一種絲膠蛋白多肽2及其制備和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物技術(shù)多肽制備領(lǐng)域，具體涉及絲膠蛋白多肽制備領(lǐng)域。
[0002]
技術(shù)背景
[0003]絲膠蛋白是一種絲膠狀蛋白質(zhì)，為球蛋白。約占蠶絲量的20%?30%，絲膠蛋白由外到內(nèi)由I，II，III，IV種蛋白質(zhì)組成?？傮w分子構(gòu)象主要為無規(guī)卷曲，分子空間結(jié)構(gòu)松散、無序含有β結(jié)構(gòu)存在，但無α螺旋結(jié)構(gòu)。絲膠蛋白鏈上有許多側(cè)鏈較長(zhǎng)的氨基酸，如精氨酸賴氨酸、谷氨酸、甲硫氨酸、色氨酸、酪氨酸等，以及許多極性親水基團(tuán)(如一0Η、一C00H、一ΝΗ2、> NH等)處于多肽鏈表面，這些親水性基團(tuán)可使體內(nèi)水分傳遞至皮膚角質(zhì)層而結(jié)合，使皮膚保持一定水分，從而使皮膚柔軟而光滑。它與人體皮膚角質(zhì)層中含有一定數(shù)量的天然調(diào)濕因子作用相似。
[0004]然而，絲膠蛋白是具有20個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)，分子量較大?，F(xiàn)在一般認(rèn)為分子量較小的水溶性絲膠具有優(yōu)異的調(diào)濕和保濕作用，能使皮膚中水分含量保持適當(dāng)使皮膚光滑、柔軟且富有彈性。但是，絲膠蛋白如果進(jìn)一步進(jìn)行酶解，可分別得到不同分子量的絲肽和絲氨酸等產(chǎn)品。它們不含生理活性成分，且對(duì)人體可能產(chǎn)生危害的重金屬和其他有機(jī)物通常附著在絲膠中。因此，如何才能讓分解后的絲膠蛋白分子量較小，且具有原蛋白質(zhì)的功效，一直是一個(gè)難以協(xié)調(diào)的問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]發(fā)明目的
針對(duì)現(xiàn)有絲膠蛋白化妝品的現(xiàn)狀，發(fā)明一種絲膠蛋白多肽及制備和應(yīng)用，制備的絲膠蛋白多肽，該多肽應(yīng)用于化妝品，其分子量較小，且具有原絲膠蛋白的功效。
[0006]技術(shù)方案
本發(fā)明為一種絲膠蛋白多肽，其序列為A⑶STTVNFIPSRATTEEQ。制備步驟包括(I)取絲膠粉500g，按照質(zhì)量/體積=1:1-3加入去離子水中溶解；(2)將絲膠溶液速冷至4-10°C ;
(3)在4-10°C離心，10000-15000rpm, 30-60分鐘，取上清；(4)采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，將上清溶液濃縮；(5)待溶液冷卻后，加入水解酶，在20-40°C反應(yīng)30-60分鐘；(6)離心2000-3000rpm，5-10分鐘，取上清；(7)將上清液加入ρΗ5.7-6.3的緩沖液中，攪拌，離心10000-15000rpm，30-60分鐘，得到沉淀物；(8)將沉淀物復(fù)溶于pH6.4-7.2緩沖液中，采用透析法，分離出分子量為1600-3400Da的多肽，即得。所述的水解酶，可以是凝血酶、溶菌酶等。所述的絲膠蛋白多肽，在制備化妝品中的應(yīng)用。
[0007]本發(fā)明涉及多肽委托上海生工合成。
[0008]有益效果
本發(fā)明的制備得到的絲膠蛋白多肽，經(jīng)蛋白質(zhì)序列測(cè)定，序列為A⑶STTVNFIPSRATTEEQ，純度大于70%。實(shí)驗(yàn)表明，該多肽能保濕的作用，作用與原絲膠蛋白相當(dāng)。
[0009]
【具體實(shí)施方式】
[0010]實(shí)施例1
取絲膠粉500g，加入500ml去離子水中溶解；將絲膠溶液速冷至4°C ；在4°C離心，1000rpm,60分鐘，取上清；采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，將上清溶液濃縮；待溶液冷卻后，加入溶菌酶，在37°C反應(yīng)30分鐘；離心3000rpm，5分鐘，取上清；將上清液加入pH5.7-6.3的緩沖液中，攪拌，離心10000rpm，60分鐘，得到沉淀物；將沉淀物復(fù)溶于pH6.4-7.2緩沖液中，采用透析法，分離出分子量為1600-3400Da的多肽，即得。采用固相蛋白質(zhì)自動(dòng)測(cè)序儀測(cè)定該多肽的序列為 ACDSTTVNFIPSRATTEEQ，純度為 84.1%。
[0011]實(shí)施例2
取絲膠粉500g，加入100ml去離子水中溶解；將絲膠溶液速冷至10°C ；在10°C離心，15000rpm, 30分鐘，取上清；采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，將上清溶液濃縮；待溶液冷卻后，加入凝血酶，在37°C反應(yīng)30分鐘；離心2000rpm，10分鐘，取上清；將上清液加入pH5.7-6.3的緩沖液中，攪拌，離心15000rpm，30分鐘，得到沉淀物；將沉淀物復(fù)溶于pH6.4-7.2緩沖液中，采用透析法，分離出分子量為1600-3400Da的多肽，即得。采用固相蛋白質(zhì)自動(dòng)測(cè)序儀測(cè)定該多肽的序列為ACDSTTVNFIPSRATTEEQ，純度為73.0%。
[0012]實(shí)施例3
將實(shí)施例1制備的多肽添加入乳膏基質(zhì)中。分別取不同濃度的絲膠蛋白2.0mg/ml、絲膠蛋白多肽溶液(0.5，1.0，2.0mg/ml)以1.25 μ L / cm2涂敷密度短期I次涂敷，輕輕拍打至吸收，測(cè)定12小時(shí)后角質(zhì)層水分含量。數(shù)據(jù)計(jì)算:皮膚水合度變化率(％)=[皮膚水合度(測(cè)試時(shí))_皮膚水合度(對(duì)照時(shí))]/皮膚水合度(對(duì)照時(shí))X 100 %。將實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次，2.0mg/ml絲膠蛋白、0.5，1.0,2.0,mg/ml絲膠蛋白多肽溶液的皮膚水合度率分別提高了為42.12、29.61、42.61、53.02%o
[0013]同時(shí)，分別取不同濃度的絲膠蛋白2.0mg/ml、絲膠蛋白多肽溶液(0.5，1.0，2.0mg/ml)以1.25 μ L / cm2涂敷密度短期I次涂敷，輕輕拍打至吸收，測(cè)定12小時(shí)后使用前后表皮的水分經(jīng)皮膚散失，將實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。初始對(duì)照的透皮失水值分別為21.0 g /(m2.h) N20.1g/ (m2.h)、20.Ig / (m2.h )和 20.7 g / (m2.h )使用 2.0mg/ml 絲膠蛋白、0.5，1.0，2.0，mg/ml絲膠蛋白多肽溶液至12 h時(shí)，透皮失水分別達(dá)到15.1 g /(m2.1ι)、14.3g / (m2.h)、13.5 g / (m2.1ι)和 11.3 g / (m2.1ι)，均有不同程度的降低。
[0014]可見，絲膠蛋白多肽溶液能顯著性提高皮膚水合度率，有效地降低皮膚的透皮水分蒸發(fā)，具有保濕的作用，且與原型絲膠蛋白相比，其保濕作用不變。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種絲膠蛋白多肽，其特征在于，序列為A⑶STTVNFIPSRATTEEQ。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述絲膠蛋白多肽的制備方法，其特征在于，步驟包括(I)取絲膠粉500g，按照質(zhì)量/體積=1:1-3加入去離子水中溶解；(2)將絲膠溶液速冷至4-10°C; (3)在4-10°C離心，10000-15000rpm, 30-60分鐘，取上清；(4)采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，將上清溶液濃縮；(5)待溶液冷卻后，加入水解酶，在20-40°C反應(yīng)30-60分鐘；(6)離心2000-3000rpm，5_10分鐘，取上清；(7)將上清液加入ρΗ5.7-6.3的緩沖液中，攪拌，離心10000-15000rpm，30-60分鐘，得到沉淀物；(8)將沉淀物復(fù)溶于pH6.4-7.2緩沖液中，采用透析法，分離出分子量為1600-3400Da的多肽，即得。3.根據(jù)權(quán)利要求書2所述絲膠蛋白多肽的制備方法，其特征在于，所述的水解酶是凝血酶、溶菌酶。4.根據(jù)權(quán)利要求書I所述的絲膠蛋白多肽在制備化妝品中的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種絲膠蛋白多肽，涉及生物技術(shù)多肽制備領(lǐng)域。其序列為ACDSTTVNFIPSRATTEEQ。制備步驟包括（1）取絲膠粉500g，按照質(zhì)量/體積=1:1-3加入去離子水中溶解；（2）將絲膠溶液速冷至4-10℃；（3）在4-10℃離心，10000-15000rpm，30-60分鐘，取上清；（4）采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，將上清溶液濃縮；（5）待溶液冷卻后，加入水解酶，在20-40℃反應(yīng)30-60分鐘；（6）離心2000-3000rpm，5-10分鐘，取上清；（7）將上清液加入pH5.7-6.3的緩沖液中，攪拌，離心10000-15000rpm，30-60分鐘，得到沉淀物；（8）將沉淀物復(fù)溶于pH6.4-7.2緩沖液中，采用透析法，分離出分子量為1600-3400Da的多肽，即得。所述的絲膠蛋白多肽，在制備化妝品中的應(yīng)用。本發(fā)明制備的絲膠蛋白多肽純度大于70%。實(shí)驗(yàn)表明，該多肽能保濕的作用，作用與原絲膠蛋白相當(dāng)。
【IPC分類】A61Q19/00, A61K8/64, C12P21/06, C07K7/08
【公開號(hào)】CN105017386
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510449826
【發(fā)明人】羅瑞雪
【申請(qǐng)人】蘇州普羅達(dá)生物科技有限公司
【公開日】2015年11月4日
【申請(qǐng)日】2015年7月28日