本發(fā)明屬于生物降解處理技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種油脂降解菌的篩選方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)：

隨著我國居民生活水平提高和區(qū)域旅游業(yè)的迅速發(fā)展，生活污水以及餐飲行業(yè)中油脂廢水的排放量也逐漸增加，我國餐飲業(yè)含油廢水所導(dǎo)致的環(huán)境污染問題日益嚴(yán)重。而進(jìn)入到污水處理廠的油類物質(zhì)包裹在填料外層，令氧的傳導(dǎo)受阻，導(dǎo)致好養(yǎng)微生物代謝紊亂，最終影響污水的處理效果。而進(jìn)入水體的油類物質(zhì)則會(huì)漂浮在水體表面，阻礙水體的復(fù)氧和自我凈化過程，破壞水體的生態(tài)平衡。

目前，油脂廢水的處理方法主要有物理法、化學(xué)法和生物法。物理法和化學(xué)法由于投資大、占地廣、流程復(fù)雜，且容易產(chǎn)生二次污染，實(shí)際應(yīng)用較少。而生物法處理油脂廢水則主要利用油脂廢水中的微生物生長過程中產(chǎn)生的脂肪酶等降解酶系的作用將油脂分解轉(zhuǎn)化。其中，生物處理方法來降解油脂廢水是極具發(fā)展前景，利用微生物的生命活動(dòng)過程對(duì)油脂廢水進(jìn)行轉(zhuǎn)移和轉(zhuǎn)化，將油脂作為其生長所需的碳源和能源，并在酶的作用下水解成甘油和長鏈脂肪酸，最終降解為h2o和co2等代謝產(chǎn)物，且具有成本低，無二次污染優(yōu)點(diǎn)，而倍受青睞。而我國油污廢水處理生物方法主要采用活性污泥法等一些常規(guī)的生活污水處理工藝，但由于廢水中缺乏高效降解微生物，效果不甚理想，無法滿足油脂廢水的處理要求，因此，如何篩選高效油脂降解微生物并將其引入到油脂廢水處理中是解決這一難題的關(guān)鍵。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的一個(gè)技術(shù)問題是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的現(xiàn)狀提供一種篩選速度快的高效油脂降解菌的篩選方法。

本發(fā)明所要解決的又一個(gè)技術(shù)問題是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的現(xiàn)狀提供一種利用上述油脂降解菌的篩選方法篩選出的微生物在降解油脂廢水中的應(yīng)用。

本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為：該高效油脂降解菌的篩選方法，其特征在于：包括如下步驟：

⑴接種微生物：將含菌污泥水樣接種于富集培養(yǎng)基中，置于25～30℃、150～180rpm的搖床中培養(yǎng)，所述富集培養(yǎng)基的配制組成和重量如下：nacl5.0～8.0g，蛋白胨10.0～15.0g，牛肉膏5.0～6.0g，橄欖油6～8ml，蒸餾水1l；

⑵培養(yǎng)微生物：將步驟⑴中接種后的微生物每3～7天轉(zhuǎn)移培養(yǎng)物至新的富集培養(yǎng)基，持續(xù)富集培養(yǎng)20～30天，保證所需微生物菌種的充分生長；

⑶馴化微生物：將步驟⑵中富集培養(yǎng)后的菌液在25～30℃、150～180rpm搖床的條件下，接種至按梯度遞增的含有油脂廢水的富集培養(yǎng)基中進(jìn)行梯度馴化，每3～5天作為一個(gè)梯度馴化周期，馴化10～20天后得到經(jīng)馴化處理的微生物；

⑷篩選微生物：將步驟⑶中馴化后的微生物菌液按梯度稀釋法稀釋成不同濃度的懸浮菌液后，均勻涂布于分離培養(yǎng)基中，在25～30℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24～48h后獲得形狀不同的單菌落，選取透明圈直徑(d)/菌落直徑(d)比值大于2的菌株為油脂降解菌，所述分離培養(yǎng)基的配制組成和重量如下：油脂6～8ml，吐溫-8020～40ml，無機(jī)鹽培養(yǎng)液1000ml，瓊脂18～25g。

進(jìn)一步地，所述步驟⑷中無機(jī)鹽培養(yǎng)液組成為：kh2po40.3～0.5g，mgso4·7h2o0.12～0.15g，k2hpo41.5～1.8g，(nh4)2so41.0～1.5g，nacl5.0～10.0g，蒸餾水1l。

進(jìn)一步地，所述步驟⑴中富集培養(yǎng)基的ph為7.2～7.4。

本發(fā)明還提供一種利用上述油脂降解菌的篩選方法篩選出的微生物在降解油脂廢水中的應(yīng)用。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)：本發(fā)明的富集培養(yǎng)基中加入了油脂成分橄欖油，且控制ph于7.2-7.4之間，有利于油脂降解菌的生長和富集，為后續(xù)菌種的篩選分離提供了基礎(chǔ)，另外利用油脂降解菌能夠產(chǎn)生脂肪酶這一特性采用透明圈法試驗(yàn)、產(chǎn)脂肪酶能力測(cè)試試驗(yàn)分離篩選高效油脂降解菌，不僅操作起來簡便可行，又有利于快速篩選出高效油脂降解菌，排除其他雜菌的影響，同時(shí)，本發(fā)明為了得到能快速降解油脂和對(duì)油脂廢水水質(zhì)變化適應(yīng)性強(qiáng)高效油脂降解菌，將富集后的菌液加入到實(shí)際油脂廢水中進(jìn)行馴化，有效解決了將高效油脂降解微生物引入到油脂廢水處理環(huán)境這一關(guān)鍵問題，為工程實(shí)踐處理油脂廢水提供了技術(shù)支持。

具體實(shí)施方式

以下通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。

實(shí)施例1

本高效油脂降解菌的篩選方法包括以下步驟：

⑴接種微生物：將含菌污泥水樣接種于富集培養(yǎng)基中，置于25℃、150rpm的搖床中培養(yǎng)，富集培養(yǎng)基的配制組成和重量如下：nacl5.0g，蛋白胨10.0g，牛肉膏5.0g，橄欖油6ml，蒸餾水1l；

⑵培養(yǎng)微生物：將步驟⑴中接種后的微生物每3天轉(zhuǎn)移培養(yǎng)物至新的富集培養(yǎng)基，持續(xù)富集培養(yǎng)20天，保證所需微生物菌種的充分生長；

⑶馴化微生物：將步驟⑵中富集培養(yǎng)后的菌液在25℃、150rpm搖床的條件下，接種至按梯度遞增的含有油脂廢水的富集培養(yǎng)基中進(jìn)行梯度馴化，每3天作為一個(gè)梯度馴化周期，馴化10天后得到經(jīng)馴化處理的微生物；

⑷篩選微生物：將步驟⑶中馴化后的微生物菌液按10倍梯度稀釋法制成濃度為10^-5，10^-6，10^-7的懸浮菌液后，均勻涂布于分離培養(yǎng)基中，在25℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后獲得形狀不同的單菌落，選取透明圈直徑(d)/菌落直徑(d)比值大于2的菌株為油脂降解菌，其中，分離培養(yǎng)基的配制組成和重量如下：油脂6ml，吐溫-8020ml，無機(jī)鹽培養(yǎng)液1000ml，瓊脂18g，而無機(jī)鹽培養(yǎng)液的配制組成和重量如下kh2po40.3g，mgso4·7h2o0.12g，k2hpo41.5g，(nh4)2so41.0g，nacl5.0g，蒸餾水1l，并用接種環(huán)將平板中菌落接種到含分離培養(yǎng)基的三角瓶中，置于32℃，180rpm搖瓶培養(yǎng)，48h后測(cè)試菌株培養(yǎng)液脂肪酶活性，篩選出產(chǎn)脂肪酶能力較強(qiáng)的菌株。

實(shí)施例2

本高效油脂降解菌的篩選方法包括以下步驟：

⑴接種微生物：將含菌污泥水樣接種于富集培養(yǎng)基中，置于30℃、180rpm的搖床中培養(yǎng)，富集培養(yǎng)基的配制組成和重量如下：nacl8.0g，蛋白胨15.0g，牛肉膏6.0g，橄欖油8ml，蒸餾水1l；

⑵培養(yǎng)微生物：將步驟⑴中接種后的微生物每7天轉(zhuǎn)移培養(yǎng)物至新的富集培養(yǎng)基，持續(xù)富集培養(yǎng)30天，保證所需微生物菌種的充分生長；

⑶馴化微生物：將步驟⑵中富集培養(yǎng)后的菌液在30℃、180rpm搖床的條件下，接種至按梯度遞增的含有油脂廢水的富集培養(yǎng)基中進(jìn)行梯度馴化，每5天作為一個(gè)梯度馴化周期，馴化20天后得到經(jīng)馴化處理的微生物；

⑷篩選微生物：將步驟⑶中馴化后的微生物菌液按10倍梯度稀釋法制成濃度為10^-5，10^-6，10^-7的懸浮菌液后，均勻涂布于分離培養(yǎng)基中，在30℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h后獲得形狀不同的單菌落，選取透明圈直徑(d)/菌落直徑(d)比值大于2的菌株為油脂降解菌，其中，分離培養(yǎng)基的配制組成和重量如下：油脂8ml，吐溫-8040ml，無機(jī)鹽培養(yǎng)液1000ml，瓊脂25g，而無機(jī)鹽培養(yǎng)液的配制組成和重量如下kh2po40.5g，mgso4·7h2o0.15g，k2hpo41.8g，(nh4)2so41.5g，nacl10.0g，蒸餾水1l，并用接種環(huán)將平板中菌落接種到含分離培養(yǎng)基的三角瓶中，置于32℃，180rpm搖瓶培養(yǎng)，48h后測(cè)試菌株培養(yǎng)液脂肪酶活性，篩選出產(chǎn)脂肪酶能力較強(qiáng)的菌株。

實(shí)施例3

本高效油脂降解菌的篩選方法包括以下步驟：

⑴接種微生物：將含菌污泥水樣接種于富集培養(yǎng)基中，置于28℃、170rpm的搖床中培養(yǎng)，富集培養(yǎng)基的配制組成和重量如下：nacl7.0g，蛋白胨12.0g，牛肉膏5.5.0g，橄欖油7ml，蒸餾水1l；

⑵培養(yǎng)微生物：將步驟⑴中接種后的微生物每5天轉(zhuǎn)移培養(yǎng)物至新的富集培養(yǎng)基，持續(xù)富集培養(yǎng)25天，保證所需微生物菌種的充分生長；

⑶馴化微生物：將步驟⑵中富集培養(yǎng)后的菌液在28℃、160rpm搖床的條件下，接種至按梯度遞增的含有油脂廢水的富集培養(yǎng)基中進(jìn)行梯度馴化，每4天作為一個(gè)梯度馴化周期，馴化15天后得到經(jīng)馴化處理的微生物；

⑷篩選微生物：將步驟⑶中馴化后的微生物菌液按10倍梯度稀釋法制成濃度為10^-5，10^-6，10^-7的懸浮菌液后，均勻涂布于分離培養(yǎng)基中，在28℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)30h后獲得形狀不同的單菌落，選取透明圈直徑(d)/菌落直徑(d)比值大于2的菌株為油脂降解菌，其中，分離培養(yǎng)基的配制組成和重量如下：油脂7ml，吐溫-8030ml，無機(jī)鹽培養(yǎng)液1000ml，瓊脂20g，而無機(jī)鹽培養(yǎng)液的配制組成和重量如下kh2po40.4g，mgso4·7h2o0.13g，k2hpo41.6g，(nh4)2so41.2g，nacl8.0g，蒸餾水1l，并用接種環(huán)將平板中菌落接種到含分離培養(yǎng)基的三角瓶中，置于32℃，180rpm搖瓶培養(yǎng)，48h后測(cè)試菌株培養(yǎng)液脂肪酶活性，篩選出產(chǎn)脂肪酶能力較強(qiáng)的菌株。

實(shí)施例4

將不進(jìn)行油脂廢水馴化試驗(yàn)的微生物篩選方式與進(jìn)行油脂廢水馴化試驗(yàn)的微生物篩選方式對(duì)比發(fā)現(xiàn)：

不進(jìn)行油脂廢水馴化試驗(yàn)的含菌水樣最終篩選出36種菌劑，將其投入到始codcr為1356.40mg/l，油脂含量為353.65mg/l，ph6.4的油脂廢水處理中發(fā)現(xiàn)，codcr去除率低于30％的菌劑有20種，而進(jìn)行油脂廢水馴化試驗(yàn)后得到的菌劑為20種，同樣將其投入于實(shí)際油脂廢水的處理中發(fā)現(xiàn)，其中有12種菌劑的codcr去除率高于50％，該12種菌劑分別為洋蔥假單胞菌(burkholderiacepacia)、地衣芽孢桿菌(bacilluslicheniformis)、解脂亞羅酵母(yarrowialipolytica)、解淀粉芽孢桿菌(bacillusamyloliquefaciens)擴(kuò)張青霉(penicilliumexpansum)、微球菌屬(micrococcus)、枯草芽孢桿菌(bacillussubtilis)、噬胞菌(cytopaga)、產(chǎn)堿桿菌(alacligenesxylosoxidanssss)、解脂耶氏酵母(yarrowialipolytica)、不動(dòng)桿菌(acinetobacter)和青霉菌(penicillium)；實(shí)驗(yàn)可以證明，經(jīng)過實(shí)際油脂廢水馴化試驗(yàn)達(dá)到的菌劑對(duì)廢水的適用性較好，同時(shí)除了分解油脂外，對(duì)廢水cod的降解效果也較好，更適用于實(shí)際生產(chǎn)與使用。