一種三七分子身份證及鑒定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于中藥材來源品種鑒定技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種三七分子身份證及鑒定 方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 三七（Panaxnotoginseng)是人參屬多年生植物，是我國傳統(tǒng)名貴中藥材，距今已 有400多年的應(yīng)用歷史，在國內(nèi)外久負(fù)盛名，三七自古就有"止血神藥"的美稱。具有散瘀 止血，消腫定痛之功效。主治咯血，吐血，衄血，便血，崩漏，外傷出血，胸腹刺痛，跌仆腫痛。 由于三七獨特的止血功效，其需求量巨大，云南白藥集團(tuán)、天津天士力、廣州白云山等企業(yè) 都是三七的大用戶。年需要量已經(jīng)接近8000噸，用量仍處于上升趨勢。由于三七藥材價格 昂貴，市場上常出現(xiàn)其混偽品。三七與人參、西洋參、竹節(jié)參及其變種狹葉竹節(jié)參、珠子參和 疙瘩七以及姜狀三七、屏邊三七和假人參均作為藥物使用，由于三七與其近緣種外形類似， 傳統(tǒng)的性狀鑒別對三七與其近緣種的鑒定有一定困難，尤其對于藥材市場存在的三七花、 粉末的鑒別具有更大障礙。
[0003] 現(xiàn)有的對三七的傳統(tǒng)鑒別方法，在實際運用中要進(jìn)行準(zhǔn)確鑒別難度極大，且存在 主觀性大，通用性差，且對觀察者經(jīng)驗要求高等缺陷。而分子鑒別手段比較準(zhǔn)確可靠，但目 前尚無統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)化方法。
[0004] 因此有必要開發(fā)一種結(jié)果準(zhǔn)確且鑒定過程簡便快速的三七鑒定方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于克服傳統(tǒng)鑒別技術(shù)中存在的上述缺陷，提供一種結(jié)果準(zhǔn)確靈 敏，鑒定過程簡便快速的三七鑒定方法。
[0006] 為達(dá)到以上目的，本發(fā)明的發(fā)明人在對大量的樣品的篩選過程中，尋找出能夠?qū)?正品三七與混偽品進(jìn)行精確區(qū)分的正品三七的特異分子身份證序列，并提供了對三七鑒別 較為快速，簡便，廉價的方法。
[0007] 本發(fā)明提供了一種三七分子身份證，所述分子身份證中含有如SEQIDNo. 1和/ 或SEQIDNo. 2所示的核苷酸序列。
[0008] 可選的，所述分子身份證為SEQIDNo. 1和/或SEQIDNo. 2所示的核苷酸序列。
[0009] 在本發(fā)明的一種實施方式中，所述分子身份證為SEQIDNo. 1所不的序列。
[0010] 在本發(fā)明的另一種實施方式中，所述分子身份證為SEQIDNo. 2所不的序列。
[0011] 本發(fā)明提供了一種三七的鑒定方法，其中，所述方法包括檢測樣品基因組DNA中 是否存在本發(fā)明所述的分子身份證。
[0012] 所述方法包括如下步驟：
[0013] 1)以待測樣品基因組DNA為模板，對所述分子身份證進(jìn)行PCR擴(kuò)增，獲得擴(kuò)增產(chǎn) 物；
[0014] 2)對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測序，拼接后去除引物區(qū)獲得擴(kuò)增片段，檢測擴(kuò)增片段中是否 存在所述分子身份證。
[0015] 當(dāng)存在SEQIDNo. 1和/或SEQIDNo. 2所示的片段時可以判定被測樣品中存在 三七成分或為三七。相反，如果既不存在SEQIDNo. 1所示的片段也不存在SEQIDNo. 2所 示的片段時，判定被測樣品為偽品。
[0016] 本發(fā)明對于PCR所使用的引物無特別的限制，只要能夠?qū)λ龇肿由矸葑C進(jìn)行擴(kuò) 增即可，為了獲得最佳的鑒定效果，所述PCR擴(kuò)增使用的引物為：
[0017] ITS2F5' -ATGCGATACTTGGTGTGAAT-3'（SEQIDNo. 3 所示的核苷酸序列），
[0018] ITS3R5' -GACGCTTCTCCAGACTACAAT-3'(SEQIDNo. 4 所示的核苷酸序列）。
[0019] 可選的，所述PCR擴(kuò)增的反應(yīng)程序為：
[0020]
【主權(quán)項】
1. 三七分子身份證，其特征在于，所述分子身份證中含有如SEQ ID No. 1和/或SEQ ID No. 2所示的核苷酸序列。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的分子身份證，其特征在于，所述分子身份證為SEQ ID No. 1和 /或SEQ ID No. 2所示的核苷酸序列。
3. -種三七鑒定方法，其特征在于，所述方法包括檢測樣品基因組DNA中是否存在權(quán) 利要求1-2中任意一項所述的分子身份證。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的鑒定方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟： 1) 以待測樣品基因組DNA為模板，對所述分子身份證進(jìn)行PCR擴(kuò)增，獲得擴(kuò)增產(chǎn)物； 2) 對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測序，拼接后去除引物區(qū)獲得擴(kuò)增片段，檢測擴(kuò)增片段中是否存在 所述分子身份證。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，檢測擴(kuò)增片段中是否存在SEQ ID No. 1和 /或SEQ ID No. 2所示的核苷酸序列。
6. 權(quán)利要求1-2所述的分子身份證序列或權(quán)利要求3-5中任意一項所述的鑒定方法在 三七鑒定中的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種三七子身份證，所述分子身份證中含有如SEQ ID No.1和/或SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。利用本發(fā)明所提供的分子身份證和方法可以準(zhǔn)確的將三七與形態(tài)特征相似的偽品區(qū)分開，本發(fā)明所提供的方法適用性更廣，能檢測所有能提取出DNA的任何樣品。因此，能夠?qū)崿F(xiàn)三七原植物、藥材、種子、種苗、粉末和混淆品的快速、準(zhǔn)確鑒定。
【IPC分類】C12Q1-68, C12N15-11
【公開號】CN104830969
【申請?zhí)枴緾N201510117020
【發(fā)明人】陳士林, 韓建萍, 王曉玥, 宋經(jīng)元
【申請人】中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所
【公開日】2015年8月12日
【申請日】2015年3月17日