一種側(cè)孢芽孢桿菌的培養(yǎng)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種由新的側(cè)抱芽抱桿菌制備的微生物肥料W及其制備方法，屬于微 生物肥料領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 我國人口多、耕地少，且隨著人口增長、工業(yè)和城市的發(fā)展耕地逐年遞減。為此，我 國增加農(nóng)產(chǎn)品產(chǎn)量的唯一可行途徑是提高單位面積產(chǎn)量。才能滿足工業(yè)發(fā)展和人口增加對 農(nóng)產(chǎn)品的需求，化肥也就順理成章的得到了廣泛應(yīng)用。長期W來不合理使用化學(xué)肥料帶來 的±壤板結(jié)、地力下降、生態(tài)破壞、環(huán)境污染W(wǎng)及農(nóng)副產(chǎn)品品質(zhì)下降問題，已經(jīng)受到國 家有關(guān)部口和農(nóng)業(yè)科技界的高度重視。近幾十年來，我國一直努力探索合理施肥、克服化肥 的弊端及提高化肥利用率的有效途徑。
[0003] 農(nóng)業(yè)肥料包括化學(xué)肥料和生物肥料，是我國農(nóng)業(yè)生產(chǎn)不可替代的重要生產(chǎn)資料。
[0004] 其中，生物肥料作為農(nóng)業(yè)生物工程學(xué)科的重要分支和±壤肥料學(xué)的重要組成部 分，近十年無論在基礎(chǔ)研究和應(yīng)用研究方面都得到了迅速發(fā)展。近幾年來我國微生物肥料 發(fā)展很快，有多家企業(yè)從事生產(chǎn)經(jīng)營，品種不斷增加，同時(shí)也有一些國外產(chǎn)品打入國內(nèi)市 場。由于菌種等原因，目前市場的產(chǎn)品質(zhì)量參差不齊，生產(chǎn)應(yīng)用上出現(xiàn)了一些問題。據(jù)最近 幾年農(nóng)業(yè)部監(jiān)督抽查、跟蹤抽查，國家統(tǒng)檢的情況看，抽查合格率不到60%，產(chǎn)品質(zhì)量問題主 要是有效菌數(shù)不達(dá)標(biāo)，保質(zhì)期過短。微生物肥料中有效活菌數(shù)是產(chǎn)品質(zhì)量的重要指標(biāo)，有效 活菌數(shù)不達(dá)標(biāo)，產(chǎn)品質(zhì)量就得不到保證，反映出來的是應(yīng)用效果不穩(wěn)定，其中原因主要是菌 種問題，菌種在制備為微生物菌種劑后，在保藏過程中的存活能力下降，存活時(shí)間變短。運(yùn) 個(gè)問題實(shí)際上是由于運(yùn)些微生物菌種劑所使用的菌種要么不能產(chǎn)生芽抱，要么產(chǎn)生芽抱的 能力比較弱，或者產(chǎn)生的芽抱萌發(fā)能力差，不能很好渡過微生物菌種劑生產(chǎn)過程中的脅迫 條件和庫存、保藏過程，在生產(chǎn)使用過程中表現(xiàn)為菌種活性下降，生產(chǎn)性能減弱，繁殖速度 變慢，抗逆性差。因此，菌種問題一直困擾我國微生物肥料的生產(chǎn)和發(fā)展。
[0005] 中國專利公開了一種保藏號為CGMCCNo. 5090的微生物菌種，但是經(jīng)過實(shí)驗(yàn)發(fā) 現(xiàn)，其中的培養(yǎng)方法有缺陷，產(chǎn)量低，價(jià)格高，為提高產(chǎn)量，本發(fā)明人對培養(yǎng)方法進(jìn)行了改 進(jìn)，意外的得到一種高產(chǎn)的保藏號為CGMCCNo. 5090的微生物菌種培養(yǎng)物，大大降低了肥料 的價(jià)格，有利于大規(guī)模生產(chǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種由CGMCCNo. 5090的微生物菌種培養(yǎng)物制備而成的微生 物肥料及其制備方法。
[0007] 為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案： 一種培養(yǎng)高產(chǎn)的側(cè)抱芽抱桿菌（BacillusIaterosporus)的方法，所述側(cè)抱芽抱桿菌 保藏號為CGMCCNo. 5090的微生物菌種。
[0008] 該菌種被命名為"新側(cè)芽抱桿菌1號"，該菌種分離自高產(chǎn)農(nóng)田，并經(jīng)馴化，長期W 來性狀穩(wěn)定。
[0009] 新側(cè)芽抱桿菌1號菌株在2010年7月22日提交中國微生物菌種保藏管理委員 會(huì)普通微生物中屯、保藏，保藏編號為CGMCCNo. 5090,生物學(xué)命名Bacilluslaterosporus， 保藏單位地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所。
[0010] 該菌種的生物學(xué)特性為菌體桿狀，屬于芽抱桿菌屬，其細(xì)胞大小為0.15~ 0.18X215~510um，革蘭氏染色陽性，可變?yōu)殛幮?，芽抱為楠圓形，側(cè)生、中生或近中 生，抱囊膨大，游離芽抱一邊比另一邊厚(獨(dú)木舟形)。能利用多種氮源、碳源，生長溫度 20-55°C，最佳生長溫度37°C，最適PH7. 2。在不良條件下，菌體轉(zhuǎn)化產(chǎn)生芽抱，芽抱對不良 環(huán)境抗逆性強(qiáng)，可耐受l〇〇°C高溫20分鐘和干燥等惡劣條件。
[0011] 本發(fā)明的菌種的保存用斜面保存，培養(yǎng)時(shí)先自斜面取種后，劃線接入斜面培養(yǎng)基， 30-38°C培養(yǎng)箱靜置黑暗條件下培養(yǎng)18小時(shí)；用無菌水沖洗斜面，形成菌懸液，作為原始 菌液。
[0012] 本發(fā)明的保藏編號為CGMCCNo. 5090的微生物菌種培養(yǎng)物，其培養(yǎng)方法是：W上 述菌懸液為原始菌液，對菌種進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng)，W達(dá)到生產(chǎn)培養(yǎng)物的目的，具體培養(yǎng)方法步驟 如下： 1) 將1體積菌懸液接入20倍體積的1號培養(yǎng)基中，30-38°C有氧培養(yǎng)8小時(shí)； 2) 將步驟1)得到的培養(yǎng)液加入到約20倍體積的2號培養(yǎng)基中，30-38°C有氧培養(yǎng)8 小時(shí)； 3) 將步驟2)得到的培養(yǎng)液加入到約20倍體積的3號培養(yǎng)基中，35-38°C培養(yǎng)8小時(shí)， 即得可生產(chǎn)用的培養(yǎng)物。
[0013] 本發(fā)明進(jìn)一步提供微生物菌種劑，所述菌種劑的制備方法如下： 將草炭粉進(jìn)行干熱滅菌后冷卻，加入到本發(fā)明得到的培養(yǎng)物中進(jìn)行充分?jǐn)埌?，用造?機(jī)造粒，低溫烘干獲得微生物菌種劑。粒機(jī)造粒，低溫烘干獲得微生物菌種劑，其中草炭粉 和培養(yǎng)物的重量比例為3-5:1。
[0014] 優(yōu)選的，草炭粉和培養(yǎng)物的重量比例為4:1。
[0015] 本發(fā)明所述的制備方法，其中微生物菌種劑與常規(guī)肥料的重量比例為1 :9 - 11， 優(yōu)選的，微生物菌種劑與常規(guī)肥料的重量比例為1 :1〇。
[0016] 本發(fā)明在于提供新的菌種培養(yǎng)方法，本發(fā)明的重點(diǎn)在于改進(jìn)了培養(yǎng)基的配方，本 發(fā)明通過加入海藻酸鋼獲得了W下培養(yǎng)基： 培養(yǎng)過程中所用的斜面培養(yǎng)基配方為：海藻酸鋼5g/l，蛋白腺5g/l，氯化鋼5g/l，牛肉 膏 5g/L，瓊脂 1. 5%-2. 0%，PH調(diào)至 6. 5-7. 8。
[0017] 1號培養(yǎng)基配方為：海藻酸鋼5g/l，蛋白腺5g/l，氯化鋼5g/l，牛肉膏5g/L，PH調(diào) 至 6. 5-7. 8。
[0018] 2號培養(yǎng)基：海藻酸鋼5g/l，淀粉5g/l，薦糖IgA,酵母浸出汁0. 2g/l，蛋白腺 5邑/1，牛肉膏5g/l，硫酸錠Ig/l，憐酸二氨鐘0. 5g/l，硫酸儀0. 2g/L,氯化鋼5g/L，PH調(diào) 至 6. 5-7. 8。
[0019] 3號培養(yǎng)基配方為：海藻酸鋼5g/l，淀粉lOg/l，薦糖5g/l，酵母浸出汁0.Ig/L， 蛋白腺0. 5g/L，豆餅粉lOg/l，硫酸錠Ig/l，憐酸二氨鐘0. 5g/l，氯化鋼5g/L，PH調(diào)至 6. 5-7. 8〇
[0020] W上所有培養(yǎng)基均在使用前經(jīng)高壓蒸汽滅菌（12rc，l.Ikg/cm3,30分鐘)，冷卻。
[0021] 海藻酸鋼，是一種天然多糖，1881年，英國化學(xué)家E.C.Stan化rd首先對褐色海藻 中的海藻酸鹽提取物進(jìn)行科學(xué)研究。他發(fā)現(xiàn)該褐藻酸的提取物具有幾種很有趣的特性，它 具有濃縮溶液、形成凝膠和成膜的能力，可用于食品工業(yè)作乳化穩(wěn)定劑和增稠劑。
[0022] 本發(fā)明通過在培養(yǎng)基中加入海藻酸鋼，意外的發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)時(shí)間大大縮短，培養(yǎng)效率， 菌種的存活率和肥效大大提高。
[0023]W下為本發(fā)明的培養(yǎng)方法和現(xiàn)有技術(shù)的參數(shù)比較：
現(xiàn)有技術(shù)培養(yǎng)方法1為中國專利201110260431. 8中實(shí)施例2的培養(yǎng)方法。
[0024] 現(xiàn)有技術(shù)培養(yǎng)方法2為中國專利201110260431. 8中實(shí)施例1的培養(yǎng)方法。
[00巧]菌數(shù)檢測方法 按照常規(guī)的