本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說涉及一種從男性尿液中提取烏司他丁粗品的方法。
背景技術(shù)：
烏司他?。║Linastatin）系從健康成年男性新鮮尿液中分離純化出來的一種酸性糖蛋白，是一種廣譜的蛋白酶抑制劑，主要在肝臟中合成，由腎臟代謝隨尿液排出，且其分解形成的低分子量成分也具有很強(qiáng)的抑制水解酶的作用。烏司他丁由143個(gè)氨基酸組成，相對(duì)分子質(zhì)量約37000~43000，屬于蛋白酶抑制劑，對(duì)胰蛋白酶、α-糜蛋白酶等絲氨酸蛋白酶及粒細(xì)胞彈性蛋白酶、透明質(zhì)酸酶、巰基酶、纖溶酶等多種酶有抑制作用，還具有穩(wěn)定溶酶體膜、抑制溶酶體酶的釋放、抑制心肌抑制因子（MDF）產(chǎn)生、清除氧自由基及抑制炎癥介質(zhì)釋放的作用。烏司他丁還可改善手術(shù)刺激引起的免疫功能下降、蛋白代謝異常和腎功能降低，防止手術(shù)刺激引起的對(duì)內(nèi)臟器官與細(xì)胞的損傷以及改善休克時(shí)的循環(huán)狀態(tài)等。
1909年歐洲首先報(bào)道人體尿液存在著胰蛋白酶抑制劑，隨后人們發(fā)現(xiàn)，當(dāng)人體受到感染、發(fā)熱、腫瘤、妊娠、休克、手術(shù)、給予糖皮質(zhì)激素等刺激時(shí)，人體尿液中UTI活性升高。1985年由日本首先開發(fā)上市，在日本已作為急性胰腺炎、急性循環(huán)衰竭的治療藥物被廣泛應(yīng)用于臨床。
本發(fā)明人自2008年開始對(duì)UTI的生產(chǎn)工藝進(jìn)行試驗(yàn)研究，采用現(xiàn)代蛋白質(zhì)高端生化分離技術(shù)進(jìn)行生產(chǎn)，使UTI的總收率提高到70%以上，總效價(jià)不低于5000iu/mg，生產(chǎn)工藝穩(wěn)定，質(zhì)量可控。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是提供了一種從男性尿液中提取烏司他丁粗品的方法。
本發(fā)明的技術(shù)方案是：健康成年男性尿液經(jīng)甲殼素并在一定酸度的條件下進(jìn)行吸附、吸附物經(jīng)過一定濃度的氨水進(jìn)行洗脫、洗脫液加入硫酸銨進(jìn)行鹽析、鹽析品經(jīng)過五氧化二磷干燥得烏司他丁粗品的方法。
包括如下步驟：
1.甲殼素吸附
將合格的男性尿液經(jīng)過二層紗布過濾，濾入塑料桶中，不斷攪拌的同時(shí)，以緩慢的速度加入16.5kg甲殼素，并用精密pH試紙測定，調(diào)節(jié)尿液pH到5.5～6.0之間；攪拌吸附2小時(shí)，過濾，棄去尿液，用水洗滌甲殼素去殘尿及雜質(zhì)，至澄清為止。
2.氨水脫附
將5%氨水?dāng)嚢柘礈旒讱に?小時(shí)，過濾，收集洗脫液；甲殼素再用等量的5%的氨水溶液洗脫1小時(shí)，收集洗脫液，合并二次洗脫液。
3.鹽析
將洗脫液按500g/L的比例，加入固體硫酸銨，攪拌溶解，攪拌后，放置12-16小時(shí)沉淀，離心（3500rpm/min-4000rpm/min），收集沉淀的烏司他丁鹽析品。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
實(shí)施例
所述的利用健康成年男性尿液經(jīng)甲殼素并在一定酸度的條件下進(jìn)行吸附、吸附物經(jīng)過一定濃度的氨水進(jìn)行洗脫、洗脫液加入硫酸銨進(jìn)行鹽析、鹽析品經(jīng)過五氧化二磷干燥得烏司他丁粗品的方法。包括如下步驟：
1.尿液檢查
1.1.尿液是否澄清；
1.2 pH試紙檢查尿液的pH值為6.0。
2.甲殼素吸附
2.1取合格尿1.0T用二層紗布過濾，濾入塑料桶中；
2.2在不斷攪拌的同時(shí)，以緩慢的速度加入16.5kg甲殼素，并用精密pH試紙測定，調(diào)節(jié)尿液pH到5.5；
2.3攪拌吸附2小時(shí)，過濾，棄去尿液，用水洗滌甲殼素去殘尿及雜質(zhì)，至澄清為止。
3.氨水脫附
用5%氨水33L攪拌洗滌甲殼素1小時(shí)，過濾，收集洗脫液；甲殼素再用等量的5%的氨水溶液洗脫1小時(shí)，收集洗脫液，合并二次洗脫液得10.6L。
4.硫酸銨鹽析
洗脫液按500g/L的比例，加入固體硫酸銨5300g，攪拌溶解，攪拌后，放置12小時(shí)沉淀，離心（3500r/min-4000r/min），收集沉淀的烏司他丁鹽析品。
5.將烏司他丁鹽析品，用五氧化二磷作吸水劑，真空干燥，干燥后即得粗制品共計(jì)199.6g，收率為0.02%。
以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并非是對(duì)本發(fā)明作其它形式的限制，任何熟悉本專業(yè)的技術(shù)人員可能利用上述揭示的技術(shù)內(nèi)容加以變更或改型為等同變化的等效實(shí)施例。但是凡是未脫離本發(fā)明技術(shù)方案內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實(shí)質(zhì)對(duì)以上實(shí)施例所作的任何簡單修改、等同變化與改型，仍屬于本發(fā)明技術(shù)方案的保護(hù)范圍。