱色譜法(combiflash)來純化，用30% EtOAc/己燒洗脫從而 獲得標(biāo)題化合物(0.17 gjAa/ohES/MS m/z 621.4 [M+H] +。
[0112] 制備 84 (S)-3-{4-[8- (4-氰基甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-2-異丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a] 吡啶-6-基甲氧基]-苯基}_己-4-炔酸乙酯
向攪拌的（S)-3-(4-{8-[4-羥基-2,6-二甲基-苯基]-2-異丙基_[1，2,4]三唑并[1，5-a]P比啶-6-基甲氧基}-苯基)-己-4-炔酸甲酯(0.09 g，0.17 mmol)在乙腈（10 mL)中的溶液 中添加溴乙腈(0.26 g，0.22 mmol)和碳酸鉀(0.046 g，0.34 mmol)。將反應(yīng)混合物在100°C 下攪拌4小時(shí)。將反應(yīng)混合物用水（10 mL)稀釋，并用EtOAc (2X20 mL)萃取。將合并的有機(jī) 萃取物用水（10 mL)、鹽水（10 mL)洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾并蒸發(fā)至干燥。將粗材料 通過硅膠柱色譜法(combif lash)來純化，用己燒中的35%EtOAc洗脫從而獲得作為褐色固體 的標(biāo)題化合物(0.08 g，82.4%) IC-MS m/z 565 [M+H] +。
[0113] 實(shí)施例1 (S)-3-{4-[2-異丙基-8-(4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-[l，2,4]三唑并[1，5-&]吡啶_ 6-基甲氧基]-苯基}_己-4-炔酸
向（S)-3-{4-[2-異丙基-8-(4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-[1，2,4]三唑并[1，5-&]吡 啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸乙酯（0.11 g，0.2 mmol)在EtOH (15 mL)中的溶液中 添加5 N NaOH (0.12 ml，0.61 mmol)。將混合物在室溫下攪拌2小時(shí)。將混合物蒸發(fā)至干 燥，將殘留物用正戊烷洗滌，干燥并再溶于水(5 mL)中。將溶液用飽和的檸檬酸溶液酸化至 約pH 5。將固體沉淀過濾，用水洗滌，并干燥從而獲得作為白色固體的標(biāo)題化合物(0.068 gJSo/ohLCMS m/z 512 (Μ+Η) + </Η MMR (400 MHz, d6-DMS0) δ 12.17 (bs, 1H), 8.95 (s, 1H), 7.40 (s, 1H), 7.26 (t, /= 8.0 Hz, 2H), 6.98 (d, /= 8.4 Hz, 2H), 6.73 (s, 2H), 5.20 (s, 2H), 3.92 (s, 1H), 3.76 (s, 3H), 3.08 (t /= 8.0 Hz, 2H), 2.65 (s, 2H), 1.89 (s, 6H), 1.75 (s, 3H), 1.27 (d, /= 6.4 Hz, 6H)〇
[0114] 基本上通過實(shí)施例1的方法來制備下述化合物。
[0116] 替代制備，實(shí)施例1 在10-15°C下，向⑶-3-{4-[2-異丙基-8-(4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-[1，2,4]三唑 并[l，5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸乙酯（419 g，0.776 mol)在EtOH (8.38 L)和THF (1 L)中的溶液中添加 NaOH (62.1 g，1.55 mol)在水(310 mL)中的溶液。將反應(yīng) 混合物加溫至25°C并攪拌2小時(shí)。添加額外的NaOH (31.05 g，0.78 mol)在水（155 mL)中的 溶液，并將反應(yīng)攪拌另外1.5小時(shí)。將反應(yīng)混合物蒸發(fā)至干燥，從而獲得粘性材料，將其用水 (4.5 L)稀釋并用二乙基醚(3X2.5 L)洗滌。將水層冷卻至0°C，并用飽和的檸檬酸溶液酸 化至pH 4.2,并攪拌30分鐘。將所得到的白色乳液用DCM (3X5 L)萃取。將合并的有機(jī)萃取 物用水(3X4 L)和鹽水(4 L)洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾并蒸發(fā)至干燥，從而獲得粘性 油。將該油溶解于DCM (5 L)中并過濾，從而除去可能存在的任何顆粒。將所得到的濾液濃 縮成粘性油。添加二乙基醚（2.5 L)，然后添加正己烷(5 L)，并且將混合物攪拌4小時(shí)。從 所得到的膠狀材料中，在40°C下除去溶劑12小時(shí)，從而獲得作為標(biāo)題化合物的淡黃色固體 (341.9 g,86%)〇LCMS m/z 512 (M+H)+〇
[0117] Tris 鹽制備 (S)-3-{4-[8-(2,6-二甲基-苯基)-2-異丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-基甲氧 基!h苯基卜己-4-炔酸的tris鹽是通過在80°C下(板溫度）以1000 rpm攪拌的同時(shí)將(S)-3-{4-[8-(2,6_二甲基-苯基)-2-異丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}- 己-4-炔酸（492 mg)溶解于乙腈（10 mL)中來制備。添加三羥甲基氨基甲烷 (Tromethamine)(tris) (492 mg)(溶解于 1 mL的水中）。將樣品在80°C/1000 rpm下衆(zhòng)化 15分鐘。關(guān)閉加熱和攪拌，并使得板達(dá)到室溫。在室溫下短時(shí)間恢復(fù)攪拌。在達(dá)到室溫后，將 樣品放置在5°C的冰箱中30分鐘。通過真空過濾分出白色的固體Tris鹽形式，并將其適當(dāng)?shù)?在真空和氣流下在濾紙上干燥15分鐘。將所得到的亮白色固體（由于片狀形態(tài)）用70°C真空 烘箱干燥。回收所得到的（S)-3-{4-[8-(2,6-二甲基-苯基)-2-異丙基_[1，2,4]三唑并[1， 5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸的tris鹽(458 mg, 74%收率）。
[0118] 實(shí)施例6 (S)-3-(4-( (8-(2,6-二甲基-4-(3-(甲基磺?；?丙氧基)苯基)-2-異丙基_[1，2,4]三 唑并[1，5-a]吡啶-6-基）甲氧基)苯基)己-4-炔酸
向攪拌的（S)-3-(4-((8-(2,6-二甲基-4-(3-(甲基磺?；?丙氧基)苯基)-2-異丙基-[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-基）甲氧基）苯基）己-4-炔酸乙酯（0.200 g，0.309 mmol) 在EtOH (15 mL)中的溶液中添加5 N氫氧化鈉（0.18 ml，0·93 mmol)。將反應(yīng)混合物在室 溫下攪拌16小時(shí)。將反應(yīng)混合物濃縮，并將殘留物用二乙基醚(2X10 mL)洗滌，溶于水(25 mL)中并用1.0 N HC1酸化(pH 4-5)。將化合物用DCM (2X25 mL)萃取，并且將有機(jī)萃取物 經(jīng)無水Na2S〇4干燥，過濾并濃縮至干燥。將粗材料進(jìn)一步通過制備型HPLC純化。制備型HPLC 條件：柱:X BRIDGE C18 (19 X 250) mm，5μ;移動(dòng)相（A):0.1% TFA;移動(dòng)相（B):乙腈； 流速:梯度，15 ml/分鐘，從而獲得作為白色固體的標(biāo)題化合物(0.070 8,36.64%)。^1^ m/ z 318.50 (M+H)+〇
[0119] 實(shí)施例7 (S)-3-(4-{8-[4-(3-氰基-3,3-二甲基-丙氧基)-2,6-二甲基-苯基]-2-異丙基-[1，2， 4 ]三唑并[1，5-a ]吡啶-6-基甲氧基}-苯基)-己-4-炔酸
向攪拌的（S)-3-(4-{8-[4-(3-氰基-3,3-二甲基-丙氧基)-2,6-二甲基-苯基]-2-異丙 基-[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-基甲氧基}-苯基）-己-4-炔酸乙酯（0.16 g，0.258 mmol)在EtOH (10 mL)中的溶液中添加5 N氫氧化鋰(0.15 ml，0.774 mmol)，并且將混合 物在80°C下攪拌2小時(shí)。將反應(yīng)混合物在減壓下濃縮，并且將殘留物用乙醚/正戊烷（1:1)磨 碎。將該材料溶解于水中，并用檸檬酸溶液酸化至約5的pH。將固體沉淀過濾并冷凍干燥，從 而獲得作為白色固體的標(biāo)題化合物(0.145 g^UACMS m/z 593.4[M+H] +。
[0120]基本上通過實(shí)施例7的方法來制備下述化合物。
[0122] 實(shí)施例9 (S)-3-(4-{8-[2-(氰基-二甲基-甲基)-苯基]-2-異丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡 啶-6-基甲氧基}_苯基)_己-4-炔酸
向（S)-3-(4-{8-[2-(氰基-二甲基-甲基)-苯基]-2-異丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡 啶-6-基甲氧基}-苯基)-己-4-炔酸乙酯（0.06 g，0.109 mmol)在THF/水（6 mL/2 mL)中 的溶液中添加2 M LiOH (0.109 ml，0.218 mmol)。將混合物在室溫下攪拌12小時(shí)。在減壓 下蒸發(fā)THF。將粗材料用飽和的檸檬酸溶液酸化(pH~5)。然后，將固體沉淀過濾并經(jīng)真空干 燥，從而獲得作為近白色固體的標(biāo)題化合物(0.043 g^UAC-MS m/z 521 [M+H] +。
[0123] 基本上通過實(shí)施例9的方法來制備下述化合物。
[0125] 實(shí)施例12 ((S)-3-{4-[8-(3-氰基甲基-苯基)-2-異丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-1甲氧 基]-苯基}-己-4-炔酸
向（S)-3-(4-{8-[3-(氰基-二甲基-甲基)-苯基]-2-異丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡 啶-6-基甲氧基}-苯基)-己-4-炔酸乙酯（0.07 g，0.13 mmol)在THF (7 mL)和水（3 mL) 中的溶液中添加 LiOH*H2〇 (0.028 g，0.67 mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌48小時(shí)。將 反應(yīng)混合物蒸發(fā)至干燥，然后用水（10 mL)稀釋，用檸檬酸酸化(pH~5)并用DCM (2X30 mL)萃取。將合并的有機(jī)萃取物經(jīng)無水硫酸鈉干燥并濃縮。將粗材料通過硅膠柱色譜法 (combiflash)純化，用15-50% EtOAc/己烷洗脫從而獲得標(biāo)題化合物（0.025 g，29.41%)。 LCMS m/z 493.3 (M+H)+〇
[0126] 基本上通過實(shí)施例12的方法來制備下述化合物。
a 通過制備型HPLC來純化，其使用柱:Kinetex C18 (50 mm X 2.1 mm X 1.7 μπι)，使 用移動(dòng)相(Α)水中的0.01% TFA和(Β)乙腈，具有0.3 mL/分鐘的流速。
[0128] 實(shí)施例16 (S)-3-{4-[8-(4-氰基甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-2-異丙基-[1，2,4]三唑并[1，5-&] 吡啶-6-基甲氧基]-苯基}_己-4-炔酸
向攪拌的（S)-3-{4-[8- (4-氰基甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-2-異丙基_[1，2,4]三唑 并[1，5-a]吡陡基甲氧基]-苯基}-己-4 -塊酸乙醋（0.07 g，0.12 mmol)在二氣乙燒 (10 mL)中的溶液中添加三甲基氫氧化錫（0.224 g，l.23 mmol)，并將混合物在80°C下加 熱96小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，并用1.5 N HC1溶液（20 mL)洗滌，并用EtOAc (2X 20 mL)萃取。將合并的有機(jī)萃取物用飽和鹽水溶液（10 mL)洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥、過濾并濃 縮。將粗材料通過硅膠柱色譜法(combiflash)純化，用49% EtOAc/己燒洗脫從而獲得作為 黃色固體的標(biāo)題化合物(0.023 g，34.8%) 1CMS m/z 536 (M+H) +。
[0129] 基本上通過實(shí)施例16的方法來制備下述化合物。
[0131] GPR40:信息 最近由Nagasumi報(bào)道的使用轉(zhuǎn)基因小鼠在胰島素 II啟動(dòng)子的控制下過度表達(dá)人體 GPR40基因的研究結(jié)果進(jìn)一步支持下述觀點(diǎn):GPR40在體內(nèi)的GDIS和血漿葡萄糖水平的調(diào)節(jié) 中起到了重要的作用，尤其是在胰島素抵抗的嚙齒動(dòng)物模型中。Nagasumi K等人， Overexpression of GPR40 in pancreatic β-cells augments glucose-stimulated insulin secretion and improves glucose tolerance in normal and diabetic mice, Diabetes 58: 1067-1076，2009。還參見Briscoe CP等人，TAe orpAa/? 61 jOroiei/?-coupled receptor GPR40 is activated by medium and long chain fatty acids, Journal Biological Chemistry 278: 11303 - 11311，2003。這些發(fā)現(xiàn)進(jìn)一步支持了下 述觀點(diǎn)：可以特別期望開發(fā)新的GPR40調(diào)節(jié)劑化合物以用于T2D的治療。
[0132] 試驗(yàn) 鈣通量初步試驗(yàn) 基本上如下所述地測(cè)試在本文中示例的化合物，并且展現(xiàn)出對(duì)于鈣通量初步試驗(yàn)而言 小于500 nM的EC5Q值，并展現(xiàn)出>50%的功效。
[0133] 這些試驗(yàn)用于通過測(cè)量細(xì)胞內(nèi)鈣水平的提高來篩選化合物，當(dāng)配體結(jié)合并激活 GPR40時(shí)導(dǎo)致所述細(xì)胞內(nèi)鈣水平的提高，由此證明了 GPR40激動(dòng)劑的效能和功效。將過度表 達(dá)人體GPR40 cDNA的HEK293細(xì)胞用于所述研究，所述細(xì)胞在37°C和5% C02下保持在補(bǔ)充有 10% FBS和800 μg/ml的遺傳霉素的以3:1的比例的達(dá)爾伯克氏改良伊格爾氏培養(yǎng)基與F12 培養(yǎng)基中。在試驗(yàn)緩沖液（lXHBSS(Hank's平衡鹽溶液）和20 mM HEPES(4-(2-羥基乙基）-1-哌嗪乙磺酸））中，在存在或不存在0.1%不含脂肪酸的BSA的情況下使用Calcium 4 Dye試 驗(yàn)試劑盒(Molecular Devices)進(jìn)行激動(dòng)劑試驗(yàn)。使用焚光成像讀板儀(FLIPR)作為細(xì)胞內(nèi) 鈣的提高來測(cè)量受體激活。將超出基線的熒光最大改變用于測(cè)定激動(dòng)劑響應(yīng)。使用Excel Fit軟件(第4版；IDBS)通過繪制濃度vs相對(duì)熒光單位(RFU)來計(jì)算化合物的EC 5Q值。基于與 天然配體亞油酸相比化合物所展現(xiàn)出的最大響應(yīng)來計(jì)算百分比功效。當(dāng)在該試驗(yàn)中檢驗(yàn) 時(shí)，實(shí)施例1的受試化合物具有247 nM( ±23.9，n=12)的EC5Q和78.7%的功效（± 12.5，n=12)。 這些結(jié)果進(jìn)一步證明了該化合物作為GPR40激動(dòng)劑的所期望的效能和功效。（平均值土SEM; SEM =該平均值的標(biāo)準(zhǔn)誤差）。
[0134] 選擇性試驗(yàn) 過氧化物酶體增殖物激活受體(ΡΡΑΙ〇α、δ和γ功能試驗(yàn) 由于已知GPR40通過結(jié)合至PPARy的配體而激活，所以在Gal4 PPARa、Gal4 PPARS和 PPAR γ報(bào)告子(reporter)試驗(yàn)中檢驗(yàn)示例化合物以確定示例化合物的選擇性。使用Fugene 用多種受體和報(bào)告子質(zhì)粒轉(zhuǎn)染源自非洲綠猴的腎組織的CV1細(xì)胞。對(duì)于Gal4 PPARa和Gal4 PPAR5試驗(yàn)，將含有酵母轉(zhuǎn)錄蛋白Gal4響應(yīng)元件的五個(gè)串聯(lián)副本(tandem copies)的報(bào)告子 質(zhì)粒（在由腺病毒的主要晚期啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的螢火蟲熒光素酶基因的上游克?。┡cSimian Virus 40 (SV40)驅(qū)動(dòng)的構(gòu)成性地表達(dá)含有Gal4 DNA結(jié)合域(DBD)和PPARa或PPARS配體結(jié)合 域的雜交蛋白的質(zhì)粒一起轉(zhuǎn)染。對(duì)于PPAR γ試驗(yàn)，將均由巨細(xì)胞病毒(CMV)啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的編 碼PPARy和RXRa的質(zhì)粒與含有由ΤΚ啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的熒光素酶報(bào)告子cDNA和受體響應(yīng)元件（2 XPPRE)的質(zhì)粒一起轉(zhuǎn)染。細(xì)胞在T225 cm2細(xì)胞培養(yǎng)燒瓶中在帶有5%木炭剝離的FBS和用于 個(gè)別試驗(yàn)的特異性質(zhì)粒的DMEM培養(yǎng)基中轉(zhuǎn)染。在過夜培養(yǎng)后，將轉(zhuǎn)染的細(xì)胞胰蛋白酶化，在 含有5%木炭剝離的FBS的DMEM培養(yǎng)基中點(diǎn)板于不透明的96孔盤中（15，000細(xì)胞/孔），培養(yǎng)4 小時(shí)并暴露于以半對(duì)數(shù)稀釋的0.17 nM至10 μΜ的受試化合物或參比化合物。與化合物培養(yǎng) 24小時(shí)后，使細(xì)胞裂解并通過發(fā)光測(cè)定熒光素酶活性作為受體激活的量度。將數(shù)據(jù)擬合成 四參數(shù)擬合的logistics模型以測(cè)定EC 5Q值。相對(duì)于用10 μΜ適當(dāng)?shù)腜PAR激動(dòng)劑參比化合物 (2-甲基-2-(4-{2-甲基-3-[2-(苯基羰基)-4-(三氟甲氧基)苯氧基]丙氧基}苯氧基)丙酸） 獲得的最大刺激來測(cè)定最大百分比刺激?！?0%的功效被認(rèn)為是陰性的。在PPAR功能試驗(yàn)中， 對(duì)于實(shí)施例1的化合物的EC 5q如下所述:PPARa> 10 μΜ;ΡΡΑΚδ = 4 μΜ;ΡΡΑΙ?γ = 2.26 μΜ。 這些數(shù)據(jù)表明，實(shí)施例1的示例化合物具有弱的PPAR活性。因此，這些試驗(yàn)支持了下述觀點(diǎn)： 在所述的試驗(yàn)中，示例化合物具有如期望的弱的或者陰性的PPAR功效。
[0135] 對(duì)GPR-40的體外結(jié)合親和力 運(yùn)行使用自制放射性標(biāo)記（5 nM [3H]-TAK-875)和由過度表達(dá)人體GPR40(hGPR40)構(gòu) 造的HEK293細(xì)胞制備的膜的快速洗濾的放射性配體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合試驗(yàn)，從而測(cè)定受試化合物的 平衡解離常數(shù)(KD。將競(jìng)爭(zhēng)曲線繪制為特異性抑制百分比vs化合物濃度，并使用具有可變 斜率的四參數(shù)非線性回歸擬合進(jìn)行分析。使用Cheng-Prusoff方程Ki = IC5〇/(l + (D/Kd))計(jì) 算Ki值，其中IC5〇是導(dǎo)致50%結(jié)合抑制的化合物濃度，D是試驗(yàn)中使用的放射性配體的濃度， 并且K d是所述受體和所述放射性配體的平衡解離常數(shù)，其由飽和結(jié)合分析實(shí)驗(yàn)測(cè)定（[3H] TAK-875的Kd = 6.2)。對(duì)于實(shí)施例l，Ki=15.8 ηΜ±3·86，η=5/6。參見Cheng, Υ·和Prusoff, ff.Η. (1973) "Relationship between the inhibition constant (Ki) and the concentration of inhibitor which causes 50 per cent inhibition (IC50) of an enzymatic reaction"，22(23):3099_108。（平均值土SEM;SEM =該 平均值的標(biāo)準(zhǔn)誤差）。這些數(shù)據(jù)證明，實(shí)施例1的化合物是人體GPR40的高親和力配體。
[0136] 競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合動(dòng)力學(xué)-測(cè)定受體停留時(shí)間 使用由Motulsky, H. J.和L. C. Mahan (1984)，"The kinetics of competitive radioligand binding predicted by the law of mass action" Mol Pharm 25(1): 1-9 描述的方法量化未標(biāo)記化合物的締合與解離速率。在不存在或存在lx Ki、3x Ki或lOx Ki的 未標(biāo)記化合物的情況下，在多個(gè)時(shí)間點(diǎn)用6-8 nM [3H] TAK875培養(yǎng)人體GPR40膜。使用快速 洗濾進(jìn)行將結(jié)合和游離的放射性配體分離至纖維玻璃過濾器上，并在液體閃爍計(jì)數(shù)器中計(jì) 數(shù)。通過將數(shù)據(jù)在GraphPad Prism 6(用于Windows的6.03版，GraphPad Software，La Jolla California USA, www.graphpad.com)中擬合成競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合模型的動(dòng)力學(xué)來計(jì)算速 率。實(shí)施例1的化合物顯示出GPR40停留時(shí)間（τ)為169分鐘（± 52.1，n=4)，其表明該GPR40配 體具有在受體上足夠的停留時(shí)間，從而產(chǎn)生體內(nèi)響應(yīng)(平均值±SEM;SEM =平均值的標(biāo)準(zhǔn) 誤差）。
[0137] 采用1% FBS的人和小鼠 β-抑制蛋白激動(dòng)劑試驗(yàn)以測(cè)定β-抑制蛋白的募集： 人胚腎（hEK293)-hFFARl細(xì)胞購自DiscoveRx。表達(dá)mFFARl的人骨肉瘤（U20S)細(xì)胞由 DiscoveRX開發(fā)。這些細(xì)胞共同表達(dá)Prolink (PK)標(biāo)記的GPR40和Enzyme Acceptor (EA)標(biāo) 記的β-抑制蛋白融合蛋白。如果GPR40的激活刺激β-抑制蛋白的募集，這將迫使β-半乳糖苷 酶03_〖&1)酶片段互補(bǔ)，形成13-〖31酶，所述13-〖31酶使用0丨8〇〇￥61^?31：11!11111丨61'檢測(cè)試劑盒 生成化學(xué)發(fā)光信號(hào)。在含有1% FBS(胎牛血清）的培養(yǎng)基中，將細(xì)胞以5,000細(xì)胞/孔在384孔 板中培養(yǎng)過夜。將在DMS0中連續(xù)稀釋的化合物(2χ稀釋以產(chǎn)生20個(gè)濃度)逐步降低地在含 有1% FBS(胎牛血清）的培養(yǎng)基中稀釋并添加至細(xì)胞中，最終的最高濃度由100 μΜ起始。在 添加化合物后，在5% C02培養(yǎng)箱中在37°C下培養(yǎng)細(xì)胞90分鐘，并添加 DiscoveRX試劑盒檢測(cè) 試劑。在室溫下培養(yǎng)1小時(shí)后，用Envision讀取器確定化學(xué)發(fā)光信號(hào)的測(cè)量。將數(shù)據(jù)擬合成4 參數(shù)擬合的logistics以測(cè)定EC 5Q值，相對(duì)于在1 μΜ下內(nèi)標(biāo)GPR40激動(dòng)劑標(biāo)準(zhǔn)TAK875的最大 響應(yīng)來測(cè)量%活性。實(shí)施例1具有30.6 ηΜ( ± 12.3，η=2)的hGPR40 b-抑制蛋白EC5Q，其中％刺 激最大值(FA)為 170(±5·95，η=2)，和4.87 ηΜ(±1·48，η=3)的mGPR40 b-抑制蛋白，其中％ 刺激最大值(FA)為149( ± 11.8，n=3)。（平均值土 SEM; SEM =該平均值的標(biāo)準(zhǔn)誤差）。這些數(shù) 據(jù)表明實(shí)施例1是可以通過β-抑制蛋白發(fā)出信號(hào)的GPR40激動(dòng)劑。
[0138] 可以容易地根據(jù)本領(lǐng)域已知的公認(rèn)實(shí)踐（例如在Remington's "Pharmaceutical Sciences"，Gennaro, Ed.，Mack Publishing Co. Easton Pa. 1990 中找到的）將本發(fā)明 的示例化合物配制為藥物組合物，例如片劑、固體或者凝膠填充的膠囊劑、粉劑、混懸劑或 者溶液。該組合物還可以包含一種或多種藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑和稀釋劑。
[0139] 優(yōu)選的藥物組合物包括被配制為片劑或膠囊劑用于口服給藥的那些。片劑或膠囊 劑可以治療糖尿病(特別是II型糖尿病)的有效量包含本發(fā)明的化合物。本領(lǐng)域技術(shù)人員將 理解的是，可以將式I的化合物與一種或多種額外的治療劑進(jìn)行給藥?？梢詢?yōu)選將藥物組合 物配制成包含式I的化合物和一種或多種額外的治療劑。
[0140] 將藥物組合物以治療糖尿病(更特別是II型糖尿?。┑挠行Я拷o藥至患者?？梢酝?過醫(yī)療服務(wù)提供者確定治療患者的有效的適當(dāng)?shù)牧炕蛘邉┝俊?br>【主權(quán)項(xiàng)】
1. 化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，所述化合物為：其中， R1選自 H、CH3、CN、CH2CN、C (CH3) 2CN和F; R2選自 H、O (C1-C3 烷基)R5、CH2CN 和CN; R3選自 H、OCH3、CN、C( CH3 )2CN 和CH2CN; R4選自H和CH3;并且 R5選自 11、^(：(013)2^0013、3(0)2〇13和(：(01 3)2〇11;條件是，選自1?1、1?2、1?和1?4中的至 少一個(gè)是H。2. 如權(quán)利要求1所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中R3是H。3. 如權(quán)利要求1至2中任一項(xiàng)所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中R1選自H和CH3。4. 如權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中R2選自H和0 (C1-C 3 烷基)R5。5. 如權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中R2選自H和 OCH3o6. 如權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中R4是CH3。7. 如權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中R1是CH3。8. 如權(quán)利要求1所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，所述化合物為（S)-3-{4-[2-異 丙基-8-( 4-甲氧基-2，6-二甲基-苯基)-[1，2，4 ]三唑并[I，5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸。9. 如權(quán)利要求1所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，所述化合物為(S)-3-{4-[8-(2， 6-二甲基-苯基)-2-異丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸。10. 藥物組合物，其包含根據(jù)權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)所述的化合物或其藥學(xué)上可接受 的鹽，以及至少一種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或者賦形劑。11. 在需要治療糖尿病的哺乳動(dòng)物中治療糖尿病的方法，其包括給藥有效量的如權(quán)利 要求1至9中任一項(xiàng)所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。12. 在需要治療II型糖尿病的哺乳動(dòng)物中治療II型糖尿病的方法，其包括給藥有效量 的如權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。13. 如權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其用于治療。14. 如權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其用于治療II型 糖尿病。15. 根據(jù)式II的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，共T，?ΓΙΖ￡ 曰 Η、υΗ3、υ?Ν、υΗ2υ?Ν、ΙΛυΗ3;2?1Ν々μΓ ; R2選自 H、O (C1-C3 烷基)R5、CH2CN 和CN; R3選自 H、OCH3、CN、C( CH3 )2CN 和CH2CN; R4選自H和CH3; R5選自 11、^(：(013)2^0013、3(0)2〇13和(：(01 3)2〇11;條件是，選自1?1、1?2、1?和1?4中的至 少一個(gè)是H;并且 R選自Cl_4烷基、Cl_4鹵代烷基、C3-6環(huán)烷基、Cl_4烷基-C3-6環(huán)烷基、苯基和Cl_5烷基 苯基。16. 權(quán)利要求15的化合物，其中R1和R4各自是CH3。17. 權(quán)利要求15的化合物，其中R1和R4各自是H。18. 如權(quán)利要求15至17中任一項(xiàng)所述的化合物，其中R2選自H和OCH3。19. 用于制備下式I的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的方法，其中， R1選自 H、CH3、CN、CH2CN、C (CH3) 2CN和F; R2選自 H、O (Ci-C3 烷基)R5、CH2CN 和CN; R3選自 H、OCH3、CN、C( CH3 )2CN 和CH2CN; R4選自H和CH3; R5選自 11、^(：(013)2^0013、3(0)2〇13和(：((：!13)2〇11;條件是，選自1?1、1?2、1?和1?4中的至 少一個(gè)是H;并且 R選自Cl-4烷基、Cl-4鹵代烷基、C3_6環(huán)烷基、Cl-4烷基 -C3_6環(huán)烷基、苯基和Cl-5烷基 苯基，從而提供式I的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
【文檔編號(hào)】A61P3/10GK105899509SQ201580004121
【公開日】2016年8月24日
【申請(qǐng)日】2015年1月6日
【發(fā)明人】C.漢杜基, P.麥蒂, A.R.米勒
【申請(qǐng)人】伊萊利利公司