生產(chǎn)啶南平的方法
【專利說(shuō)明】生產(chǎn)啶南平的方法 本申請(qǐng)為2011年1月19日提交的、發(fā)明名稱為"生產(chǎn)啶南平的方法"的PCT申請(qǐng)PCT/JP2011/050851的分案申請(qǐng)，所述PCT申請(qǐng)進(jìn)入中國(guó)國(guó)家階段的日期為2012年7月26日， 申請(qǐng)?zhí)枮?201180007262. 5。
[與相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用]
[0001] 此專利申請(qǐng)要求在2010年1月26日提交的日本專利申請(qǐng)?zhí)?4727/2010的優(yōu)先 權(quán)，將其全部公開(kāi)引入本文作為參考。
[發(fā)明背景]
[0002] 發(fā)明領(lǐng)域 本發(fā)明涉及一種生產(chǎn)陡南平（pyripyropene)的方法，更具體地，一種生產(chǎn)陡南平A,E, 〇等的方法。
【背景技術(shù)】
[0003] 如在日本專利特開(kāi)公報(bào)號(hào)（Laid-OpenPublicationNo. ) 360895/1992 (專利文 件 1)和JournalofAntibiotics(1993)，46(7)，1168_9(非專利文件 1)中公開(kāi)的陡南平 A，具有針對(duì)ACAT(酰基輔酶A:膽固醇?；D(zhuǎn)移酶）的抑制活性，有望將其應(yīng)用于治療由膽 固醇積累引起的疾病等等。
[0004] 作為產(chǎn)卩定南平A的真菌，煙曲霉（Aspergillusfumigatus)F0-1289菌株已在日 本專利特開(kāi)公報(bào)號(hào)360895/1992 (專利文件1)中公開(kāi)；Eupenicilliumreticulosporum NRRL-3446 菌株已在AppliedandEnvironmentalMicrobiology(1995) ,61(12)， 4429-35 (非專利文件2)中公開(kāi)：灰黃青霉（Penicilliumgriseofulvum)F1959菌株已在 W02004/060065 (專利文件 2)中公開(kāi):和糞牛.青霉（Penici1 1iumcoprobium)PF1169 菌 株已在JournalofTechnicalDisclosure500997/2008 (專利文件 3)中公開(kāi)。
[0005]此外，作為陡南平A的生物合成途徑，在JournalofOrganicChemistry(1996)， 61，882-886 (非專利文件 3)和ChemicalReview(2005)，105,4559-4580(非專利文件 4) 中已公開(kāi)了在煙曲霉F0-1289菌株中假定的牛物合成涂徑。這些文件公開(kāi)了在里血皇 F0-1289菌株中，通過(guò)環(huán)化酶連接分別由聚酮合酶或異戊烯轉(zhuǎn)移酶合成的部分結(jié)構(gòu)以合成 啶南平A。
[現(xiàn)有技術(shù)參考]
[專利文件]
[0006] [專利文件1]日本專利特開(kāi)公報(bào)號(hào)360895/1992 [專利文件 2]W02004/060065
[專利文件 3]JournalofTechnicalDisclosure5〇0"7/2〇〇8 [非專利文件]
[0007][非專利文件 1]JournalofAntibiotics(1993)，46 (7)，1168-9.
[非專利文件2]AppliedandEnvironmentalMicrobiology(1995)，61 (12)，4429-35. [非專利文件 3]JournalofOrganicChemistry(1996)，61，882_886.
[非專利文件 4]ChemicalReview(2〇〇5)，l〇5,4559_458〇.
[發(fā)明概述]
[0008] 本發(fā)明者現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)，能夠通過(guò)用啶南平A生物合成所必需的中間體化合物培養(yǎng)微 生物生產(chǎn)啶南平A或類似物，在所述微生物中引入特定多核苷酸或包含其的重組載體。已 基于這些發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生了本發(fā)明。
[0009] 因此，本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種生產(chǎn)啶南平A的方法。
[0010] 此外，根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，提供了一種生產(chǎn)啶南平A的方法，其特征在于 用啶南平E培養(yǎng)導(dǎo)入有以下（I)至（III)中的至少一種多核苷酸或包含其的重組載體的 微生物，并通過(guò)啶南平0分離啶南平A: (I) 分離的多核苷酸，其具有選自以下（a)至（d)中的核苷酸序列的至少一種核苷酸序 列： (a) SEQIDN0:266的核苷酸序列， (b) 核苷酸序列，其能夠在嚴(yán)格條件下與SEQIDN0:266的核苷酸序列的互補(bǔ)序列雜 交，且其編碼與SEQIDN0:266的核苷酸序列編碼的蛋白基本等同的蛋白， (c)SEQIDN0:266的核苷酸序列的多核苷酸的核苷酸序列，其中缺失、取代、插入或添 加了一個(gè)或多個(gè)核苷酸，且其編碼與SEQIDN0:266的核苷酸序列編碼的蛋白基本等同的 蛋白，和 (d) 核苷酸序列，其與SEQIDN0:266的核苷酸序列的多核苷酸具有至少90%的同一 性，且其編碼與SEQIDN0:266的核苷酸序列編碼的蛋白基本等同的蛋白； (II) 分離的多核苷酸，其具有編碼選自SEQIDN0:267至275的至少一個(gè)氨基酸序列 或與其基本等同的氨基酸序列的核苷酸序列；和 (III) 分離的多核苷酸，其具有選自以下（1)至（4)中的核苷酸序列的至少一種核苷酸 序列： (1)在以下（a)至⑴中的核苷酸序列： (a) SEQIDN0:266中顯示的核苷酸序列的從3342至5158的核苷酸序列， (b)SEQIDN0:266中顯示的核苷酸序列的從5382至12777的核苷酸序列， (c)SEQIDN0:266中顯示的核苷酸序列的從13266至15144的核苷酸序列， (d)SEQIDN0:266中顯示的核苷酸序列的從16220至18018的核苷酸序列， (e)SEQIDN0:266中顯示的核苷酸序列的從18506至19296的核苷酸序列， (f)SEQIDN0:266中顯示的核苷酸序列的從19779至21389的核苷酸序列， (g)SEQIDN0:266中顯示的核苷酸序列的從21793至22877的核苷酸序列， (h)SEQIDN0:266中顯示的核苷酸序列的從23205至24773的核苷酸序列，和 (i)SEQIDN0:266中顯示的核苷酸序列的從25824至27178的核苷酸序列； (2) 核苷酸序列，其能夠在嚴(yán)格條件下與（1)中的核苷酸序列的互補(bǔ)序列雜交，且其編 碼與每個(gè)核苷酸序列編碼的蛋白基本等同的蛋白； (3) (1)中的核苷酸序列的多核苷酸的核苷酸序列，其中缺失、取代、插入或添加了一個(gè) 或多個(gè)核苷酸，且其編碼與每個(gè)核苷酸序列編碼的蛋白基本等同的蛋白；和 (4) 核苷酸序列，其與（1)中的核苷酸序列的多核苷酸具有至少90%的同一'丨生，且其編 碼與每個(gè)核苷酸序列編碼的蛋白基本等同的蛋白。
[0011] 另外，根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案，提供了一種生產(chǎn)啶南平A的方法，其特征在 于用去乙酰啶南平E培養(yǎng)微生物，其中引入上述（I)至（III)中的至少一種多核苷酸或包 含其的重組載體，并通過(guò)啶南平E和啶南平0分離啶南平A。
[0012] 此外，根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案，提供了一種生產(chǎn)4-羥基-6-(吡 啶-3-基）-3-((2E，6E)-3, 7, 11-三甲基十二碳-2, 6, 10-三烯）-2H-吡喃-2-酮 (4-hydroxy-6-(pyridin-3-yl)-3-((2E, 6E)-3, 7, 11-trimethyldodeca-2, 6,l〇-trienyl)-2H-pyran_2-〇ne)的方法，其特征在于用4-氧-6_(3-批陡基）_a-批 喃酮（4-〇x〇-6-(3-pyridyl)_a-pyrone)培養(yǎng)微生物，其中引入上述（I)至 (III)中的至少一種多核苷酸或包含其的重組載體，并分離4-羥基-6-(吡 啶-3-基）-3- ((2E，6E) -3, 7, 11-三甲基十二碳-2, 6, 10-三烯）-2H-吡喃-2-酮。
[0013] 根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案，提供了上述（I)至（III)中的至少一種分離的多 核苷酸。
[0014] 此外，根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案，提供了重組載體，其選自PPP6 (用質(zhì)粒PPP6 轉(zhuǎn)化的米曲霉（Aspergillusoryzae)的登記號(hào):FERMBP-11218)，pPP7 (用質(zhì)粒pPP7轉(zhuǎn)化 的米曲霍的登記號(hào):FERMBP-11219)和pPP9 (用質(zhì)粒pPP9轉(zhuǎn)化的激血靈的登記號(hào)：FERM BP-11220)。
[0015] 此外，根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案，提供了轉(zhuǎn)化體，其包含選自質(zhì)粒pPP6,pPP7 和pPP9的一種或多種載體。
[0016] 根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案，提供了上述重組載體用于生產(chǎn)啶南平A的用途。
[0017] 根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案，提供了上述轉(zhuǎn)化體用于生產(chǎn)啶南平A的用途。
[0018] 根據(jù)本發(fā)明的生產(chǎn)方法，能夠通過(guò)基因重組技術(shù)生產(chǎn)啶南平A，E，0等等。因此本 發(fā)明的生產(chǎn)方法對(duì)啶南平A，E，0等等的大量生產(chǎn)技術(shù)具有重大貢獻(xiàn)。
[附圖簡(jiǎn)述]
[0019] [圖1]圖