一種蔓荊子黃素的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于天然藥物提取分離領(lǐng)域，特別設(shè)及一種蔓荊子黃素的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 蔓荊子為馬鞭草科牡荊屬單葉蔓荊VitextrifoliaL.var.simplicifolia 化arm.或蔓荊Vitextri化IiaL的干燥成熟果實(shí)，主要產(chǎn)于山東、廣西、云南、江西、浙江、 福建、及廣東等地。蔓荊子為常用中藥，具有疏散風(fēng)熱、清利頭目、止痛的功效。臨床上用于 治療風(fēng)熱、感冒頭痛、偏頭痛等癥。據(jù)報(bào)道，蔓荊子的主要活性成分是黃酬類化合物，其中蔓 荊子黃素作為我國(guó)2010版藥典規(guī)定的蔓荊子藥材的質(zhì)控指標(biāo)。
[0003] 現(xiàn)在研究表明，蔓荊子黃素具有抗缺氧、抗不良刺激、抗疲勞、雙向調(diào)節(jié)機(jī)體、抑制 血糖升高和影響學(xué)習(xí)記憶等多種作用。由此可見(jiàn)，目標(biāo)成分的開(kāi)發(fā)具有廣泛的商業(yè)價(jià)值。結(jié) 構(gòu)式如下：
[0004]
[0005]目前，蔓荊子中的蔓荊子黃素提取分離主要多采用柱色譜法，分離周期長(zhǎng)，消耗溶 劑多，操作復(fù)雜。高速逆流色譜化i曲-speedcountercurrentC虹omatogra地y，服CCC) 作為一種新型分離純化技術(shù)，操作方便，快捷，分離度較高，克服了由固相載體帶來(lái)的樣品 結(jié)合、失活、污染等缺點(diǎn)，已被廣泛應(yīng)用于天然產(chǎn)物活性成分的分離制備和總草藥的分析鑒 定。有文獻(xiàn)報(bào)道用高速逆流色譜分離純化蔓荊子黃素，但有上樣量少，分離時(shí)間長(zhǎng)，純化效 果不好等缺點(diǎn)，不能實(shí)現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種蔓荊子黃素的制備方法，該方法制備蔓荊 子黃素，產(chǎn)品純度高，品質(zhì)好，適用于各種型號(hào)高速逆流色譜儀，易于產(chǎn)業(yè)化放大。
[0007] 本發(fā)明的一種蔓荊子黃素的制備方法，包括：
[000引 （1)將粉碎后的蔓荊子原料，W固液質(zhì)量比1:5-10加入乙醇溶液，超聲提取，濃縮 提取液得到浸膏（減壓濃縮至無(wú)醇味）；將浸膏按固液質(zhì)量比1:100-150用醇水溶液溶解， 萃取，減壓濃縮得到萃取物；
[0009] (2)采用柱色譜，W聚酷胺為填料，醇水溶液洗脫上述萃取物，收集含有蔓荊子黃 素的流份，濃縮，干燥，得到粗提物；
[0010] (3)對(duì)上述粗提物采用高速逆流色譜法分離，高速逆流色譜的溶劑系統(tǒng)由正己燒、 乙酸乙醋、甲醇和水按體積比1:1-2:1-2:2組成；紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)，收集流份減壓濃 縮，結(jié)晶，干燥，得到蔓荊子黃素。
[0011] 所述步驟（1)中的乙醇的體積分?jǐn)?shù)為30-90%。
[0012] 所述步驟（1)中的超聲提取次數(shù)為2~3次。
[0013] 所述步驟（1)中的醇水溶液為體積分?jǐn)?shù)30-90%的乙醇水溶液。
[0014] 所述步驟（1)中的萃取所用溶劑為石油酸。
[0015] 所述步驟（2)中的醇水溶液為體積分?jǐn)?shù)75-95%的乙醇水溶液。
[0016] 所述步驟（3)中的高速逆流色譜的分離條件為：主機(jī)轉(zhuǎn)速750-1000巧m/min，流動(dòng) 相 2. 5-15.Oml/min，水浴溫度 10-35°C。
[0017] 所述步驟（3)中的溶劑系統(tǒng)的上相為固定化下相為流動(dòng)相。
[0018] 本發(fā)明將樣品進(jìn)行特殊簡(jiǎn)便預(yù)處理，使得樣品純度提高1倍，上樣量增加3倍，同 時(shí)摸索溶劑體系，使得分離時(shí)間縮短1倍，旨在解決現(xiàn)有分離工藝效率較低，未能實(shí)現(xiàn)大量 制備分離的問(wèn)題。
[0019]有益效果
[0020] (1)本發(fā)明分離方法簡(jiǎn)便，快捷，分離周期短，可W短時(shí)間內(nèi)分離制備高純度蔓荊 子黃素。傳統(tǒng)的柱色譜方法操作繁瑣，需要反復(fù)的進(jìn)行柱層析分離，分離周期長(zhǎng)，目標(biāo)成分 死吸附嚴(yán)重。
[0021] (2)本發(fā)明單體制備量大，根據(jù)所需蔓荊子黃素的質(zhì)量，可W調(diào)節(jié)被分離樣品的進(jìn) 樣量，采用制備型高速逆流色譜儀，工藝重現(xiàn)性好，產(chǎn)品純度高，具有良好的應(yīng)用前景。
【附圖說(shuō)明】
[0022] 圖1為實(shí)施例IHSCCC分離得到的蔓荊子黃素圖譜；
[0023] 圖2為蔓荊子黃素HPLC圖譜。
【具體實(shí)施方式】
[0024] 下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，運(yùn)些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明 而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明講授的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人 員可W對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，運(yùn)些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書所限定 的范圍。
[0025] 實(shí)施例1
[0026] 取經(jīng)干燥的蔓荊子原料粉碎，稱2000g，每次加入IOL80%乙醇溶液超聲提取60 分鐘，提取3次，減壓濃縮提取液得到浸膏45g。按1質(zhì)量份浸膏加入100質(zhì)量份50%乙醇 水溶液溶解，石油酸萃取，共萃取3次，合并萃取液回收石油酸得萃取物40g，萃取物上目數(shù) 為100-200的聚酷胺柱，W體積分?jǐn)?shù)80%的乙醇水溶液洗脫，收集洗脫液，濃縮干燥得粗提 物，用于高速逆流分離。
[0027] 在分液漏斗里配制正己燒、乙酸乙醋、甲醇、水兩相溶劑體系，按體積比1:2:1:2 混合，振搖后靜置分層，超聲脫氣30min。取上相注滿高速逆流色譜儀作為固定相，轉(zhuǎn)動(dòng)主 機(jī)，轉(zhuǎn)速80化pm，同時(shí)W5ml/min累入下相做流動(dòng)相，水浴溫度為20°C，建立動(dòng)態(tài)平衡后， 用流動(dòng)相溶解粗提物，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，紫外檢測(cè)器在254nm波長(zhǎng)下在線監(jiān)測(cè)，收集各目標(biāo)成 分，連續(xù)制備，相應(yīng)合并回收試劑，濃縮后甲醇結(jié)晶，從1000 mg粗提物中分離得到高純度的 蔓荊子黃素200mg。經(jīng)HPLC檢測(cè)，含量98.O%，經(jīng)UV、IR、MS、HNMR、CNMR等表征其物理性 狀的數(shù)據(jù)與現(xiàn)有技術(shù)相一致。
[002引實(shí)施例2
[0029] 取經(jīng)干燥的蔓荊子原料粉碎，稱2000g，每次加入10L95%乙醇溶液超聲提取60分 鐘，提取3次，減壓濃縮提取液得到浸膏40g。按1質(zhì)量份浸膏加入100質(zhì)量份50%乙醇 水溶液溶解，石油酸萃取，共萃取3次，合并萃取液回收石油酸得萃取物35g，萃取物上目數(shù) 為200-300的聚酷胺柱，W體積分?jǐn)?shù)95%的乙醇水溶液洗脫，收集洗脫液，濃縮干燥得粗提 物，用于高速逆流分離。
[0030] 在分液漏斗里配制正己燒、乙酸乙醋、甲醇、水兩相溶劑體系，按體積比1:2:2:2 混合，振搖后靜置分層，超聲脫氣30min。取上相注滿高速逆流色譜儀作為固定相，轉(zhuǎn)動(dòng)主 機(jī)，轉(zhuǎn)速80化pm，同時(shí)WlOml/min累入下相做流動(dòng)相，水浴溫度為25°C，建立動(dòng)態(tài)平衡后， 用流動(dòng)相溶解粗提物，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，紫外檢測(cè)器在254nm波長(zhǎng)下在線監(jiān)測(cè)，收集各目標(biāo)成 分，連續(xù)制備，相應(yīng)合并回收試劑，濃縮后甲醇結(jié)晶，從1000 mg粗提物中分離得到高純度的 蔓荊子黃素300mg。經(jīng)HPLC檢測(cè)，含量97. 7 %，經(jīng)UV、IR、MS、HNMR、CNMR等表征其物理性 狀的數(shù)據(jù)與現(xiàn)有技術(shù)相一致。
[00引]實(shí)施例3
[0032] 取經(jīng)干燥的蔓荊子原料粉碎，稱2000g，每次加入IOL70%乙醇溶液超聲提取60 分鐘，提取3次，減壓濃縮提取液得到浸膏60g。按1質(zhì)量份浸膏加入100質(zhì)量份70%乙醇 水溶液溶解加石油酸萃取，共萃取3次，合并萃取液回收石油酸得萃取物51g，萃取物上目 數(shù)為300-400的聚酷胺柱，W體積分?jǐn)?shù)75%的乙醇水溶液洗脫，收集洗脫液，濃縮干燥得粗 提物，用于高速逆流分離。
[0033] 在分液漏斗里配制正己燒、乙酸乙醋、甲醇、水兩相溶劑體系，按體積比1:2:1:1 混合，振搖后靜置分層，超聲脫氣30min。取上相注滿高速逆流色譜儀作為固定相，轉(zhuǎn)動(dòng)主 機(jī)，轉(zhuǎn)速80化pm，同時(shí)W8ml/min累入下相做流動(dòng)相，水浴溫度為30°C，建立動(dòng)態(tài)平衡后， 用流動(dòng)相溶解粗提物，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，紫外檢測(cè)器在254nm波長(zhǎng)下在線監(jiān)測(cè)，收集各目標(biāo)成 分，連續(xù)制備，相應(yīng)合并回收試劑，濃縮后甲醇結(jié)晶，從1000 mg粗提物中分離得到高純度的 蔓荊子黃素250mg。經(jīng)HPLC檢測(cè)，含量98. 8 %，經(jīng)UV、IR、MS、HNMR、CNMR等表征其物理性 狀的數(shù)據(jù)與現(xiàn)有技術(shù)相一致。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種蔓荊子黃素的制備方法，包括： (1) 將粉碎后的蔓荊子原料，以固液質(zhì)量比1:5-10加入乙醇溶液，超聲提取，濃縮提 取液得到浸膏；將浸膏按固液質(zhì)量比1:100-150用醇水溶液溶解，萃取，減壓濃縮得到萃取 物； (2) 采用柱色譜，以聚酰胺為填料，醇水溶液洗脫上述萃取物，收集含有蔓荊子黃素的 流份，濃縮，干燥，得到粗提物； (3) 對(duì)上述粗提物采用高速逆流色譜法分離，高速逆流色譜的溶劑系統(tǒng)由正己烷、乙酸 乙酯、甲醇和水按體積比1:1-2:1-2:2組成；紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)，收集流份減壓濃縮，結(jié) 晶，干燥，得到蔓荊子黃素。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蔓荊子黃素的制備方法，其特征在于：所述步驟（1)中 的乙醇的體積分?jǐn)?shù)為30-90 %。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蔓荊子黃素的制備方法，其特征在于：所述步驟（1)中 的超聲提取次數(shù)為2~3次。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蔓荊子黃素的制備方法，其特征在于：所述步驟（1)中 的醇水溶液為體積分?jǐn)?shù)30-90%的乙醇水溶液。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蔓荊子黃素的制備方法，其特征在于：所述步驟（1)中 的萃取所用溶劑為石油醚。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蔓荊子黃素的制備方法，其特征在于：所述步驟（2)中 的醇水溶液為體積分?jǐn)?shù)75-95 %的乙醇水溶液。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蔓荊子黃素的制備方法，其特征在于：所述步驟（3)中 的高速逆流色譜的分離條件為：主機(jī)轉(zhuǎn)速750-1000rpm/min，流動(dòng)相2. 5-15.Oml/min，水浴 溫度 10-35 °C。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蔓荊子黃素的制備方法，其特征在于：所述步驟（3)中 的溶劑系統(tǒng)的上相為固定相，下相為流動(dòng)相。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種蔓荊子黃素的制備方法，包括：(1)將粉碎后的蔓荊子原料，加入乙醇，超聲提取，濃縮提取液得到浸膏；將浸膏按固液用醇水溶液溶解，萃取，減壓濃縮得到萃取物；(2)采用柱色譜，以聚酰胺為填料，醇水溶液洗脫上述萃取物，收集含有蔓荊子黃素的流份，濃縮，干燥，得到粗提物；(3)對(duì)上述粗提物采用高速逆流色譜法分離，高速逆流色譜的溶劑系統(tǒng)由正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水組成；紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)，收集流份減壓濃縮，結(jié)晶，干燥，得到蔓荊子黃素。采用本發(fā)明制備蔓荊子黃素，產(chǎn)品純度高，品質(zhì)好，適用于各種型號(hào)高速逆流色譜儀，易于產(chǎn)業(yè)化放大。
【IPC分類】C07D311/40, C07D311/30
【公開(kāi)號(hào)】CN105294629
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510795076
【發(fā)明人】王維娜, 鄧力
【申請(qǐng)人】上海同田生物技術(shù)股份有限公司
【公開(kāi)日】2016年2月3日
【申請(qǐng)日】2015年11月18日