一種同時(shí)提取dna和rna的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種同時(shí)提取DNA和RNA的方法，1)、將組織置于震蕩管內(nèi)，然后向震蕩管內(nèi)加入體積為500μl組織裂解液，將組織進(jìn)行裂解，得到組織液；2)、將組織液轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，然后向離心管內(nèi)添加體積為100μl的1?溴?3?氯丙烷和濃度為20ng/μl的糖原，然后將離心管進(jìn)行震蕩、室溫靜置，然后進(jìn)行離心后，離心管內(nèi)液體分為三層，所述三層為上層、中層、下層；3)、取試管A和試管B，將步驟2中的離心管內(nèi)的上層液體倒入試管A中進(jìn)行RNA的提取，同時(shí)將離心管內(nèi)的中下層液體倒入試管B中進(jìn)行DNA的提取。本發(fā)明本發(fā)明的毒性更低，提取DNA和RNA更加快捷、高效；本發(fā)明提取的DNA和RNA的純度很高，并且能夠同時(shí)提取DNA和RNA，大大提高了工作效率。
【專利說明】
_種同時(shí)提取DNA和RNA的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001 ]本發(fā)明涉及一種同時(shí)提取DNA和RNA的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]臨床組織樣本是珍貴的遺傳物質(zhì)來源，通常情況下能夠獲得的量很少，如何更充分高效地利用有限的臨床組織是一個(gè)亟需解決的問題。目前提取DNA和RNA的方法有兩種，一種是Trizol即氯仿萃取法，另一種是硅膠模吸附法。前者所使用的氯仿是一種易制毒的危險(xiǎn)有機(jī)溶劑，后者雖然操作簡(jiǎn)單但是獲得的核酸純度偏低，特別是在微量樣本的核酸提取中效率尤其低下。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的是提供一種同時(shí)提取DNA和RNA的方法。
[0004]為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:
[0005 ] 一種同時(shí)提取DNA和RNA的方法，步驟如下:
[0006]I)、將組織置于震蕩管內(nèi)，然后向震蕩管內(nèi)加入體積為500μ1組織裂解液，將組織進(jìn)行裂解，得到組織液；
[0007]2)、將組織液轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，然后向離心管內(nèi)添加體積為ΙΟΟμΙ的1-溴-3-氯丙烷和濃度為20ngAU的糖原，然后將離心管進(jìn)行震蕩、室溫靜置，然后進(jìn)行離心后，離心管內(nèi)液體分為三層，所述三層為上層、中層、下層；
[0008]3)、取試管A和試管B，將步驟2中的離心管內(nèi)的上層液體倒入試管A中進(jìn)行RNA的提取，同時(shí)將離心管內(nèi)的中下層液體倒入試管B中進(jìn)行DNA的提取。
[0009]試管A中進(jìn)行RNA的提取步驟如下:
[0010]第一步:將體積為150μ1的異丙醇添加到試管A中，將試管A依次進(jìn)行上下顛倒混勻、室溫靜置、離心；
[0011]第二步:然后向試管A中加入500μ1體積濃度為75%的乙醇，進(jìn)行漂洗；
[0012]第三步:離心后，將試管A中的液體倒出去，然后將試管A在室溫晾干至白色沉淀變透明；
[0013]第四步:繼續(xù)在試管A中加入體積為5ul到50μ1經(jīng)焦碳酸二乙酯處理過的滅菌超純水，所述焦碳酸二乙酯的體積濃度為1%。，然后將試管A進(jìn)行水浴加熱，然后震蕩、離心，然后置于冰上，得到RNA液體，測(cè)定RNA純度和濃度后將RNA液體在零下80度溫度下進(jìn)行保存。
[0014]試管B中進(jìn)行DNA的提取步驟如下:
[0015]a、向試管B中加入200μ1 DNA提取緩沖液，將試管B進(jìn)行55度水浴加熱10分鐘，水浴加熱期間將試管B進(jìn)行上下顛倒5次；
[0016]b、將試管B在室溫進(jìn)行靜置10分鐘后，然后4度12000轉(zhuǎn)/分離心15分鐘，此時(shí)試管B中的液體分為上下兩層；
[0017]C、取試管C，將將試管B的上層液體倒入到試管C中，然后向試管C中加入體積為250μ?無水乙醇；
[0018]d、將試管C放在溫度為零下20度下靜置I小時(shí)，沉淀DNA，然后將試管C進(jìn)行4度12000轉(zhuǎn)/分離心;
[0019]e、向試管C中加入體積濃度為75%乙醇，進(jìn)行漂洗，漂洗兩次后，將試管C的上層液體倒出去，然后將試管C在室溫晾干至白色沉淀變透明；
[0020]f、向試管C中加入10-50ul滅菌超純水，震蕩后離心，得到DNA液體，測(cè)定DNA純度和濃度后將DNA液體在零下80度溫度下進(jìn)行保存。
[0021]本發(fā)明的DNA提取緩沖液包括IM三羥甲基氨基甲烷、3.75M異胍氫酸胍、0.3M硫氰酸銨、35mM梓檬酸鈉。
[0022]本發(fā)明的有益效果如下:本發(fā)明采用1-溴-3-氯丙烷代替氯仿，大大降低了核酸提取過程中的毒害，因此本發(fā)明的毒性更低，提取DNA和RNA更加安全;此外本發(fā)明在加入1-溴-3-氯丙烷的同時(shí)添加了適量的糖原使核酸更容易沉淀，提取DNA和RNA更加快捷、高效；本發(fā)明利用DNA提取緩沖液使DNA更容易提取出來，本發(fā)明提取的DNA和RNA的純度很高，并且能夠同時(shí)提取DNA和RNA，大大提高了工作效率。
【具體實(shí)施方式】
[0023]下面結(jié)合對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步說明:
[0024]一種同時(shí)提取DNA和RNA的方法，步驟如下:
[0025]I)、將組織置于震蕩管內(nèi)，然后向震蕩管內(nèi)加入體積為500μ1組織裂解液，進(jìn)行震蕩使得組織進(jìn)行裂解，震蕩的時(shí)間為I分鐘，得到組織液；
[0026]2)、將組織液轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，然后向離心管內(nèi)添加體積為ΙΟΟμΙ的1-溴-3-氯丙烷和濃度為20ngAU的糖原，然后將離心管進(jìn)行震蕩、室溫靜置12分鐘，然后4度12000轉(zhuǎn)/分離心15分鐘后，離心管內(nèi)液體分為三層，所述三層為上層、中層、下層；
[0027]3)、取試管A和試管B，將步驟2中的離心管內(nèi)的上層液體倒入試管A中進(jìn)行RNA的提取，同時(shí)將離心管內(nèi)的中下層液體倒入試管B中進(jìn)行DNA的提??；
[0028]試管A中進(jìn)行RNA的提取步驟如下:
[0029]第一步:將體積為150μ1的異丙醇添加到試管A中，將試管A依次進(jìn)行上下顛倒混勻、室溫靜置8分鐘、隨后4度12000轉(zhuǎn)/分離心15分鐘；
[0030]第二步:然后向試管A中加入500μ1體積濃度為75%的乙醇，進(jìn)行漂洗；
[0031 ]第三步:4度12000轉(zhuǎn)/分離心后，將試管A中的液體倒出去，然后將試管A在室溫晾干至白色沉淀變透明；
[0032]第四步:繼續(xù)在試管A中加入體積為5ul到50μ1經(jīng)焦碳酸二乙酯處理過的滅菌超純水，所述焦碳酸二乙酯的體積濃度為1%。，然后將試管A進(jìn)行59度水浴加熱10分鐘，然后震蕩、離心后，然后置于冰上，得到RNA液體，測(cè)定RNA純度和濃度后將RNA液體在零下80度溫度下進(jìn)行保存。
[0033]試管B中進(jìn)行DNA的提取步驟如下:
[0034]a、向試管B中加入200μ1 DNA提取緩沖液，將試管B進(jìn)行水浴加熱，水浴加熱期間將試管B進(jìn)行上下顛倒；
[0035]b、將試管B在室溫進(jìn)行靜置，然后進(jìn)行離心，此時(shí)試管B中的液體分為上下兩層；
[0036]c、取試管C，將將試管B的上層液體倒入到試管C中，然后向試管C中加入體積為250μ?無水乙醇；
[0037]d、將試管C放在溫度為零下20度下靜置I小時(shí)，然后將試管C進(jìn)行離心；
[0038]e、向試管C中加入體積濃度為75 %乙醇，進(jìn)行漂洗，將試管C的上層液體倒出去，然后將試管C在室溫晾干至白色沉淀變透明；
[0039]f、向試管C中加入10-50ul滅菌超純水，震蕩后離心，得到DNA液體，測(cè)定DNA純度和濃度后將DNA液體在零下80度溫度下進(jìn)行保存。
[0040]本發(fā)明的DNA提取緩沖液包括IM三羥甲基氨基甲烷、3.75M異胍氫酸胍、0.3M硫氰酸銨、35mM梓檬酸鈉。
[0041]本發(fā)明采用1-溴-3-氯丙烷代替氯仿，大大降低了核酸提取過程中的毒害，因此本發(fā)明的毒性更低，提取DNA和RNA更加安全;此外本發(fā)明在加入1-溴-3-氯丙烷的同時(shí)添加了適量的糖原使核酸更容易沉淀，提取DNA和RNA更加快捷、高效;本發(fā)明利用DNA提取緩沖液使DNA更容易提取出來，本發(fā)明提取的DNA和RNA的純度很高，并且能夠同時(shí)提取DNA和RNA，大大提高了工作效率。
[0042]需要注意的是，以上列舉的僅是本發(fā)明的一種具體實(shí)施例。顯然，本發(fā)明不限于以上實(shí)施例，還可以有許多變形。
[0043]總之，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能從本發(fā)明公開的內(nèi)容直接導(dǎo)出或聯(lián)想到的所有變形，均應(yīng)認(rèn)為是本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種同時(shí)提取DNA和RNA的方法，其特征在于，步驟如下: 1)、將組織置于震蕩管內(nèi)，然后向震蕩管內(nèi)加入體積為500μ1組織裂解液，將組織進(jìn)行裂解，得到組織液； 2)、將組織液轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，然后向離心管內(nèi)添加體積為ΙΟΟμΙ的1-溴-3-氯丙烷和濃度為20ngAU的糖原，然后將離心管進(jìn)行震蕩、室溫靜置，然后進(jìn)行離心后，離心管內(nèi)液體分為三層，所述三層為上層、中層、下層； 3)、取試管A和試管B，將步驟2中的離心管內(nèi)的上層液體倒入試管A中進(jìn)行RNA的提取，同時(shí)將離心管內(nèi)的中下層液體倒入試管B中進(jìn)行DNA的提取。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種同時(shí)提取DNA和RNA的方法，其特征在于，所述試管A中進(jìn)行RNA的提取步驟如下: 第一步:將體積為150μ1的異丙醇添加到試管A中，將試管A依次進(jìn)行上下顛倒混勻、室溫靜置、離心； 第二步:然后向試管A中加入500μ1體積濃度為75 %的乙醇，進(jìn)行漂洗； 第三步:離心后，將試管A中的液體倒出去，然后將試管A在室溫晾干至白色沉淀變透明； 第四步:繼續(xù)在試管A中加入體積為5ul到50μ1經(jīng)焦碳酸二乙酯處理過的滅菌超純水，所述焦碳酸二乙酯的體積濃度為1%。，然后將試管A進(jìn)行水浴加熱，然后震蕩、離心，然后置于冰上，得到RNA液體，測(cè)定RNA純度和濃度后將RNA液體在零下80度溫度下進(jìn)行保存。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種同時(shí)提取DNA和RNA的方法，其特征在于，所述試管B中進(jìn)行DNA的提取步驟如下: a、向試管B中加入200μ1DNA提取緩沖液，將試管B進(jìn)行水浴加熱，水浴加熱期間將試管B進(jìn)行上下顛倒； b、將試管B在室溫進(jìn)行靜置，然后進(jìn)行離心，此時(shí)試管B中的液體分為上下兩層； c、取試管C，將將試管B的上層液體倒入到試管C中，然后向試管C中加入體積為250μ1無水乙醇； d、將試管C放在溫度為零下20度下靜置I小時(shí)，然后將試管C進(jìn)行離心； e、向試管C中加入體積濃度為75%乙醇，進(jìn)行漂洗，將試管C的上層液體倒出去，然后將試管C在室溫晾干至白色沉淀變透明； f、向試管C中加入10-50ul滅菌超純水，震蕩后離心，得到DNA液體，測(cè)定DNA純度和濃度后將DNA液體在零下80度溫度下進(jìn)行保存。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述一種同時(shí)提取DNA和RNA的方法，其特征在于，所述DNA提取緩沖液包括IM三羥甲基氨基甲烷、3.75M異胍氫酸胍、0.3M硫氰酸銨、35mM梓檬酸鈉。
【文檔編號(hào)】C12N15/10GK105838709SQ201610369194
【公開日】2016年8月10日
【申請(qǐng)日】2016年5月27日
【發(fā)明人】羅春芳, 孫建國(guó), 胡慧
【申請(qǐng)人】賽瀾生物技術(shù)(杭州)有限公司