本發(fā)明涉及一種利用動物臟器提取肝素鈉的制備工藝,尤其是豬腸粘膜中肝素鈉的提取精制技術(shù)。
背景技術(shù):
肝素鈉是廣泛存在于動物器官(如:牛、羊的小腸粘膜、肝、胰臟及肺組織等)的一種葡萄胺聚糖,和大多數(shù)粘多糖一樣在體內(nèi)作為蛋白質(zhì)結(jié)合的復合物存在,這種復合物的抗凝活性隨著蛋白質(zhì)的去除而增加。肝素納及其衍生物藥品是經(jīng)典的抗凝、抗血栓藥物,在臨床上廣泛用于治療腎臟病患者的滲血,急性心肌梗塞癥,防止血栓形成,腦血管疾病,皮膚病,清除腎病形成的尿毒以及配合治療暴發(fā)性流腦敗血癥,腎炎等,同時,肝素鈉在降血脂和免疫等方面也有較好的作用,而且隨著對其逐漸深入了解,其醫(yī)療用途日益擴大,市場供不應求。
目前,我國通常利用豬小腸,提取新鮮腸粘膜液,運用傳統(tǒng)的鹽解工藝生產(chǎn)肝素鈉,這種制備方法由于生產(chǎn)周期長,水解不完全、不徹底,制得的肝素鈉純度低、收率低、效價低,很難進行規(guī)模性生產(chǎn),且不能滿足市場的大量需求。
技術(shù)實現(xiàn)要素:
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足之處,提供一種產(chǎn)品純度高、雜質(zhì)少、效價高的豬腸粘膜中肝素鈉的提取精制技術(shù),本工藝采用生物酶酶解法從原材料易得的豬大腸中提取肝素鈉粗品。
本發(fā)明實現(xiàn)目的的技術(shù)方案如下:
豬腸粘膜中肝素鈉的提取精制技術(shù),步驟如下:
(1)破漿:將豬大腸絞碎再磨成漿狀物,在充分攪拌下加入重量比1∶1-2的水,混勻得豬大腸漿液;
(2)酶解:豬大腸漿液調(diào)整漿液的ph值為8-10,加入豬大腸漿液重量的1-1.5%的肝素鈉專用酶,攪拌均勻,升溫至45-60℃,保溫反應1.5-2.5小時后,保持反應液的ph值為8-10,加入酶解重量的4-5%氯化鈉,攪拌均勻,保溫0.5-1.5小時,繼續(xù)升溫到90-100℃,保持10-10分鐘,冷卻,得到豬大腸酶解液;
(3)過濾、吸附:過濾豬大腸酶解液,去除表面油脂層,濾液再升溫到40-55℃,攪拌狀態(tài)下加入濾液體積的2-4%的大孔吸附樹脂,攪拌3-5小時后靜置過濾,去除上層液,收集吸附有肝素鈉的樹脂;
(4)洗脫:樹脂先用水沖洗濾干,再用鹽水進行梯度洗脫,最后濾干樹脂;合并梯度洗脫的濾液,得洗脫液;
(5)沉淀獲得粗品:在洗脫液中加入等體積的95%乙醇沉淀過夜后,除去上層清液,沉淀物為肝素鈉粗品,最后干燥儲存。
而且,所述步驟(3)大孔吸附樹脂為d-254樹脂。
而且,所述步驟(3)過濾用60目尼龍布。
而且,所述梯度洗脫為:用樹脂體積1-2倍鹽度為4-5波美度氯化鈉洗脫1小時,濾干;繼續(xù)用樹脂體積0.5-0.9倍鹽度為4-5波美度氯化鈉溶液攪拌洗脫45分鐘~70分鐘,濾干樹脂;再用樹脂體積2-3倍鹽度為23-24波美度氯化鈉溶液攪拌洗脫2-3小時;濾干樹脂,繼續(xù)用1-2倍鹽度為23-24波美度氯化鈉溶液洗脫3-4小時,濾干樹脂。
而且,所述干燥儲存步驟為:肝素鈉粗品置于容器中抽干,然后放入干燥器內(nèi),定時置換干燥劑。
本發(fā)明的優(yōu)點和有益效果為:
1、本發(fā)明將新鮮豬大腸絞碎成漿液、漿液保溫酶解、酶解液過濾收集濾液、對濾液進行離子交換吸附處理、樹脂的洗滌與洗脫、肝素鈉的沉淀、干燥得肝素鈉粗品,本發(fā)明采用的酶解方法能更徹底全面地溶解豬大腸漿液,有效提高和穩(wěn)定產(chǎn)品的質(zhì)量以及肝素鈉收率,同時獲得的粗品雜質(zhì)少、效價高。
2、本發(fā)明制備工藝設計合理,無廢氣、廢渣、廢水排出污染環(huán)境,運營生產(chǎn)成本低,適合于工業(yè)化生產(chǎn)。
3、本發(fā)明工藝生產(chǎn)無毒、無害、生物環(huán)保,豬大腸原料來源易得,成本低,適合大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。
具體實施方式
下面通過具體實施例對本發(fā)明作進一步詳述,以下實施例只是描述性的,不是限定性的,不能以此限定本發(fā)明的保護范圍。
本實施例中使用的肝素鈉專用酶均采用南寧東恒華道生物科技有限責任公司生產(chǎn)的肝素鈉提取專用酶。
豬腸粘膜中肝素鈉的提取精制技術(shù),步驟如下:
(1)破漿:首先將新鮮豬大腸用清水仔細清洗,除去內(nèi)外污物和外部皮質(zhì)脂肪后,將其絞碎再磨成漿狀物,取1000g豬大腸漿狀物,在充分攪拌下加入1000g水混勻得豬大腸漿液;
(2)酶解:豬大腸漿液在充分攪拌下,用氫氧化鈉溶液調(diào)整漿液的ph值為8.5時,加入10g肝素鈉專用酶,攪拌均勻,升溫至53℃,保溫反應2小時后,保持反應液的ph值為8.5,加入90g氯化鈉,攪拌均勻,保溫1小時,繼續(xù)升溫到98℃,保持15分鐘,自然冷卻,得到豬大腸酶解液;
(3)過濾、吸附:豬大腸酶解液自然冷卻后,用60目尼龍布過濾,并撇去表面油脂層,濾液再升溫到48℃,攪拌狀態(tài)下加入60gd-254樹脂,攪拌4小時后靜置過濾,用虹吸管吸去上層液,收集吸附有肝素鈉的樹脂;
(4)洗脫:樹脂先用水沖洗濾干,再用70g鹽度為4.5波美度氯化鈉洗脫1小時,濾干;繼續(xù)用樹脂體積0.7倍鹽度為4.5波美度氯化鈉溶液攪拌洗脫45分鐘,濾干樹脂;再用240g鹽度為23波美度氯化鈉溶液攪拌洗脫2小時;濾干樹脂,繼續(xù)用240g鹽度為23-24波美度氯化鈉溶液洗脫3小時,濾干樹脂;合并上述濾液得洗脫液;
(5)沉淀獲得粗品:在洗脫液中加入3000g的95%乙醇沉淀過夜后,用虹吸管除去上層清液,沉淀物為肝素鈉粗品;
(6)干燥儲存:抽濾至干的肝素鈉沉淀物置于布氏漏斗中抽干,然后放入干燥器內(nèi),定時置換干燥劑如五氧化二磷不再吸水為止,搗碎成顆粒狀,即得肝素鈉粗品2.0g,其效價為每毫克90單位。