一種從馬尾藻中綜合提取巖藻黃素和褐藻多酚的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種綜合提取巖藻黃素和褐藻多酚的方法，主要是涉及一種從馬尾藻中綜合提取高純度巖藻黃素和褐藻多酚的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]巖藻黃素(fucoxanthin)，又稱褐藻黃素、墨角藻黃素，是褐藻中馬尾藻科海藻的主要類胡蘿卜素類成分。藥理研究表明，巖藻黃素具有抗腫瘤、減肥、抗氧化、消炎、預(yù)防糖尿病等多種活性；同時(shí)毒理學(xué)研究表明，巖藻黃素具有毒副作用小、不影響脂代謝循環(huán)等優(yōu)點(diǎn)，因此，巖藻黃素是一種具有極大潛在藥用價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值的海洋活性天然產(chǎn)物。
[0003]褐藻多酚(phlorotannins)是發(fā)現(xiàn)于褐藻且僅存于褐藻的一族天然產(chǎn)物，是海洋褐藻中重要的活性次級代謝產(chǎn)物?；瘜W(xué)結(jié)構(gòu)上，褐藻多酚是一類以間苯三酚為基礎(chǔ)骨架的獨(dú)特的多酚類化合物，其聚合度可以幾個(gè)至幾百個(gè)，具有抗氧化、抗菌、抗病毒、治療心血管疾病、抗糖尿病綜合癥、保肝以及抑制賴氨酸激酶等多種生物活性，是值得開發(fā)的新型海洋功能性產(chǎn)品。褐藻多酚因其潛在的生物活性已被廣泛應(yīng)用于食品、藥品及化妝品等多個(gè)產(chǎn)業(yè)。
[0004]目前，提取巖藻黃素的專利有:名稱為一種從海藻中分離巖藻黃素的方法(公開號為CN 1706836A)，名稱為一種純化巖藻黃素的方法(公開號為CN 101735178A)，名稱為一種由褐藻中提取巖藻黃素的方法(公開號為CN 101565411A)等；提取褐藻多酸的專利有:名稱為一種褐藻多酸的提取方法(公開號為CN 102397300A)，名稱為一種褐藻多酸的提取方法(公開號為CN 103610704A)。
[0005]上述專利中的提取方法皆是單獨(dú)提取巖藻黃素或褐藻多酚的方法，提取效率和原料利用率低；同時(shí)，生產(chǎn)成本普遍偏高，無法實(shí)現(xiàn)技術(shù)普及和大規(guī)模生產(chǎn)，難以實(shí)現(xiàn)應(yīng)用的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。目前，國內(nèi)外還沒有公開任何關(guān)于從馬尾藻中綜合提取巖藻黃素和褐藻多酚的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種原料利用率和提取效率高，操作簡單、高效、安全的從馬尾藻中綜合提取巖藻黃素和褐藻多酚的方法。
[0007]本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為:一種從馬尾藻中綜合提取巖藻黃素和褐藻多酚的方法，包括以下步驟:
(1)將新鮮馬尾藻在溫度為-5?-80°C的條件下進(jìn)行凍結(jié)，冷凍I天?30天后取出，在室溫條件下進(jìn)行空氣解凍直至馬尾藻中心溫度達(dá)到O?2°C后即完成凍融過程；將馬尾藻放入離心機(jī)，于轉(zhuǎn)速為800rpm?1000rpm的條件下離心3_10min去除水分；
(2)重復(fù)上述步驟I?4次后，將有機(jī)試劑加入到馬尾藻中，避光浸提1-24小時(shí)后抽濾，得到浸提液，將馬尾藻反復(fù)浸提直至浸提液為無色，合并浸提液，待用；
(3)將浸提液于15-40°C條件下進(jìn)行濃縮，直至溶液中出現(xiàn)大量沉淀，過濾除去沉淀得濾液，待用；
(4)將濾液于4°C-30°C低溫結(jié)晶2-72h，過濾即得純度高于75%的紅色固體巖藻黃素；
(5)在步驟(4)得到的濾液中加入脂溶性溶劑，進(jìn)行多次液液萃取直至脂溶性溶劑層無色，合并多次萃取所得脂溶性溶劑層，待用；
(6)將上述步驟(5)所得脂溶性溶劑進(jìn)行低溫濃縮，直至溶液中析出黃綠色固體，即為褐藻多酚提取物。
[0008]步驟(2)中所述的有機(jī)試劑為丙酮、甲醇或60— 99V/V %的乙醇水溶液。
[0009]步驟(5)中所述的脂溶性溶劑為二氯甲烷、正己烷、環(huán)己烷、乙醚中的一種或幾種。
[0010]步驟(I)中所述的馬尾藻為羊棲菜、海蒿子、海黍子、鼠尾藻、匍枝馬尾藻、銅藻、裂葉馬尾藻、半葉馬尾藻、弱枝馬尾藻。
[0011]一種從馬尾藻中提取褐藻多酚的檢測方法，包括以下步驟:
(1)稱取新鮮馬尾藻1.000 g于錐形瓶中，加入50 mL的體積濃度為60%的乙醇水溶液，40 °(:超聲提取30 min，過濾至50 mL容量瓶，加入體積濃度為60%的乙醇水溶液定容至50 mL得到馬尾藻提取液，待用；
(2)量取馬尾藻提取液l.0mL，加1.25mL Folin-C1calteu試劑，混勻3min后，加入4.0mL 0.lg/mL ~&20)3溶液，加水定容至10mL，混勻，30°C避光反應(yīng)60min，以試劑空白為對照，在760nm波長處測定吸光度；以沒食子酸為標(biāo)準(zhǔn)品繪制得到標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性回歸方程為Y=0.0138X+0.0267，相關(guān)系數(shù)R2=0.9993，其中X為馬尾藻提取液中褐藻多酚的濃度，單位為μ g/mL ;Y為吸光值；計(jì)算馬尾藻供試液中褐藻多酚的含量，計(jì)算公式如下:
褐藻多酸含量(mg/g) = XX V/m X:馬尾藻提取液中褐藻多酚濃度(mg/mL);
V:馬尾藻提取液總體積(mL); m:馬尾藻總質(zhì)量(g)。
[0012]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于:本發(fā)明提供一種從馬尾藻中綜合提取高純度巖藻黃素和褐藻多酚的方法，將濾去巖藻黃素的濾液用乙酸乙酯萃取，進(jìn)而得到較純凈的褐藻多酚提取物。本發(fā)明還具有以下優(yōu)點(diǎn)和積極效果:
1、操作簡單、成本低、分離效果好；
2、采用多次凍融和離心方法，除去馬尾藻中水分，可有效避免馬尾藻中的巖藻黃素等有效成分被破壞和分解，且馬尾藻樣品表面和內(nèi)部含水量差異小，處理后得到的馬尾藻含水量為50%?90%，含水量低于50%，巖藻黃素受到光、熱、空氣的影響，易于氧化，不利于巖藻黃素的提取，含水量高于90%，造成生產(chǎn)成本的急劇上升，生產(chǎn)效率下降，不利于馬尾藻高值化產(chǎn)品的規(guī)模化生產(chǎn)，獲得的巖藻黃素產(chǎn)品具有很好的產(chǎn)量和質(zhì)量，得率為85%?100% ;
3、產(chǎn)品安全、健康、純度高。本發(fā)明采用常用溶劑從馬尾藻中提取巖藻黃素，常用試劑甲醇、乙醇或丙酮不會(huì)影響天然巖藻黃素的化學(xué)結(jié)構(gòu)。通過本發(fā)明的提取工藝，可得到安全、健康、純度高于75%的巖藻黃素和純度10%左右的褐藻多酚；
4、為工廠化生產(chǎn)奠定基礎(chǔ)。本發(fā)明提出了一種簡單、高效的巖藻黃素和褐藻多酚綜合提取方法，其提取工藝適用于工業(yè)化的大規(guī)模生產(chǎn)。
[0013]綜上所述，本發(fā)明首次提出一種綜合利用提取高純度巖藻黃素和褐藻多酚的方法，為一種簡單、安全、低成本的高純度巖藻黃素和褐藻多酚粗品的制備方案。本發(fā)明為滿足國內(nèi)、外高純度巖藻黃素和褐藻多酚市場提供了安全、低毒的提取分離技術(shù)，對于綜合利用巖藻黃素和褐藻多酚開發(fā)功能性食品及天然藥物，具有重要的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。
【附圖說明】
[0014]圖1為本發(fā)明從馬尾藻中提取高純度巖藻黃素和褐藻多酚粗品的工藝流程圖；
圖2為實(shí)施例1從銅藻中提取得到的巖藻黃素紫外/可見吸收光譜圖；
圖3為實(shí)施例1從銅藻中提取得到的巖藻黃素的高效液相色譜圖；
圖4為實(shí)施例1從銅藻中提取得到的褐藻多酚的紫外/可見吸收光譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0015]以下結(jié)合附圖實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)描述。
[0016]—、實(shí)驗(yàn)方法液相色譜條件:
所用儀器=Waters 2695高效液相色譜儀
液相條件:固定相為YMC-Pack ODS-A 柱(250X4.6_，5 μm);柱溫:25 °C;流速:1 mL/min ;檢測波長:450 nm ;進(jìn)樣量:10yL ;流動(dòng)相:A:甲醇，B:水，梯度洗脫:A相(體積％)，0-40 min (20-90)，40-50 min (90)。
[0017]Folin-C1calteu比色法測定褐藻中褐藻多酚的含量:
(1)稱取新鮮馬尾藻1.000 g于錐形瓶中，加入50 mL的體積濃度為60%的乙醇水溶液，40 °(:超聲提取30 min，過濾至50 mL容量瓶，加入體積濃度為60%的乙醇水溶液定容至50 mL得到馬尾藻提取液，待用；
(2)量取馬尾藻提取液l.0mL，加1.25mL Folin-C1calteu試劑，混勻3min后，加入4.0mL 0.lg/mL ~&20)3溶液，加水定容至10mL，混勻，30°C避光反應(yīng)60min，以試劑空白為對照，在760nm波長處測定吸光度；以沒食子酸為標(biāo)準(zhǔn)品繪制得到標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性回歸方程為Y=0.0138X+0.0267，相關(guān)系數(shù)R2=0.9993，其中X為馬尾藻提取液中褐藻多酚的濃度，單位為μ g/mL ;Y為吸光值；計(jì)算馬尾藻供試液中褐藻多酚的含量，計(jì)算公式如下:
褐藻多酸含量(mg/g) = XX V/m X:馬尾藻提取液中褐藻多酚濃度(mg/mL);
V:馬尾藻提取液總體積(mL); m:馬尾藻總質(zhì)量(g)。
[0018]二、具體實(shí)施例實(shí)施例1
工藝流程如圖1所