本發(fā)明屬于生物育種技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一組可準(zhǔn)確區(qū)分我國育成芝麻品種的snp標(biāo)記。

背景技術(shù)：

芝麻（sesamumindicuml.，2n=26），屬胡麻科胡麻屬，是我國重要的特色優(yōu)質(zhì)油料作物。自上世紀(jì)60年代以來至今，我國共育成芝麻新品種151份，其中白芝麻品種135份，黑芝麻品種16份。受芝麻種質(zhì)遺傳基礎(chǔ)狹窄、少量優(yōu)異親本使用率高等因素影響，目前我國芝麻主栽品種間的遺傳差異越來越小，田間表型較為相似，采用田間形態(tài)性狀指標(biāo)區(qū)分和鑒定芝麻品種的準(zhǔn)確度差；加之形態(tài)鑒定方法周期長，易受環(huán)境及主觀因素影響，鑒定結(jié)果可靠性較低。因此，開發(fā)用于區(qū)分不同芝麻品種的分子標(biāo)記十分必要。

利用ssr、snp等分子標(biāo)記建立的植物dna指紋鑒定技術(shù)，可以用于區(qū)分同種植物個體在分子水平上的差異，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，檢測快速，在新品種選育與鑒定方面得到廣泛應(yīng)用。在眾多分子標(biāo)記中，單核苷酸多態(tài)位點（snp）標(biāo)記具有數(shù)量多、分布廣、多態(tài)性豐富、遺傳穩(wěn)定且二等位基因等特點，已被用于多種植物的高質(zhì)量分子遺傳圖譜構(gòu)建、基因定位和農(nóng)作物種質(zhì)的遺傳特異性分析。但是針對國內(nèi)眾多芝麻品種，由于傳統(tǒng)鑒定方法的局限性，現(xiàn)有技術(shù)中，尚缺乏一種或一組較好的有針對性的snp標(biāo)記分子，從而便于相關(guān)芝麻品種的鑒定。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的在于提供一組用于區(qū)分我國育成芝麻品種的snp標(biāo)記，從而便于相關(guān)芝麻品種的鑒定、及相關(guān)作為品種的篩選和開發(fā)利用。

本發(fā)明所采取的技術(shù)方案詳述如下。

一組用于區(qū)分我國育成芝麻品種的snp標(biāo)記，序列表具體如seqidno.1~45所示，具體而言，如下表1所示：

表1，用于區(qū)分151個芝麻品種的15個多態(tài)性snp標(biāo)記引物對信息表：

表中括號內(nèi)堿基為特異snp位點（括號本身無含義，僅為便于區(qū)別相關(guān)堿基）。

利用所述用于區(qū)分我國育成芝麻品種的snp標(biāo)記所構(gòu)建的我國151個芝麻品種的指紋圖譜，具體如下表2所示：

表2，我國151個芝麻育成品種的指紋圖譜信息表：

指紋圖譜中的a、t、c或g分別表示對應(yīng)著特定多態(tài)性snp標(biāo)記在該品種中的條帶類型；

需要說明的是，利用指紋圖譜進行鑒定時，由于皖芝4號、皖芝5號與皖芝3號間親緣關(guān)系太近，導(dǎo)致其指紋信息過于一致無法區(qū)分，但其他品種均獲得了特異性指紋圖譜。

利用所述用于區(qū)分我國育成芝麻品種的snp標(biāo)記的芝麻品種區(qū)分方法，具體包括如下操作步驟：

（1）種子預(yù)處理

挑選待鑒定芝麻種子，滅菌處理后，25℃~28℃、100~120rpm條件下振蕩培養(yǎng)至種子露白；

所述滅菌處理具體程序為：先用70%酒精處理30s，再3%的次氯酸鈉處理10~15min，最后無菌水沖洗3~5次；

將露白后芝麻種子播種于盛有無菌蛭石的容器中，所述容器例如容量為250ml的紙杯，每個紙杯中可播種10粒露白后芝麻種子；

（2）幼苗培養(yǎng)并dna提取

定期用ms基本營養(yǎng)液進行澆灌，人工氣候培養(yǎng)箱培養(yǎng)。培養(yǎng)溫度25-28℃、相對濕度為60-80%、每天15h/9h光暗交替；培育至2對真葉后，采集幼嫩葉片；

參照魏利斌等（2008）的改良ctab法提取待鑒品種的dna（魏利斌等，芝麻dna和rna同步提取方法，2008，分子植物育種）；

（3）pcr產(chǎn)物擴增

利用上述用于區(qū)分我國育成芝麻品種的snp標(biāo)記組（15個snp標(biāo)記引物對），以步驟（2）中所提取待測芝麻品種的基因組dna為模板進行pcr擴增；10μl的pcr反應(yīng)體系設(shè)計如下：

步驟（2）中所提取模板dna，50ng/μl、1.0μl；

10×pcrbuffer(mg²⁺)，1.0μl；

taqase酶，5u/μl、0.2μl；

dntp，10mmol/l、0.2μl；

snp引物組中正向引物（f引物），10μm、0.5μl；

snp引物組中反向引物（r引物），10μm、0.5μl；

超純水加至為10μl；

pcr反應(yīng)程序為：

94℃預(yù)變性3分鐘；之后94℃變性30秒，55℃復(fù)性30秒，72℃延伸30秒，循環(huán)30次；最后72℃延伸5分鐘；4℃保存pcr擴增產(chǎn)物備用或直接進行后續(xù)電泳分析；

需要說明的是，pcr反應(yīng)時，可根據(jù)每個snp引物對的tm值，對pcr反應(yīng)過程中的復(fù)性溫度進行調(diào)整，以確保特異性pcr擴增結(jié)果；

（4）對pcr擴增產(chǎn)物分析

對步驟（3）中的pcr擴增產(chǎn)物進行非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分析；電泳分析時，凝膠質(zhì)量濃度為8~10%，凝膠大小可設(shè)計為：180mm×120mm×2mm，電泳緩沖液為0.5×tbe，150v恒壓交流電電泳1.5~2小時；

電泳結(jié)束后，進行銀染并顯色，漂洗后讀取數(shù)據(jù)進行分析；具體而言：電泳結(jié)束后，在凝膠加入濃度為0.1%的硝酸銀水溶液，置于水平搖床上滲透銀染10min；再加入2%氫氧化鈉和0.4%甲醛混合溶液，置于水平搖床中適度顯色；最后清水漂洗凝膠并記錄讀取數(shù)據(jù)。

本發(fā)明創(chuàng)新點主要體現(xiàn)在以下幾個方面：

（1）本發(fā)明開發(fā)出了適于鑒定我國芝麻品種的15個snp引物對，同時提供了利用多態(tài)性snp位點鑒定芝麻品種的pcr鑒定方法，該方法可以較為便捷和快速地初步確定待測芝麻品種的類型，對開展芝麻品種鑒定和評價具有重要意義，必將在芝麻分子輔助育種中得到較好地應(yīng)用；

（2）本發(fā)明所獲得了151個芝麻品種的dna指紋圖譜，snp標(biāo)記序列明確，檢測結(jié)果穩(wěn)定可靠，為芝麻新品種選育、良種繁育及種子銷售提供了參考。

（3）本發(fā)明所提供的snp標(biāo)記，位于芝麻栽培種的13條染色體組上，分布較為均勻，具有代表性和普遍性，檢測結(jié)果穩(wěn)定性好，應(yīng)用價值高。

與現(xiàn)有芝麻品種鑒定方法相比，本發(fā)明優(yōu)點可以概況為：

（1）本發(fā)明首次開發(fā)了用于區(qū)分芝麻品種的一組多態(tài)性snp標(biāo)記；

（2）本發(fā)明開發(fā)了用于區(qū)分芝麻品種的15個snp引物對，為快速鑒定和評價芝麻品種特異性和親緣關(guān)系提供了技術(shù)支撐。

（3）本發(fā)明所提供的snp分子標(biāo)記，為建立芝麻分子輔助育種技術(shù)平臺提供了理論和數(shù)據(jù)支持，為選育優(yōu)異麻新品種提供了高效檢測方法。

總之，針對我國現(xiàn)有151個育成芝麻品種，本申請有針對性地進行了snp標(biāo)記篩選和開發(fā)工作，通過篩選所確定的15個多態(tài)性snp標(biāo)記，最終成功構(gòu)建了151份我國芝麻品種的snp指紋圖譜，從而為評價我國芝麻品種遺傳特征、特定芝麻品種鑒定等工作提供了理論依據(jù)和技術(shù)手段，具有較為重要的理論價值和應(yīng)用意義。

附圖說明

圖1為多態(tài)性snp標(biāo)記引物對sisnp13-f（ccgtggcttgtggtgact）、sisnp13-1r（gtccaacccctggaagtct）和sisnp13-2r（tataagtccaacccctggaagtcg）在22個芝麻品種中的擴增結(jié)果；圖中m為dnamarker；具體泳道情況為：

泳道1、2：鄂芝1號；泳道3、4：鄂芝2號；泳道5、6：鄂芝3號；

泳道7、8：贛芝4號；泳道9、10：贛芝5號；泳道11、12：贛芝6號；

泳道13、14：吉芝5號；泳道15、16：吉芝6號；泳道17、18：吉芝7號；

泳道19、20：遼芝1號；泳道21、22：遼芝2號；泳道23、24：漯芝18號；

泳道25、26：漯芝19號；泳道27、28：漯芝20號；泳道29、30：漯芝21號；

泳道31、32：豫芝6號；泳道33、34：豫芝7號；泳道35、36：豫芝8號；

泳道37、38：中芝12號；泳道39、40：中芝13號；泳道41、42：中芝14號；

泳道43、44：中芝15號；

低帶為正向引物sisnp13-f（ccgtggcttgtggtgact）和第一個反向引物sisnp13-1r（gtccaacccctggaagtct）的擴增結(jié)果，標(biāo)記為a；高帶為正向引物sisnp13-f（ccgtggcttgtggtgact）和第二個反向引物sisnp13-2r（tataagtccaacccctggaagtcg）的擴增結(jié)果，標(biāo)記為c；

圖2為15組snp引物對擴增晉芝6號芝麻品種所獲得的snp指紋識別帶型；圖中m為分子量marker；具體泳道情況為：

泳道1、2為sisnp1引物對（分別為a、c標(biāo)記）；

泳道3、4為sisnp2引物對（分別為g、c標(biāo)記）；

泳道5、6為sisnp9引物對（分別為g、a標(biāo)記）；

泳道7、8為sisnp11引物對（分別為t、a標(biāo)記）；

泳道9、10為sisnp13引物對（分別為a、c標(biāo)記）；

泳道11、12為sisnp30引物對（分別為a、t標(biāo)記）；

泳道13、14為sisnp35引物對（分別為c、t標(biāo)記）；

泳道15、16為sisnp37引物對（分別為c、t標(biāo)記）；

泳道17、18為sisnp38引物對（分別為t、a標(biāo)記）；

泳道19、20為sisnp39引物對（分別為a、t標(biāo)記）；

泳道21、22為sisnp40引物對（分別為a、g標(biāo)記）；

泳道23、24為sisnp43引物對（分別為g、a標(biāo)記）；

泳道25、26為sisnp46引物對（分別為c、g標(biāo)記）；

泳道27、28為sisnp48引物對（分別為c、a標(biāo)記）；

泳道29、30為sisnp52引物對（分別為t、c標(biāo)記）；

圖中，如果一組引物組合沒有dna擴增片段，說明晉芝6號基因組中不含該snp位點類型；一組引物組合擴增出dna片段，說明晉芝6號基因組中含有該snp位點類型；

將晉芝6號的上述15個多態(tài)性snp位點pcr擴增信息進行組合，為ccaaaatcatgaccc，即為其dna指紋圖譜。

具體實施方式

下面結(jié)合實施例對本申請的技術(shù)方案進一步解釋如下。在具體介紹實施例前，就下述實施例中部分生物材料及相關(guān)實驗背景情況簡介如下。

生物材料：

下述實施例中所涉及151個芝麻品種均來自于均來自于河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院芝麻研究中心種質(zhì)資源庫，為我國現(xiàn)有生產(chǎn)應(yīng)用中的主要育成品種；

相關(guān)引物序列合成及測序工作由上海生工完成并提供；

實驗試劑：

pcr擴增中所用試劑均購自于上海生工試劑公司；其他試劑均為常規(guī)分析純試劑，不再單獨說明；

實驗儀器：

pcr反應(yīng)在ptc-100(mjresearch公司產(chǎn)品)熱循環(huán)儀上進行。

實施例1

本實施例主要介紹一下對于本申請中所述15個多態(tài)性snp位點標(biāo)記的篩選過程。具體過程簡介如下。

（1）多態(tài)性snp標(biāo)記挑選及引物設(shè)計

利用已知的芝麻栽培種豫芝11號基因組（ncbi數(shù)據(jù)庫,prjna315784），并依據(jù)芝麻基因組精細圖（miaoh.&zhangh.thegenomeofsesamumindicuml.thesesamegenomeworkinggroup.xxivinternationalplantandanimalgenomeconference.sandiego,usa,2016,january,9-13.），參考其他相關(guān)資料，針對現(xiàn)有的151個國內(nèi)芝麻品種，挑選了分布于13條染色體上的52個多態(tài)性snp標(biāo)記；

利用primerpremier5.0軟件設(shè)計了擴增上述snp標(biāo)記的引物對；具體snp引物對信息如下表3所示。

需要解釋的是，為區(qū)分被檢測基因組dna的不同snp等位位點，在設(shè)計用于pcr擴增用的snp引物時，參考了如下兩個設(shè)計原則：

（1）將snp引物對設(shè)計成3條，并需在特異引物的3’末端第3位的堿基引入錯配以增加擴增產(chǎn)物的特異性；

引入錯配的原則為：引物3’端-3位錯配堿基與3’末端的snp錯配堿基形成穩(wěn)定性互補的錯配結(jié)構(gòu)；即強錯配型(c／t或g／a)與弱錯配型(c／a或g／t)搭配，中等錯配型(a／a、c／c、g／g或t／t)與中等錯配型搭配；

（2）在含有snp位點的2個正向或反向引物中，將其中1條引物序列的5’端隨機增加5個堿基，其主要目的是為了不同位點的pcr產(chǎn)物在后續(xù)凝膠電泳圖譜區(qū)分能夠較為便捷地區(qū)分開來；

根據(jù)上述snp引物設(shè)計原則，結(jié)合每個snp位點，設(shè)計了上述2個正向引物和1個反向引物。

表3，待篩選的52個多態(tài)性snp標(biāo)記：

需要說明的是，表中所列的pcr產(chǎn)物大小為以豫芝11號基因組為模板的pcr擴增結(jié)果，從pcr擴增產(chǎn)物大小看出，二者相差5個堿基（引物設(shè)計時相差5個堿基的原因），從而便于凝膠成像后能夠辨認不同引物對的差異。

（2）制備不同芝麻品種的基因組dna樣品

分別取我國育成的151份芝麻品種的適量健康成熟種子，滅菌處理后，25℃~28℃、100~120rpm條件下振蕩培養(yǎng)至種子露白；

所述滅菌處理具體程序為：先用70%酒精處理30s，再3%的次氯酸鈉處理10~15min，最后無菌水沖洗3~5次；

將露白后芝麻種子播種于盛有無菌蛭石的容器中，所述容器容量為250ml的紙杯，每個紙杯中可播種10粒。

定期用ms基本營養(yǎng)液進行澆灌，人工氣候培養(yǎng)箱培養(yǎng)。培養(yǎng)溫度25-28℃、相對濕度為60-80%、每天15h/9h光暗交替。培育2對真葉后，采集幼嫩葉片。參照魏利斌等（2008）中的改良ctab法提取各品種的dna（魏利斌等，芝麻dna和rna同步提取方法，2008，分子植物育種）。

（3）利用前述待篩選的52個多態(tài)性snp標(biāo)記進行pcr擴增

以步驟（2）中所提取dna基因組為模板，以步驟（1）中所設(shè)計引物對進行pcr擴增，10μl的擴增體系設(shè)計如下：

步驟（2）中所提取模板dna，50ng/μl、1.0μl；

10×pcrbuffer(mg²⁺)，1.0μl；

taqase酶，5u/μl、0.2μl；

dntp，10mmol/l、0.2μl；

snp引物組中正向引物（f引物），10μm、0.5μl；

snp引物組中反向引物（r引物），10μm、0.5μl；

超純水加至為10μl；

pcr反應(yīng)程序為：

94℃預(yù)變性3分鐘；之后94℃變性30秒，55℃復(fù)性30秒，72℃延伸30秒，循環(huán)30次；最后72℃延伸5分鐘；4℃保存pcr擴增產(chǎn)物備用或直接進行后續(xù)電泳分析；

需要說明的是，pcr反應(yīng)時，可根據(jù)每個snp引物對的tm值，對pcr反應(yīng)過程中的復(fù)性溫度進行調(diào)整，以確保特異性pcr擴增結(jié)果。

（4）對pcr擴增產(chǎn)物分析

對步驟（3）中的pcr擴增產(chǎn)物進行非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分析；電泳分析時，凝膠質(zhì)量濃度為8~10%，凝膠大小可設(shè)計為：180mm×120mm×2mm，電泳緩沖液為0.5×tbe，150v恒壓交流電電泳1.5~2小時；

電泳結(jié)束后，進行銀染并顯色，漂洗后讀取數(shù)據(jù)進行分析；具體而言：電泳結(jié)束后，在凝膠加入濃度為0.1%的硝酸銀水溶液，置于水平搖床上滲透銀染10min；再加入2%氫氧化鈉和0.4%甲醛混合溶液，置于水平搖床中適度顯色；最后清水漂洗凝膠并記錄讀取數(shù)據(jù)。

部分電泳圖譜如圖1所示。分析表明：多態(tài)性snp標(biāo)記引物對sisnp13-f（ccgtggcttgtggtgact）、sisnp13-1r（gtccaacccctggaagtct）和sisnp13-2r（tataagtccaacccctggaagtcg）在不同品種中的擴增結(jié)果有一定差異，表現(xiàn)出品種間具有遺傳多樣性。其中：

低帶型為引物對sisnp13-f（ccgtggcttgtggtgact）和sisnp13-1r（gtccaacccctggaagtct）擴增結(jié)果，大小為180bp；

高帶型為引物對sisnp13-f（ccgtggcttgtggtgact）和sisnp13-2r（tataagtccaacccctggaagtcg）擴增結(jié)果，185bp；二者相差5個堿基；

為區(qū)分二者的差異，分別用sisnp13-1r和sisnp13-2r引物中的snp差異位點，即a和c表示。

依據(jù)上述原則，對各引物對在每個芝麻品種上的擴增結(jié)果進行標(biāo)注，顯示其各snp位點的特異性和多態(tài)性。

綜合全部pcr結(jié)果，最終從52個snp標(biāo)記中篩選確定了15個多態(tài)性snp標(biāo)記（如前述表1所示，文本簡要起見，不再重復(fù)列舉）。利用這15個snp標(biāo)記即可將151份芝麻品種區(qū)分開來。

進一步地，利用上述標(biāo)記的pcr結(jié)果和snp位點標(biāo)記方法，將每個品種的15個多態(tài)性snp位點組合，形成了各個品種的snp特征信息，即dna指紋圖譜。對于我國育成的151個芝麻品種的dna指紋圖譜，具體如前述內(nèi)容的表2所示（文本簡要起見，不再重復(fù)列舉）。依據(jù)所構(gòu)建的151個芝麻品種的dna指紋圖譜，可為鑒定和評價芝麻品種的特異性提供充分依據(jù)。

需要說明的是，利用指紋圖譜進行鑒定時，由于皖芝4號、皖芝5號與皖芝3號間親緣關(guān)系太近，導(dǎo)致其指紋信息過于一致無法區(qū)分，但其他品種均獲得了特異性指紋圖譜。其他149個品種的指紋圖譜均具有特異性。圖譜中的每一個a、t、c或g字母分別表示不同品種中含有特定多態(tài)性snp標(biāo)記的堿基差異，在pcr結(jié)果中均顯示了該品種具有的特異性條帶類型。分別用特定snp標(biāo)記的2個引物對對某個品種基因組進行擴增。如果其中的一組引物組合擴增出dna片段，說明該品種基因組中只含有對應(yīng)引物對的snp位點；如果2個引物對均擴增出dna片段，說明該品種含有2類snp，為雜合型。如果2個引物對均未擴增儲dna片段，說明測定品種不屬于151份我國育種品種材料范圍。

實施例2

本實施以晉芝6號芝麻品種為例，對利用實施例1中所述15個snp多態(tài)性位點的鑒定過程及其指紋圖譜構(gòu)建過程進一步簡要介紹如下。

取晉芝6號芝麻種子，參考實施例1的幼苗培養(yǎng)過程，并提取基因組dna，以此為模板，利用實施例1中篩選所得15個snp多態(tài)性引物對（如表1所示）進行pcr擴增。

最終晉芝6號電泳圖譜如圖2所示。

晉芝6號的dna指紋圖譜構(gòu)建過程如下：根據(jù)上述利用15個snp標(biāo)記的pcr結(jié)果和snp位點標(biāo)記方法，將晉芝6號的15個多態(tài)性snp位點pcr擴增信息進行組合，即ccaaaatcatgaccc；該snp特征信息就是晉芝6號的dna指紋圖譜，對比表明，該指紋圖譜與其余的150份芝麻品種的snp指紋圖譜信息均有明顯差異，可以用于區(qū)分和鑒定該芝麻品種。

sequencelisting

<110>河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院芝麻研究中心

<120>一組用于區(qū)分我國育成芝麻品種的snp分子標(biāo)記

<130>none

<160>45

<170>patentinversion3.5

<210>1

<211>25

<212>dna

<213>sisnp1-f

<400>1

cgaatcagatttaatcgaacttaat25

<210>2

<211>20

<212>dna

<213>人工設(shè)計

<400>2

accaatttgccccacggctt20

<210>3

<211>25

<212>dna

<213>人工設(shè)計

<400>3

ttataaccaatttgccccacggctg25

<210>4

<211>23

<212>dna

<213>人工設(shè)計

<400>4

agatcccaagattcaagggtaca23

<210>5

<211>22

<212>dna

<213>人工設(shè)計

<400>5

ccttcatcacactccaatcacc22

<210>6

<211>27

<212>dna

<213>人工設(shè)計

<400>6

taagaccttcatcacactccaatcacg27

<210>7

<211>19

<212>dna

<213>人工設(shè)計

<400>7

gcgatcgtctgcttgtgag19

<210>8

<211>24

<212>dna

<213>人工設(shè)計

<400>8

gcaatgcgatcgtctgcttgtgaa24

<210>9

<211>20

<212>dna

<213>人工設(shè)計

<400>9

ccatccactgcgaagttgtc20

<210>10

<211>25

<212>dna

<213>人工設(shè)計

<400>10

ccattagtccacttgttgctatagt25

<210>11

<211>30

<212>dna

<213>人工設(shè)計

<400>11

ctattccattagtccacttgttgctataga30

<210>12

<211>21

<212>dna

<213>人工設(shè)計

<400>12

ctatcccaaatccaacggtga21

<210>13

<211>18

<212>dna

<213>人工設(shè)計

<400>13

ccgtggcttgtggtgact18

<210>14

<211>19

<212>dna

<213>人工設(shè)計

<400>14

gtccaacccctggaagtct19

<210>15

<211>24

<212>dna

<213>人工設(shè)計

<400>15

tataagtccaacccctggaagtcg24

<210>16

<211>25

<212>dna

<213>人工設(shè)計

<400>16

agtccttatccttcctgttcctctc25

<210>17

<211>20

<212>dna

<213>人工設(shè)計

<400>17

tgctcaggtgaagagcgact20

<210>18

<211>25

<212>dna

<213>人工設(shè)計

<400>18

ggtattgctcaggtgaagagcgaca25

<210>19

<211>27

<212>dna

<213>人工設(shè)計

<400>19

cttatcttacagtaccaaatcgaccgt27

<210>20

<211>22

<212>dna

<213>人工設(shè)計

<400>20

cttacagtaccaaatcgaccgc22

<210>21

<211>25

<212>dna

<213>人工設(shè)計

<400>21

tgttcatattaatcagtattttaca25

<210>22

<211>21

<212>dna

<213>人工設(shè)計

<400>22

aagcagaaaagaccatcatcg21

<210>23

<211>18

<212>dna

<213>人工設(shè)計

<400>23

ctcatctgttgggagccg18

<210>24

<211>23

<212>dna

<213>人工設(shè)計

<400>24

agttcctcatctgttgggagcca23

<210>25

<211>19

<212>dna

<213>人工設(shè)計

<400>25

cgatgggcttggagagaac19

<210>26

<211>23

<212>dna

<213>人工設(shè)計

<400>26

tcttcactctcagccactaagta23

<210>27

<211>28

<212>dna

<213>人工設(shè)計

<400>27

ttatttcttcactctcagccactaagtt28

<210>28

<211>25

<212>dna

<213>人工設(shè)計

<400>28

aagaacgattacagtatagggagaa25

<210>29

<211>25

<212>dna

<213>人工設(shè)計

<400>29

gatagagtctccatttacagttcct25

<210>30

<211>30

<212>dna

<213>人工設(shè)計

<400>30

tcgctgatagagtctccatttacagttcca30

<210>31

<211>25

<212>dna

<213>人工設(shè)計

<400>31

ataataccccgacagctattcaggg25

<210>32

<211>20

<212>dna

<213>人工設(shè)計

<400>32

accccgacagctattcagga20

<210>33

<211>22

<212>dna

<213>人工設(shè)計

<400>33

ataagtcaaagcagggtatcga22

<210>34

<211>20

<212>dna

<213>人工設(shè)計

<400>34

ccacattgtcatcttgcgga20

<210>35

<211>17

<212>dna

<213>人工設(shè)計

<400>35

ggccttcgggtgattcc17

<210>36

<211>22

<212>dna

<213>人工設(shè)計

<400>36

ataatggccttcgggtgattct22

<210>37

<211>22

<212>dna

<213>人工設(shè)計

<400>37

aaaatgctccaaagacacgaca22

<210>38

<211>19

<212>dna

<213>人工設(shè)計

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<211>24

<212>dna

<213>人工設(shè)計

<400>39

taaatgaacgtcgggactctgctc24

<210>40

<211>22

<212>dna

<213>人工設(shè)計

<400>40

caaccctatttgccttggtaag22

<210>41

<211>21

<212>dna

<213>人工設(shè)計

<400>41

gtttgaggagagagacggaag21

<210>42

<211>26

<212>dna

<213>人工設(shè)計

<400>42

acgatgtttgaggagagagacggaat26

<210>43

<211>22

<212>dna

<213>人工設(shè)計

<400>43

gcggtggactagactcagacat22

<210>44

<211>27

<212>dna

<213>人工設(shè)計

<400>44

actatgcggtggactagactcagacac27

<210>45

<211>19

<212>dna

<213>人工設(shè)計

<400>45

cacccattccgttcccact19