一種濾紙片擴散法測定黃酒抑菌圈的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種濾紙片擴散法測定黃酒抑菌圈的方法，屬于黃酒釀造的技術(shù)領(lǐng) 域。
【背景技術(shù)】
[0002] 黃酒是世界上最古老的酒類之一，也是我國的特產(chǎn)，享有"國酒"之美譽。由于它 的酒度適中，酒香濃郁，口味獨特，營養(yǎng)豐富，具有食療價值，深受消費者的歡迎。
[0003] 黃酒成分相當(dāng)復(fù)雜，其酒體是一種不穩(wěn)定的膠體，貯存期間的溫度、光照、PH值等 因素的改變都將在一定程度上破壞其膠體平衡，從而使其中的某些物質(zhì)析出，形成沉淀。這 些沉淀雖對人體無害，但嚴(yán)重影響了黃酒的外觀品質(zhì)。解決黃酒的沉淀問題已迫在眉睫。因 此，對這一現(xiàn)象的探索和研宄具有重要的理論意義和實用價值。
[0004] 關(guān)于黃酒生產(chǎn)方面的相關(guān)報道很多，但對于黃酒工藝的系統(tǒng)性研宄還未見詳細報 道。本發(fā)明探索了在黃酒發(fā)酵過程中添加具有殺菌作用的中藥材及其產(chǎn)品對于霉菌和細菌 的抑制作用，為功能性黃酒的生產(chǎn)和研發(fā)提供理論依據(jù)和技術(shù)支持。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 針對現(xiàn)有技術(shù)的上述技術(shù)問題，本發(fā)明的目的是提供一種濾紙片擴散法測定黃酒 抑菌圈的方法，通過對霉菌和細菌的抑制作用的控制，從而為功能性黃酒的生產(chǎn)和研發(fā)提 供理論依據(jù)和技術(shù)支持。
[0006] 為達到上述目的，本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的： 一種濾紙片擴散法測定黃酒抑菌圈的方法，包括以下步驟： (1) 菌液的制備：取大腸桿菌、金黃色葡萄球菌菌株接種到牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基斜面， 37°C培養(yǎng)24h，用接種環(huán)從斜面上挑菌到IOOmL無菌水中制成菌液，用棉塞塞好備用； (2) 濾紙片的制備及處理：用打孔器打成若干直徑為5. 5mm的圓形濾紙片，經(jīng)120°C干 熱滅菌2h后備用，用鑷子夾取已滅菌的濾紙片浸在不同濃度的藥液和酒樣中備用；以無菌 水浸過的濾紙做空白； (3) 藥物稀釋：以吸入20 μ L藥液為標(biāo)準(zhǔn)，若紙片薄，藥物原液需作調(diào)整；根據(jù)紙片內(nèi)各 種抗菌藥物的不同濃度配制藥物原液，其濃度需比紙片濃度大200倍；青霉素 G的紙片為 IOU/片，青霉素 G的原液濃度為2000U/mL，200張紙片內(nèi)即加入ImL青霉素 G原液； (4) 紙片浸潤、干燥和保存：用無菌操作法將待測的抗菌藥物溶液Iml加入攤布于滅菌 平皿中的100片紙片中，置冰箱內(nèi)浸泡1-2小時，不時翻動，使濾紙片將藥液均勻吸凈，如立 即實驗可不烘干，若保存?zhèn)溆每捎孟铝幸环N方法烘干，干燥的抗菌素紙片可保存6個月； (5) 按種培養(yǎng)：在無菌條件下，用已滅菌的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基制平板，待冷卻凝固后， 分別加入0. 2mL供試菌，然后用無菌涂布器涂布均勻，再用無菌鑷子夾取浸提處理過的濾 紙片貼在上述含菌平皿上，每種濃度的濾紙片要間隔一定的距離，并以無菌水和4%己醇的 濾紙片作為對照； 所述步驟（4)中烘干采用培養(yǎng)皿烘干法或真空抽干法： 所述的培養(yǎng)皿烘干法為：將浸有抗菌藥液的紙片攤平在培養(yǎng)皿中，于37°C溫箱內(nèi)保持 2-3h即可干燥，或放在無菌室內(nèi)過夜干燥； 所述的真空抽干法為：將放有抗菌藥物紙片的試管置于干燥器了，用真空抽氣機抽 干； 所述步驟（4)中的紙片保存為：將制好的各種藥物紙片裝入無菌小瓶中置冰箱內(nèi)保存 備用，收到紙片后應(yīng)立即保存在-20-4°C中，放置1周使用的紙片；紙片容器打開前先置室 溫平衡，裝紙片的容器自冰箱取出后，在室溫IOmin以上打開，紙片貼畢應(yīng)把未用完的放回 冰箱中。
[0007] 所述的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基為：牛肉膏3. Og、蛋白胨10. 0g、食鹽5. 0g、瓊脂 18-20g和自來水1000 mL用NaOH調(diào)節(jié)PH至7. 0~7. 2, lkg/cm2、121°C下滅菌30分鐘。
[0008] 本發(fā)明的有益效果如下： 本發(fā)明濾紙片擴散法測定黃酒抑菌圈的方法，通過對霉菌和細菌的抑制作用的控制， 從而為功能性黃酒的生產(chǎn)和研發(fā)提供理論依據(jù)和技術(shù)支持。
【具體實施方式】
[0009] 下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步的說明，但本發(fā)明的保護范圍并不限于 此。
[0010] 本發(fā)明一種濾紙片擴散法測定黃酒抑菌圈的方法，包括以下步驟： (1) 菌液的制備：取大腸桿菌、金黃色葡萄球菌菌株接種到牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基斜面， 37°C培養(yǎng)24h，用接種環(huán)從斜面上挑菌到IOOmL無菌水中制成菌液，用棉塞塞好備用； (2) 濾紙片的制備及處理：用打孔器打成若干直徑為5. 5mm的圓形濾紙片，經(jīng)120°C干 熱滅菌2h后備用，用鑷子夾取已滅菌的濾紙片浸在不同濃度的藥液和酒樣中備用；以無菌 水浸過的濾紙做空白； (3) 藥物稀釋：以吸入20 μ L藥液為標(biāo)準(zhǔn)，若紙片薄，藥物原液需作調(diào)整；根據(jù)紙片內(nèi)各 種抗菌藥物的不同濃度配制藥物原液，其濃度需比紙片濃度大200倍；青霉素 G的紙片為 IOU/片，青霉素 G的原液濃度為2000U/mL，200張紙片內(nèi)即加入ImL青霉素 G原液； (4) 紙片浸潤、干燥和保存：用無菌操作法將待測的抗菌藥物溶液Iml加入攤布于滅菌 平皿中的100片紙片中，置冰箱內(nèi)浸泡1-2小時，不時翻動，使濾紙片將藥液均勻吸凈，如立 即實驗可不烘干，若保存?zhèn)溆每捎孟铝幸环N方法烘干，干燥的抗菌素紙片可保存6個月； (5) 按種培養(yǎng)：在無菌條件下，用已滅菌的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基制平板，待冷卻凝固后， 分別加入0. 2mL供試菌，然后用無菌涂布器涂布均勻，再用無菌鑷子夾取浸提處理過的濾 紙片貼在上述含菌平皿上，每種濃度的濾紙片要間隔一定的距離，并以無菌水和4%己醇的 濾紙片作為對照； 所述步驟（4)中烘干采用培養(yǎng)皿烘干法或真空抽干法： 所述的培養(yǎng)皿烘干法為：將浸有抗菌藥液的紙片攤平在培養(yǎng)皿中，于37°C溫箱內(nèi)保持 2-3h即可干燥，或放在無菌室內(nèi)過夜干燥； 所述的真空抽干法為：將放有抗菌藥物紙片的試管置于干燥器了，用真空抽氣機抽 干； 所述步驟（4)中的紙片保存為：將制好的各種藥物紙片裝入無菌小瓶中置冰箱內(nèi)保存 備用，收到紙片后應(yīng)立即保存在-20-4°C中，放置1周使用的紙片；紙片容器打開前先置室 溫平衡，裝紙片的容器自冰箱取出后，在室溫IOmin以上打開，紙片貼畢應(yīng)把未用完的放回 冰箱中。
[0011] 本發(fā)明的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基為：牛肉膏3. Og、蛋白胨10. 0g、食鹽5. 0g、瓊脂 18-20g和自來水1000 mL用NaOH調(diào)節(jié)PH至7. 0~7. 2, lkg/cm2、121°C下滅菌30分鐘。
[0012] 實施例1 以4%的酒精和無菌水為對照，測定不同濃度藥液和添加功能性中藥材制作的酒樣對 金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的抑制作用。抑菌圈的大小見下表1。
[0013] 表中數(shù)據(jù)為抑菌圈直徑的平均值，單位為mm，抑菌圈直徑越大，抑菌效果越好， " "表不無抑菌圈。
[0014] 由上表1可知：不同濃度的中藥提取液對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌都具有一定 的抑制作用，但對金黃色葡萄球菌的抑制作用較強，其抑菌圈大于大腸桿菌的抑菌圈；添加 功能性中藥材制作的酒樣對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的抑制作用均強于中藥提取液，這 可能與發(fā)酵過程中形成某種有效成分有關(guān)；另外，酒樣對金黃色葡萄球菌的抑制作用強于 大腸桿菌。
[0015] 本發(fā)明濾紙片擴散法測定黃酒抑菌圈的方法，通過對霉菌和細菌的抑制作用的控 制，從而為功能性黃酒的生產(chǎn)和研發(fā)提供理論依據(jù)和技術(shù)支持。
[0016] 上述實施例僅用于解釋說明本發(fā)明的發(fā)明構(gòu)思，而非對本發(fā)明權(quán)利保護的限定， 凡利用此構(gòu)思對本發(fā)明進行非實質(zhì)性的改動，均應(yīng)落入本發(fā)明的保護范圍。
【主權(quán)項】
1. 一種濾紙片擴散法測定黃酒抑菌圈的方法，其特征在于包括以下步驟： (1) 菌液的制備：取大腸桿菌、金黃色葡萄球菌菌株接種到牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基斜面， 37°C培養(yǎng)24h，用接種環(huán)從斜面上挑菌到IOOmL無菌水中制成菌液，用棉塞塞好備用； (2) 濾紙片的制備及處理：用打孔器打成若干直徑為5. 5mm的圓形濾紙片，經(jīng)120°C干 熱滅菌2h后備用，用鑷子夾取已滅菌的濾紙片浸在不同濃度的藥液和酒樣中備用；以無菌 水浸過的濾紙做空白； (3) 藥物稀釋：以吸入20yL藥液為標(biāo)準(zhǔn)，若紙片薄，藥物原液需作調(diào)整；根據(jù)紙片內(nèi)各 種抗菌藥物的不同濃度配制藥物原液，其濃度需比紙片濃度大200倍；青霉素G的紙片為 IOU/片，青霉素G的原液濃度為2000U/mL，200張紙片內(nèi)即加入ImL青霉素G原液； (4) 紙片浸潤、干燥和保存：用無菌操作法將待測的抗菌藥物溶液Iml加入攤布于滅菌 平皿中的100片紙片中，置冰箱內(nèi)浸泡1-2小時，不時翻動，使濾紙片將藥液均勻吸凈，如立 即實驗可不烘干，若保存?zhèn)溆每捎孟铝幸环N方法烘干，干燥的抗菌素紙片可保存6個月； (5) 按種培養(yǎng)：在無菌條件下，用已滅菌的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基制平板，待冷卻凝固后， 分別加入0. 2mL供試菌，然后用無菌涂布器涂布均勻，再用無菌鑷子夾取浸提處理過的濾 紙片貼在上述含菌平皿上，每種濃度的濾紙片要間隔一定的距離，并以無菌水和4%己醇的 濾紙片作為對照； 所述步驟（4)中烘干采用培養(yǎng)皿烘干法或真空抽干法： 所述的培養(yǎng)皿烘干法為：將浸有抗菌藥液的紙片攤平在培養(yǎng)皿中，于37°C溫箱內(nèi)保持 2-3h即可干燥，或放在無菌室內(nèi)過夜干燥； 所述的真空抽干法為：將放有抗菌藥物紙片的試管置于干燥器了，用真空抽氣機抽 干； 所述步驟（4)中的紙片保存為：將制好的各種藥物紙片裝入無菌小瓶中置冰箱內(nèi)保存 備用，收到紙片后應(yīng)立即保存在-20-4°C中，放置1周使用的紙片；紙片容器打開前先置室 溫平衡，裝紙片的容器自冰箱取出后，在室溫IOmin以上打開，紙片貼畢應(yīng)把未用完的放回 冰箱中。2. 如權(quán)利要求1所述濾紙片擴散法測定黃酒抑菌圈的方法，其特征在于所述的牛肉膏 蛋白胨培養(yǎng)基為：牛肉膏3.Og、蛋白胨10. 0g、食鹽5. 0g、瓊脂18-20g和自來水1000 mL用 NaOH調(diào)節(jié)pH至 7. 0 ~7. 2，lkg/cm2、121°C下滅菌 30 分鐘。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種濾紙片擴散法測定黃酒抑菌圈的方法，包括以下步驟：（1）菌液的制備：取大腸桿菌、金黃色葡萄球菌菌株接種到牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基斜面，用接種環(huán)從斜面上挑菌到lOOmL無菌水中制成菌液，用棉塞塞好備用；（2）濾紙片的制備及處理：用打孔器打成圓形濾紙片，經(jīng)干熱滅菌后備用，用鑷子夾取已滅菌的濾紙片浸在不同濃度的藥液和酒樣中備用；（3）按種培養(yǎng)：在無菌條件下，用已滅菌的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基制平板，待冷卻凝固后，加入供試菌，用無菌涂布器涂布均勻，再用無菌鑷子夾取浸提處理過的濾紙片貼在上述含菌平皿上。本發(fā)明通過對霉菌和細菌的抑制作用的控制，從而為功能性黃酒的生產(chǎn)和研發(fā)提供理論依據(jù)和技術(shù)支持。
【IPC分類】C12Q1/18
【公開號】CN104911244
【申請?zhí)枴緾N201510353952
【發(fā)明人】魯志康, 張?zhí)K敏
【申請人】紹興文理學(xué)院
【公開日】2015年9月16日
【申請日】2015年6月25日