本發(fā)明屬于蛋白提取，具體涉及一種具有控糖功效的桑葉蛋白和多肽的提取方法。

背景技術(shù)：

1、糖尿病是人類健康的重要威脅，α-葡糖苷酶抑制劑可以延長碳水化合物的消化時間，由此降低餐后血糖，是最具臨床價值的降血糖藥物之一。多肽具有抑制α-葡萄糖苷酶活性的功能，由于降血糖活性好、副作用少等優(yōu)點，被認為是目前最廣泛研究的潛在治療劑，而桑葉中蛋白質(zhì)的含量可以占到干基重量的15％-30％，是蛋白含量較高的植物，桑葉作為一種優(yōu)質(zhì)的蛋白質(zhì)資源，其蛋白質(zhì)及多肽的提取具有重要意義。

2、基于桑葉的應(yīng)用價值，近年來我國科研人員通過人工選擇與雜交育種，培育出抗逆性品系——蛋白桑。據(jù)報道，蛋白桑干桑葉粉中粗蛋白含量在25％-35％之間，含有18種氨基酸，種類齊全，其中動物必需氨基酸占總氨基酸質(zhì)量分數(shù)的43％，是優(yōu)質(zhì)的蛋白質(zhì)資源。關(guān)于桑葉蛋白的提取加工方法有較廣泛的研究，目前桑葉蛋白的提取方式有直接加熱法、酸堿沉淀法、鹽析法、乳酸發(fā)酵法以及泡沫分離等技術(shù)，其中酸堿沉淀法由于其廉價、高效的特性，為工業(yè)化生產(chǎn)廣泛采用，但高濃度堿會讓蛋白質(zhì)營養(yǎng)學(xué)特性發(fā)生變化，高濃度堿還會促進糖類和蛋白質(zhì)發(fā)生美拉德反應(yīng)，降低蛋白質(zhì)活性。鹽提取蛋白質(zhì)原理為：蛋白質(zhì)在低濃度鹽溶液中分子表面電荷增加，蛋白質(zhì)分子與水分子的相互作用增加蛋白質(zhì)在鹽溶液中的溶解度，在高濃度鹽溶液中，蛋白質(zhì)外周水化膜被破壞，鹽類的離子中和蛋白質(zhì)分子的電荷，蛋白質(zhì)的膠體穩(wěn)定性遭到破壞而沉淀。用鹽提法提取蛋白，蛋白質(zhì)的內(nèi)部結(jié)構(gòu)沒有變，仍保持其天然蛋白質(zhì)的特性，但提取率較低。目前提升提取率的常用輔助技術(shù)為超聲波輔助提取，超聲波作為一種輔助提取的技術(shù)，其在傳播過程中產(chǎn)生的超聲效應(yīng)可使介質(zhì)的形態(tài)、結(jié)構(gòu)等發(fā)生一定變化，可大大提高蛋白質(zhì)的提取率，但由于超聲過程具有熱效應(yīng)，需要維持低溫狀態(tài)，并且會造成部分成分氧化分解而降低產(chǎn)物活性。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于提供一種具有控糖功效的桑葉蛋白和多肽的提取方法，提高桑葉蛋白的提取率。

2、本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)：

3、本發(fā)明提供一種具有控糖功效的桑葉蛋白和多肽的提取方法，包括如下步驟：

4、步驟1、將桑葉洗凈晾干后粉碎，篩選得到桑葉粉，-10℃低溫保存；

5、步驟2、將桑葉粉和氯化鈉溶液混合，于脈沖電場中預(yù)處理后恒溫水浴提取，離心過濾得到提取液a和濾渣a；

6、步驟3、將濾渣a和氫氧化鈉溶液混合，恒溫水浴提取，離心過濾得到濾液，濾液為提取液b；

7、步驟4、向提取液a中加入氯化鈉溶液混合，靜置沉淀后離心處理，沉淀物透析后冷凍干燥得到桑葉蛋白粉a；

8、步驟5、向提取液b中加入鹽酸混合，靜置沉淀后離心處理，沉淀物透析冷凍干燥后得到桑葉蛋白粉b；

9、步驟6、將桑葉蛋白粉a和桑葉蛋白粉b于去離子水中加熱均勻混合得到蛋白溶液，調(diào)節(jié)ph后加入蛋白酶酶解；

10、步驟7、酶解完成后置于沸水中滅酶，冷凍干燥得到多肽；

11、步驟8、將酶解液離心后取上清液，得到多肽提取液。

12、進一步地，所述步驟2中氯化鈉溶液的濃度為0.6mol/l-0.8mol/l；

13、所述步驟2中桑葉粉和氯化鈉溶液的料液比為1g/18ml。

14、進一步地，所述步驟2中脈沖電場的電場強度為5kv/cm-20kv/cm，脈沖電場的持續(xù)時間為1min-5min。

15、進一步地，所述步驟2中恒溫水浴的溫度為40℃-60℃，提取時間為30min-60min。

16、進一步地，所述步驟3中氫氧化鈉溶液的濃度為0.125mol/l-0.15mol/l，濾渣a和氫氧化鈉溶液的料液比為1g/(40-50)ml。

17、進一步地，所述步驟3中恒溫水浴的溫度為45℃-50℃，提取的時間為40min-50min。

18、進一步地，所述步驟4中氯化鈉溶液的濃度為1.5mol/l，靜置沉淀時間為20min。

19、進一步地，所述步驟5中加入鹽酸調(diào)節(jié)提取液b的ph為3.5，靜置沉淀時間為20min。

20、進一步地，所述步驟6中加熱混合的溫度為45℃-55℃；

21、所述蛋白溶液的濃度為10mg/ml；

22、所述步驟6中調(diào)節(jié)ph的范圍為6.5-7.0。

23、進一步地，所述蛋白酶為中性蛋白酶和木瓜蛋白酶中的一種，蛋白酶在蛋白溶液中的質(zhì)量濃度為6％；

24、所述酶解時間為3h，滅酶時間為10min。

25、本發(fā)明的有益效果：

26、(1)本發(fā)明采用鹽提取法和堿提酸沉法相結(jié)合，先用鹽提取法提取桑葉中的蛋白，再對提取濾渣進行堿提酸沉，實現(xiàn)對桑葉中蛋白的充分提取，避免蛋白流失，提高桑葉中蛋白提取率的同時可有效提升最終產(chǎn)物多肽的活性。

27、(2)本發(fā)明采用脈沖電場輔助處理，利用脈沖電場產(chǎn)生的電脈沖使桑葉中的細胞壁和細胞膜破裂，促進細胞內(nèi)成分溶出，且適當(dāng)強度的脈沖電場可加速nacl在細胞中的擴散，增加細胞膜通透性，增強傳質(zhì)過程，使桑葉中蛋白的溶解更加高效，且脈沖處理時間短，沒有明顯熱效應(yīng)，不會造成氧化降解，且電脈沖會使部分蛋白結(jié)構(gòu)展開，蛋白酶酶解活性增加，進而提升多肽提取液的活性，控糖效率更高。

技術(shù)特征：

1.一種具有控糖功效的桑葉蛋白和多肽的提取方法，其特征在于，包括如下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種具有控糖功效的桑葉蛋白和多肽的提取方法，其特征在于，所述步驟2中氯化鈉溶液的濃度為0.6mol/l-0.8mol/l；

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種具有控糖功效的桑葉蛋白和多肽的提取方法，其特征在于，所述步驟2中脈沖電場的電場強度為5kv/cm-20kv/cm，脈沖電場的持續(xù)時間為1min-2min。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種具有控糖功效的桑葉蛋白和多肽的提取方法，其特征在于，所述步驟2中恒溫水浴的溫度為40℃-60℃，提取時間為30min-60min。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種具有控糖功效的桑葉蛋白和多肽的提取方法，其特征在于，所述步驟3中氫氧化鈉溶液的濃度為0.125mol/l-0.15mol/l，濾渣a和氫氧化鈉溶液的料液比為1g/(40-50)ml。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種具有控糖功效的桑葉蛋白和多肽的提取方法，其特征在于，所述步驟3中恒溫水浴的溫度為45℃-50℃，提取的時間為40min-50min。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種具有控糖功效的桑葉蛋白和多肽的提取方法，其特征在于，所述步驟4中氯化鈉溶液的濃度為1.5mol/l，靜置沉淀時間為20min。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種具有控糖功效的桑葉蛋白和多肽的提取方法，其特征在于，所述步驟5中加入鹽酸調(diào)節(jié)提取液b的ph為3.5，靜置沉淀時間為20min。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種具有控糖功效的桑葉蛋白和多肽的提取方法，其特征在于，所述步驟6中加熱混合的溫度為45℃-55℃；

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種具有控糖功效的桑葉蛋白和多肽的提取方法，其特征在于，所述蛋白酶為中性蛋白酶和木瓜蛋白酶中的一種，蛋白酶在蛋白溶液中的質(zhì)量濃度為6％；

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種具有控糖功效的桑葉蛋白和多肽的提取方法，屬于蛋白提取技術(shù)領(lǐng)域，先采用低濃度鹽溶解桑葉中的蛋白質(zhì)，再采用高濃度鹽溶液沉淀析出蛋白質(zhì)，并對鹽溶后的濾渣進一步堿提酸沉處理，避免蛋白流失，提升提取率。本發(fā)明選用脈沖電場預(yù)處理桑葉粉，相較超聲處理，使得蛋白質(zhì)的溶解更高效，提升蛋白提取率的同時提高蛋白酶活性，通過蛋白酶酶解獲得的多肽具有高達80％以上的α?葡萄糖苷酶抑制率?？刂迫芙膺^程中的氯化鈉溶液濃度和脈沖電場強度，實現(xiàn)高效提取桑葉中的蛋白質(zhì)和多肽。

技術(shù)研發(fā)人員：盧小剛,黃六仔,羅華,張有發(fā)
受保護的技術(shù)使用者：湖南杰萃生物技術(shù)有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/9/26