一種斷氧化馬錢子苷的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種斷氧化馬錢子巧的制備方法，具體設(shè)及一種從金銀花中快速制備 斷氧化馬錢子巧的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 斷氧化馬錢子巧是從忍冬科植物忍冬化onicera japonica Thunb.)的干燥花蕾 即金銀花(Flos Lonicerae japonicae)中提取精制得到的產(chǎn)品。斷氧化馬錢子巧是環(huán)締酸 祗類化合物，是金銀花的一種有效成分。現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，環(huán)締酸祗類化合物具有神經(jīng)系 統(tǒng)保護(hù)作用、抗炎、抗菌、抗病毒、抗腫瘤、保肝利膽、降血糖、解疫鎮(zhèn)痛等藥理作用，也可用 于治療屯、血管疾病、糖尿病及其并發(fā)癥的原料藥物。文獻(xiàn)報(bào)道，斷氧化馬錢子巧在20mg/kg 的劑量下，對0^4致肝損傷小鼠顯示顯著的保肝活性，因此，斷氧化馬錢子巧具有很大的開 發(fā)應(yīng)用前景，對斷氧化馬錢子巧的分離和純化成為斷氧化馬錢子巧深度開發(fā)的關(guān)鍵技術(shù)。
[0003] 現(xiàn)有研究技術(shù)中，關(guān)于斷氧化馬錢子巧制備方法的文獻(xiàn)很少，且對斷氧化馬錢子 巧的分離純化也只限于實(shí)驗(yàn)室條件下研究，一般從藥材提取經(jīng)萃取或大孔樹脂純化到娃 膠、凝膠及反相柱層析純化等要經(jīng)過5~6步甚至更多步驟才能得到純度較高的化合物，步 驟比較繁瑣，且有機(jī)溶劑用量大。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，如畢躍峰(畢躍峰，田野，裴珊珊，劉宏民. 金銀花中裂環(huán)環(huán)締酸祗巧類化學(xué)成分研究.中草藥[J]. 2008,39(1): 18~21.)利用D101、 S邱hadexLH-20、硅膠等色譜法從1.化g金銀花中分離得到21mg斷氧化馬錢子巧;宋衛(wèi)霞(宋 衛(wèi)霞.金銀花水溶性化學(xué)成分研究[D].中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)，2008.)從12kg金銀花中分離得 到斷氧化馬錢子巧13. Img;田野（田野.金銀花化學(xué)成分研究[D].鄭州大學(xué).2007.)從1.化g 金銀花中通過萃取、大孔樹脂及反復(fù)硅膠柱色譜等方法分離得到斷氧化馬錢子巧21mg;李 楊（李楊，戴毅，張金博，劉明莉，姚新生.金銀花中1個(gè)新的環(huán)締酸祗巧類化合物.中草藥 [J].2013,44(21) :2951~2954.)通過HP-20大孔樹脂、0DS、HW-40等多種柱色譜從1kg金銀 花中分離得到斷氧化馬錢子巧186.2mg;陳雨（陳雨，趙友誼，吳雙，王鳴，馮賊，梁敬佳.灰拉 毛忍冬花蕾水溶性化學(xué)成分研究.中藥材[J] .2012,35(2) : 231~234.)采用D101、 S邱hadexLH-20和反復(fù)反相柱層析等方法從8kg灰拉毛忍冬花蕾中分離得到斷氧化馬錢子 巧121mg。然而，W上研究中普遍存在一個(gè)問題，斷氧化馬錢子巧都是在化學(xué)成分研究過程 中發(fā)現(xiàn)的，得到的斷氧化馬錢子巧的量非常小，重現(xiàn)性差，難于放大。此外，多數(shù)精制純化過 程中用到S邱hadexLH-20填料，該填料載樣量少、流速小，耗時(shí)長，大規(guī)模放大難W操作，而 且該填料價(jià)格昂貴，成本高，不適合工業(yè)化推廣。
[0004] 因此，很有必要在現(xiàn)有技術(shù)的基礎(chǔ)之上，研究開發(fā)一種制備效率高，速度快，生產(chǎn) 成本低，無需使用大量有機(jī)溶劑，具有很好應(yīng)用前景的從金銀花中快速制備斷氧化馬錢子 巧的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 發(fā)明目的:本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)篩選，提供從 金銀花中快速制備斷氧化馬錢子巧的方法。本發(fā)明提供的制備方法，w金銀花為原藥材，采 用優(yōu)選樹脂柱吸附，并用優(yōu)選濃度的乙醇洗脫，最后在優(yōu)化的工藝條件下工業(yè)制備色譜純 化，整個(gè)工藝制備效率高，尤其是制備量大，得率高，制備得到的斷氧化馬錢子巧純度高，生 產(chǎn)成本低，可操作性強(qiáng)，適合大規(guī)模制備，具有很好應(yīng)用前景。
[0006] 技術(shù)方案:為了實(shí)現(xiàn)W上目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
[0007] -種斷氧化馬錢子巧的制備方法，包括W下步驟：
[000引（1)取金銀花藥材，加入藥材8~16倍量體積濃度為70 %~85 %乙醇回流提取1~3 次，濾過，合并濾液，濃縮，上大孔樹脂柱，先用水洗脫，再用濃度為20%~95%的乙醇梯度 洗脫，收集含有斷氧化馬錢子巧的洗脫部位；
[0009] (2)工業(yè)制備色譜分離:將斷氧化馬錢子巧部位用工業(yè)制備色譜制備，色譜柱W反 相C18為填料，W體積比為10~35:90~65的甲醇：水為流動相，于242nm波長下監(jiān)視流出曲 線W指導(dǎo)產(chǎn)品收集，收集液經(jīng)濃縮干燥后得到斷氧化馬錢子巧。
[0010] 作為優(yōu)選方案，W上所述的從金銀花中快速制備斷氧化馬錢子巧的方法，所述的 工業(yè)制備色譜分離的色譜條件為:色譜柱W反相Ci8為填料(30~250X250~1000mm)，流速 為10~lOOOmL/min，進(jìn)樣量為0.2g~20.0 g，波長為24化m，流動相為體積比為25:75的甲醇 和水，每次樣品處理時(shí)間為30~60min。
[0011] 制備工藝篩選試驗(yàn)
[0012] 1、樹脂型號的篩選
[0013] 選取巧巾經(jīng)預(yù)處理的樹脂各5g(D101、HP20、HPD100)置100ml具塞錐形瓶中，取金銀 花提取濃縮液加入瓶中，于室溫靜置24h，吸附平衡后，濾去樹脂，定量移取清液，測定斷氧 馬錢巧的含量，計(jì)算吸附率。結(jié)果吸附率依次為72.1 %、64.3%、67.7%，因此本發(fā)明選擇 D101型大孔吸附樹脂，純化效率更高。
[0014] 2、洗脫溶劑的選擇
[0015] 按照優(yōu)選的D101樹脂平行取5份進(jìn)行樣品吸附后，先用水洗脫至流出液為無色后， 然后分別用10 %、20 %、30 %、40 %、60 %乙醇溶液進(jìn)行洗脫，并用HPLC跟蹤檢測，計(jì)算洗脫 率，流出液減壓濃縮并干燥，測定斷氧馬錢巧含量，結(jié)果見表1。
[0016] 表1不同濃度乙醇對斷氧馬錢巧的洗脫率和含量
[0017]
[001引由表1可知，10%乙醇洗脫液的斷氧馬錢巧含量最高，但洗脫不完全，30%、40%和 60%乙醇洗脫液洗脫率雖高，但雜質(zhì)也多，故選擇20 %乙醇作為洗脫溶劑，不僅洗脫率高， 并且洗脫液中斷氧馬錢巧的含量也高。
[0019] 作為優(yōu)選方案，W上所述的從金銀花中快速制備斷氧化馬錢子巧的方法，取金銀 花藥材，加入藥材8倍量體積濃度為70 %乙醇回流提取2次，濾過，合并濾液，上D101大孔樹 脂柱。
[0020] 3、工業(yè)制備色譜分離條件選擇
[0021 ]采用Agilent 1260分析型高效液相色譜儀，W甲醇-水，甲醇-0.5%甲酸水，乙臘- 水和乙臘-0.5%甲酸水分別為流動相，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，W甲醇-0.5 %甲酸水，乙臘-水和乙 臘-0.5 %甲酸水為流動相時(shí)，系統(tǒng)分離效果較差，洗脫速度慢，峰形不佳，因此本發(fā)明選擇 甲醇-水為洗脫劑。
[0022] 確定洗脫劑后，本發(fā)明又通過大量實(shí)驗(yàn)對甲醇:水的具體體積比進(jìn)行了大量的實(shí) 驗(yàn)篩選，結(jié)果表明，甲醇:水= 25:75(V/V)時(shí)，具有很好的洗脫效果，并可在40分鐘內(nèi)分離洗 脫得到斷氧化馬錢子巧。洗脫速度快，效率高。
[0023] 作為優(yōu)選方案，W上所述的從金銀花中快速制備斷氧化馬錢子巧的方法，步驟(2) 制備得到斷氧化馬錢子巧的純度達(dá)98% W上，相比現(xiàn)有技術(shù)所得純度更高。
[0024] 有益效果:本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有W下優(yōu)點(diǎn)：
[0025] 本發(fā)明提供的從金銀花中快速制備斷氧化馬錢子巧的方法，經(jīng)過系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)篩選最 佳的提取方法和大孔樹脂純化方法，并經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)優(yōu)選的反相工業(yè)制備色譜純化制備得 到高純度的斷氧化馬錢子巧，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是僅采用大孔樹脂和工業(yè)制備色譜兩步純化即 可得到高純度的斷氧化馬錢子巧，避免了現(xiàn)有技術(shù)經(jīng)萃取或反復(fù)正相硅膠、凝膠及常壓反 相柱層析等繁雜步驟、洗脫時(shí)間長、有機(jī)溶劑用量大、得率低等缺點(diǎn)，工藝合理，操作簡單， 重復(fù)性好，誤差小，尤其是相對常壓柱層析來說，制備周期短、制備量大、產(chǎn)量高，得到的斷 氧化馬錢子巧純度高，適合大規(guī)模制備，取得了很好的技術(shù)效果。
【附圖說明】
[0026] 圖1為本發(fā)明制備的斷氧化馬錢子巧的液相色譜圖。
[0027] 圖2為斷氧化馬錢子巧對照品的液相色譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0028] 根據(jù)下述實(shí)施例，可W更好地理解本發(fā)明。然而，本領(lǐng)域的技術(shù)人員容易理解，實(shí) 施例所描述的具體的物料配比、工藝條件及其結(jié)果僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)當(dāng)也不會限 制權(quán)利要求書中所詳細(xì)描述的本發(fā)明。
[00巧]實(shí)施例1
[0030] 1、一種斷氧化馬錢子巧的制備方法，其包括W下步驟：
[0031] (1)取金銀花藥材化g，加入藥材8倍量體積濃度為70 %乙醇回流提取2次，每次2小 時(shí)，濾過，合并濾液，濃縮，上D101大孔樹脂柱，先用水洗脫，再用濃度為20%的乙醇梯度洗 脫，收集20 %乙醇洗脫部位；
[0032] (2)工業(yè)制備色譜制備分離:將斷氧化馬錢子巧部位用工業(yè)制備色譜進(jìn)行制備，色 譜柱為反相Ci8色譜柱(50X250mm)，流速為20mL/min，波長為242皿，