本申請(qǐng)是申請(qǐng)?zhí)枮?01380030602.5的中國(guó)專利申請(qǐng)的分案申請(qǐng)，原申請(qǐng)是國(guó)際申請(qǐng)pct/us2013/037579的中國(guó)國(guó)家階段申請(qǐng)。相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用本申請(qǐng)要求對(duì)以下文件的優(yōu)先權(quán)：于2012年4月20日提交的美國(guó)申請(qǐng)序列號(hào)61/636,059；于2012年8月10日提交的美國(guó)申請(qǐng)序列號(hào)61/681,750；和于2013年3月14日提交的美國(guó)申請(qǐng)序列號(hào)61/782,838，每個(gè)文件都通過(guò)引用并入本文。本申請(qǐng)涉及新的治療肥胖的方法，具體地，涉及產(chǎn)熱的mirna調(diào)節(jié)劑。
背景技術(shù)：
：肥胖已經(jīng)達(dá)到了流行病的比例，影響到所有年齡段和社會(huì)經(jīng)濟(jì)群體。世界衛(wèi)生組織估計(jì)，在2008年，有15億20歲及以上的成年人超重，并且有超過(guò)2億的男性和超過(guò)3億的女性肥胖。據(jù)估計(jì)，到2030年，超重和肥胖個(gè)體的數(shù)據(jù)將分別增長(zhǎng)至21.6億和11.2億。肥胖導(dǎo)致收入損失、活動(dòng)天數(shù)受到限制、缺勤、工作效率低下(出勤)、生活質(zhì)量下降、永久性失能、顯著的發(fā)病率和死亡率，以及壽命縮短。事實(shí)上，據(jù)估計(jì)，2009年美國(guó)和加拿大因醫(yī)療費(fèi)用、過(guò)高的死亡率以及失能導(dǎo)致的超重和肥胖的年總經(jīng)濟(jì)費(fèi)用為約3000億美元。國(guó)際研究顯示，肥胖癥的經(jīng)濟(jì)費(fèi)用占總醫(yī)療費(fèi)用的2％至10％。肥胖是由能量攝取與消耗之間的長(zhǎng)期失衡造成的。這導(dǎo)致過(guò)多的能量?jī)?chǔ)存在脂肪細(xì)胞中，這樣的脂肪細(xì)胞通常表現(xiàn)出肥大(細(xì)胞體積增大)和增生(細(xì)胞數(shù)目或脂肪生成增加)二者。最近，肥胖的惡化源于過(guò)度消費(fèi)含飽和脂肪和糖類的高能量密度食物結(jié)合體力活動(dòng)的減少?，F(xiàn)有的肥胖的癥狀性醫(yī)藥治療不能達(dá)到長(zhǎng)期治療的目的，這很大程度上是由于有限的藥物效力以及患者很少能堅(jiān)持生活方式改變和治療所導(dǎo)致的。數(shù)種肥胖藥物已經(jīng)由于安全因素而被移出市場(chǎng)，而一些正在研發(fā)的小分子由于其不理想的短期療效和未知的安全性能(profile)正掙扎于獲取審批。目前，僅限制性肥胖治療(bariatric)手術(shù)和吸收不良性肥胖治療手術(shù)可實(shí)現(xiàn)顯著的長(zhǎng)期減重并伴有一些有利的心血管益處。因此，本領(lǐng)域中需要新的治療肥胖的方法。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：肥胖是能量攝取與消耗長(zhǎng)期失衡的結(jié)果，導(dǎo)致過(guò)多的能量?jī)?chǔ)存進(jìn)白色脂肪細(xì)胞中。本公開(kāi)內(nèi)容涉及肥胖的新治療方法，其靶向周圍脂肪細(xì)胞，包括儲(chǔ)存能量的填充有脂質(zhì)的白色脂肪細(xì)胞(whiteadipocytes，wat)，以及消耗能量的富含線粒體的褐色脂肪細(xì)胞(brownadipocyte，bat)。此外，本公開(kāi)內(nèi)容提供了通過(guò)使用微小rna(mirorna，mirna)試劑來(lái)調(diào)節(jié)產(chǎn)熱(生物體中的熱產(chǎn)生過(guò)程)的方法。本文所描述的方法一般包括使用經(jīng)分離的mirna試劑直接和/或間接地調(diào)節(jié)細(xì)胞、組織和/或?qū)ο笾械闹辽僖环N產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子(regulator)(例如，線粒體解偶聯(lián)劑(uncoupler)，如解偶聯(lián)蛋白1(uncouplingprotein1，ucp1還被稱為產(chǎn)熱素)或解偶聯(lián)蛋白2(ucp2))。ucp使氧化磷酸化與atp合成解偶聯(lián)。在某些情況下，該解偶聯(lián)反應(yīng)導(dǎo)致能量作為熱消散。這樣的方法是特別有利的，因?yàn)樗鼈冊(cè)试S減少對(duì)象身體中的脂肪，而無(wú)需所述對(duì)象必須通過(guò)節(jié)食調(diào)節(jié)其熱量攝入、改變身體活動(dòng)或進(jìn)行肥胖治療手術(shù)。因此，本發(fā)明的方法對(duì)治療或預(yù)防肥胖特別有用。本發(fā)明還提供了可調(diào)節(jié)產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子活性的新mirna試劑組合物(例如mirna、agomir和antagomir)。此外，本發(fā)明提供了篩選調(diào)節(jié)產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子活性的新mirna試劑的方法。此外，本發(fā)明還提供了提供mirna試劑的細(xì)胞/組織特異性遞送的新試劑組合物(例如，適配體(aptamer)-mirna復(fù)合物或“aptamir”)。因此，在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了調(diào)節(jié)細(xì)胞中的呼吸鏈解偶聯(lián)的方法，所述方法包括使細(xì)胞與調(diào)節(jié)至少一種線粒體解偶聯(lián)劑的表達(dá)水平和/或活性的經(jīng)分離的mirna試劑接觸。在一些實(shí)施方案中，所述方法還包括選擇需要調(diào)節(jié)呼吸鏈解偶聯(lián)的對(duì)象(例如，肥胖患者)的步驟。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述mirna試劑提高至少一種線粒體解偶聯(lián)劑的表達(dá)水平和/或活性。在某些實(shí)施方案中，所述線粒體解偶聯(lián)劑是ucp1或ucp2。在一些實(shí)施方案中，所述方法在體內(nèi)提高細(xì)胞中的呼吸鏈解偶聯(lián)。在另一些實(shí)施方案中，所述方法離體提高細(xì)胞中的呼吸鏈解偶聯(lián)。在某些實(shí)施方案中，所述方法還包括測(cè)定線粒體解偶聯(lián)劑的表達(dá)水平(mrna或蛋白質(zhì))或活性。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞是前脂肪細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、脂肪組織來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞、肝細(xì)胞、肌細(xì)胞或其前體。任選地，脂肪細(xì)胞可為白色脂肪細(xì)胞或褐色脂肪細(xì)胞。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了調(diào)節(jié)組織中的產(chǎn)熱的方法，所述方法包括使組織與調(diào)節(jié)至少一種線粒體解偶聯(lián)劑的表達(dá)水平和/或活性的經(jīng)分離的mirna試劑接觸。在一些實(shí)施方案中，所述方法還包括選擇需要調(diào)節(jié)產(chǎn)熱的對(duì)象(例如，肥胖患者)的步驟。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述mirna試劑提高至少一種線粒體解偶聯(lián)劑的表達(dá)水平和/或活性。在某些實(shí)施方案中，所述線粒體解偶聯(lián)劑是ucp1或ucp2。在某些實(shí)施方案中，所述方法包括提高產(chǎn)熱。在某些實(shí)施方案中，所述方法還包括測(cè)定線粒體解偶聯(lián)劑的表達(dá)水平(mrna或蛋白質(zhì))或活性。在某些實(shí)施方案中，所述組織是褐色脂肪組織、白色脂肪組織、皮下脂肪組織、肝或肌肉。在某些實(shí)施方案中，使所述組織與所述mirna試劑離體接觸。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了治療需要此治療的人對(duì)象的肥胖的方法，所述方法一般包括向所述人對(duì)象施用有效量的調(diào)節(jié)至少一種線粒體解偶聯(lián)劑活性的mirna試劑。在某些實(shí)施方案中，所選擇用于治療的人對(duì)象具有肥胖的遺傳素質(zhì)或表觀遺傳素質(zhì)。在某些實(shí)施方案中，所述線粒體解偶聯(lián)劑是ucp1、ucp2或ucp3。在所有以上方面的某些實(shí)施方案中，所述mirna試劑是選自以下的經(jīng)分離的mirna：hsa-mir-1-1、hsa-mir-1-2、mir-19a-b、hsa-mir-105、hsa-mir-1283、hsa-mir-129、hsa-mir-133a-1、hsa-mir-133a-2、hsa-mir-143、hsa-mir-143-5p、hsa-mir-147、hsa-mir-149、hsa-mir-199a、hsa-mir-199b、hsa-mir-200c、hsa-mir-204、hsa-mir-205、hsa-mir-206、hsa-mir-21、hsa-mir-211、hsa-mir-218、hsa-mir-218-1、hsa-mir-218-2、hsa-mir-219-2、hsa-mir-219-2-3p、hsa-mir-22、hsa-mir-22-3p、hsa-mir-22-5p、hsa-mir-24-2、hsa-mir-30a-e、hsa-mir-3177-5p、hsa-mir-325、hsa-mir-331、hsa-mir-331-5p、hsa-mir-3613-3p、hsa-mir-362、hsa-mir-362-5p、hsa-mir-3658、hsa-mir-367、hsa-mir-371、hsa-mir-371-5p、hsa-mir-377、hsa-mir-378、hsa-mir-378a-5p、hsa-mir-382、hsa-mir-383、hsa-mir-422a、hsa-mir-425、hsa-mir-455-3p、hsa-mir-455-5p、hsa-mir-491、hsa-mir-508、hsa-mir-508-5p、hsa-mir-512-1、hsa-mir-512-2、hsa-mir-515-3p、hsa-mir-519e、hsa-mir-520a、hsa-mir-543、hsa-mir-545、hsa-mir-549、hsa-mir-556、和hsa-mir-568、hsa-mir-620、hsa-mir-643、hsa-mir-654-3p、hsa-mir-7a-g、hsa-mir-765、hsa-mir-871、hsa-mir-888、hsa-mir-888-3p、hsa-mir-92b、hsa-mir-93、hsa-mir-96以及hsa-mir-99a。在所有以上方面的某些實(shí)施方案中，所述mirna試劑是與以上列出的mirna序列有80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的經(jīng)分離的mirna試劑。在所有以上方面的某些實(shí)施方案中，所述mirna試劑是上文列出的mirna的種子序列(seedsequence)。在所有以上方面的某些實(shí)施方案中，mirna試劑是選自表1中記載的536個(gè)mirna中的經(jīng)分離的mirna。在所有以上方面的某些實(shí)施方案中，mirna試劑是與表1中列出的mirna序列有80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的經(jīng)分離的mirna試劑。在所有以上方面的某些實(shí)施方案中，所述mirna試劑是表1中列出的mirna的種子序列。表1.以升序列出的脂肪細(xì)胞mirna(mirbase19命名法)：在所有以上方面的某些實(shí)施方案中，mirna試劑是選自表11、13和14中記載的經(jīng)分離的mirna中的mirna。在所有以上方面的某些實(shí)施方案中，所述mirna試劑是與表1、11、13和14中列出的mirna序列有80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的經(jīng)分離的mirna。在所有以上方面的某些實(shí)施方案中，所述mirna試劑是表11、13和14中列出的mirna的種子序列。在所有以上方面的某些實(shí)施方案中，mirna試劑是選自表1中記載的mirna中的mirna的agomir或antagomir。在所有以上方面的某些實(shí)施方案中，mirna試劑是選自以下的mirna的agomir或antagomir：hsa-mir-1-1、hsa-mir-1-2、mir-19a-b、hsa-mir-105、hsa-mir-1283、hsa-mir-129、hsa-mir-133a-1、hsa-mir-133a-2、hsa-mir-143、hsa-mir-143-5p、hsa-mir-147、hsa-mir-149、hsa-mir-199a、hsa-mir-199b、hsa-mir-200c、hsa-mir-204、hsa-mir-205、hsa-mir-206、hsa-mir-21、hsa-mir-211、hsa-mir-218、hsa-mir-218-1、hsa-mir-218-2、hsa-mir-219-2、hsa-mir-219-2-3p、hsa-mir-22、hsa-mir-22-3p、hsa-mir-22-5p、hsa-mir-24-2、hsa-mir-30a-e、hsa-mir-3177-5p、hsa-mir-325、hsa-mir-331、hsa-mir-331-5p、hsa-mir-3613-3p、hsa-mir-362、hsa-mir-362-5p、hsa-mir-3658、hsa-mir-367、hsa-mir-371、hsa-mir-371-5p、hsa-mir-377、hsa-mir-378、hsa-mir-378a-5p、hsa-mir-382、hsa-mir-383、hsa-mir-422a、hsa-mir-425、hsa-mir-455-3p、hsa-mir-455-5p、hsa-mir-491、hsa-mir-508、hsa-mir-508-5p、hsa-mir-512-1、hsa-mir-512-2、hsa-mir-515-3p、hsa-mir-519e、hsa-mir-520a、hsa-mir-543、hsa-mir-545、hsa-mir-549、hsa-mir-556、andhsa-mir-568、hsa-mir-620、hsa-mir-643、hsa-mir-654-3p、hsa-mir-7a-g、hsa-mir-765、hsa-mir-871、hsa-mir-888、hsa-mir-888-3p、hsa-mir-92b、hsa-mir-93、hsa-mir-96和hsa-mir-99a。在所有以上方面的某些實(shí)施方案中，mirna試劑是選自表11中記載的mirna中的mirna的agomir或antagomir。在所有上述方面的某些實(shí)施方案中，mirna試劑是選自以下的mirna的antagomir：hsa-mir-19b-2-5p、hsa-mir-21-5p、hsa-mir-130b-5p、hsa-mir-211、hsa-mir-325、hsa-mir-382-3p/5p、hsa-mir-543、hsa-mir-515-3p和hsa-mir-545。在所有上述方面的某些實(shí)施方案中，mirna試劑是選自以下的mirna的antagomir：hsa-mir-331-5p、hsa-mir-552、hsa-mir-620和hsa-mir-1179。在所有以上方面的某些實(shí)施方案中，mirna試劑與靶向部分(例如適配體)連接。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述靶向部分將mirna試劑遞送至特定細(xì)胞類型或組織。在所有以上方面的某些實(shí)施方案中，mirna試劑直接與至少一種線粒體解偶聯(lián)劑的mrna或啟動(dòng)子區(qū)結(jié)合。在所有以上方面的某些實(shí)施方案中，mirna試劑直接與至少一種線粒體解偶聯(lián)劑之mrna的5’utr或編碼序列結(jié)合。在所有以上方面的某些實(shí)施方案中，mirna試劑直接與至少一種線粒體解偶聯(lián)劑之mrna的3’utr結(jié)合。在所有以上方面的某些實(shí)施方案中，mirna試劑調(diào)節(jié)線粒體解偶聯(lián)蛋白的激活蛋白(activator)或阻抑蛋白(repressor)的活性。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述mirna試劑直接與激活蛋白或阻抑蛋白的mrna或啟動(dòng)子區(qū)結(jié)合。在一個(gè)實(shí)施方案中，mirna試劑直接與激活蛋白或阻抑蛋白之mrna的5’utr或編碼序列結(jié)合。在一個(gè)實(shí)施方案中，mirna試劑直接與激活蛋白或阻抑蛋白之mrna的3’utr結(jié)合。在一個(gè)實(shí)施方案中，激活蛋白或阻抑蛋白選自列于表2中的組。在所有以上方面的某些實(shí)施方案中，上調(diào)線粒體解偶聯(lián)蛋白的mrna或蛋白質(zhì)表達(dá)。在所有以上方面的某些實(shí)施方案中，上調(diào)線粒體解偶聯(lián)蛋白的線粒體解偶聯(lián)活性。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了篩選調(diào)節(jié)產(chǎn)熱的mirna試劑的方法，所述方法一般包括：提供指示細(xì)胞(indicatorcell)；使所述指示細(xì)胞與受試mirna試劑接觸；以及在存在及不存在所述mirna試劑的情況下，測(cè)定所述指示細(xì)胞中的至少一種產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子的細(xì)胞活性，其中，所述產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子活性在存在所述受試mirna試劑的情況下的改變將所述受試mirna試劑鑒定為調(diào)節(jié)產(chǎn)熱的mirna試劑。所述指示細(xì)胞可為哺乳動(dòng)物細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述指示細(xì)胞是包含至少部分人基因組的人細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞是前脂肪細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、脂肪組織來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞、肝細(xì)胞、肌細(xì)胞或其前體。在某些實(shí)施方案中，在該方法中測(cè)定的產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子細(xì)胞活性是所述產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子的mrna表達(dá)水平、蛋白質(zhì)表達(dá)水平或線粒體解偶聯(lián)活性。在某些實(shí)施方案中，與不存在受試mirna試劑的條件下產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子的活性水平相比，受試mirna試劑提高了產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子的活性。在某些實(shí)施方案中，產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子是ucp1或ucp2。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了調(diào)節(jié)細(xì)胞中的至少一種產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子活性的agomir或antagomir。在某些實(shí)施方案中，agomir或antagomir是選自表11、13和14中所記載mirna的mirna的agomir或antagomir。在某些實(shí)施方案中，agomir或antagomir是選自表1中所記載mirna的mirna的agomir或antagomir。在某些實(shí)施方案中，agomir或antagomir是選自以下的mirna的agomir或antagomir：hsa-mir-1-1、hsa-mir-1-2、mir-19a-b、hsa-mir-105、hsa-mir-1283、hsa-mir-129、hsa-mir-133a-1、hsa-mir-133a-2、hsa-mir-143、hsa-mir-143-5p、hsa-mir-147、hsa-mir-149、hsa-mir-199a、hsa-mir-199b、hsa-mir-200c、hsa-mir-204、hsa-mir-205、hsa-mir-206、hsa-mir-21、hsa-mir-211、hsa-mir-218、hsa-mir-218-1、hsa-mir-218-2、hsa-mir-219-2、hsa-mir-219-2-3p、hsa-mir-22、hsa-mir-22-3p、hsa-mir-22-5p、hsa-mir-24-2、hsa-mir-30a-e、hsa-mir-3177-5p、hsa-mir-325、hsa-mir-331、hsa-mir-331-5p、hsa-mir-3613-3p、hsa-mir-362、hsa-mir-362-5p、hsa-mir-3658、hsa-mir-367、hsa-mir-371、hsa-mir-371-5p、hsa-mir-377、hsa-mir-378、hsa-mir-378a-5p、hsa-mir-382、hsa-mir-383、hsr-mir-422a、hsa-mir-425、hsa-mir-455-3p、hsa-mir-455-5p、hsa-mir-491、hsa-mir-508、hsa-mir-508-5p、hsa-mir-512-1、hsa-mir-512-2、hsa-mir-515-3p、hsa-mir-519e、hsa-mir-520a、hsa-mir-543、hsa-mir-545、hsa-mir-549、hsa-mir-556、和hsa-mir-568、hsa-mir-620、hsa-mir-643、hsa-mir-654-3p、hsa-mir-7a-g、hsa-mir-765、hsa-mir-871、hsa-mir-888、hsa-mir-888-3p、hsa-mir-92b、hsa-mir-93、hsa-mir-96以及hsa-mir-99a。在某些實(shí)施方案中，agomir或antagomir是選自以下的mirna的agomir或antagomir：hsa-mir-19b-2-5p、ha-mir-21-5p、hsa-mir-130b-5p、hsa-mir-211、hsa-mir-325、hsa-mir-382-3p/5p、hsa-mir-543、hsa-mir-515-3p和hsa-mir-545。在某些實(shí)施方案中，agomir或antagomir是選自以下的mirna的antagomir：hsa-mir-331-5p、hsa-mir-552、hsa-mir-620和hsa-mir-1179。在某些實(shí)施方案中，agomir或antagomir與靶向部分連接。在某些實(shí)施方案中，靶向部分是適配體。在某些實(shí)施方案中，靶向部分將所述agomir或antagomir遞送至特定細(xì)胞類型或組織。在某些實(shí)施方案中，agomir或antagomir直接與至少一種線粒體解偶聯(lián)劑的mrna或啟動(dòng)子區(qū)結(jié)合。在某些實(shí)施方案中，agomir或antagomir直接與至少一種線粒體解偶聯(lián)劑之mrna的5’utr或編碼序列結(jié)合。在某些實(shí)施方案中，agomir或antagomir直接與至少一種線粒體解偶聯(lián)劑之mrna的3’utr結(jié)合。在某些實(shí)施方案中，agomir或antagomir調(diào)節(jié)線粒體解偶聯(lián)蛋白的激活蛋白或阻抑蛋白的活性。在某些實(shí)施方案中，激活蛋白或阻抑蛋白選自列于表2中的組。在某些實(shí)施方案中，agomir或antagomir直接與激活蛋白或阻抑蛋白的mrna或啟動(dòng)子區(qū)結(jié)合。在某些實(shí)施方案中，agomir或antagomir直接與激活蛋白或阻抑蛋白之mrna的5’utr或編碼序列結(jié)合。在另一些實(shí)施方案中，agomir或antagomir直接與激活蛋白或阻抑蛋白之mrna的3’utr結(jié)合。本公開(kāi)內(nèi)容還提供了藥物組合物，其包含選自以下的兩種或更多種mirna：hsa-let-7aagomir、hsa-let-7aantagomir、hsa-mir-1agomir、hsa-mir-1antagomir、hsa-mir-19bagomir、hsa-mir-19bantagomir、hsa-mir-30bagomir和hsa-mir-30bantagomir。在某些實(shí)施方案中，所述藥物組合物還包含可藥用賦形劑。在某些實(shí)施方案中，所述兩種或更多種mirna由重組載體表達(dá)。所述重組載體可選自dna質(zhì)粒、病毒載體和dna微環(huán)。本公開(kāi)內(nèi)容還提供了誘導(dǎo)前脂肪細(xì)胞先分化成白色脂肪細(xì)胞并且隨后分化成褐色脂肪細(xì)胞的方法，其包括向前體脂肪細(xì)胞群施用選自以下的一種或更多種mirna：hsa-let-7aagomir、hsa-let-7aantagomir、hsa-mir-1agomir、hsa-mir-1antagomir、hsa-mir-19bagomir、hsa-mir-19bantagomir、hsa-mir-30bagomir和hsa-mir-30bantagomir。所述一種或更多種mirna還可選自hsa-let-7aagomir、hsa-let-7aantagomir、hsa-mir-1agomir、hsa-mir-1antagomir、hsa-mir-19bagomir、hsa-mir-19bantagomir、hsa-mir-30bagomir和hsa-mir-30bantagomir。在某些實(shí)施方案中，使前脂肪細(xì)胞分化成脂肪細(xì)胞的誘導(dǎo)大于當(dāng)將前脂肪細(xì)胞暴露于100nm羅格列酮兩天隨后暴露于維持培養(yǎng)基中時(shí)得到的前脂肪細(xì)胞向脂肪細(xì)胞的分化。在某些實(shí)施方案中，所述脂肪細(xì)胞是褐色脂肪細(xì)胞。在另一些實(shí)施方案中，所述脂肪細(xì)胞是白色脂肪細(xì)胞。其他分化標(biāo)準(zhǔn)可在下文的實(shí)施例中找到。本公開(kāi)內(nèi)容還提供了用于降低脂肪細(xì)胞的脂質(zhì)含量的方法，其包括向脂肪細(xì)胞群施用選自以下的一種或更多種mirna：hsa-let-7aagomir、hsa-let-7aantagomir、hsa-mir-1agomir、hsa-mir-1antagomir、hsa-mir-19bagomir、hsa-mir-19bantagomir、hsa-mir-30bagomir和hsa-mir-30bantagomir。在某些實(shí)施方案中，所述脂肪細(xì)胞中的脂質(zhì)含量小于暴露于100nm羅格列酮兩天隨后暴露于維持培養(yǎng)基中的脂肪細(xì)胞中的脂質(zhì)含量，或者小于在培養(yǎng)持續(xù)時(shí)間內(nèi)暴露于100nm羅格列酮的脂肪細(xì)胞的脂肪含量。培養(yǎng)持續(xù)時(shí)間可為8天至16天、10天至14天或者14天。培養(yǎng)持續(xù)時(shí)間還可為8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天或20天。脂肪細(xì)胞之脂質(zhì)含量的另外的標(biāo)準(zhǔn)可在下文的實(shí)施例中找到。本公開(kāi)內(nèi)容還提供了用于在有此需要的對(duì)象中提高胰島素敏感性的方法，其包括向所述對(duì)象施用選自以下的一種或更多種mirna：hsa-let-7aagomir、hsa-let-7aantagomir、hsa-mir-1agomir、hsa-mir-1antagomir、hsa-mir-19bagomir、hsa-mir-19bantagomir、hsa-mir-30bagomir和hsa-mir-30bantagomir。在某些實(shí)施方案中，所述對(duì)象是哺乳動(dòng)物。本公開(kāi)內(nèi)容還提供了提高細(xì)胞中的一種或更多種解偶聯(lián)蛋白之表達(dá)或活性的方法，其包括向所述細(xì)胞施用選自hsa-let-7aantagomir、hsa-mir-1agomir、hsa-mir-19bagomir和hsa-mir-30bagomir的一種或更多種、兩種或多于兩種或者三種或多于三種mirna。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞選自褐色脂肪細(xì)胞、白色脂肪細(xì)胞、皮下脂肪細(xì)胞、肝細(xì)胞或者肌肉細(xì)胞。在另一些實(shí)施方案中，所述一種或更多種解偶聯(lián)蛋白包括ucp1或者ucp2。在某些實(shí)施方案中，所述方法是離體方法。在另一些實(shí)施方案中，所述方法是體內(nèi)方法。在某些實(shí)施方案中，所述方法包括選擇需要提高一種或更多種解偶聯(lián)蛋白(例如ucp1、ucp2)之表達(dá)水平或活性水平的對(duì)象(例如，人)。在一些實(shí)施方案中，所述對(duì)象患有肥胖或者有發(fā)展成肥胖的風(fēng)險(xiǎn)。在某些實(shí)施方案中，所述對(duì)象患有糖尿病或者有發(fā)展成糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)。在某些實(shí)施方案中，所述方法還包括測(cè)定一種或更多種解偶聯(lián)蛋白的表達(dá)水平(mrna或蛋白質(zhì))或活性。本公開(kāi)內(nèi)容還提供了引起有此需要之對(duì)象中的脂肪消耗的方法，其包括向所述對(duì)象施用選自以下的一種或更多種mirna：hsa-let-7aantagomir、hsa-mir-1agomir、hsa-mir-19bagomir和hsa-mir-30bagomir。在某些實(shí)施方案中，所述對(duì)象是哺乳動(dòng)物。在另一些實(shí)施方案中，所述哺乳動(dòng)物是人。附圖說(shuō)明圖1a和1b是使用string9.0數(shù)據(jù)庫(kù)在兩種不同嚴(yán)格(stringency)水平上確定的83種產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子相互作用的示意圖。圖2a是使用ingenuitypathwayanalysissoftware程序確定的83種產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子相互作用的示意圖。圖2b是使用reactomefunctionalinteractionnetwork程序確定的83種產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子相互作用的示意圖。圖3是多種mirna預(yù)測(cè)程序預(yù)測(cè)的人ucp1基因的5’utr、啟動(dòng)子區(qū)、編碼序列和3’utr的mirna結(jié)合位點(diǎn)的結(jié)果的重疊示意圖。圖4是多種mirna預(yù)測(cè)程序預(yù)測(cè)的83種產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子基因的5’utr、啟動(dòng)子區(qū)、編碼序列和3’utr的mirna結(jié)合位點(diǎn)的結(jié)果的重疊示意圖。圖5是線粒體中氧化磷酸化的示意圖，描述通過(guò)ucp1使氧化磷酸化與atp合成解偶聯(lián)以產(chǎn)生熱。圖6描述了由另一些示例性產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子對(duì)ucp1進(jìn)行的轉(zhuǎn)錄控制。圖7描述了ucp1基因轉(zhuǎn)錄的示例性正性(a)轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)子和負(fù)性(b)轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)子。圖8a描述了人ucp1基因的15,910個(gè)堿基對(duì)(bp)序列(ncbi參考序列：gi|237858805|ref|ng_012139.1|人解偶聯(lián)蛋白1(線粒體、質(zhì)子載體)(ucp1)，4號(hào)染色體上的refseqgene)中多種調(diào)控元件相對(duì)于ucp1轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)(第5,001位)的位置。圖8b描述了人ucp2基因的15,174bp序列(ensg00000175567)(包含11號(hào)染色體上的5,000bp5’utr和2,000bp3’utr)中多種調(diào)控元件相對(duì)于轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)(第5,001位)的位置。圖9是示出未標(biāo)記的前脂肪細(xì)胞或者經(jīng)dy547-標(biāo)記的非靶向mirna模擬物或發(fā)夾抑制劑轉(zhuǎn)染的前脂肪細(xì)胞中的相對(duì)熒光的條形圖。圖10a是示出經(jīng)sirna對(duì)照和gapdhsirna轉(zhuǎn)染的前脂肪細(xì)胞在轉(zhuǎn)染4天后gapdh基因表達(dá)降低的條形圖。圖10b是示出經(jīng)sirna對(duì)照和gapdhsirna轉(zhuǎn)染的前脂肪細(xì)胞在轉(zhuǎn)染12天后gapdh基因表達(dá)降低的條形圖。圖11a是單獨(dú)在維持培養(yǎng)基中培養(yǎng)兩周后的前脂肪細(xì)胞用油紅o染色的光學(xué)顯微照片(micrograph)。圖11b是在胰島素、三-碘甲狀腺原氨酸(tri-iodothyronine)、地塞米松、異丁基-甲基黃嘌呤和羅格列酮的存在下培養(yǎng)兩天隨后在維持培養(yǎng)基中培養(yǎng)12天的前脂肪細(xì)胞用油紅o染色的光學(xué)顯微照片。圖11c是實(shí)驗(yàn)中始終在胰島素、三-碘甲狀腺原氨酸、地塞米松、異丁基-甲基黃嘌呤和羅格列酮的存在下培養(yǎng)的前脂肪細(xì)胞用油紅o染色的光學(xué)顯微照片。圖11d是在hsa-mir-30b模擬物的存在下培養(yǎng)的前脂肪細(xì)胞用油紅o染色的光學(xué)顯微照片。圖11e是在非靶向mirna模擬物的存在下培養(yǎng)的前脂肪細(xì)胞用油紅o染色的光學(xué)顯微照片。圖11f是在非靶向mirna抑制劑的存在下培養(yǎng)的前脂肪細(xì)胞用油紅o染色的光學(xué)顯微照片。圖12a是示出在羅格列酮的存在下產(chǎn)熱靶標(biāo)的mrna表達(dá)的條形圖。圖12b是示出在hsa-let-7a抑制劑的存在下產(chǎn)熱靶標(biāo)的mrna表達(dá)的條形圖。圖12c是示出在hsa-mir-1模擬物的存在下產(chǎn)熱靶標(biāo)的mrna表達(dá)的條形圖。圖12d是示出在hsa-mir-19b模擬物的存在下產(chǎn)熱靶標(biāo)的mrna表達(dá)的條形圖。圖12e是示出在hsa-mir-30b模擬物的存在下產(chǎn)熱靶標(biāo)的mrna表達(dá)的條形圖。圖12f是示出未經(jīng)處理的前脂肪細(xì)胞中產(chǎn)熱靶標(biāo)的mrna表達(dá)的條形圖。圖13是示出x軸上的平均基因表達(dá)和y軸上的堿基對(duì)之間的對(duì)數(shù)級(jí)差異的m-a圖(plot)。圖14是示出維恩圖的示意圖，其示出在mirna類似物hsa-let-7a抑制劑、hsa-mir-1模擬物、hsa-mir-19b模擬物和hsa-mir-30b模擬物的存在下，顯著上調(diào)的基因數(shù)分別是305、247、255和267。127個(gè)基因的組通常被所列的mirna類似物上調(diào)。圖15是示出維恩圖的示意圖，其示出在mirna類似物hsa-let-7a抑制劑、hsa-mir-1模擬物、hsa-mir-19b模擬物和hsa-mir-30b模擬物的存在下，顯著下調(diào)的基因數(shù)分別是143、177、115和165。60個(gè)基因的組通常被所列的mirna類似物下調(diào)。圖16是示出未標(biāo)記的脂肪細(xì)胞或者經(jīng)dy547-標(biāo)記的非靶向miridian模擬物或發(fā)夾抑制劑轉(zhuǎn)染的脂肪細(xì)胞中的相對(duì)熒光的條形圖。圖17a是示出經(jīng)sirna對(duì)照和gapdhsirna轉(zhuǎn)染的細(xì)胞在轉(zhuǎn)染4天后gapdh基因表達(dá)降低的條形圖。圖17b是示出經(jīng)sirna對(duì)照和gapdhsirna轉(zhuǎn)染的細(xì)胞在轉(zhuǎn)染12天后gapdh基因表達(dá)降低的條形圖。圖18a是單獨(dú)在維持培養(yǎng)基中培養(yǎng)兩周后的成熟脂肪細(xì)胞用油紅o染色的光學(xué)顯微照片。圖18b是在羅格列酮的存在下培養(yǎng)兩周的成熟脂肪細(xì)胞用油紅o染色的光學(xué)顯微照片。圖18c是在非靶向mirna的存在下培養(yǎng)的成熟脂肪細(xì)胞用油紅o染色的光學(xué)顯微照片。圖18d是在hsa-mir-30b模擬物的存在下培養(yǎng)的成熟脂肪細(xì)胞用油紅o染色的光學(xué)顯微照片。圖19是示出暴露于多種mirna類似物或羅格列酮的成熟脂肪細(xì)胞中脂質(zhì)(尼羅紅(nilered)熒光染料)的量的條形圖。圖20是示出從暴露于多種轉(zhuǎn)染試劑的成熟脂肪細(xì)胞中提取的rna總量的條形圖。圖21是示出使用多種轉(zhuǎn)染試劑用gapdh特異性的mirna模擬物轉(zhuǎn)染的成熟脂肪細(xì)胞中g(shù)apdh基因表達(dá)降低的條形圖。圖22示出在單獨(dú)的維持培養(yǎng)基(對(duì)照)、50nmhsa-let-7a抑制劑、10μmβ腎上腺素能受體激動(dòng)劑cl316，243、50nmhsa-mir-1模擬物、10nm甲狀腺激素三-碘甲狀腺原氨酸、50nmhsa-mir-19b模擬物、100nm羅格列酮或50nmhsa-mir-30b模擬物中培養(yǎng)兩周的成熟脂肪細(xì)胞的明場(chǎng)顯微照片。圖23是用于分離特異性針對(duì)人細(xì)胞表面獨(dú)特靶標(biāo)的適配體的cell-selex方法的示意圖。圖24描述了評(píng)價(jià)所選的熒光適配體與人肝細(xì)胞和脂肪細(xì)胞結(jié)合的facs實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。具體實(shí)施方式i.定義除非另有定義，否則本文所用的所有技術(shù)術(shù)語(yǔ)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)都具有由本發(fā)明所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員所通常理解的相同的含義。在相抵觸的情況下，以本申請(qǐng)(包括定義)為準(zhǔn)。本文所用術(shù)語(yǔ)“mirna試劑”是指直接或間接調(diào)節(jié)產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子(例如線粒體解偶聯(lián)劑或其或激活蛋白或阻抑蛋白)活性的寡核苷酸或寡核苷酸模擬物。mirna試劑可作用于靶基因或靶mirna。本文所用術(shù)語(yǔ)“mirna”是指能夠與靶基因(mrna或dna)結(jié)合并調(diào)節(jié)該基因表達(dá)的單鏈rna分子(或其合成衍生物)。在某些實(shí)施方案中，mirna天然表達(dá)于生物體中。本文所用術(shù)語(yǔ)“種子序列”是指mirna5’端的前8個(gè)核苷酸(nt)內(nèi)的6至8個(gè)核苷酸至個(gè)核苷酸長(zhǎng)的子串(substring)(即，種子序列)，其為靶標(biāo)特異性的重要決定因素。本文所用術(shù)語(yǔ)“agomir”是指功能上模擬mirna的合成寡核苷酸或寡核苷酸模擬物(oligonucleotidemimetic)。agomir可為與mirna或mirna的一部分具有相同或相似的核酸序列的寡核苷酸。在某些實(shí)施方案中agomir與其所模擬的mirna具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個(gè)核苷酸差異。此外，與其所模擬的mirna相比，agomir還可具有相同的長(zhǎng)度、更長(zhǎng)的長(zhǎng)度或更短的長(zhǎng)度。在某些實(shí)施方案中，agomir具有與其所模擬的mirna5’端的6至8個(gè)核苷酸相同的序列。在另一些實(shí)施方案中，agomir的長(zhǎng)度可為5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50個(gè)核苷酸。在另一些實(shí)施方案中，agomir的長(zhǎng)度可為5至10個(gè)核苷酸、6至8個(gè)核苷酸、10至20個(gè)核苷酸、10至15個(gè)核苷酸或5至500個(gè)核苷酸。在某些實(shí)施方案中，agomir包含表1、11、13和14中所示的任意序列。這些經(jīng)化學(xué)修飾的合成rna雙鏈包含與目的mirna相同或基本相同的引導(dǎo)鏈，以允許有效地加載進(jìn)mirisc復(fù)合物中，而過(guò)客鏈(passengerstrand)經(jīng)化學(xué)修飾以防止其加載到mirisc復(fù)合物的argonaute蛋白中(thorsensb等，cancerj.，18(3)：275-284(2012)；broderickja等，genether.，18(12)：1104-1110(2011))。本文所用術(shù)語(yǔ)“antagomir”是指具有與特定的微小rna互補(bǔ)并且抑制該mirna活性的合成寡核苷酸或寡核苷酸模擬物。在某些實(shí)施方案中，antagomir與其所抑制的mirna具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個(gè)核苷酸差異。此外，與其所抑制的mirna相比，antagomir還可具有相同的長(zhǎng)度、更長(zhǎng)的長(zhǎng)度或更短的長(zhǎng)度。在某些實(shí)施方案中，所述antagomir與其所抑制的mirna5’端的6至8個(gè)核苷酸雜交。在另一些實(shí)施方案中，antagomir的長(zhǎng)度可為5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50個(gè)核苷酸。在另一些實(shí)施方案中，antagomir的長(zhǎng)度可為5至10個(gè)核苷酸、6至8個(gè)核苷酸、10至20個(gè)核苷酸、10至15個(gè)核苷酸或5至500個(gè)核苷酸。在某些實(shí)施方案中，antagomir包含與表1、11、13和14中所示的任意序列互補(bǔ)的核苷酸。antagomir是與特定mirna緊密結(jié)合并使其失活的合成的反向互補(bǔ)。使用多種化學(xué)修飾以改進(jìn)核酸酶抗性和結(jié)合親和力。最常用的提高效價(jià)的修飾包括多種2’糖修飾，例如2’-o-me、2’-o-甲氧基乙基(2’-moe)或2’-氟代(2’-f)。mirna的核酸結(jié)構(gòu)還可修飾成鎖核酸(lna)，其中在2’氧和4’碳之間具有亞甲基橋從而將核糖鎖定為a型核酸構(gòu)象的3’-內(nèi)(north)構(gòu)象(lennoxka等，genether.dec2011；18(12)：1111-1120；baderag等，genether.dec2011；18(12)：1121-1126)。該修飾顯著提高分子的靶特異性和雜交性質(zhì)二者。本文所用術(shù)語(yǔ)“aptamir”是指適配體(與特定靶分子結(jié)合的寡核苷酸或肽分子)與如上文定義的agomir或antagomir的組合，其允許mirna試劑的細(xì)胞特異性遞送或組織特異性遞送。本文所用術(shù)語(yǔ)“干擾rna”是指能夠通過(guò)介導(dǎo)rna干擾來(lái)抑制或下調(diào)基因表達(dá)的任何雙鏈rna序列或單鏈rna序列。干擾rna包括但不限于小干擾rna(“sirna”)和小發(fā)夾rna(“shrna”)?！皉na干擾”是指序列匹配(compatible)的信使rna轉(zhuǎn)錄物的選擇性降解。本文所用術(shù)語(yǔ)“小干擾rna”或“sirna”是指能夠通過(guò)以序列特異性的方式介導(dǎo)rna干擾來(lái)抑制或下調(diào)基因表達(dá)的任何小rna分子。所述小rna的長(zhǎng)度可為例如約16至21個(gè)核苷酸。本文所用術(shù)語(yǔ)“shrna”(小發(fā)夾rna)是指包含反義區(qū)、環(huán)部分和正義區(qū)的rna分子，其中所述正義區(qū)具有與所述反義區(qū)進(jìn)行堿基配對(duì)的互補(bǔ)核苷酸以形成雙鏈的莖。在轉(zhuǎn)錄后加工后，小發(fā)夾rna通過(guò)由rna酶iii家族成員酶dicer介導(dǎo)的切割事件轉(zhuǎn)變成小干擾rna(sirna)。本文所用術(shù)語(yǔ)“反義寡核苷酸”是指與dna序列或mrna序列(例如mirna)互補(bǔ)的合成寡核苷酸或寡核苷酸模擬物。本文所用術(shù)語(yǔ)“mir-掩蔽物(mask)”是指與靶mrna中的mirna結(jié)合位點(diǎn)互補(bǔ)并且用于抑制mirna與該mrna結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合的單鏈反義寡核苷酸。參見(jiàn)例如，xiao等，“novelapproachesforgene-specificinterferenceviamanipulatingactionsofmicrornas：examinationonthepacemakerchannelgeneshcn2andhcn4，”journalofcellularphysiology，第212卷，第2期，第285-292頁(yè)，2007，其整體并入本文。本文所用術(shù)語(yǔ)“mirna海綿”是指包含目的mirna的多個(gè)串聯(lián)結(jié)合位點(diǎn)并且用于去除(titrateout)內(nèi)源性目的mirna以抑制目的mirna與其內(nèi)源靶標(biāo)結(jié)合的合成核酸(例如mrna轉(zhuǎn)錄物)。參見(jiàn)例如，ebert等，“micrornasponges：competitiveinhibitorsofsmallrnasinmammaliancells，”naturemethods，第4卷，第9期，第721-726頁(yè)，2007，其整體并入本文。本文所用術(shù)語(yǔ)“呼吸鏈解偶聯(lián)”是指使線粒體的內(nèi)膜質(zhì)子梯度消失從而阻止線粒體中通過(guò)氧化磷酸化來(lái)合成atp。本文所用術(shù)語(yǔ)“線粒體解偶聯(lián)劑”是指可使線粒體內(nèi)膜質(zhì)子梯度消失從而阻止線粒體中通過(guò)氧化磷酸化來(lái)合成atp的蛋白質(zhì)(或編碼核酸)。示例性的線粒體解偶聯(lián)劑包括ucp1和ucp2。本文所用術(shù)語(yǔ)線粒體解偶聯(lián)劑的“激活蛋白”或“阻抑蛋白”是指分別用于上調(diào)或下調(diào)線粒體解偶聯(lián)劑活性的蛋白質(zhì)。本文所用術(shù)語(yǔ)“產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子”是指直接或間接調(diào)控產(chǎn)熱的蛋白質(zhì)(或編碼核酸)。該術(shù)語(yǔ)涵蓋線粒體線粒體解偶聯(lián)劑，以及還涵蓋線粒體解偶聯(lián)劑的激活蛋白和阻抑蛋白。示例性的產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子記載于本文的表2中。本文所用術(shù)語(yǔ)“調(diào)節(jié)”是指使參數(shù)提高或降低。例如，調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)的活性可為使蛋白質(zhì)的活性提高或降低。本文所用術(shù)語(yǔ)線粒體解偶聯(lián)劑或產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子的“活性”是指任何可測(cè)量的生物學(xué)活性，包括但不限于，mrna表達(dá)、蛋白質(zhì)表達(dá)或呼吸鏈解偶聯(lián)。mirna試劑組合物的“有效量”是足以在人中有效治療或預(yù)防病癥或控制生理學(xué)癥狀(condition)的量。在某些實(shí)施方案中，該生理學(xué)癥狀是肥胖。“對(duì)象”是脊椎動(dòng)物，包括哺乳綱的任何成員，包括人、家養(yǎng)動(dòng)物和農(nóng)場(chǎng)動(dòng)物、動(dòng)物園動(dòng)物、運(yùn)動(dòng)場(chǎng)動(dòng)物或?qū)櫸?，例如小鼠、兔子、豬、綿羊、山羊、牛和高等靈長(zhǎng)類。術(shù)語(yǔ)“哺乳動(dòng)物”是指哺乳綱的任何成員，包括嚙齒類、靈長(zhǎng)類、犬、貓、駱駝科動(dòng)物(camelid)和有蹄類。術(shù)語(yǔ)“嚙齒類”是指作為嚙齒目成員的任何種，包括小鼠、大鼠、倉(cāng)鼠、沙鼠和兔子。術(shù)語(yǔ)“靈長(zhǎng)類”是指作為靈長(zhǎng)目成員的任何種，包括猴子、猿和人。術(shù)語(yǔ)“駱駝科動(dòng)物”是指作為駱駝科家族成員的任何種，包括駱駝和美洲駝(llama)。術(shù)語(yǔ)“有蹄類”是指作為有蹄超目成員的任何種，包括牛、馬和駱駝科動(dòng)物。根據(jù)一些實(shí)施方案，哺乳動(dòng)物是人類。本文所用的“治療”定義為以治療、治愈、緩解、減輕、改變、補(bǔ)救、改善、改良或影響該疾病或病癥、疾病或病癥的癥狀或?qū)膊〉囊赘行詾槟康模瑢⒅委焺?例如mirna試劑或載體或編碼它們的轉(zhuǎn)基因)應(yīng)用或施用于患者，或?qū)⒅委焺?yīng)用或施用于從患有疾病或病癥、疾病或病癥的癥狀或者具有對(duì)疾病或病癥的素質(zhì)的患者分離的組織或細(xì)胞系。本文所用的“藥物基因組學(xué)”是指基因組學(xué)技術(shù)例如基因測(cè)序、統(tǒng)計(jì)遺傳學(xué)和基因表達(dá)分析在對(duì)臨床開(kāi)發(fā)中和市售的藥物的應(yīng)用。更具體地，該術(shù)語(yǔ)是指患者的基因如何決定他或她對(duì)藥物的響應(yīng)的研究(例如，患者的“藥物響應(yīng)表型”，或“藥物響應(yīng)基因型”)。mirna試劑組合物的“有效量”是足以在人中有效治療或預(yù)防疾病或控制生理學(xué)病癥的量。ii.產(chǎn)熱和肥胖在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了用于調(diào)節(jié)產(chǎn)熱的方法。這些方法一般包括使細(xì)胞或組織與調(diào)節(jié)至少一種線粒體解偶聯(lián)劑(例如ucp1和/或ucp2)活性的mirna試劑接觸。這樣的方法和組合物對(duì)治療肥胖特別有用。哺乳動(dòng)物脂肪細(xì)胞可基于其功能性質(zhì)分為兩大類：1)儲(chǔ)存和釋放能量的填充有脂質(zhì)的白色脂肪細(xì)胞(wat)，以及；2)消耗能量并產(chǎn)生熱的富含線粒體的褐色脂肪細(xì)胞(bat)。直至最近，認(rèn)為bat在幼兒期經(jīng)歷了快速的退化，在成年人中僅留下殘余的量。然而，在人體中用示蹤劑18f-氟脫氧葡萄糖(18f-fdg)進(jìn)行的正電子發(fā)射斷層成像(pet)研究證實(shí)：1)成年對(duì)象的頸部、鎖骨上、腋部和椎旁區(qū)域中仍然存在多個(gè)bat儲(chǔ)庫(kù)；2)成年人的bat可通過(guò)暴露于冷溫度而被迅速激活；3)bat的活性與年齡、體重指數(shù)(bmi)、身體脂肪百分比、空腹血漿葡萄糖水平、β-阻滯劑的使用以及室外溫度反相關(guān)；并且4)bat的增加(expansion)可驅(qū)動(dòng)與產(chǎn)生兒茶酚胺的嗜鉻細(xì)胞瘤相關(guān)的重量減輕，但是已經(jīng)將導(dǎo)致受體功能降低的β3-腎上腺素能受體多態(tài)性與體重增加和2型糖尿病的早期發(fā)作聯(lián)系到一起。雖然wat和bat來(lái)源于間充質(zhì)干細(xì)胞，但是它們具有不同的譜系，其中myf5(肌源性調(diào)節(jié)因子5)(也在骨骼肌祖細(xì)胞中表達(dá))、pgc-1α和prdm16(含pr-結(jié)構(gòu)域的16)的表達(dá)將褐色脂肪細(xì)胞前體與白色脂肪細(xì)胞前體區(qū)分開(kāi)來(lái)。除了典型的褐色脂肪細(xì)胞外，在wat占優(yōu)勢(shì)的組織中還可誘導(dǎo)不同類型的褐色脂肪細(xì)胞。創(chuàng)造了術(shù)語(yǔ)“白中褐(brite)”(白色中的褐色)脂肪細(xì)胞，并且wat儲(chǔ)庫(kù)中的褐色樣脂肪細(xì)胞的外觀與改進(jìn)的代謝表型有關(guān)。bat質(zhì)量和/或活性的提高提供了對(duì)肥胖一定程度的預(yù)防。bat的產(chǎn)熱量為300w/g，相比之下，所有其他組織中的產(chǎn)熱量為1w/g。因?yàn)樯僦?0gbat就將占有20％的日常能量消耗，所以對(duì)能量平衡產(chǎn)生顯著影響僅需要相對(duì)有限量的bat。據(jù)推測(cè)，在一個(gè)對(duì)象的鎖骨上/頸旁的儲(chǔ)庫(kù)中發(fā)現(xiàn)的大約63gbat在1年內(nèi)可消耗掉的能量等于4.1kgwat。線粒體解偶聯(lián)蛋白(ucp)是線粒體陰離子載體蛋白質(zhì)(macp)家族的成員。ucp使氧化磷酸化與atp合成分開(kāi)，使能量作為熱散失(也稱為“線粒體質(zhì)子泄漏”)。ucp促進(jìn)陰離子從線粒體的內(nèi)膜向外膜轉(zhuǎn)移和從線粒體外膜向內(nèi)膜的返回傳遞，在該過(guò)程中產(chǎn)生熱。ucp是負(fù)責(zé)產(chǎn)熱和熱耗散的主要蛋白質(zhì)。解偶聯(lián)蛋白1(ucp1)也稱為產(chǎn)熱素，是負(fù)責(zé)產(chǎn)熱和熱耗散的bat特異性蛋白質(zhì)。ucp2是同樣在脂肪細(xì)胞中表達(dá)的另一種解偶聯(lián)蛋白。ucp是產(chǎn)熱調(diào)節(jié)蛋白網(wǎng)絡(luò)的一部分(參見(jiàn)圖1)。示例性的產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子記載于表2中。調(diào)節(jié)產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子以誘導(dǎo)bat分化和/或線粒體解偶聯(lián)蛋白提供了在對(duì)象中誘導(dǎo)產(chǎn)熱從而治療肥胖的方法。然而，化學(xué)藥理學(xué)方法不能靶向這些分子，因?yàn)樗鼈儾粚儆趥鹘y(tǒng)藥物發(fā)現(xiàn)的“可用藥空間(druggablespace)”占主導(dǎo)地位的典型“靶標(biāo)類型”(激酶、離子通道、g蛋白偶聯(lián)受體等)。因此，本發(fā)明提供了使用mirna試劑來(lái)調(diào)節(jié)這些產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子的新方法和組合物。在某些實(shí)施方案中，使用mirna試劑來(lái)上調(diào)線粒體解偶聯(lián)劑的活性(例如，mrna表達(dá)水平、蛋白質(zhì)表達(dá)水平或線粒體解偶聯(lián)活性)。線粒體解偶聯(lián)劑的上調(diào)可通過(guò)幾種方式實(shí)現(xiàn)。在一個(gè)實(shí)施方案中，mirna試劑直接抑制負(fù)責(zé)下調(diào)線粒體解偶聯(lián)劑之活性(例如，mrna表達(dá)水平、蛋白質(zhì)表達(dá)水平)的天然mirna的活性。在另一個(gè)實(shí)施方案中，mirna試劑上調(diào)線粒體解偶聯(lián)劑之激活蛋白的活性(例如，mrna表達(dá)水平或蛋白質(zhì)表達(dá)水平)。該上調(diào)可例如通過(guò)直接抑制負(fù)責(zé)下調(diào)該激活蛋白表達(dá)的天然mirna的活性來(lái)實(shí)現(xiàn)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，mirna試劑下調(diào)線粒體解偶聯(lián)劑之阻抑蛋白的活性(例如，mrna表達(dá)水平或蛋白質(zhì)表達(dá)水平)。該下調(diào)可例如通過(guò)使用mirna試劑直接抑制線粒體解偶聯(lián)劑之阻抑蛋白的表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)。在某些實(shí)施方案中，使用能夠同時(shí)調(diào)節(jié)多種產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子活性的mirna試劑(與通用mirna試劑相反的通路特異性mirna試劑)。例如，可使用與多種產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子結(jié)合的單一mirna、agomir或antagomir。該方法是特別有利的，因?yàn)槠湓试S使用單一mirna試劑來(lái)調(diào)節(jié)整個(gè)信號(hào)通路中的多個(gè)成員。在某些實(shí)施方案中，使用多種抑制性mirna試劑(例如，antagomir或mir掩蔽物)。這些抑制性mirna試劑可具有相同的mirna靶標(biāo)或不同的mirna靶標(biāo)。iii.mirna試劑在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明使用mirna試劑來(lái)調(diào)節(jié)產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子(例如，線粒體解偶聯(lián)劑，如ucp1和/或ucp2)。適用于本文所公開(kāi)方法的mirna試劑包括但不限于：mirna、agomir、antagomir、mir-掩蔽物、mirna-海綿、sirna(單鏈或雙鏈的)、shrna、反義寡核苷酸、核酶或與靶核酸的至少一部分雜交并調(diào)節(jié)其功能的其他寡核苷酸模擬物。在某些實(shí)施方案中，所述mirna試劑是mirna分子或其合成衍生物(例如agomir)。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述mirna試劑是mirna。mirna是存在于包括哺乳動(dòng)物在內(nèi)的多種生物體中的一類非編碼的小rna(例如，18至24個(gè)核苷酸)，并且其在進(jìn)化上是保守的。mirna通過(guò)由rna酶iii酶drosha和dicer的順序切割來(lái)加工來(lái)源于初級(jí)轉(zhuǎn)錄物的約70個(gè)核苷酸的發(fā)夾前體而得到。許多mirna可在基因間區(qū)編碼，位于前mrna的內(nèi)含子中或位于ncrna基因內(nèi)。許多mirna還傾向于成簇分布并轉(zhuǎn)錄為多順?lè)醋?，并且?jīng)常具有相似的時(shí)空表達(dá)模式。一般而言，mirna是轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)子，其與靶基因(mrna或dna)上的互補(bǔ)序列結(jié)合，通過(guò)例如轉(zhuǎn)錄抑制或靶向降解來(lái)導(dǎo)致基因沉默。一種mirna可同時(shí)靶向多個(gè)不同基因。用于所公開(kāi)方法的示例性mirna分子包括但不限于：hsa-mir-1-1、hsa-mir-1-2、hsa-mir-7a-g、hsa-mir-105、hsa-mir-1283、hsa-mir-129、hsa-mir-133a-1、hsa-mir-133a-2、hsa-mir-143、hsa-mir-143-5p、hsa-mir-147、hsa-mir-149、hsa-mir-199a、hsa-mir-19a-b、hsa-mir-199b、hsa-mir-200c、hsa-mir-204、hsa-mir-205、hsa-mir-206、hsa-mir-21、hsa-mir-211、hsa-mir-218、hsa-mir-218-1、hsa-mir-218-2、hsa-mir-219-2、hsa-mir-219-2-3p、hsa-mir-22、hsa-mir-22-3p、hsa-mir-22-5p、hsa-mir-24-2、hsa-mir-30a-e、hsa-mir-3177-5p、hsa-mir-325、hsa-mir-331、hsa-mir-331-5p、hsa-mir-3613-3p、hsa-mir-362、hsa-mir-362-5p、hsa-mir-367、hsa-mir-371、hsa-mir-371-5p、hsa-mir-377、hsa-mir-378、hsa-mir-378a-5p、hsa-mir-382、hsa-mir-383、hsa-mir-3658、hsa-mir-422a、hsa-mir-425、hsa-mir-455-3p、hsa-mir-455-5p、hsa-mir-491、hsa-mir-508、hsa-mir-508-5p、hsa-mir-512-1、hsa-mir-512-2、hsa-mir-515-3p、hsa-mir-519e、hsa-mir-520a、hsa-mir-543、hsa-mir-545、hsa-mir-549、hsa-mir-556、andhsa-mir-568、hsa-mir-620、hsa-mir-643、hsa-mir-654-3p、hsa-mir-765、hsa-mir-871、hsa-mir-888、hsa-mir-888-3p、hsa-mir-92b、hsa-mir-93、hsa-mir-96和hsa-mir-99a。在另一些實(shí)施方案中，用于所公開(kāi)方法的示例性mirna分子是本文的表1、11、13和14中所公開(kāi)的mirna。在一個(gè)特定實(shí)施方案中，所述mirna試劑是人mir-22或其功能性衍生物。在另一個(gè)特定實(shí)施方案中，所述mirna試劑是agomir。可使用本文公開(kāi)的篩選方法來(lái)鑒定特定mirna的agomir。在一個(gè)特定實(shí)施方案中，agomir是人mir-22的功能模擬物(davidsonbl等，nat.rev.genet.，12(5)：329-340(2011))。在某些實(shí)施方案中，所述mirna試劑是抑制一種或更多種mirna活性的寡核苷酸或寡核苷酸模擬物。這樣的分子實(shí)例包括但不限于antagomir、干擾rna、反義寡核苷酸、核酶、mirna海綿和mir-掩蔽物。在一個(gè)特定實(shí)施方案中，所述mirna試劑是antagomir。一般而言，antagomir是經(jīng)化學(xué)修飾的反義寡核苷酸，其與靶mirna結(jié)合并通過(guò)阻止該mirna與其同源基因靶標(biāo)結(jié)合來(lái)抑制mirna的功能。antagomir可包含本領(lǐng)域已知的任何堿基修飾。在一個(gè)特定實(shí)施方案中，antagomir抑制人mir-22的活性(vanrooije等，circ.res.，110(3)：496-507(2012)；sneadnm等，nucleicacidther.，22(3)：139-146(2012)；czechmp等，nat.rev.endocrinol.，7(8)：473-484(2011))。在某些實(shí)施方案中，所述mirna試劑的長(zhǎng)度為10至50個(gè)核苷酸。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)理解，這體現(xiàn)在寡核苷酸具有長(zhǎng)度為10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50個(gè)或其中任意范圍個(gè)核苷酸的反義部分。在某些實(shí)施方案中，所述mirna試劑是嵌合寡核苷酸，其包含兩個(gè)或更多個(gè)化學(xué)上不同的區(qū)域，每個(gè)區(qū)域由至少一個(gè)核苷酸構(gòu)成。這些寡核苷酸通常包含賦予一種或更多種有益性質(zhì)(例如，提高核酸酶抗性、提高進(jìn)入細(xì)胞的攝取、提高與靶標(biāo)的結(jié)合親和力)的至少一個(gè)經(jīng)修飾的核苷酸區(qū)域，以及作為使酶能夠切割rna：dna或rna：rna雜合體(hybrid)的底物的區(qū)域。本發(fā)明的嵌合抑制性核酸可形成為由上述兩種或更多種寡核苷酸、經(jīng)修飾的寡核苷酸、寡聚核苷(oligonucleoside)和/或寡核苷酸模擬物組成的復(fù)合結(jié)構(gòu)。這樣的化合物在本領(lǐng)域也被稱為雜合體或缺口體(gapmer)，教導(dǎo)制備這樣的雜合體結(jié)構(gòu)的代表性美國(guó)專利包括但不限于以下美國(guó)專利no：5,013,830；5,149,797；5,220,007；5,256,775；5,366,878；5,403,711；5,491,133；5,565,350；5,623,065；5,652,355；5,652,356；以及5,700,922，其分別通過(guò)引用整體并入本文。在某些實(shí)施方案中，所述mirna試劑包含至少一種在糖的2＇位經(jīng)修飾的核苷酸，最優(yōu)選經(jīng)2＇-o-烷基、2＇-o-烷基-o-烷基或2＇-氟代修飾的核苷酸。在另一些優(yōu)選實(shí)施方案中，rna修飾包括嘧啶的核糖、堿基殘基或rna3＇端的反向堿基上的2＇-氟代、2＇-氨基以及2＇-o-甲基修飾。寡核苷酸中常規(guī)地并入這樣的修飾，并且這些寡核苷酸比2＇-脫氧寡核苷酸示出了針對(duì)指定靶標(biāo)的更高tm(即，更高的靶向結(jié)合親和力)。已經(jīng)示出許多核苷酸和核苷修飾以得到更加抗核酸酶消化的寡核苷酸，從而延長(zhǎng)體內(nèi)半衰期。經(jīng)修飾寡核苷酸的具體實(shí)例包括包含含有例如以下之骨架的那些：硫代磷酸酯、磷酸三酯、磷酸甲酯、短鏈烷基或環(huán)烷基糖間鍵(intersugarlinkage)或短鏈雜原子或雜環(huán)糖間鍵。最優(yōu)選的是具有硫代磷酸酯骨架的寡核苷酸和具有雜原子骨架的寡核苷酸，所述雜原子骨架特別是：ch2-nh-o-ch2、ch2～n(ch3)～o～ch2(稱為亞甲基(甲基亞氨基)或mmi骨架]、ch2-o-n(ch3)-ch2、ch2-n(ch3)-n(ch3)-ch2和o-n(ch3)-ch2-ch2骨架，其中天然的磷酸二酯骨架表示為o-p-o-ch)；酰胺骨架(參見(jiàn)demesmaeker等.ace.chem.res.1995，28：366-374)；嗎啉基骨架結(jié)構(gòu)(參見(jiàn)summerton和weller，美國(guó)專利no.5,034,506)；肽核酸(pna)骨架(其中，寡核苷酸的磷酸二酯骨架由聚酰胺骨架替代，核苷酸直接或間接與聚酰胺骨架的氮雜氮原子結(jié)合，參見(jiàn)nielsen等，science1991，254，1497)，各自通過(guò)引用整體并入本文。含磷連接包括但不限于，硫代磷酸酯、手性硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、磷酸三酯、氨基烷基磷酸三酯、包括3＇亞烷基膦酸酯和手性膦酸酯在內(nèi)的甲基膦酸酯或其他烷基膦酸酯、次膦酸酯、包括3＇-氨基氨基磷酸酯和氨基烷基氨基磷酸酯在內(nèi)的氨基磷酸酯、硫羰氨基磷酸酯、硫羰烷基膦酸酯、硫羰烷基磷酸三酯、硼烷磷酸酯、以及這些物質(zhì)的具有正常3＇-5＇連接、2＇-5＇連接的類似物，以及具有反轉(zhuǎn)極性的那些(其中相鄰核苷單元對(duì)連接從3＇-5＇變成5＇-3＇或者從2＇-5＇變成5＇-2＇)；參見(jiàn)美國(guó)專利no.3,687,808、4,469,863、4,476,301、5,023,243、5,177,196、5,188,897、5,264,423、5,276,019、5,278,302、5,286,717、5,321,131、5,399,676、5,405,939、5,453,496、5,455,233、5,466,677、5,476,925、5,519,126、5,536,821、5,541,306、5,550,111、5,563,253、5,571,799、5,587,361和5,625,050，其各自通過(guò)引用整體并入本文?；趩徇墓丫刍衔锩枋鲈赿wainea.braasch和davidr.corey，biochemistry，2002，41(14)，4503-4510)；genesis，2001年第30卷第3期；heasman，j.，dev.biol.，2002，243，209-214；nasevicius等，nat.genet.，2000，26，216-220；lacerra等，proc.natl.acad.sci.，2000，97，9591-9596；以及1991年7月23日出版的美國(guó)專利no.5,034,506中，其各自通過(guò)引用整體并入本文。環(huán)己烯基核酸寡核苷酸模擬物描述在wang等，j.am.chem.soc.，2000，122，8595-8602中，其內(nèi)容通過(guò)引用整體并入本文。其中不包含磷原子的經(jīng)修飾的寡核苷酸骨架具有由短鏈烷基或環(huán)烷基核苷酸間連接、混合的雜原子和烷基或環(huán)烷基核苷酸間連接或者一種或更多種短鏈雜原子或雜環(huán)核苷酸間連接形成的骨架。這些包含具有以下結(jié)構(gòu)的那些：?jiǎn)徇B接(部分地由核苷的糖部分形成)；硅氧烷骨架；硫醚、亞砜和砜骨架；甲酰乙?；?formacetyl)和硫代甲酰乙?；羌?；亞甲基甲酰乙酰基和亞甲基硫代甲酰乙?；羌?；含烯烴骨架；氨基磺酸酯骨架、亞甲基亞氨基和亞甲基肼基骨架；磺酸酯和磺酰胺骨架；酰胺骨架；以及混合了n、o、s和ch2組成部分的其他骨架；參見(jiàn)美國(guó)專利no.5,034,506、5,166,315、5,185,444、5,214,134、5,216,141、5,235,033、5,264,562、5,264,564、5,405,938、5,434,257、5,466,677、5,470,967、5,489,677、5,541,307、5,561,225、5,596,086、5,602,240、5,610,289、5,602,240、5,608,046、5,610,289、5,618,704、5,623,070、5,663,312、5,633,360、5,677,437以及5,677,439,其各自通過(guò)引用整體并入本文。在某些實(shí)施方案中，mirna試劑包含一種或更多種經(jīng)取代的糖部分，例如在2＇位置的以下的一種：oh、sh、sch3、f、ocn、och3och3、och3o(ch2)nch3、o(ch2)nnh2或o(ch2)nch3，其中n為1至約10；ci至cio低級(jí)烷基、烷氧基烷氧基、經(jīng)取代的低級(jí)烷基、烷芳基或芳烷基；ci；br；cn；cf3；ocf3；o-烷基、s-烷基或n-烷基；o-烯基、s-烯基或n-烯基；soch3；so2ch3；ono2；no2；n3；nh2；雜環(huán)烷基；雜環(huán)烷基芳基；氨基烷基氨基；聚烷基氨基；經(jīng)取代的甲硅烷基；rna切割基團(tuán)；報(bào)告子基團(tuán)；嵌入子(intercalator)基團(tuán)；用于改進(jìn)寡核苷酸藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)的基團(tuán)；或者用于改進(jìn)寡核苷酸的藥代動(dòng)力學(xué)/藥效學(xué)性質(zhì)的基團(tuán)以及具有類似性質(zhì)的其他取代基。優(yōu)選的修飾包括2＇-甲氧基乙氧基[2＇-o-ch2ch2och3，也稱為2＇-o-(2-甲氧基乙基)](martin等，helv.chim.acta，1995，78，486)。其他優(yōu)選的修飾包括2＇-甲氧基(2＇-o-ch3)、2＇-丙氧基(2＇-och2ch2ch3)和2＇-氟代(2＇-f)。類似的修飾還可在寡核苷酸的另一些位置上發(fā)生，特別是3＇端核苷酸上糖的3＇位置和5＇端核苷酸的5＇位置。寡核苷酸還可含有糖模擬物，例如環(huán)丁基替代戊呋喃基。在某些實(shí)施方案中，mirna試劑包含一種或更多種堿基修飾和/或替換。本文所用的“未經(jīng)修飾的”或“天然的”堿基包括腺嘌呤(a)、鳥(niǎo)嘌呤(g)、胸腺嘧啶(t)、胞嘧啶(c)和尿嘧啶(u)。經(jīng)修飾的堿基包括但不限于天然核酸中發(fā)現(xiàn)的僅稀有的或瞬變的堿基，例如，次黃嘌呤、6-甲基腺嘌呤、5-me嘧啶，特別是5-甲基胞嘧啶(也稱為5-甲基-2＇脫氧胞嘧啶，并且在本領(lǐng)域經(jīng)常稱為5-me-c)、5-羥甲基胞嘧啶(hmc)、糖基hmc和龍膽二糖基(gentobiosyl)hmc；以及合成堿基，例如2-氨基腺嘌呤、2-(甲基氨基)腺嘌呤、2-(咪唑基烷基)腺嘌呤、2-(氨基烷基氨基)腺嘌呤或其他雜原子取代的烷基腺嘌呤、2-硫尿嘧啶、2-硫代胸腺嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-羥甲基尿嘧啶、8-氮雜鳥(niǎo)嘌呤、7-脫氮鳥(niǎo)嘌呤、n6(6-氨基己基)腺嘌呤和2,6-二氨基嘌呤。(kornberg，a.，dnareplication，w.h.freeman&co.，sanfrancisco，1980，第75-77頁(yè)；gebeyehu，g.等，nucl.acidsres.1987，15：4513)。還可包括本領(lǐng)域已知的“通用”堿基，例如肌苷。還可包括5-me-c替換。已顯示，這些修飾和/或替換使核酸雙鏈的穩(wěn)定性提高了0.6oc至1.2oc。(sanghvi，y.s.，crooke，s.t和lebleu，b.編寫(xiě)，antisenseresearchandapplications，crcpress，bocaraton，1993，第276-278頁(yè))。另一些合適的經(jīng)修飾的堿基在美國(guó)專利no.3,687,808，以及4,845,205；5,130,302；5,134,066；5,175,273；5,367,066；5,432,272；5,457,187；5,459,255；5,484,908；5,502,177；5,525,711；5,552,540；5,587,469；5,596,091；5,614,617；5,750,692中有描述，其各自通過(guò)引用并入本文。不需要在指定的寡核苷酸中的所有位置進(jìn)行統(tǒng)一修飾，并且事實(shí)上，在單一的寡核苷酸中可并入多于一種前述修飾，甚至在寡核苷酸內(nèi)的單一核苷酸上并入多于一種前述修飾。在某些實(shí)施方案中，核苷酸單元的糖和核苷間連接(即，骨架)兩者都被新基團(tuán)替換。堿基單元維持與合適的核酸靶標(biāo)化合物雜交。一種這樣的寡聚化合物，已示出具有優(yōu)異雜交性質(zhì)的寡核苷酸模擬物，被稱為肽核酸(pna)。在pna化合物中，寡核苷酸的糖骨架被含酰胺的骨架例如氨基乙基甘氨酸骨架替代。核堿基(nucleobase)被保留，并直接或間接與骨架酰胺部分的氮雜氮原子結(jié)合。教導(dǎo)pna化合物之制備的代表性的美國(guó)專利包括但不限于美國(guó)專利no.5,539,082；5,714,331；以及5,719,262，其各自通過(guò)引用并入本文。pna化合物的另一些教導(dǎo)還可見(jiàn)于nielsen等，science，1991，254，1497-1500中。在某些實(shí)施方案中，mirna試劑(共價(jià)或非共價(jià)地)與一種或更多種增強(qiáng)寡核苷酸活性、細(xì)胞分布或細(xì)胞攝取的部分或綴合物連接。這樣的部分包括但不限于，脂質(zhì)部分，例如膽固醇部分(letsinger等，proc.natl.acad.sci.usa，1989，86，6553-6556)、膽酸(manoharan等，bioorg.med.chem.let.，1994，4，1053-1060)；硫醚，例如己基-s-三苯甲基硫醇(manoharan等，ann.n.y.acad.sci.，1992，660，306-309；manoharan等，bioorg.med.chem.let.，1993，3，2765-2770)；巰基膽固醇(oberhauser等，nucl.acidsres.，1992，20，533-538)；脂肪族鏈，例如十二烷基二醇或十一烷基殘基(kabanov等，febslett.，1990，259，327-330；svinarchuk等，biochimie，1993，75，49-54)；磷脂，例如二-十六烷基-外消旋-甘油或三乙銨1,2-二-o-十六烷基-外消旋-甘油基-3-h-膦酸酯(manoharan等，tetrahedronlett.，1995，36，3651-3654；shea等，nucl.acidsres.，1990，18，3777-3783)；聚胺鏈或聚乙二醇鏈(mancharan等，nucleosides&nucleotides，1995，14，969-973)；或金剛烷乙酸(manoharan等，tetrahedronlett.，1995，36，3651-3654)；棕櫚基部分(mishra等，biochim.biophys.acta，1995，1264，229-237)；或十八胺或己基氨基-羰基-叔氧膽固醇部分(crooke等，j.pharmacol.exp.ther.，1996，277，923-937)，其各自通過(guò)引用整體并入本文。還參見(jiàn)美國(guó)專利no.4,828,979、4,948,882、5,218,105、5,525,465、5,541,313、5,545,730、5,552,538、5,578,717、5,580,731、5,580,731、5,591,584、5,109,124、5,118,802、5,138,045、5,414,077、5,486,603、5,512,439、5,578,718、5,608,046、4,587,044、4,605,735、4,667,025、4,762,779、4,789,737、4,824,941、4,835,263、4,876,335、4,904,582、4,958,013、5,082,830、5,112,963、5,214,136、5,082,830、5,112,963、5,214,136、5,245,022、5,254,469、5,258,506、5,262,536、5,272,250、5,292,873、5,317,098、5,371,241、5,391,723、5,416,203、5,451,463、5,510,475、5,512,667、5,514,785、5,565,552、5,567,810、5,574,142、5,585,481、5,587,371、5,595,726、5,597,696、5,599,923、5,599,928和5,688,941，其各自通過(guò)引用整體并入本文。在一個(gè)特定實(shí)施方案中，mirna試劑(共價(jià)或非共價(jià)地)與核酸適配體連接。適配體是與特定靶分子結(jié)合的合成的寡核苷酸分子或肽分子。適于與本文提供的mirna試劑一起使用的適配體在2012年8月31日提交的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)no.61/695,477中有描述，其通過(guò)引用整體并入本文。因此，在第一方面，本發(fā)明提供了脂肪細(xì)胞特異性的mirna調(diào)節(jié)劑(modulator)組合物，其包含：i)與人脂肪靶細(xì)胞上的細(xì)胞表面標(biāo)記選擇性結(jié)合的靶向部分，以及ii)產(chǎn)熱的mirna調(diào)節(jié)劑部分，其中所述靶向部分促進(jìn)所述靶細(xì)胞對(duì)所述mirna調(diào)節(jié)部分的攝取以使所述mirna能夠靶向產(chǎn)熱通路并上調(diào)所述靶細(xì)胞中的產(chǎn)熱。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述組合物包含含有作為靶向部分之適配體的agomir。在某些實(shí)施方案中，與本文公開(kāi)的mirna一起使用的適配體與脂肪組織間充質(zhì)干細(xì)胞(atmsc)、白色脂肪組織(wat)脂肪細(xì)胞以及褐色脂肪組織(bat)脂肪細(xì)胞上的細(xì)胞表面標(biāo)記蛋白特異性結(jié)合。atmsc的細(xì)胞表面標(biāo)記包括：cd9、cd10、cd13、cd29、cd36、cd44、cd49d、cd54、cd55、cd59、cd73、cd90、cd91、cd105、cd137、cd146、cd166和hla-abc。wat脂肪細(xì)胞的細(xì)胞表面標(biāo)記包括：脂聯(lián)蛋白、窖蛋白-1、窖蛋白-2、cd36(fat)、clh-22(網(wǎng)格蛋白重鏈chr22)、fabp4(脂肪細(xì)胞蛋白2，ap2)、slc27a1(fatp1)、slc27a2(fatp2)、glut4(葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)子4)、圍脂滴蛋白2或抵抗素。所有脂肪細(xì)胞的細(xì)胞表面標(biāo)記包括中性溶酶(cd10)、fat(cd36)、thy-1(cd90)、低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白1(lrp1或cd91)、窖蛋白-1、窖蛋白-2、脂肪酸結(jié)合蛋白4(fabp4)、細(xì)胞表面糖蛋白muc18(cd146)、激活的白細(xì)胞細(xì)胞粘合分子(cd166)和利尿鈉肽受體a(npr1)。根據(jù)另一些實(shí)施方案，與本文公開(kāi)的mirna一起使用的適配體還可與包括以下的脂肪組織標(biāo)記特異性結(jié)合：脂聯(lián)蛋白、瘦素、抵抗素、fgf17、fgf19、bmp7、pyy、metap2、rbp4、內(nèi)皮抑制素和制管張素。在某些實(shí)施方案中，通過(guò)使用整個(gè)活細(xì)胞作為靶標(biāo)的cell-selex技術(shù)來(lái)選擇適配體，借此，通過(guò)重復(fù)擴(kuò)增和與活細(xì)胞結(jié)合來(lái)選擇識(shí)別完整細(xì)胞表面上的天然環(huán)境中處于其天然構(gòu)象的特定分子的適配體。在該基于細(xì)胞的選擇中，可在其天然環(huán)境中直接靶向特定的細(xì)胞表面分子或甚至未知的膜受體，從而允許對(duì)細(xì)胞特異性適配體的直接富集。在某些示例性實(shí)施方案中，所述mirna調(diào)節(jié)劑與適配體組合，產(chǎn)生“aptamir”組合物。有許多方法來(lái)將適配體和mirna類似物組合成產(chǎn)生aptamir。它們包括例如，適配體-mirna類似物嵌合體、適配體-剪接-轉(zhuǎn)換寡核苷酸嵌合體以及與含mirna類似物的納米顆?；蛑|(zhì)體綴合的適配體。“護(hù)送適配體(escortaptamer)”可插入至可攜帶多種mirna類似物的功能性聚合物、脂質(zhì)體和納米顆粒的表面。例如，硫代適配體綴合的脂質(zhì)體的大小為約120nm。納米顆粒方法有幾個(gè)功能優(yōu)點(diǎn)，包括例如，細(xì)胞攝取、跨膜能力以及經(jīng)觸發(fā)的納米顆粒解體。在一個(gè)實(shí)施方案中，aptamir組合物包含直接與mirna調(diào)節(jié)劑連接或融合的適配體。這樣的aptamir完全是化學(xué)合成的，這為綴合物的組合物提供了更多的控制。例如，化學(xué)計(jì)量學(xué)(mirna類似物/適配體的比率)和附著位點(diǎn)可如前文所定義。綴合物的連接部分存在充當(dāng)適配體和mirna類似物之反應(yīng)附著點(diǎn)的多個(gè)(兩個(gè)或多于兩個(gè))親核部分和/或親電部分。此外，所述aptamir還可包含處于所述適配體和所述mirna類似物之間的接頭。在一些實(shí)施方案中，所述接頭是聚亞烷基二醇，特別是聚乙二醇。在另一些實(shí)施方案中，所述接頭是脂質(zhì)體、外來(lái)體、樹(shù)狀聚體或梳形聚合物(combpolymer)。另一些接頭可介導(dǎo)適配體與mirna類似物之間的綴合，包括生物素鏈霉素橋或核糖核酸。示例性的非共價(jià)接頭包括由mirna部分的單鏈部分或突出端(overhang)與適配體部分的互補(bǔ)性單鏈部分或突出端堿基配對(duì)形成的接頭。在另一個(gè)特定實(shí)施方案中，適配體與mirna類似物組合形成基于脂質(zhì)體的aptamir。脂質(zhì)體是由脂質(zhì)雙層形成的可加載有藥物例如mirna的球形納米結(jié)構(gòu)。此外，脂質(zhì)體表面可加載有不同物質(zhì)，例如，聚乙二醇(延長(zhǎng)其系統(tǒng)半衰期)或分子識(shí)別部分如與靶細(xì)胞特異性結(jié)合的適配體。例如，已開(kāi)發(fā)出經(jīng)適配體修飾的脂質(zhì)體，其中每個(gè)脂質(zhì)體展示與其表面結(jié)合的約250個(gè)適配體，以促進(jìn)靶向結(jié)合。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，制造了脂質(zhì)體來(lái)包封mirna類似物并在其表面展示以高親和力和特異性與在脂肪細(xì)胞和atmsc表面高表達(dá)的分子(例如脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白)特異性結(jié)合的適配體。所述脂質(zhì)體與靶細(xì)胞的融合導(dǎo)致mirna類似物釋放至細(xì)胞質(zhì)中，然后其改變特定的細(xì)胞內(nèi)通路?；蛘?，可在脂質(zhì)體表面插入穩(wěn)定的硫代適配體，以引導(dǎo)脂質(zhì)體mirna類似物遞送并加載至靶向的atmsc和脂肪細(xì)胞中。在另一個(gè)特定實(shí)施方案中，適配體與mirna類似物組合組合形成基于載體的aptamir。示例性的載體包括納米顆粒、脂質(zhì)體或外來(lái)體。這樣的基于載體之a(chǎn)ptamir組合物具有在單一的載體中將多種mirna調(diào)節(jié)劑貨物遞送至靶細(xì)胞的能力。為了完成靶向和積累，將所述載體配制成在其外表面存在靶向部分以使其可與所選的靶脂肪細(xì)胞上的細(xì)胞表面抗原或受體反應(yīng)/結(jié)合。例如，可將載體制造為包封mirna調(diào)節(jié)劑同時(shí)在其表面展示以高親和力和特異性與在脂肪細(xì)胞和atmsc表面高表達(dá)的分子(例如脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白)特異性結(jié)合的適配體。內(nèi)化的外來(lái)體在細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中釋放其mirna類似物負(fù)載，這改變了特定的細(xì)胞內(nèi)通路。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述載體是外來(lái)體。外來(lái)體起源于晚期內(nèi)體，是天然的特異性加載蛋白質(zhì)、mrna或mirna的納米顆粒，其由細(xì)胞進(jìn)行內(nèi)源性分泌。外來(lái)體從宿主細(xì)胞釋放，不具有毒性，并且可基于其組分和外來(lái)體中/上的物質(zhì)向特定細(xì)胞傳遞信息。因?yàn)橥鈦?lái)體是直徑為約20nm至100nm的顆粒，所以，外來(lái)體避過(guò)了單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)(其清除大?。?00nm的循環(huán)顆粒)的清除，并且被非常有效地遞送至靶組織。此外，相比于其他載體，合成的外來(lái)體可提供數(shù)個(gè)優(yōu)點(diǎn)。例如，它們直接將其貨物遞送至細(xì)胞溶膠中，同時(shí)，其惰性避過(guò)了細(xì)胞外環(huán)境的攻擊和清除。外來(lái)體的結(jié)構(gòu)組分可包括負(fù)責(zé)例如信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、膜轉(zhuǎn)運(yùn)、抗原呈遞、靶向/附著等過(guò)程的小分子。所述mirna試劑必須充分地與靶mrna互補(bǔ)，即，充分雜交并且具有足夠的特異性，以得到期望的效果?！盎パa(bǔ)”是指兩條包含天然或非天然堿基或其類似物的序列之間通過(guò)氫鍵進(jìn)行配對(duì)的能力。例如，如果mirna試劑的一個(gè)位置上的堿基能夠與靶核苷酸序列的相應(yīng)位置上的堿基進(jìn)行氫鍵結(jié)合，則認(rèn)為在該位置上的堿基是彼此互補(bǔ)的。在某些實(shí)施方案中，不要求100％的互補(bǔ)性。在另一些實(shí)施方案中，要求100％的互補(bǔ)性。用于本文公開(kāi)的方法的mirna試劑可使用常規(guī)方法設(shè)計(jì)。雖然本文記載了某些示例性靶核酸序列和mirna試劑的具體序列，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)意識(shí)到，這些序列僅用于舉例說(shuō)明和描述在本發(fā)明范圍內(nèi)的具體實(shí)施方案。從本公開(kāi)內(nèi)容的角度來(lái)看，另外的靶區(qū)段對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是容易鑒定的。包含在種子序列中或與其緊鄰的至少五個(gè)(5)連續(xù)核苷酸延伸的長(zhǎng)度為5、6、7、8、9、10或更多個(gè)核苷酸的靶區(qū)段被認(rèn)為適于靶向基因。在一些實(shí)施方案中，靶區(qū)段可包括包含來(lái)自種子序列之一的5′端的至少5個(gè)連續(xù)核苷酸的序列(其余核苷酸為同一rna從種子序列5′端上游緊接著開(kāi)始延伸并且延續(xù)直至mirna試劑包含約5至約30個(gè)核苷酸)。在一些實(shí)施方案中，靶區(qū)段可由包含來(lái)自種子序列之一的3′端的至少5個(gè)連續(xù)核苷酸的rna序列來(lái)代表(其余核苷酸為同一rna從靶區(qū)段3′端下游緊接著開(kāi)始延伸并且延續(xù)直至mirna試劑包含約5至約30個(gè)核苷酸)。通過(guò)掌握本文提供的序列，本領(lǐng)域技術(shù)人員將能夠在不進(jìn)行過(guò)度實(shí)驗(yàn)的情況下即可鑒定其他優(yōu)選區(qū)域以靶向使用mirna試劑。當(dāng)鑒定了一個(gè)或更多個(gè)靶標(biāo)區(qū)域、區(qū)段或位點(diǎn)后，選擇與靶標(biāo)充分互補(bǔ)——即，充分雜交并且具有足夠的特異性(即，基本不與其他非靶核酸序列結(jié)合)——的抑制性核酸化合物以得到期望的效果。在某些實(shí)施方案中，由重組載體表達(dá)用于實(shí)施本發(fā)明的mirna試劑。合適的重組載體包括但不限于dna質(zhì)粒、病毒載體或dna微環(huán)?？墒褂帽绢I(lǐng)域公知的任何合適的基因工程技術(shù)來(lái)完成載體構(gòu)建體的生成，包括但不限于pcr標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)、寡核苷酸合成、限制核酸內(nèi)切酶消化、連接、轉(zhuǎn)化、質(zhì)粒純化和dna測(cè)序，例如，如sambrook等，molecularcloning：alaboratorymanual.(1989)，coffin等(retroviruses.(1997)，以及“rnaviruses：apracticalapproach”(alanj.cann編寫(xiě)，oxforduniversity出版社(2000))中所述。如對(duì)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員顯而易見(jiàn)的，用于將本發(fā)明的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞中的多種合適的載體是可得到的。遞送核酸的合適載體的選擇以及將選擇的表達(dá)載體插入至細(xì)胞中的條件優(yōu)化在本領(lǐng)域普通技術(shù)人員能力范圍內(nèi)，無(wú)需進(jìn)行過(guò)度實(shí)驗(yàn)。病毒載體包含具有用于在包封細(xì)胞中生產(chǎn)重組病毒之序列的核苷酸序列。表達(dá)本發(fā)明核酸的病毒載體可基于包括但不局限于以下的病毒骨架來(lái)構(gòu)建：逆轉(zhuǎn)錄病毒、慢病毒、腺病毒、腺相關(guān)病毒、天花病毒或甲病毒?？扇绫疚乃枋龅膩?lái)遞送重組載體，并且其可存在于靶細(xì)胞(例如穩(wěn)定的轉(zhuǎn)化體)中。在某些實(shí)施方案中，使用化學(xué)合成技術(shù)在體外合成用于實(shí)施本發(fā)明的mirna試劑，如在例如以下文獻(xiàn)中所述，adams(1983)j.am.chem.soc.105：661；belousov(1997)nucleicacidsres.25：3440-3444；frenkel(1995)freeradic.biol.med.19：373-380；blommers(1994)biochemistry33：7886-7896；narang(1979)meth.enzymol.68：90；brown(1979)meth.enzymol.68：109；beaucage(1981)tetra.lett.22：1859；美國(guó)專利no.4,458,066，其各自通過(guò)引用整體并入本文。iv.治療方法在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了治療人對(duì)象的肥胖的方法。所述方法一般包括向人對(duì)象施用有效量的調(diào)節(jié)至少一種產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子(例如線粒體解偶聯(lián)劑，如ucp1和/或ucp2)活性的mirna試劑。這樣的治療方法可基于從藥物基因組領(lǐng)域得到的知識(shí)來(lái)具體調(diào)整和修改。因此，本發(fā)明的另一個(gè)方面提供了使用本發(fā)明的靶基因分子或根據(jù)個(gè)體的藥物響應(yīng)基因型的靶基因調(diào)節(jié)劑來(lái)調(diào)整個(gè)體預(yù)防性或治療性治療的方法。藥物基因組學(xué)使得臨床醫(yī)生或醫(yī)師能夠?qū)㈩A(yù)防性或治療性治療靶向從治療中受到最大益處的患者，并避免治療將經(jīng)歷藥物相關(guān)毒性副作用的患者?？稍诤线m的動(dòng)物模型例如肥胖模型(包括ob/ob小鼠(lindstromp.，scientificworldjournal，7：666-685(2007)和db/db小鼠(sharmak等，amjphysiolrenalphysiol.，284(6)：f1138-1144(2003))中測(cè)試mirna試劑。例如，可將本文所述的mirna試劑(或編碼所述mirna試劑的表達(dá)載體或轉(zhuǎn)基因)用于動(dòng)物模型中，以確定使用所述試劑治療的效力、毒性或副作用?；蛘?，可將治療劑用于動(dòng)物模型中以確定這樣的試劑的作用機(jī)制。例如，可將mirna試劑用于動(dòng)物模型中，以確定使用此試劑治療的效力、毒性或副作用?；蛘撸蓪⒃噭┯糜趧?dòng)物模型中以確定此試劑的作用機(jī)制。本公開(kāi)內(nèi)容還提供了誘導(dǎo)前脂肪細(xì)胞分化成白色脂肪細(xì)胞和將白色脂肪細(xì)胞分化成褐色脂肪細(xì)胞的方法，其包括向前體脂肪細(xì)胞群施用選自以下的一種或更多種mirna：hsa-let-7aagomir、hsa-let-7aantagomir、hsa-mir-1agomir、hsa-mir-1antagomir、hsa-mir-19bagomir、hsa-mir-19bantagomir、hsa-mir-30bagomir和hsa-mir-30bantagomir。在某些實(shí)施方案中，使前脂肪細(xì)胞分化成脂肪細(xì)胞的誘導(dǎo)大于當(dāng)將前脂肪細(xì)胞暴露于100nm羅格列酮兩天隨后暴露于維持培養(yǎng)基中時(shí)得到的前脂肪細(xì)胞向脂肪細(xì)胞的分化。在某些實(shí)施方案中，所述脂肪細(xì)胞是褐色脂肪細(xì)胞。在另一些實(shí)施方案中，所述脂肪細(xì)胞是白色脂肪細(xì)胞。本公開(kāi)內(nèi)容還提供了用于在有此需要的對(duì)象中提高胰島素敏感性的方法，其包括向所述對(duì)象施用選自以下的一種或更多種mirna：hsa-let-7aagomir、hsa-let-7aantagomir、hsa-mir-1agomir、hsa-mir-1antagomir、hsa-mir-19bagomir、hsa-mir-19bantagomir、hsa-mir-30bagomir和hsa-mir-30bantagomir。在某些實(shí)施方案中，所述對(duì)象是哺乳動(dòng)物。本公開(kāi)內(nèi)容還提供了引起有此需要的對(duì)象中脂肪消耗的方法，其包括向所述對(duì)象施用選自以下的一種或更多種mirna：hsa-let-7aantagomir、hsa-mir-1agomir、hsa-mir-19bagomir和hsa-mir-30bagomir。在某些實(shí)施方案中，所述對(duì)象是哺乳動(dòng)物。在另一些實(shí)施方案中，所述哺乳動(dòng)物是人。經(jīng)修飾以增強(qiáng)進(jìn)入細(xì)胞(例如，脂肪細(xì)胞)之?dāng)z取的mirna試劑可以單位劑量施用，所述單位劑量低于約每kg體重15mg，或低于每kg體重10、5、2、1、0.5、0.1、0.05、0.01、0.005、0.001、0.0005、0.0001、0.00005或0.00001mg，并且低于每kg體重200納摩爾mirna試劑(例如約4.4×1016個(gè)拷貝)，或低于每kg體重1500、750、300、150、75、15、7.5、1.5、0.75、0.15、0.075、0.015、0.0075、0.0015、0.00075、0.00015納摩爾rna沉默試劑。單位劑量例如可通過(guò)注射(例如靜脈內(nèi)或肌內(nèi))、吸入劑量或局部施用來(lái)施用。特別優(yōu)選的劑量為低于2、1或0.1mg/kg體重?？梢源蠹s0.00001mg至約3mg每器官/組織，或優(yōu)選約0.0001mg至0.001mg每器官/組織，約0.03mg至3.0mg每器官/組織，約0.1mg至3.0mg每器官/組織或約0.3mg至3.0mg每器官/組織的劑量直接向器官或組織(例如，直接向脂肪組織)遞送mirna試劑。所述劑量可為對(duì)治療或預(yù)防肥胖或提高胰島素敏感性有效的量。在一個(gè)實(shí)施方案中，以低于一天一次的頻率來(lái)施用單位劑量，例如低于每2天、4天、8天或30天一次。在另一個(gè)實(shí)施方案中，不以一定頻率的方式來(lái)施用單位劑量(例如，不以規(guī)律的頻率)。例如，可一次施用單位劑量。在一個(gè)實(shí)施方案中，以另一些傳統(tǒng)治療形式來(lái)施用有效劑量。在某些實(shí)施方案中，向?qū)ο笫┯胢irna試劑的初始劑量，以及一次或更多次維持劑量。維持劑量一般低于初始劑量，例如，是初始劑量的一半。維持方案可包括用每天0.01mg/kg體重至1.4mg/kg體重的劑量來(lái)治療對(duì)象，例如，每天10、1、0.1、0.01、0.001或0.00001mg/kg體重。維持劑量?jī)?yōu)選施用不多于每5天、10天或30天一次。此外，治療方案的持續(xù)時(shí)間根據(jù)具體疾病的性質(zhì)、其嚴(yán)重性以及的總體狀況(condition)而不同。在一些優(yōu)選實(shí)施方案中，劑量可以不高于每天一次遞送，例如不高于每24小時(shí)、36小時(shí)、48小時(shí)或更多個(gè)小時(shí)一次，例如不高于每5天或8天一次。治療后，可監(jiān)測(cè)患者的狀況改變，例如體脂肪百分比的改變。在患者對(duì)現(xiàn)有劑量水平不顯著響應(yīng)的情況下可增加所述化合物的劑量，或者如果觀察到體脂肪降低或觀察到不期望的副作用，則可降低劑量。如在具體情況下適當(dāng)期望或考慮，有效劑量可以單次給藥(dose)或以兩次或或更多次給藥來(lái)施用。如果期望有助于反復(fù)輸注或頻繁輸注，可建議植入遞送裝置，例如泵、半永久支架(例如，皮下、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、腦池內(nèi)(intracisternal)或囊內(nèi))，或儲(chǔ)庫(kù)。在一個(gè)實(shí)施方案中，藥物組合物包含多個(gè)mirna試劑種類。在另一個(gè)實(shí)施方案中，相對(duì)于天然靶序列，mirna試劑種類具有與另一個(gè)試劑種類不重疊或不相鄰的序列。在另一個(gè)實(shí)施方案中，多個(gè)mirna試劑種類對(duì)不同的天然靶基因具有特異性。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述mirna試劑是等位基因特異性的。在另一個(gè)實(shí)施方案中，多個(gè)mirna試劑種類靶向兩種或更多種snp等位基因(例如，兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)、六個(gè)或更多個(gè)snp等位基因)。在成功的治療后，可期望使患者經(jīng)歷維持治療以預(yù)防疾病狀態(tài)的復(fù)發(fā)，其中，以0.01mg/kg至100mg/kg體重的維持劑量來(lái)施用本發(fā)明的化合物(參見(jiàn)美國(guó)專利no.6,107,094)。所施用的mirna試劑的濃度或量將取決于為試劑和施用方法(例如經(jīng)鼻、經(jīng)口腔或經(jīng)肺)所確定的參數(shù)。例如，經(jīng)鼻制劑傾向于需要一些組分的濃度低得多以避免刺激或灼傷鼻通道。有時(shí)期望將經(jīng)口制劑稀釋多達(dá)10至100倍，以提供合適的經(jīng)鼻制劑。某些因素可影響有效治療對(duì)象所需要的劑量，這些因素包括但不限于，疾病或病癥的嚴(yán)重程度、先前的治療、對(duì)象的一般健康和/或年齡，以及存在的其他疾病。此外，用治療有效量的mirna試劑給對(duì)象治療可包括單次治療，或者優(yōu)選可包括系列治療。還應(yīng)理解，在具體的療程中用于治療的mirna試劑的有效劑量可提高或降低。劑量的改變可從本文描述的診斷測(cè)定結(jié)果得出并變得顯而易見(jiàn)。例如，可在施用mirna試劑組合物后監(jiān)測(cè)對(duì)象?；诒O(jiān)測(cè)信息，可施用額外量的mirna試劑組合物。給藥取決于待治療疾病病狀的嚴(yán)重性和響應(yīng)性，治療療程持續(xù)數(shù)天到數(shù)個(gè)月或直至實(shí)現(xiàn)治愈，或?qū)崿F(xiàn)疾病狀態(tài)的緩解?？赏ㄟ^(guò)藥物在患者體內(nèi)的藥物積累測(cè)量值來(lái)計(jì)算優(yōu)化的給藥方案。本領(lǐng)域技術(shù)人員可容易地確定最佳劑量、給藥方法學(xué)和重復(fù)速率。最佳劑量可根據(jù)單種化合物的相對(duì)效力而變化，并且可一般基于在動(dòng)物模型體外和體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的有效的ec50來(lái)估計(jì)。在一些實(shí)施方案中，所述動(dòng)物模型包括表達(dá)人基因(例如產(chǎn)生靶mrna的基因(例如產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子))的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。所述轉(zhuǎn)基因動(dòng)物可為相應(yīng)內(nèi)源mrna缺陷的。在另一個(gè)實(shí)施方案中，用于測(cè)試的組合物包含至少在一個(gè)內(nèi)部區(qū)域與在所述動(dòng)物模型的核酸序列和人靶核酸序列之間保守的序列互補(bǔ)的mirna試劑。一些研究已經(jīng)報(bào)道了使用mirna試劑對(duì)哺乳動(dòng)物進(jìn)行的成功給藥。例如，esauc，等，cellmetabolism，3(2)：87-98(2006)報(bào)道了用mir-122反義寡核苷酸的腹膜內(nèi)劑量對(duì)正常小鼠進(jìn)行給藥，12.5mg/kg至75mg/kg，每周兩次，持續(xù)四周。小鼠在治療結(jié)束時(shí)表現(xiàn)健康并且正常，未出現(xiàn)體重?fù)p失或攝食減少。除了75mg/kg劑量mir-122aso顯示非常輕微的alt和ast水平增加以外，所有劑量的血漿轉(zhuǎn)氨酶水平處于正常范圍內(nèi)(ast3/445，alt3/435)。這可推斷，50mg/kg是有效的無(wú)毒性的劑量。由krutzfeldtj.，等，nature，438，685-689(2005)進(jìn)行的另一個(gè)研究采用每kg體重80mg、160mg或240mg的總劑量將antagomir注射至小鼠中以沉默mir-122。最高劑量導(dǎo)致完全失去mir-122信號(hào)。在另一個(gè)研究中，成功地將鎖核酸(“l(fā)na”)施用至靈長(zhǎng)類動(dòng)物中以沉默mir-122。(elmenj.，等，(2008)nature452，896-899報(bào)道，通過(guò)三次10mg/kglna-antimir的給藥實(shí)現(xiàn)了在靈長(zhǎng)類動(dòng)物中有效沉默mir-122，導(dǎo)致總血漿膽固醇長(zhǎng)時(shí)間并且可逆地降低，并且研究動(dòng)物不顯示任何lna相關(guān)的毒性或組織病理學(xué)改變。在某些實(shí)施方案中，通過(guò)從重組載體表達(dá)來(lái)施用用于實(shí)施本發(fā)明的mirna試劑。合適的重組載體包括但不限于dna質(zhì)粒、病毒載體或dna微環(huán)?？墒褂帽绢I(lǐng)域公知的任何合適的基因工程技術(shù)來(lái)完成載體構(gòu)建體的產(chǎn)生，包括但不限于pcr標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)、寡核苷酸合成、限制核酸內(nèi)切酶消化、連接、轉(zhuǎn)化、質(zhì)粒純化和dna測(cè)序，例如，如sambrook等.molecularcloning：alaboratorymanual.(1989)，coffin等(retroviruses.(1997)，以及“rnaviruses：apracticalapproach”(alanj.caun，ed.，oxforduniversitypress(2000))中所述。如對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見(jiàn)的，用于將本發(fā)明的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞中的多種合適的載體是可用的。遞送核酸的合適載體的選擇以及將選擇的表達(dá)載體插入至細(xì)胞中的條件優(yōu)化在本領(lǐng)域技術(shù)普通人員的能力范圍內(nèi)，無(wú)需進(jìn)行過(guò)度實(shí)驗(yàn)。病毒載體包含具有用于在包封細(xì)胞中產(chǎn)生重組病毒之序列的核苷酸序列。表達(dá)本發(fā)明核酸的病毒載體可基于包括但不限于以下的病毒骨架來(lái)構(gòu)建：逆轉(zhuǎn)錄病毒、慢病毒、腺病毒、腺相關(guān)病毒、天花病毒或甲病毒。重組載體可如本文所描述的來(lái)遞送，并且其可存在于靶細(xì)胞(例如穩(wěn)定的轉(zhuǎn)化體)中。mirna試劑可直接引入細(xì)胞(例如脂肪細(xì)胞)中；或以細(xì)胞外的方式引入腔、間隙(interstitial)空間中，引入生物體的循環(huán)中，經(jīng)口引入，或者可通過(guò)將細(xì)胞或生物體浴在含有核酸的溶液中來(lái)引入。血管或血管外循環(huán)、血液系統(tǒng)或淋巴系統(tǒng)以及腦脊液都是可引入核酸的位點(diǎn)?？墒褂帽绢I(lǐng)域已知的遞送方法來(lái)引入本發(fā)明的mirna試劑，所述方法包括：注射含核酸的溶液，用被核酸覆蓋的顆粒進(jìn)行轟擊，將細(xì)胞或生物體浸漬于核酸溶液中，或在核酸的存在下對(duì)細(xì)胞膜進(jìn)行電穿孔。可使用本領(lǐng)域已知的另外的方法來(lái)將核酸引入細(xì)胞中，例如脂質(zhì)介導(dǎo)的載體轉(zhuǎn)運(yùn)、化學(xué)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)運(yùn)和陽(yáng)離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染例如磷酸鈣等。mirna試劑可與另一些組分(例如增強(qiáng)細(xì)胞攝取mirna試劑的化合物)一起引入。在某些實(shí)施方案中，本文描述的方法包括將mirna試劑與另一些藥劑或藥物(例如用于調(diào)節(jié)產(chǎn)熱的組合物、用于治療糖尿病的組合物、用于治療肥胖的組合物)共施用。用于調(diào)節(jié)產(chǎn)熱的組合物包括β-3腎上腺素能受體激動(dòng)劑、甲狀腺激素、pparg激動(dòng)劑、瘦素、脂聯(lián)蛋白和食欲肽。v.篩選方法在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了篩選調(diào)節(jié)產(chǎn)熱、減少肥胖或提高胰島素敏感性的mirna試劑的方法。所述方法一般包括以下步驟：提供指示細(xì)胞；使所述指示細(xì)胞與受試mirna試劑接觸；以及在存在和不存在所述mirna試劑的情況下，測(cè)定所述指示細(xì)胞中的至少一種產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子的表達(dá)水平和/或細(xì)胞活性，其中，所述產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子活性在存在所述受試mirna試劑的情況下的改變將所述受試mirna試劑鑒定為調(diào)節(jié)產(chǎn)熱、減少肥胖或提高胰島素敏感性的mirna試劑。在某些實(shí)施方案中，所述方法包括測(cè)定產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子(例如ucp1、ucp2)的表達(dá)水平和/或活性的提高。所述指示細(xì)胞可為哺乳動(dòng)物細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述哺乳動(dòng)物細(xì)胞是包含至少部分人基因組的人細(xì)胞。在本文公開(kāi)的方法中可測(cè)定任何產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子。示例性的產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子記載于表2中。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子是線粒體解偶聯(lián)蛋白，例如ucp1和/或ucp2。其中可測(cè)量產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子之活性的任何細(xì)胞都適用于本文公開(kāi)的方法。示例性的細(xì)胞包括前脂肪細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、脂肪組織來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞、肝細(xì)胞、肌細(xì)胞或其前體?？蓽y(cè)定產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子的任何活性，包括但不限于，產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子的mrna表達(dá)水平、蛋白質(zhì)表達(dá)水平或線粒體解偶聯(lián)活性。用于測(cè)定這些活性的方法是本領(lǐng)域公知的?？珊Y選任何mirna試劑，包括但不限于：mirna、agomir、antagomir、aptamir、mir-掩蔽物、mirna-海綿、sirna(單鏈或雙鏈的)、shrna、反義寡核苷酸、核酶或與至少靶核酸的一部分雜交并調(diào)節(jié)其功能的另外的寡核苷酸模擬物。vi.藥物組合物在一個(gè)方面，本文公開(kāi)的方法可包括施用包含能夠調(diào)節(jié)至少一種產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子活性的mirna試劑的藥物組合物和制劑。在某些實(shí)施方案中，用可藥用載劑來(lái)配制所述組合物。所述藥物組合物和制劑可經(jīng)腸胃外施用、經(jīng)局部施用、直接施用至胃腸道(例如，經(jīng)口或經(jīng)直腸)，或局部施用例如經(jīng)氣霧劑或經(jīng)皮。所述藥物組合物可以任何方式配制，并且可以多種單位劑型來(lái)施用，這取決于癥狀或疾病以及疾病的程度、每個(gè)患者的一般用藥情況、產(chǎn)生優(yōu)選結(jié)果的施用方法等。藥物的配制和施用技術(shù)上的細(xì)節(jié)在科學(xué)文獻(xiàn)和專利文獻(xiàn)中有很好的描述，參見(jiàn)例如remington：thescienceandpracticeofpharmacy，第21版，2005。mirna試劑可單獨(dú)施用，或作為藥物制劑(組合物)的組分來(lái)施用。所述化合物可以任何方便用于人醫(yī)藥或獸醫(yī)藥施用的方式進(jìn)行配制。所述組合物中還可存在潤(rùn)濕劑、乳化劑和潤(rùn)滑劑，例如十二烷基硫酸鈉和硬脂酸鎂，以及著色劑、釋放劑、涂層劑、甜味劑、調(diào)味劑和香味劑、防腐劑和抗氧化劑。本發(fā)明的組合物制劑包括適于皮內(nèi)施用、吸入施用、經(jīng)口/經(jīng)鼻施用、經(jīng)局部施用、經(jīng)腸胃外施用、經(jīng)直腸施用和/或經(jīng)陰道內(nèi)施用的那些。所述制劑可適宜地以單位劑型存在，并且可通過(guò)任何藥學(xué)領(lǐng)域公知的方法來(lái)制備?？膳c載劑材料組合以生產(chǎn)單一劑型的活性成分(例如本發(fā)明的核酸序列)的量可根據(jù)待治療的宿主、具體的施用方式例如皮內(nèi)或吸入而不同?？膳c載劑材料組合以生產(chǎn)單一劑型的活性成分的量一般為產(chǎn)生治療效果例如抗原特定t細(xì)胞應(yīng)答或體液應(yīng)答的化合物的量。本發(fā)明的藥物制劑可根據(jù)本領(lǐng)域已知的制造藥物的任何方法來(lái)制備。這樣的藥物可包含甜味劑、調(diào)味劑、著色劑和防腐劑。制劑可與適合于制造的無(wú)毒可藥用賦形劑摻合。制劑可包含一種或更多種稀釋劑、乳化劑、防腐劑、緩沖劑、賦形劑等，并且可以這樣的形式來(lái)提供：液體劑、散劑、乳劑、凍干散劑、噴霧劑、霜?jiǎng)?、洗劑、受控釋放的制劑、片劑、丸劑、凝膠劑、貼劑、植入物等。用于經(jīng)口施用的藥物制劑可使用本領(lǐng)域公知的可藥用載劑以適當(dāng)和合適的劑量來(lái)配制。這樣的載劑使藥物能夠配制成適于患者攝取的以下單位劑型：片劑、丸劑、散劑、糖衣劑、膠囊劑、液體劑、錠劑、凝膠劑、糖漿劑、漿料劑、混懸劑等。用于經(jīng)口使用的藥物制備物可配制成固體賦形劑，任選經(jīng)研磨得到混合物，并加工成混合物顆粒，在按需要添加合適的額外化合物后得到片劑或糖衣劑芯。合適的固體賦形劑是碳水化合物或蛋白質(zhì)填料，包括例如：糖，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇；來(lái)自玉米、小麥、水稻、馬鈴薯或其他植物的淀粉；纖維素例如甲基纖維素、羥丙甲基纖維素或羧甲基纖維素鈉；以及樹(shù)膠，包括阿拉伯膠和西黃蓍膠；以及蛋白質(zhì)，例如明膠和骨膠原?？商砑颖澜鈩┗蛟鋈軇?，例如交聯(lián)的聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂、海藻酸或其鹽，例如海藻酸鈉。適于推送(push-fit)的膠囊劑可包含混合有填料或粘合劑(例如乳糖或淀粉)，潤(rùn)滑劑(例如滑石或硬脂酸鎂)，以及任選地，穩(wěn)定劑。在軟膠囊劑中，活性劑可溶解于或懸浮于含有或不含穩(wěn)定劑的合適液體中，例如，脂肪油、液體石蠟或液體聚乙二醇。水性混懸劑可包含混合有適于制造水性混懸劑(例如水性皮內(nèi)注射劑)的活性劑(例如，本發(fā)明的核酸序列)。這樣的賦形劑包括懸浮試劑，例如羧基甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙甲基纖維素、藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮、西黃蓍膠和阿拉伯膠，以及分散劑或潤(rùn)濕劑，例如天然磷脂(例如卵磷脂)、氧化烯與脂肪酸的縮合物(例如，聚氧乙烯硬脂酸酯)、氧化乙烯與長(zhǎng)鏈脂肪族醇的縮合物(例如，十七乙烯氧基十六醇)、氧化乙烯與衍生自脂肪酸和己糖醇的偏酯的縮合物(例如，聚氧乙烯山梨醇單油酸酯)，或氧化乙烯與衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的縮合物(例如，聚氧乙烯脫水山梨糖醇單油酸酯)。所述水性混懸劑還可包含一種或更多種防腐劑，例如對(duì)羥基苯甲酸乙酯或?qū)郊姿嵴?；一種或更多種著色劑；一種或更多種調(diào)味劑和一種或更多種甜味劑，例如蔗糖、阿斯巴甜或糖精。可調(diào)節(jié)制劑的摩爾滲透壓濃度。在某些實(shí)施方案中，使用基于油的藥物來(lái)施用mirna試劑?？赏ㄟ^(guò)將活性劑混懸于以下物質(zhì)中來(lái)配制基于油的混懸劑：植物油，例如花生油、橄欖油、芝麻油或椰子油；或礦物油，例如液體石蠟；或這些物質(zhì)的混合物。參見(jiàn)例如，美國(guó)專利no.5,716,928描述了使用精油或精油組分來(lái)提高生物利用度并降低經(jīng)口施用的疏水性藥物化合物的個(gè)體間差異和個(gè)體內(nèi)差異(另參見(jiàn)美國(guó)專利no.5,858,401)。油混懸劑可包含增稠劑，例如蜂蠟、硬石蠟或十六醇?？商砑犹鹞秳┮蕴峁┻m口的經(jīng)口制劑，例如甘油、山梨醇或蔗糖。這些制劑可通過(guò)添加抗氧化劑例如抗壞血酸來(lái)保存。可注射油載劑的實(shí)例參見(jiàn)minto(1997)j.pharmacol.exp.ther.281：93-102。在某些實(shí)施方案中，所述藥物組合物和制劑是水包油乳劑的形式。油相可為上文描述的植物油或礦物油，或其混合物。合適的乳化劑包括天然樹(shù)膠，例如阿拉伯膠和西黃蓍膠；天然磷脂，例如大豆卵磷脂；衍生自脂肪酸和己糖醇酸酐的酯或偏酯，例如脫水山梨糖醇單油酸酯；以及這些偏酯與氧化乙烯的縮合物，例如聚氧乙烯脫水山梨糖醇單油酸酯。所述乳劑還可包含甜味劑和調(diào)味劑，如在糖漿劑和酏劑制劑中。這樣的制劑還可包含緩和劑(demulcent)、防腐劑或著色劑。在一些替代實(shí)施方案中，本發(fā)明的這些可注射水包油乳劑包含石蠟油、脫水山梨糖醇單油酸酯、乙氧基化脫水山梨糖醇單油酸酯和/或乙氧基化山梨糖醇三油酸酯。在某些實(shí)施方案中，藥物組合物和制劑通過(guò)以鼻內(nèi)、眼內(nèi)和陰道內(nèi)的途徑來(lái)施用，包括栓劑、吹入劑、散劑和氣霧劑制劑(類固醇吸入劑例如參見(jiàn)rohatagi(1995)j.clin.pharmacol.35：1187-1193；tjwa(1995)ann.allergyasthmaimmunol.75：107-111)。栓劑制劑可通過(guò)將藥物與合適的非刺激性賦形劑混合來(lái)制備，所述非刺激性賦形劑在常溫下為固體但是在體溫下為液體，因而將在體內(nèi)熔化以釋放藥物。這樣的材料為可可油和聚乙二醇。在某些實(shí)施方案中，通過(guò)局部途徑經(jīng)皮遞送的藥物組合物和制劑配制為涂敷棒(applicatorstick)、溶液劑、混懸劑、乳劑、凝膠劑、霜?jiǎng)?、軟膏劑、糊劑、膠凝劑(jully)、涂劑(paint)、散劑和噴霧劑。在某些實(shí)施方案中，所述藥物組合物和制劑作為微球遞送，以在體內(nèi)緩慢釋放。例如，微球可經(jīng)藥物的皮內(nèi)注射來(lái)施用，所述藥物緩慢地經(jīng)皮下釋放；參見(jiàn)rao(1995)j.biomatersci.polym.ed.7：623-645；作為生物可降解和可注射凝膠制劑，參見(jiàn)例如，gao(1995)pharm.res.12：857-863(1995)；或者作為經(jīng)口施用的微球，參見(jiàn)例如，eyles(1997)j.pharm.pharmacol.49：669-674。在某些實(shí)施方案中，所述藥物組合物和制劑經(jīng)腸胃外施用，例如通過(guò)靜脈內(nèi)(iv)施用，或施用至體腔或器官的管腔中。這些制劑可包括溶解于可藥用載劑中的活性劑溶液?？墒褂玫目山邮艿妮d劑和溶劑有水和作為等滲氯化鈉的林格液(ringer’ssolution)。此外，可使用無(wú)菌的固定油作為溶劑或混懸培養(yǎng)基。為此目的，可使用任何溫和的固定油，包括合成的甘油單酯和甘油二酯。此外，還可在可注射劑的制備中使用脂肪酸，例如油酸。這些溶液是無(wú)菌的，并且一般不含不期望的物質(zhì)。這些制劑可通過(guò)常規(guī)的公知的滅菌技術(shù)來(lái)滅菌。所述制劑可按需要包含可藥用輔料物質(zhì)以接近生理學(xué)狀態(tài)，例如ph調(diào)節(jié)劑(adiusting)和緩沖劑，毒性調(diào)節(jié)劑，例如醋酸鈉、氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、乳酸鈉等。這些制劑中活性劑的濃度可大范圍地不等，并且將根據(jù)所選的具體施用方式和患者的需要，主要基于流體體積、粘度、體重等來(lái)選擇。對(duì)于iv施用，所述制劑可為無(wú)菌的可注射制備物，例如無(wú)菌的可注射水性混懸劑或油性混懸劑。該混懸劑可使用那些合適的分散劑或潤(rùn)濕劑或助懸劑來(lái)配制。所述無(wú)菌的可注射制備物還可為在無(wú)毒的腸胃外可接受的稀釋劑或溶劑中的混懸劑，例如1，3-丁二醇溶液。所述施用可為推注輸注(bolusinfusion)或連續(xù)輸注(例如，在指定時(shí)間段內(nèi)基本無(wú)打斷地引入血管中)。在某些實(shí)施方案中，凍干所述藥物化合物和制劑。包含抑制性核酸的穩(wěn)定凍干制劑可通過(guò)凍干包含本發(fā)明藥物和填充劑例如甘露醇、海藻糖、棉籽糖和蔗糖或其混合物的溶液來(lái)得到。用于制備穩(wěn)定的凍干制劑的方法可包括凍干這樣的溶液，其含有約2.5mg/ml核酸、約15mg/ml蔗糖、約19mg/mlnacl和ph大于5.5但小于6.5的檸檬酸鈉緩沖劑。參見(jiàn)例如美國(guó)20040028670。在某些實(shí)施方案中，所述藥物組合物和制劑通過(guò)使用脂質(zhì)體來(lái)遞送。通過(guò)使用脂質(zhì)體，特別是其中脂質(zhì)體表面攜帶對(duì)靶細(xì)胞具有特異性之配體的脂質(zhì)體，或以其他方式優(yōu)選指向特定器官的脂質(zhì)體，我們可以著重于在體內(nèi)將活性劑遞送至靶細(xì)胞中。參見(jiàn)例如，美國(guó)專利no.6,063,400；6,007,839；al-muhammed(1996)j.microencapsul.13：293-306；chonn(1995)curr.opin.biotechnol.6：698-708；ostro(1989)am.j.hosp.pharm.46：1576-1587?？墒┯帽景l(fā)明制劑用于預(yù)防性和/或治療性治療。在某些實(shí)施方案中，對(duì)于治療應(yīng)用，可以足以治愈、緩解或部分阻止病癥或其并發(fā)癥的臨床表現(xiàn)的量將組合物施用至需要降低甘油三酯水平的對(duì)象，或有罹患本文所描述的病癥風(fēng)險(xiǎn)或患有所述病癥的對(duì)象；該量可稱為治療有效量。例如，在某些實(shí)施方案中，以足以治療對(duì)象的肥胖的量來(lái)施用本發(fā)明的藥物組合物。足以實(shí)現(xiàn)該效果的藥物組合物的量是治療有效劑量。對(duì)該應(yīng)用有效的給藥時(shí)間表和量(即，給藥方案)將取決于多種因素，包括疾病或癥狀的階段、疾病或癥狀的嚴(yán)重程度、患者健康的一般狀態(tài)(state)、患者的身體狀態(tài)、年齡等。在為患者計(jì)算給藥方案的過(guò)程中，還將施用方式納入考慮。給藥方案將本領(lǐng)域公知的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)納入考慮，即，活性劑的吸收速率、生物利用度、代謝、清除率等(參見(jiàn)例如，hidalgo-aragones(1996)j.steroidbiochem.mol.biol.58：611-617；groning(1996)pharmazie51：337-341；fotherby(1996)contraception54：59-69；johnson(1995)j.pharm.sci.84：1144-1146；rohatagi(1995)pharmazie50：610-613；brophy(1983)eur.j.clin.pharmacol.24：103-108；remington：thescienceandpracticeofpharmacy，第21版，2005)。本領(lǐng)域現(xiàn)有技術(shù)使臨床醫(yī)生能夠?yàn)槊课粋€(gè)體患者、活性劑和被治療的疾病或病癥來(lái)確定給藥方案。為用作藥物的相似組合物提供的原則可用作指導(dǎo)來(lái)確定施用的給藥方案(即給藥時(shí)間表和劑量水平)實(shí)施本發(fā)明之方法是正確的并且是適當(dāng)?shù)?。制劑的單?dú)施用或多重使用可根據(jù)例如以下來(lái)給定：所需要的劑量和頻率，以及患者的耐受，每次施用后所生成的膽固醇穩(wěn)態(tài)的程度和量等。制劑應(yīng)當(dāng)提供足夠量的活性劑以有效治療、預(yù)防或緩解病癥、疾病或癥狀，例如治療肥胖。在某些實(shí)施方案中，用于經(jīng)口施用的藥物制劑的每日量為每千克體重約1mg至100mg每天。與經(jīng)口施用相比，可使用更低的劑量施用至血流、體腔或器官的管腔中?？墒褂贸浞指叩膭┝坑糜诮?jīng)局部施用或經(jīng)口施用或通過(guò)散劑、噴霧劑或吸入劑來(lái)施用。用于制備能夠經(jīng)腸胃外或經(jīng)非腸胃外施用的制劑的實(shí)際方法對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員是已知或是顯而易見(jiàn)的，并且這些方法在出版物例如remington：thescienceandpracticeofpharmacy，第21版，2005中有著更詳細(xì)的描述。vii.例證進(jìn)一步通過(guò)以下實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行舉例說(shuō)明，這些實(shí)施例不應(yīng)當(dāng)解讀為進(jìn)一步的限制。貫穿于本申請(qǐng)中的序列表內(nèi)容、附圖以及引用的所有文獻(xiàn)、專利和已公開(kāi)的專利申請(qǐng)都通過(guò)引用清楚地并入本文。此外，根據(jù)本發(fā)明，可采用本領(lǐng)域范圍內(nèi)的常規(guī)分子生物學(xué)、微生物學(xué)和重組dna技術(shù)。這些技術(shù)在文獻(xiàn)中有充分的解釋。參見(jiàn)例如，sambrook，fritsch&maniatis，molecularcloning：alaboratorymanual，第二版(1989)coldspringharborlaboratory出版社coldspringharbor，newyork(本文中寫(xiě)為“sambrook等，1989”)；dnacloning：apracticalapproach，i卷和ii卷(d.n.glover編寫(xiě)，1985)；oligonucleotidesynthesis(m.j.gait編寫(xiě)，1984)；nucleicacidhybridization[b.d.hames和s.j.higgins編寫(xiě)(1985)]；transcriptionandtranslation[b.d.hames和s.j.higgins編寫(xiě)(1984)]；animalcellculture[r.i.freshney編寫(xiě)(1986)]；immobilizedcellsandenzymes[irl出版社，(1986)]；b.perbal，apracticalguidetomolecularcloning(1984)；f.m.ausubel等(編寫(xiě))，currentprotocolsinmolecularbiology，johnwiley&sons，inc.(1994)。實(shí)施例1.產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子的計(jì)算機(jī)分析基于對(duì)有效的科學(xué)信息和我們自己的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的重要評(píng)估和回顧，選擇了八十三種在產(chǎn)熱調(diào)控中涉及到的蛋白質(zhì)。基于其功能，將這些蛋白質(zhì)劃分為產(chǎn)熱的激活蛋白或阻抑蛋白。這些產(chǎn)熱調(diào)節(jié)蛋白記載于表2中。表2.產(chǎn)熱調(diào)節(jié)蛋白：使用已知的string9.0數(shù)據(jù)庫(kù)和預(yù)測(cè)的蛋白質(zhì)相互作用(string-db.org/)來(lái)測(cè)試這83個(gè)候選分子。該相互作用包括直接(物理的)締合和間接(功能性的)締合；它們來(lái)自四個(gè)來(lái)源：基因組背景；高通量實(shí)驗(yàn)；共表達(dá)；以及現(xiàn)有知識(shí)。string定量地整合了來(lái)自這些來(lái)源的大量生物體中的相互作用數(shù)據(jù)，在可適用的情況下在這些生物體之間轉(zhuǎn)移信息。所述數(shù)據(jù)庫(kù)目前覆蓋了來(lái)自1，133種生物體中的5，214，234個(gè)蛋白質(zhì)。例如，83種產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子分子之間的關(guān)系以u(píng)cp1為中心，與ucp1具有直接聯(lián)系或間接聯(lián)系的分子可通過(guò)使用最高為0.90的置信度分?jǐn)?shù)來(lái)鑒別。該關(guān)系記載于圖1a的示意圖中。根據(jù)該分析發(fā)現(xiàn)，九個(gè)分子(cebpb、cidea、kdm3a、nrip1、prdm16、pparg、ppargc1a、ppkaa2和ucp2)直接與ucp1關(guān)聯(lián)，而更多分子在第二級(jí)或更高程度的級(jí)上與ucp1關(guān)聯(lián)。當(dāng)置信度設(shè)置在0.70分時(shí)，發(fā)現(xiàn)另外八個(gè)蛋白質(zhì)直接與ucp1關(guān)聯(lián)(azgp1、dio2、klf11、klf15、nr1h3、ppara、ppard和ppargc1b)，圖1b。類似地，使用其他軟件程序獨(dú)立地評(píng)估這83種產(chǎn)熱調(diào)控分子之間的相互作用。由ingenuitypathwayanalysis(ipa)software程序(www.ingenuity.com)預(yù)測(cè)的相互作用在圖2a中示出(ucp1為黃色，激活蛋白為綠色并且阻抑蛋白為紫色)。由reactomefunctionalinteraction(reactomeif)software程序(http：//wiki.reactome.org)預(yù)測(cè)的相互作用在圖2b中示出(ucp1為黃色，激活蛋白為綠色并且阻抑蛋白為紫色)。ipa和reactomeif網(wǎng)絡(luò)與圖1a和1b中記載的使用string程序得到的網(wǎng)絡(luò)不同。這些算法的結(jié)果不同并不令人意外，因?yàn)樗鼈兓诓煌念A(yù)設(shè)參數(shù)、信息來(lái)源和選擇標(biāo)準(zhǔn)。實(shí)施例2.相關(guān)mirna靶標(biāo)的計(jì)算機(jī)選擇為了選擇適合作為mirna試劑靶標(biāo)的產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子，采用了數(shù)種基于互聯(lián)網(wǎng)的資源來(lái)使mirna與其靶標(biāo)匹配(“micronome”)。示例性的工具記載于表3中。表3.用于選擇mirna及其靶標(biāo)的示例性生物信息學(xué)工具：具體而言，這些工具用于進(jìn)行：1)整合的數(shù)據(jù)挖掘(8個(gè)工具)；2)mirna挖掘和繪圖(6個(gè)工具)；3)mirna靶向的靶標(biāo)和表達(dá)(21個(gè)工具)；4)整合的mirna靶標(biāo)和表達(dá)(13個(gè)工具))5)mirna二級(jí)結(jié)構(gòu)的預(yù)測(cè)和比較(5個(gè)工具)；6)網(wǎng)絡(luò)搜索和分析(8個(gè)工具)；7)分子顯示(4個(gè)工具)；以及8)信息整合以及開(kāi)發(fā)(1個(gè)工具)。單個(gè)基因靶標(biāo)可被幾種mirna來(lái)控制，然而單個(gè)mirna可控制數(shù)個(gè)基因靶標(biāo)。已經(jīng)開(kāi)發(fā)了龐雜的生物信息學(xué)資源來(lái)選擇與靶疾病最相關(guān)的mirna(gallagherij等，genomemedicine.2010；fujikik等，bmcbiol.2009；okaday，等，jandrol.2010；haot，等，molbiosyst.2012；haot，等，molbiosyst.2012)。然而這些算法的結(jié)果嚴(yán)重依賴于預(yù)設(shè)參數(shù)，并且這些算法之間的會(huì)聚程度十分有限。因此，需要開(kāi)發(fā)出更好的對(duì)鑒定mirna/靶標(biāo)關(guān)系具有改進(jìn)的靈敏性、特異性和選擇性的進(jìn)行生物信息學(xué)分析的工具。mirna與其靶標(biāo)之間的相互作用超出了作為轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)子的mirna的初始描述，所述轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)子的驅(qū)動(dòng)鏈(driverstrand)的種子區(qū)域(5′堿基2位至7位)與靶mrna的3′utr區(qū)的互補(bǔ)序列結(jié)合，通常導(dǎo)致翻譯抑制、靶標(biāo)降解和基因沉默。所述相互作用還可包含mirna的驅(qū)動(dòng)鏈或過(guò)客鏈的多個(gè)區(qū)域以及mrna的5′utr、啟動(dòng)子和編碼區(qū)。根據(jù)對(duì)可用數(shù)據(jù)的分析，決定選擇靶向一個(gè)離散的信號(hào)通路中多個(gè)基因的通路特異性mirna，而不是在許多信號(hào)通路、功能或過(guò)程中涉及到的通用mirna。通過(guò)使用34種可公開(kāi)獲取的互聯(lián)網(wǎng)工具預(yù)測(cè)mirna靶標(biāo)，檢索可潛在地調(diào)節(jié)實(shí)施例1中所選的83個(gè)產(chǎn)熱調(diào)控分子(其中包括36個(gè)轉(zhuǎn)錄因子)中的數(shù)個(gè)靶標(biāo)的特異性人mirna?？紤]的數(shù)個(gè)范例：a)一種微小rna-多種mrna通路特異性的范例a1.一種小rna-多種rna通路特異性的范例的第一個(gè)實(shí)施例組蛋白的甲基化狀態(tài)可通過(guò)組蛋白甲基化轉(zhuǎn)移酶和去甲基化酶來(lái)動(dòng)態(tài)調(diào)控。人賴氨酸(k)特異性去甲基化酶3a(kdm3a)在代謝基因的表達(dá)調(diào)控中是至關(guān)重要的。其功能的缺失導(dǎo)致小鼠的肥胖和高脂血癥。與ucp1基因的ppar應(yīng)答元件(ppre)結(jié)合的kdm3a的β-腎上腺素能刺激不僅降低在ppre的h3k9me2(對(duì)組蛋白h3的第9位賴氨酸進(jìn)行二甲基化)水平，而且還促使pparg和rxra以及其共激活蛋白ppargc1a、crebbp和ncoa1募集至ppre。targetscanhuman數(shù)據(jù)庫(kù)(release6.0)的查詢顯示，人kdm3a3′utr的29位至35位區(qū)域是hsa-mir-22的保守靶標(biāo)。數(shù)種其他mirna靶標(biāo)數(shù)據(jù)庫(kù)也確認(rèn)了hsa-mir-22與kdm3a之間的該匹配。因此，通過(guò)hsa-mir-22antagomir使去甲基化酶kdm3a的產(chǎn)量提高將導(dǎo)致ucp1基因啟動(dòng)子區(qū)的去甲基化，從而促進(jìn)數(shù)種調(diào)控元件的結(jié)合，并提高ucp1的產(chǎn)量。此外，我們使用了34種mirna靶標(biāo)和表達(dá)工具(表4)來(lái)鑒定指定mirna的mrna靶標(biāo)。表4.用于選擇mirna及其靶標(biāo)的生物信息學(xué)工具：通過(guò)應(yīng)用上述計(jì)算機(jī)策略發(fā)現(xiàn)，hsa-mir-22-3p和hsa-mir-22-5p分別與所選83種產(chǎn)熱靶標(biāo)中的總共42種和8種相互作用。該數(shù)據(jù)記載于表5中。表5.鑒定為hsa-mir-22的預(yù)測(cè)靶標(biāo)和/或已證實(shí)靶標(biāo)的產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子：a2.一種微小rna-多mrna通路特異性的范例的另一些實(shí)施例我們還利用34種mirna靶標(biāo)和表達(dá)工具(表4)來(lái)尋找脂肪細(xì)胞的536種mirna(表1)中的任意一種與83種產(chǎn)熱靶標(biāo)(表2)之間的潛在關(guān)系。顯示許多脂肪細(xì)胞mirna與所述83種產(chǎn)熱靶標(biāo)中的至少一種相互作用(預(yù)測(cè)和/或證實(shí))。例如mir-17-3p和hsa-mir-17-5p分別與所選83種產(chǎn)熱靶標(biāo)中的總共23種和65種相互作用。該數(shù)據(jù)記載于表6中。表6.鑒定為hsa-mir-17的預(yù)測(cè)和/或已證實(shí)的靶標(biāo)的產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子：當(dāng)制作出目的mirna及其mrna靶標(biāo)的清單后，使用以下過(guò)濾條件來(lái)提煉結(jié)果：參數(shù)1目的組織/細(xì)胞中mirna的表達(dá)2預(yù)測(cè)指定基因或基因組的一種mirna的算法數(shù)量3來(lái)自算法的評(píng)分/百分比4由一種mirna靶向的優(yōu)選基因數(shù)量5靶基因中一種mirna的結(jié)合位點(diǎn)數(shù)量6靶基因中數(shù)種mirna的結(jié)合位點(diǎn)數(shù)量7靶基因中一種mirna種子互補(bǔ)序列的過(guò)呈現(xiàn)(over-representation)(mirvestigator)8經(jīng)證實(shí)的mirna-mrna靶標(biāo)對(duì)9mirna結(jié)合位點(diǎn)的基因位置(5’utr-啟動(dòng)子-cds-3’utr)10mirna的內(nèi)含子位置11mirna的聚類12在目的特異性組織/細(xì)胞中mirna的豐度使用以上參數(shù)發(fā)現(xiàn)，229種mirna滿足這些標(biāo)準(zhǔn)中的至少兩種。該數(shù)據(jù)記載于表7中。表7.根據(jù)選擇標(biāo)準(zhǔn)數(shù)目減少的mirna排序：b)多種微小rna-一種mrna范例.b1.包括ucp1的一個(gè)示例性的多種mirna-一種mrna范例。在脂肪細(xì)胞中，最關(guān)鍵的產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子是ucp1(也稱為產(chǎn)熱素)，并且因此，所有產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子必須最終影響ucp1活性。ucp1是產(chǎn)生質(zhì)子跨線粒體內(nèi)膜泄漏從而使氧化磷酸化與atp合成解偶聯(lián)的線粒體轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。因此，能量以熱的形式散失(適應(yīng)性產(chǎn)熱)(參見(jiàn)圖5)lowell等，nature(2000)；friedman等，bioinformatics(2010)；hsu等，nucleicacidsresearch(2011)；rieger等，frontiersingenetics(2011))。ucp1生物合成主要受到轉(zhuǎn)錄水平的控制。圖6描述了由其他示例性產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子對(duì)ucp1的轉(zhuǎn)錄調(diào)控。ucp1基因的啟動(dòng)子區(qū)包含許多不同的調(diào)控位點(diǎn)，允許多種蛋白質(zhì)正性(參見(jiàn)圖7a)和負(fù)性(參見(jiàn)圖7b)地影響其轉(zhuǎn)錄。孟德?tīng)栯S機(jī)化是一種在非實(shí)驗(yàn)研究中使用已知功能基因中測(cè)量的變化來(lái)檢查可變的暴露對(duì)疾病的因果效應(yīng)。孟德?tīng)栯S機(jī)化可視為“天然的”隨機(jī)化臨床試驗(yàn)。據(jù)報(bào)道，ucp1基因的遺傳多態(tài)性(例如ucp1的外顯子2的啟動(dòng)子中-3826a/g單核苷酸多態(tài)性)與mrna的表達(dá)降低及肥胖有關(guān)?；蛐蜑間/g的健康兒童對(duì)高脂肪膳食和急性冷暴露具有較低的產(chǎn)熱能力。年輕女性中，相同的-3826a/gucp1遺傳多態(tài)性降低靜息能力消耗，并降低熱調(diào)控交感神經(jīng)系統(tǒng)的活性。在367位韓國(guó)女性的研究中，在優(yōu)勢(shì)模型(dominantmodel)中-3826a＞g的g等位基因和-412a＞c的c等位基因與大面積的腹部皮下脂肪顯著相關(guān)(分別為，p＜0.001和p＜0.0004)；它們組合到一起(ht2[gc])提高了該顯著性(p＜0.00005)。針對(duì)100名重度肥胖(bmi＞40kg/m2)的成年人和100名正常體重的對(duì)照對(duì)象(bmi范圍＝19kg/m2至24.9kg/m2)的研究鑒定了ucp1基因啟動(dòng)子區(qū)的7個(gè)突變、內(nèi)含子區(qū)的4個(gè)突變和外顯子區(qū)的4個(gè)突變。這些突變可促進(jìn)肥胖的產(chǎn)生，具體而言，g.-451c＞t，g.940g＞a，以及g.ivs4-208t＞g可表示促進(jìn)能量?jī)?chǔ)存的“節(jié)約(thrifty)”因子。最后，位于ucp1基因上游啟動(dòng)子區(qū)的兩種多態(tài)性(a-3826g和c-3740a)影響基因表達(dá)，并且與人類的長(zhǎng)壽相關(guān)。所有前述信息都支持將靶向ucp1的表達(dá)和活性作為改變適應(yīng)性產(chǎn)熱并從而治療人類肥胖的有意義的方法?？蓪?shí)施許多策略來(lái)達(dá)到實(shí)現(xiàn)該目的，但是，本發(fā)明方法采用的一種策略中使用mirna試劑來(lái)同時(shí)調(diào)節(jié)產(chǎn)熱通路中的數(shù)個(gè)元件以提高ucp1的合成和活性。mirna與ucp1基因之間的直接相互作用和間接相互作用都被考慮。直接相互作用意為，mirna與ucp1基因的多個(gè)區(qū)域直接結(jié)合，導(dǎo)致ucp1mrna的轉(zhuǎn)錄、翻譯、穩(wěn)定性和/或降解發(fā)生改變。間接相互作用意為，mirna改變產(chǎn)熱mrna的轉(zhuǎn)錄、翻譯、穩(wěn)定性和/或降解，所述產(chǎn)熱mrna表達(dá)的蛋白質(zhì)改變ucp1基因的轉(zhuǎn)錄。另外，間接相互作用意為，mirna改變修飾ucp1基因轉(zhuǎn)錄的其他mirna的轉(zhuǎn)錄、翻譯、穩(wěn)定性和/或降解。人ucp1基因(gi|237858805|ref|ng_012139.1|人解偶聯(lián)蛋白1(線粒體，質(zhì)子載體)(ucp1)，4號(hào)染色體上的refseqgene)的啟動(dòng)子區(qū)特別富含調(diào)控元件基序(表8)。表8.ucp1基因調(diào)控元件：表8a描述了人ucp1基因的15,910堿基對(duì)(bp)(fasta登錄號(hào)：＞gi|237858805|ref|ng_012139.1|人解偶聯(lián)蛋白1(線粒體、質(zhì)子載體)(ucp1)，4號(hào)染色體上的refseqgene；ncbi參考序列：ng_012139.1)中這些多種調(diào)控元件相對(duì)于第5,001位核酸的ucp1轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)的位置。由mirna直接或間接激活或抑制這些調(diào)控元件將導(dǎo)致ucp1基因表達(dá)和活性的改變。在正常條件下，ucp1基因表達(dá)和活性受到豐富的調(diào)控元件網(wǎng)絡(luò)抑制，以避免能量浪費(fèi)。在脅迫條件下，例如暴露于冷環(huán)境，ucp1基因表達(dá)通過(guò)處于數(shù)種mirna調(diào)控下的多種激活蛋白和阻抑蛋白上調(diào)。用數(shù)種程序(包括microrna.org)進(jìn)行的靶向人ucp13’utr之mirna的初始調(diào)查是陰性的。然而，另一些程序，包括microcosmtargets，使用ucp1ensembl的1,462堿基對(duì)的轉(zhuǎn)錄物enst00000262999作為靶標(biāo)揭示出在ucp13’utr中的28個(gè)位置上的27種mirna的結(jié)合位點(diǎn)，其在表9中示出。表9.使用microcosmtargets確定的ucp1(ncbi參考序列ng_012139.1)的3’utr中mirna的結(jié)合位點(diǎn)：另一些程序，例如mirwalk、mirgen、mirgator-miranda和dianamicrot，使用ucp1ensembl的1,462堿基對(duì)轉(zhuǎn)錄物(enst00000262999)、ucp1ensembl的9,371堿基對(duì)基因序列(ensg00000109424)或所述15,910堿基對(duì)ucp1序列(ncbi引用序列：ng_012139.1)作為靶標(biāo)揭示出在ucp13’utr的69個(gè)位置上總共50種mirna的結(jié)合位點(diǎn)，其在表10中示出。表10.根據(jù)數(shù)種程序的ucp1(ncbi引用序列ng_012139.1)的3’utr中mirna的結(jié)合位點(diǎn)：將人ucp1基因與數(shù)種mirna序列的序列比對(duì)得到在ucp1基因的5’utr、啟動(dòng)子區(qū)和編碼區(qū)中的匹配。集成可公開(kāi)獲取的互聯(lián)網(wǎng)工具預(yù)測(cè)靶向ucp1基因多個(gè)區(qū)域之mirna誘發(fā)的數(shù)個(gè)命中(hit)。出乎意料的是，這些預(yù)測(cè)工具之間的重疊為零，如圖3所示。然而，使用比對(duì)程序geneious篩選mirna數(shù)據(jù)庫(kù)。發(fā)現(xiàn)了總共191個(gè)人微小rna，其在ucp1基因序列中具有450個(gè)互補(bǔ)結(jié)合位點(diǎn)(表11)。匹配的長(zhǎng)度為7個(gè)堿基至12個(gè)堿基(例如，hsa-mir-24-2-5p和hsa-mir-192-5p)。每個(gè)mirna的命中數(shù)為1至若干個(gè)不等(例如，hsa-mir-19b2有9個(gè)(豐富的脂肪細(xì)胞mirna)，hsa-mir-26a-2-3p有14個(gè)，hsa-mir-181c有11個(gè)，并且hsa-mir-620有12個(gè))。表11.在ucp1基因序列(ncbi參考序列：ng_012139.1)中具有預(yù)測(cè)的結(jié)合位點(diǎn)的mirna：b2.包括ucp2的另一個(gè)示例性的多種mirna-一種mrna范例。ucp2是在wat、骨骼肌、胰島和中樞神經(jīng)系統(tǒng)中表達(dá)的線粒體轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。與ucp1一樣，其制造跨線粒體內(nèi)膜的質(zhì)子泄漏，從而使氧化磷酸化與atp合成解偶聯(lián)(適應(yīng)性產(chǎn)熱，參見(jiàn)圖5)(lowell等，nature(2000))。兩個(gè)最近的元-分析報(bào)道了ucp2啟動(dòng)子區(qū)的多態(tài)性與肥胖之間的關(guān)聯(lián)(liu等，gene(2013)；andersen等，int.j.obes.(2013))。第一個(gè)元-分析包括14個(gè)研究(7,647個(gè)案例和11,322個(gè)對(duì)照)，并得出以下結(jié)論，在ucp2-866g/a多態(tài)性的a等位基因與肥胖風(fēng)險(xiǎn)的降低之間有顯著的關(guān)聯(lián)，特別是在歐洲人群中。在第二個(gè)元-分析中包括12,984位對(duì)象，常見(jiàn)的ucp2-866g等位基因與肥胖有關(guān)。在17,636位丹麥對(duì)象中，同樣的ucp2-866g等位基因與胰島素敏感性的降低有關(guān)。在一個(gè)研究中，在具有g(shù)g表型的對(duì)象中，內(nèi)臟脂肪中ucp2的mrna水平降低(esterbauer等，nat.genet.(2001))。在另一個(gè)研究中發(fā)現(xiàn)了皮下脂肪細(xì)胞ucp2mrna與體脂肪百分比之間的負(fù)相關(guān)趨勢(shì)(wang等，americanjournalofphysiol.(2004))。該信息支持將靶向ucp2的表達(dá)和活性作為改變適應(yīng)性產(chǎn)熱并從而治療人肥胖的有意義的方法。可實(shí)施許多策略來(lái)達(dá)到實(shí)現(xiàn)該目的，但是，本發(fā)明方法采用的一種策略中使用mirna試劑來(lái)同時(shí)調(diào)節(jié)產(chǎn)熱通路中的數(shù)個(gè)元件以提高ucp2的合成和活性?？紤]mirna與ucp2基因之間的直接相互作用和間接相互作用二者。直接相互作用意為，mirna與ucp2基因的多個(gè)區(qū)域直接結(jié)合，導(dǎo)致ucp1mrna的轉(zhuǎn)錄、翻譯、穩(wěn)定性和/或降解發(fā)生改變。間接相互作用意為，mirna改變產(chǎn)熱mrna的轉(zhuǎn)錄、翻譯、穩(wěn)定性和/或降解，所述產(chǎn)熱mrna表達(dá)的蛋白質(zhì)改變ucp2基因的轉(zhuǎn)錄。此外，間接相互作用意為，mirna改變修飾ucp2基因之轉(zhuǎn)錄的其他mirna轉(zhuǎn)錄、翻譯、穩(wěn)定性和/或降解。人ucp2基因(ensg00000175567，人解偶聯(lián)蛋白2(線粒體，質(zhì)子載體)(ucp2)，11號(hào)染色體上的refseqgene)的啟動(dòng)子區(qū)富含調(diào)控元件基序(表12)。表12.ucp2基因調(diào)控元件：表8b描述了人ucp2基因的15,174堿基對(duì)(bp)中這些多種調(diào)控元件相對(duì)于第5,001位核酸的ucp2轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)的位置。由mirna直接或間接激活或抑制這些調(diào)控元件將導(dǎo)致ucp2基因表達(dá)和活性的改變。用數(shù)個(gè)預(yù)測(cè)程序使用ucp2ensembl2,113堿基對(duì)轉(zhuǎn)錄物enst00000310473作為靶標(biāo)進(jìn)行的mirna靶向人ucp23’utr的調(diào)查顯示了161個(gè)mirnas的結(jié)合位點(diǎn)，其在表13中示出。表13.ucp2轉(zhuǎn)錄物序列3’utr中具有預(yù)測(cè)的結(jié)合位點(diǎn)的mirna：此外，用數(shù)個(gè)預(yù)測(cè)程序使用包含5,000bp5’utr的人ucp2基因(ensg00000175567，15,174堿基對(duì)(bp))作為靶標(biāo)進(jìn)行的mirna靶向人ucp25’utr的調(diào)查揭示了在ucp2的5’utr中的54個(gè)mirna結(jié)合位點(diǎn)，其在表14中示出。表14.在ucp2基因序列之5’utr中具有預(yù)測(cè)的結(jié)合位點(diǎn)的mirna：c)多種微小rna-多種mrna范例。在從表2中選擇的83種產(chǎn)熱調(diào)控分子中篩選高嚴(yán)謹(jǐn)性的多種mirna-多種mrna關(guān)聯(lián)。用7種主要的預(yù)測(cè)工具進(jìn)行的這些分析的結(jié)果在圖4中示出。這7種工具的聯(lián)合產(chǎn)生了4439個(gè)mirna-基因?qū)?。隨著工具數(shù)量的增加，這些工具之間的重疊降低，當(dāng)考慮7種工具時(shí)，達(dá)到僅15個(gè)mirna-基因?qū)?。d)共調(diào)控的mrna靶標(biāo)范例中的一個(gè)微小rna種子序列基序的過(guò)呈現(xiàn)?？墒褂脭?shù)種方法來(lái)鑒定通路特異性的mirna。例如，檢索推定為共調(diào)控基因的3’-utr的來(lái)自mirna種子區(qū)的過(guò)呈現(xiàn)序列可鑒定共有的調(diào)控mirna。為了確定特定的mirna種子序列是否在所選擇的83種產(chǎn)熱靶標(biāo)的3’utr中過(guò)呈現(xiàn)，使用mirvestigator網(wǎng)絡(luò)應(yīng)用(mirvestigator.systemsbiology.net/)。使用以下參數(shù)(基序大小為8bp，默認(rèn)weeder模式，種子模式為8聚體，100％的互補(bǔ)同源性，以及允許0.25的擺動(dòng)堿基配對(duì))，其確定，如在表15中所示，由hsa-mir-19a/19b識(shí)別的基序5’-uuuguaca-3’在83種產(chǎn)熱靶標(biāo)的15種中過(guò)呈現(xiàn)，互補(bǔ)性p值為1.7×10-04。應(yīng)注意，據(jù)報(bào)道，hsa-mir-19是豐富的人脂肪細(xì)胞mirna。表15.共有基序uuuguaca與hsa-mir-19a/19b之間的互補(bǔ)性：通過(guò)mirvestigator鑒定，hsa-mir-19mrna/mirna雙鏈的最小自由能水平十分低，傾向于緊密結(jié)合。因此，使用較低的互補(bǔ)性嚴(yán)謹(jǐn)水平來(lái)重復(fù)mirvestigator分析。該分析還鑒定了與hsa-mir-19基序具有95％相似度至一致的10種另外的靶標(biāo)(cebpd、prkaa1、twist1、irs1、ncoa1、ncoa2、ncoa3、klf5、rps6kb1、nrip1)。有趣的是，hsa-mir-19是脂肪組織組織中最豐富的mirna之一。鑒定為包含hsa-mir-19種子區(qū)域的互補(bǔ)序列的基因記載于表16中。表16.鑒定為hsa-mir-19之靶標(biāo)的產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子：因此，以更低的互補(bǔ)性嚴(yán)謹(jǐn)水平(基序大小為8bp，默認(rèn)weeder模式，種子模式為8聚體，95％的互補(bǔ)同源性，以及允許0.25的擺動(dòng)堿基配對(duì))來(lái)重復(fù)mirvestigator分析。該分析還鑒定了與hsa-mir-19基序具有95％相似度至一致的10至12種另外的靶標(biāo)(cebpd、creb1、prkaa1、twist1、insr、irs1、ncoa1、ncoa2、ncoa3、klf5、rps6kb1、nrip1)。有趣的是，hsa-mir-19是脂肪組織組織中最豐富的mirna之一。鑒定為包含hsa-mir-19種子區(qū)域之互補(bǔ)序列的基因記載于表17中。表17.鑒定為hsa-mir-19a/b的靶標(biāo)，與共有基序有95％至100％相似度的產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子：在沒(méi)有擺動(dòng)的情況下，相同的基序5’-uuuguaca-3’在hsa-mir-1283的靶標(biāo)中過(guò)呈現(xiàn)，互補(bǔ)性p值為1.4×104。此外，hsa-mir-1283與和遺傳性的人類肥胖有關(guān)的另一些目的mrna如abca1(膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白)、脂聯(lián)素受體以及轉(zhuǎn)錄因子tcf7l2結(jié)合。類似地，對(duì)在脂肪細(xì)胞中表達(dá)的mirna鑒定了過(guò)呈現(xiàn)種子序列的另一些mirna。它們包括通用hsa-let-7家族(序列cuauacaa，p值＝7.5e-04)，以及脂肪細(xì)胞中富含的hsa-mir-30家族(序列uguaaaca，p值＝1.9×10-3)等。相對(duì)于根據(jù)string軟件包與ucp1直接相連的prdm16、cidea、nrip1、kdm3a、ceppb、pparg、ppargc1a和ppkaa2，似乎它們都和數(shù)個(gè)mirna共享(基序大小8bp，默認(rèn)weeder模式，晶種模式8聚體，95％的互補(bǔ)同源性，以及0.25的擺動(dòng)堿基配對(duì)允許)一個(gè)共有序列，所述mirna包括hsa-mir-3658(p值＝1.9e-003)和hsa-mir30家族(p值＝6.3e-003)，如下所示：hsa-mir-3658：hsa-mir-30a/b/c/d/e：e)內(nèi)含子mirna-多種mrna通路特異性的范例。許多哺乳動(dòng)物mirna位于蛋白編碼基因的內(nèi)含子中，而不是其本身的特有的轉(zhuǎn)錄單元中。內(nèi)含子mirna通常與它們所處在的前體mrna一起表達(dá)和加工。雖然可對(duì)內(nèi)含子mirna和它們的宿主基因進(jìn)行獨(dú)立調(diào)控，但內(nèi)含子mirna可通過(guò)靶向宿主基因的utr來(lái)下調(diào)其本身的宿主蛋白質(zhì)編碼基因。通過(guò)選擇作為mirna靶向的轉(zhuǎn)錄因子或通過(guò)內(nèi)含子mirna宿主基因產(chǎn)物與mirna靶基因產(chǎn)品之間的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用可實(shí)現(xiàn)宿主蛋白編碼基因的反饋調(diào)控。例如，mir-33與srebp宿主基因配合作用以控制膽固醇穩(wěn)態(tài)，并且mir-33a和mir-33b的藥物抑制是提高血漿hdl和低級(jí)vldl甘油三酯水平以治療血脂異常的有前景的治療策略。83種產(chǎn)熱靶基因的檢驗(yàn)揭示出兩種內(nèi)含子mirna：位于ppargc1b基因中的mir-378，和位于prdm16基因中的mir-4251。預(yù)測(cè)mirna靶標(biāo)的互聯(lián)網(wǎng)工具的挖掘顯示，mir-378靶標(biāo)包括bmp2、ppara、ppargc1a、prdm16、stat5和wnt10a，以及adipoq和igfr1；并且mir-4251靶標(biāo)包括bmp2、ctbp1、ctbp2、mapk14、ncoa3、plac8、ppara、ppard、trpm8以及abca5、abca13、adipoqr2、kdm5b、klf-12、klf-14和tcf7l2。實(shí)施例3.高內(nèi)涵細(xì)胞表型篩選使用高內(nèi)涵篩選方法來(lái)篩選調(diào)節(jié)產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子(例如ucp1和ucp2)活性的新mirna試劑。高內(nèi)涵篩選是使用活細(xì)胞圖像以輔助分子發(fā)現(xiàn)的藥物發(fā)現(xiàn)方法。這樣的基于自動(dòng)成像的篩選方法特別適用于鑒定改變細(xì)胞表型的試劑。wat細(xì)胞包含大脂滴，而相反地，bat細(xì)胞包含許多較小的滴和較多數(shù)目的線粒體，所述線粒體包含鐵并使其呈現(xiàn)棕色。與wat相比，bat中的大量線粒體導(dǎo)致氧消耗的增加。因此，可基于其細(xì)胞表型來(lái)視覺(jué)地區(qū)分bat細(xì)胞和wat細(xì)胞。因此，高內(nèi)涵篩選方法用于篩選調(diào)節(jié)產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子活性的新mirna。具體地，通過(guò)經(jīng)培養(yǎng)的細(xì)胞的相差顯微術(shù)、測(cè)量細(xì)胞脂質(zhì)含量(使用油紅o染色或尼羅紅熒光染色)；線粒體含量(例如，使用lifetechnologiesmito-trackerredfm)，和/或體外氧消耗(例如，使用seahorsebioscienceextra-cellularfluxinstrument)來(lái)評(píng)估在存在或不存在mirna激動(dòng)劑或拮抗劑的情況下生長(zhǎng)的經(jīng)培養(yǎng)的人脂肪細(xì)胞和來(lái)源于間充質(zhì)干細(xì)胞的脂肪組織，持續(xù)兩周。通過(guò)靶向的q-rt-pcr、nanostring和通用rna測(cè)序來(lái)測(cè)量mrna表達(dá)。由通過(guò)靶向的western印跡和通用蛋白質(zhì)組學(xué)分析(proteomicprofiling)來(lái)測(cè)量蛋白質(zhì)表達(dá)。a.人前脂肪細(xì)胞分化成脂肪細(xì)胞。1.分化方案。為了評(píng)估m(xù)irna類似物對(duì)人前脂肪細(xì)胞分化成成熟脂肪細(xì)胞的影響，在第0天將人皮下的前脂肪細(xì)胞(來(lái)自8名女性供體的superlot0048，zenbio，nc)平板接種于96孔板上，并使其在前脂肪細(xì)胞培養(yǎng)基(dmem/ham’sf-12(1∶1，v/v)、hepes緩沖劑、胎牛血清和抗生素)中附著過(guò)夜。次日(第1天)，去除該培養(yǎng)基，并用分化培養(yǎng)基(dmem/ham’sf-12(1∶1，v/v)，100μm抗壞血酸，0.85μm胰島素，20nm亞硒酸鈉，0.2nm三-碘甲狀腺原氨酸，1μm地塞米松，100μm異丁基-甲基黃嘌呤，100nm羅格列酮和抗生素)更換。將細(xì)胞于37℃，5％co2中孵育2天。兩天后(第3天)，去除該培養(yǎng)基，并用新鮮維持培養(yǎng)基(dmem/ham’sf-12(1∶1，v/v)，100μm抗壞血酸，0.85μm胰島素，20nm亞硒酸鈉，0.2nm三-碘甲狀腺原氨酸和抗生素)更換。在第3天，用mirna類似物(dharmacon特異性miridian模擬物和發(fā)夾抑制劑)，使用轉(zhuǎn)染試劑dharmafect1轉(zhuǎn)染細(xì)胞。所有處理為一式三份。在轉(zhuǎn)染后，陰性對(duì)照為僅維持培養(yǎng)基，并且陽(yáng)性對(duì)照為具有100nmpparg激動(dòng)劑羅格列酮的維持培養(yǎng)基。2天后，去除培養(yǎng)基，并用新鮮的維持培養(yǎng)基替換。然后，每?jī)商旄鼡Q維持培養(yǎng)基，直至處理時(shí)間結(jié)束(第15天)。在處理結(jié)束時(shí)(總共培養(yǎng)15天)，將細(xì)胞加工用于表型篩選和基因型篩選。2.前脂肪細(xì)胞的轉(zhuǎn)染.使用轉(zhuǎn)染試劑促進(jìn)mirna類似物滲透進(jìn)靶細(xì)胞中。例如，本文中描述了我們用轉(zhuǎn)染試劑dharmafect1(dharmacon，co)在前脂肪細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)的轉(zhuǎn)染效率的范圍。通過(guò)兩種方式來(lái)評(píng)估轉(zhuǎn)染效率：a.用熒光mirna類似物轉(zhuǎn)染后測(cè)量細(xì)胞的表面熒光。在第15天測(cè)量第3天用dy547標(biāo)記的非靶向miridian模擬物和發(fā)夾抑制劑(100nm)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中的熒光(540激發(fā)/590發(fā)射)。如圖9所示，用熒光mirna類似物轉(zhuǎn)染的細(xì)胞具有顯著更強(qiáng)的熒光，甚至在轉(zhuǎn)染后第12天亦如此：b.對(duì)照基因表達(dá)的降低。為了確認(rèn)前脂肪細(xì)胞的成功轉(zhuǎn)染，在用gapdh特異性sirna轉(zhuǎn)染前脂肪細(xì)胞后4天(第7天)(圖10a)和12天(第15天)(圖10b)測(cè)量對(duì)照基因gapdh(“管家基因”)的表達(dá)降低。得到細(xì)胞裂解物，并使用通過(guò)細(xì)胞-至-ct試劑得到的純r(jià)na來(lái)進(jìn)行rt-pcr。在轉(zhuǎn)染后第4天和第12天觀察到gapdhmrna表達(dá)的91％和86％敲除，這兩者都是高度顯著的，如圖10a和10b所示。3.在人前脂肪細(xì)胞分化成脂肪細(xì)胞過(guò)程中的表型變化.在處理結(jié)束時(shí)(培養(yǎng)的第15天)，用油紅o對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色來(lái)評(píng)估脂質(zhì)含量。如圖11a至11f所示，在不含羅格列酮的培養(yǎng)基存在的情況下，前脂肪細(xì)胞顯示基本沒(méi)有分化成加載有脂質(zhì)的成熟脂肪細(xì)胞。在含有100nm羅格列酮的分化培養(yǎng)基的存在下保持兩天，隨后在維持培養(yǎng)基中保持12天(陰性對(duì)照)，觀察到一些分化成加載有脂質(zhì)的成熟脂肪細(xì)胞。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中100nm羅格列酮都存在的情況下(陽(yáng)性對(duì)照)，大多數(shù)細(xì)胞變成加載有脂質(zhì)的成熟脂肪細(xì)胞。例如，在25nmhsa-mir-30b模擬物存在的情況下，約一半的細(xì)胞變成加載有脂質(zhì)的成熟脂肪細(xì)胞。非靶向mirna模擬物和抑制劑示出與陰性對(duì)照相似的模式。4.在人前脂肪細(xì)胞分化成脂肪細(xì)胞過(guò)程中的基因型變化.通過(guò)rna-seq技術(shù)來(lái)進(jìn)行在人前脂肪細(xì)胞由羅格列酮或mirna類似物誘導(dǎo)分化成成熟脂肪細(xì)胞期間發(fā)生的mrna變化的作圖。小rna測(cè)序(rna-seq)是一種高通量的新一代測(cè)序平臺(tái)，其現(xiàn)在允許在不需要在先的序列或二級(jí)結(jié)構(gòu)信息的情況下對(duì)所有小rna(已知或未知)進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組寬度的作圖。從前脂肪細(xì)胞(前脂肪細(xì)胞陰性對(duì)照)和在100nm羅格列酮(分化陽(yáng)性對(duì)照)或25nmmirna模擬物或抑制劑的存在下培養(yǎng)12天的前脂肪細(xì)胞中提取rna樣品。使用illuminahi-seq2000設(shè)備進(jìn)行rna測(cè)序。將結(jié)果針對(duì)人基因組19進(jìn)行作圖(http：//genome.ucsc.edu/)。似乎在mirna類似物的存在下，相對(duì)于前脂肪細(xì)胞，313至449個(gè)mrna存在顯著差異的表達(dá)。相對(duì)于羅格列酮，顯著差異表達(dá)的基因數(shù)減少111至216個(gè)，從而提示mirna和pparg類似物之間激活脂肪細(xì)胞分化的共同通路。關(guān)于我們的83種產(chǎn)熱激活蛋白和抑制劑，其中73種的表達(dá)在羅格列酮或mirna類似物的存在下改變。在羅格列酮的存在下(圖12a)，或在mirna類似物hsa-let-7a抑制劑、hsa-mir-1模擬物、hsa-mir-19b模擬物、hsa-mir-30b模擬物或?qū)φ罩炯?xì)胞的存在下，產(chǎn)熱靶標(biāo)mrna表達(dá)的改變分別在圖12b至12f中示出。在羅格列酮或mirna類似物的存在下，還測(cè)量了ucp1、ucp2和ucp3的mrna表達(dá)的改變，如下文表18所示。表18.產(chǎn)熱mrna表達(dá)的變化：這三種解偶聯(lián)蛋白的表達(dá)水平在前脂肪細(xì)胞中低。在隔天隨培養(yǎng)基更換的100nm羅格列酮的存在下，ucp1的表達(dá)顯著升高。隨mirna類似物的ucp1mrna的升高幅度低于羅格列酮，但是我們必須記住所使用的mirna類似物濃度(25nm)，以及僅在rna提取12天前進(jìn)行了一次轉(zhuǎn)染的事實(shí)。主要發(fā)現(xiàn)的是，在羅格列酮以及mirna類似物的存在下ucp2表達(dá)大幅升高。ucp3的表達(dá)在任何條件下都沒(méi)有變化，如所預(yù)期的，其是主要在肌細(xì)胞中表達(dá)的基因。ucp1和ucp2表達(dá)的該升高說(shuō)明，施用這些mirna使得細(xì)胞分化成具有更大產(chǎn)熱潛力的脂肪細(xì)胞，因此這些mirna很可能是用于治療肥胖和另一些代謝疾病或病癥的有效藥物。此外，我們觀察了在mirna類似物的存在下前脂肪細(xì)胞培養(yǎng)期間差異表達(dá)的基因。例如在圖13中所示，作了m-a圖以顯示在維持培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的前脂肪細(xì)胞和在hsa-mir-19b模擬物的存在下生長(zhǎng)的前脂肪細(xì)胞之間mrna表達(dá)的差異。x軸是平均基因表達(dá)，并且y軸是成對(duì)之間在對(duì)數(shù)級(jí)上的差值。紅點(diǎn)是差異表達(dá)的基因(上調(diào)大于0并且下調(diào)小于0)?；尹c(diǎn)是對(duì)照和hsa-mir-19b模擬物之間沒(méi)有差異表達(dá)的基因(上調(diào)大于0并且下調(diào)小于0)。例如在圖14中所示，相對(duì)于在僅維持培養(yǎng)基培養(yǎng)的前脂肪細(xì)胞，在mirna類似物hsa-let-7a抑制劑、hsa-mir-1模擬物、hsa-mir-19b模擬物和hsa-mir-30b模擬物的存在下顯著差異表達(dá)的基因數(shù)目分別是406、382、370和433。127個(gè)基因的組被這4種mirna類似物共同上調(diào)(維恩圖，圖14)。它們不僅包括我們的83種產(chǎn)熱靶標(biāo)中的一些如aldh1a1、azgp1、cebpa、ppargc1a、ucp1和ucp2，還包括脂類代謝和脂肪細(xì)胞分化中涉及的許多基因(表19)。表19.被4種mirna類似物共同上調(diào)的127個(gè)基因的組：60個(gè)基因的組被這4種mirna類似物共同下調(diào)(維恩圖，圖15)。它們包括許多趨化因子基因以及細(xì)胞增殖中涉及的基因(表20)。表20.被4種mirna類似物共同下調(diào)的60個(gè)基因的組：actc1cenpfid1krtap2-1anlnckap2lid3mallarsicxcl1ier3mmp3atoh8cxcl2il13ra2ncaphaurkbcxcl3il6phlda1blmcxcl5il8plk1brca2cxcl6inhbappapdc1abub1e2f7iqgap3ptgs2bub1besco2kiaa1244relncasc5fam83dkif11shcbp1ccl26gabbr2kif14slc17a9cdc6grem2kif18bslc6a17cdca5gtse1kif2cthbdcdca8has1kifc1tmsl3cdh15hjurpkrt34top2ab.人白色脂肪細(xì)胞分化成褐色脂肪細(xì)胞。1.分化方案。為了評(píng)估m(xù)irna類似物對(duì)人白色脂肪細(xì)胞分化成褐色脂肪細(xì)胞的影響，在第0天將人皮下的前脂肪細(xì)胞(來(lái)自8名女性供體的superlot0048，zenbio，nc)平板接種于96孔板上，并使其在前脂肪細(xì)胞培養(yǎng)基(dmem/ham’sf-12(1∶1，v/v)、hepes緩沖劑、胎牛血清和抗生素)中附著過(guò)夜。在下一天(第1天)，去除該培養(yǎng)基，并用分化培養(yǎng)基-2(dmem/ham’sf-12(1∶1，v/v)、hepes緩沖劑、胎牛血清、生物素、泛酸鹽/酯、人胰島素、地塞米松、異丁基-甲基黃嘌呤、專利的pparg激動(dòng)劑和抗生素)更換。使細(xì)胞于37℃，5％co2中孵育7天。7天后(第7天)，用am-1脂肪細(xì)胞維持培養(yǎng)基(dmem/ham’sf-12(1∶1，v/v)、hepes緩沖劑、胎牛血清、生物素、泛酸鹽/酯、人胰島素、地塞米松和抗生素)更換部分培養(yǎng)基。使細(xì)胞于37℃，5％co2中再孵育7天。在第17天，用mirna類似物(dharmacon特異性miridian模擬物和抑制劑)，使用轉(zhuǎn)染試劑dharmafect3轉(zhuǎn)染細(xì)胞。所有處理一式三份進(jìn)行。在轉(zhuǎn)染后，陰性對(duì)照為僅維持培養(yǎng)基，并且陽(yáng)性對(duì)照為具有100nmpparg激動(dòng)劑羅格列酮的維持培養(yǎng)基。2天后，去除培養(yǎng)基，并用新鮮的維持培養(yǎng)基替換。然后，每2至3天更換維持培養(yǎng)基，直至處理持續(xù)時(shí)間結(jié)束(第30天)。在處理結(jié)束時(shí)(總共培養(yǎng)30天)，將細(xì)胞加工用于表型篩選和基因型篩選。2.脂肪細(xì)胞的轉(zhuǎn)染。使用轉(zhuǎn)染試劑以促進(jìn)mirna類似物滲透進(jìn)靶細(xì)胞中。例如，本文中描述了我們用轉(zhuǎn)染試劑dharmafect3(dharmacon，co)在脂肪細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)的轉(zhuǎn)染效率的范圍。通過(guò)兩種方式來(lái)評(píng)估轉(zhuǎn)染效率：a.用熒光mirna類似物轉(zhuǎn)染后測(cè)量細(xì)胞表面熒光。在第30天測(cè)量第17天用dy547標(biāo)記的非靶向miridian模擬物和發(fā)夾抑制劑(100nm)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中的熒光(540激發(fā)/590發(fā)射)。如圖16所示，用熒光mirna類似物轉(zhuǎn)染的細(xì)胞具有顯著更強(qiáng)的熒光，甚至在轉(zhuǎn)染后第12天亦如此。b.對(duì)照基因表達(dá)的降低。為了確認(rèn)脂肪細(xì)胞的成功轉(zhuǎn)染，在用gapdh特異性sirna進(jìn)行的dharmafect3(dharmacon，co)介導(dǎo)的脂肪細(xì)胞轉(zhuǎn)染后4天(第22天)和12天(第30天)測(cè)量對(duì)照基因gapdh(“管家基因”)的表達(dá)降低。得到細(xì)胞裂解物，并使用通過(guò)細(xì)胞-至-ct試劑得到的純r(jià)na來(lái)進(jìn)行rt-pcr。用轉(zhuǎn)染試劑dharmafect3實(shí)現(xiàn)了對(duì)成熟脂肪細(xì)胞(已知難以進(jìn)行轉(zhuǎn)染的細(xì)胞類型)的有效轉(zhuǎn)染，在轉(zhuǎn)染后第4天和第12天觀察到gapdhmrna表達(dá)的54％和71％敲除，這兩者都是高度顯著的，如圖17所示。3.將人脂肪細(xì)胞維持在培養(yǎng)物中30天的過(guò)程中表型的變化。在處理結(jié)束時(shí)(總培養(yǎng)30天)，用油紅o對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色來(lái)評(píng)估脂質(zhì)含量(圖18)。在第16天至第30天僅維持培養(yǎng)基的存在下(對(duì)照)，脂肪細(xì)胞表現(xiàn)出加載有大脂滴。在100nm羅格列酮整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中都存在的情況下(陽(yáng)性對(duì)照)，紅色染色的強(qiáng)度似乎降低了，并且脂滴看起來(lái)更小。例如，在25nmhsa-mir-30b模擬物存在的情況下，紅色染色似乎也降低了，并且脂滴看起來(lái)更小。在非靶向mirna類似物存在的情況下，未觀察到這樣的變化。用熒光尼羅紅染料測(cè)量第30天存在于成熟脂肪細(xì)胞中的脂質(zhì)的量。如圖19所示，在第15天至第30天不暴露于羅格列酮的脂肪細(xì)胞中觀察到最高熒光。在用非靶向mirna模擬物和抑制劑轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中觀察到相似的熒光水平。當(dāng)將細(xì)胞暴露于羅格列酮兩天時(shí)，熒光顯著下降，并且在第15天至第30天存在羅格列酮的情況下，熒光進(jìn)一步降低?？雌饋?lái)在受試的mirna抑制劑存在的情況下，熒光水平處于用羅格列酮2天至貫穿實(shí)驗(yàn)所觀察到的范圍內(nèi)。在mirna模擬物存在的情況下，熒光水平看起來(lái)更低，指示更低的脂質(zhì)含量。4.人成熟脂肪細(xì)胞轉(zhuǎn)染的優(yōu)化。已知成熟脂肪細(xì)胞有效轉(zhuǎn)染是難以實(shí)現(xiàn)的，我們測(cè)試了11種不同轉(zhuǎn)染試劑，并且評(píng)估了對(duì)照基因gapdh的mrna表達(dá)的降低程度。將人皮下前脂肪細(xì)胞平板接種于6孔板中，并根據(jù)上文描述的方案分化兩周。然后，根據(jù)其制造商的操作方案使用轉(zhuǎn)染試劑將靶向gapdh的mirna模擬物(50nm)引入分化的脂肪細(xì)胞。將經(jīng)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞用試劑和mirna模擬物孵育72小時(shí)，然后轉(zhuǎn)移至維持培養(yǎng)基。轉(zhuǎn)染14天后，使用gapdhrneasymini試劑盒分離rna，并且在使用每孔100ngcdna一式三份對(duì)對(duì)照基因gapdh和參考基因18s進(jìn)行rt-pcr反應(yīng)。除了在實(shí)驗(yàn)條件下可產(chǎn)生潛在細(xì)胞毒性的轉(zhuǎn)染試劑transittko和transitsiquest外，每個(gè)孔提取的rna的量非常相似(圖20)。用dharmafect1和siportneofx轉(zhuǎn)染的細(xì)胞具有顯著降低的18s表達(dá)水平，并且從rt-pcr實(shí)驗(yàn)分析中排除。在余下的7種轉(zhuǎn)染試劑分析中，經(jīng)常使用的轉(zhuǎn)染試劑lipofectaminernaimax導(dǎo)致在轉(zhuǎn)染后的第14天gapdh表達(dá)降低66％，dharmafect3和dharmafect4分別導(dǎo)致gapdh表達(dá)降低60％和75％(圖21)。5.在mirna類似物或已知的脂肪生成和/或產(chǎn)熱之激活蛋白的存在下培養(yǎng)兩周的人成熟脂肪細(xì)胞的表型變化。如上文所述，將人皮下脂肪細(xì)胞以每孔391,000個(gè)細(xì)胞的密度平板接種于6孔板中。使用dharmafect4，在第14天用以下物質(zhì)轉(zhuǎn)染這些脂肪細(xì)胞：1.以下mirna類似物中的一種(50nm)：-hsa-let-7a抑制劑(hsa-let-7a是報(bào)道的調(diào)節(jié)脂肪生成的通用mirna)-hsa-mir-1模擬物(據(jù)報(bào)道hsa-mir-1調(diào)節(jié)prdm16和ucp1)-hsa-mir-19b模擬物(hsa-mir-19b是豐富的脂肪細(xì)胞mirna，根據(jù)我們的計(jì)算機(jī)分析，預(yù)測(cè)其與我們的83種靶標(biāo)中的許多相互作用)或者-hsa-mir-30b模擬物(根據(jù)我們的計(jì)算機(jī)分析，預(yù)測(cè)hsa-mir-30b與我們的83種靶標(biāo)中的許多相互作用)2.陰性對(duì)照(模擬轉(zhuǎn)染)3.三種陽(yáng)性對(duì)照(已知改變脂肪生成和/或適應(yīng)性產(chǎn)熱的pparg激動(dòng)劑羅格列酮(100nm)，β3腎上腺素能受體激動(dòng)劑cl316,243(10μm)或甲狀腺激素三-碘甲狀腺原氨酸(10nm))。在第17天，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到維持培養(yǎng)基中，然后每2至3天更換培養(yǎng)基，直至第28天，拍攝細(xì)胞的明場(chǎng)顯微鏡圖片。如圖22所示，并對(duì)比于對(duì)照條件，在陽(yáng)性對(duì)照cl316,243和羅格列酮的存在下，以及在hsa-let-7a抑制劑、has-mir-19b和hsa-mir-30b模擬物的存在下，細(xì)胞密度增加，并且外觀“變褐”。不同試劑對(duì)細(xì)胞密度、脂質(zhì)含量、脂滴數(shù)量和大小的影響總結(jié)于表21中。表21.實(shí)施例4.通過(guò)熒光素酶活性和qrt-pcr進(jìn)行的高通量mirna靶標(biāo)篩選使用熒光素酶報(bào)告子測(cè)定構(gòu)建體的高通量篩選用于鑒定產(chǎn)熱中涉及的新mirna靶標(biāo)。熒光素酶通常用作報(bào)告子，以評(píng)估用包含在目的啟動(dòng)子控制下的熒光素酶基因的基因構(gòu)建體轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄活性。switchgeargenomics已經(jīng)建立了全基因組文庫(kù)，將超過(guò)18,000種人啟動(dòng)子和12,000種人3’utr區(qū)克隆至包含switchgear’srensp報(bào)告子盒(goclonetm)作為lightswitchtm熒光素酶測(cè)定系統(tǒng)組分的優(yōu)化的熒光素酶報(bào)告基因載體系統(tǒng)中。該熒光素酶的改進(jìn)形式極大地促進(jìn)了詳細(xì)的動(dòng)力學(xué)研究，特別是那些聚焦于抑制上的研究，否則這樣的抑制可能被報(bào)告蛋白積累而掩蓋。用switchgeargenomicgoclone系統(tǒng)，使用ucp1作為單一的產(chǎn)熱靶基因測(cè)試了多種微小rnas-一種mrna范例。為了探索多種人mirna與hela細(xì)胞和hepg2細(xì)胞中的人ucp1基因的3’utr區(qū)、5’utr區(qū)和啟動(dòng)子/增強(qiáng)子區(qū)的可能相互作用，制備了三種報(bào)告基因構(gòu)建體：1.人ucp13’utr構(gòu)建體，其包含被強(qiáng)組成型啟動(dòng)子(rpl10-prom)驅(qū)動(dòng)的報(bào)告基因以及克隆于報(bào)告基因3’utr區(qū)中的人ucp1序列2,218bp3’utr片段。將特異性mirna模擬物、抑制劑或非靶向?qū)φ諏?duì)該報(bào)告基因之活性的影響與由空的3’utr和肌動(dòng)蛋白β-3’utr的那些進(jìn)行對(duì)比，以鑒定對(duì)假定的ucp13’utr構(gòu)建體具有特異性的影響。2.人ucp1啟動(dòng)子構(gòu)建體，其包含由人ucp1序列的4,147bp5’utr片段驅(qū)動(dòng)的報(bào)告基因，所述人ucp1序列跨越轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)和覆蓋人ucp1基因序列之甲基化區(qū)和增強(qiáng)子區(qū)的上游區(qū)域。將特異性mirna模擬物、抑制劑或非靶向?qū)φ諏?duì)該報(bào)告基因之活性的影響與肌動(dòng)蛋白β啟動(dòng)子的那些進(jìn)行對(duì)比，以鑒定對(duì)假定的ucp15’utr構(gòu)建體具有特異性的影響。3.人ucp1增強(qiáng)子區(qū)構(gòu)建體，其包含由來(lái)自hsv-tk基因座的短的最小啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的報(bào)告基因以及跨越人ucp1基因序列之增強(qiáng)子區(qū)的人ucp1序列的601bp5’utr片段的。將特異性mirna模擬物、抑制劑或非靶向?qū)φ諏?duì)該報(bào)告基因活性的影響與由空的5’增強(qiáng)子區(qū)的那些進(jìn)行對(duì)比，以鑒定對(duì)假定的ucp15’增強(qiáng)子構(gòu)建體具有特異性的影響。此外，制備了mirnaxxx_3’utr構(gòu)建體。它們包含由與克隆于報(bào)告基因3’utr區(qū)的mirnaxxx靶序列完全匹配之強(qiáng)啟動(dòng)子(rpl10_prom)驅(qū)動(dòng)的報(bào)告基因。將mirna模擬物、抑制劑或非靶向?qū)φ諏?duì)該報(bào)告基因活性的影響與empty_3’utr和肌動(dòng)蛋白b_3’utr進(jìn)行對(duì)比，以確定mirna模擬物或抑制劑的活性是否可以在實(shí)驗(yàn)細(xì)胞類型中進(jìn)行被合理地檢測(cè)到。如果該細(xì)胞類型沒(méi)有目的mirna的內(nèi)源性表達(dá)，則模擬物的添加應(yīng)敲低了該報(bào)告子的活性，并且抑制劑的添加應(yīng)沒(méi)有顯著效果。如果該細(xì)胞類型具有目的mirna的內(nèi)源性高表達(dá)，則添加抑制劑應(yīng)提高該報(bào)告基因的活性，并且添加模擬物沒(méi)有顯著效果。在hela和hepg2細(xì)胞類型中，內(nèi)源mirna的表達(dá)是寬范圍的，因此，合成靶標(biāo)活性的變化很可能影響可變性。對(duì)于每種mirna候選物(總共38種)，測(cè)試以下條件：-hela細(xì)胞中的mirna模擬物(特異性)＊8種報(bào)告基因構(gòu)建體-hepg2細(xì)胞中的mirna模擬物(特異性)＊8種報(bào)告基因構(gòu)建體-hela細(xì)胞中的mirna模擬物非靶向?qū)φ眨?種報(bào)告基因構(gòu)建體-hepg2細(xì)胞中的mirna模擬物非靶向?qū)φ眨?報(bào)告基因構(gòu)建體-hela細(xì)胞中的mirna抑制劑(特異性)＊8種報(bào)告基因構(gòu)建體-hepg2細(xì)胞中的mirna抑制劑(特異性)＊8種報(bào)告基因構(gòu)建體-hela細(xì)胞中的mirna抑制劑非靶向?qū)φ眨?種報(bào)告基因構(gòu)建體-hepg2細(xì)胞中的mirna抑制劑非靶向?qū)φ眨?種報(bào)告基因構(gòu)建體對(duì)可以與ucp1序列結(jié)合的龐大的mirna列表施加10種過(guò)濾條件(除了需要與ucp13’utr區(qū)結(jié)合之外的)，以減少待測(cè)試mirna候選物的數(shù)量。這些過(guò)濾條件是，結(jié)合位點(diǎn)長(zhǎng)度、結(jié)合位點(diǎn)數(shù)目、與5’utr區(qū)的結(jié)合、具有其他mirna的染色體群、內(nèi)含子位置、擺動(dòng)、跨物種表達(dá)、與增強(qiáng)子區(qū)的結(jié)合、與甲基化區(qū)的結(jié)合以及證明與ucp1有關(guān)的實(shí)驗(yàn)證據(jù)。對(duì)滿足這些標(biāo)準(zhǔn)中至少3個(gè)的38種mirna中進(jìn)行測(cè)試(表22)。表22.在ucp1基因序列中具有假定的結(jié)合位點(diǎn)的mirna：在這些熒光素酶報(bào)告基因測(cè)定實(shí)驗(yàn)中，如果滿足特定mirna抑制劑使熒光素酶信號(hào)升高以及特定mirna模擬物使熒光素酶信號(hào)降低二者，并且抑制劑/模擬物比率≥1.5和或/p值＜0.05，則mirna候選物視為與ucp1相互作用。這些選擇標(biāo)準(zhǔn)鑒定出9種mirna(hsa-mir-19b-2-5p、ha-mir-21-5p、hsa-mir-130b-5p、hsa-mir-211、hsa-mir-325、hsa-mir-382-3p/5p、hsa-mir-543、hsa-mir-515-3p和hsa-mir-545)(表23)。還有一些勉強(qiáng)符合這些選擇標(biāo)準(zhǔn)；它們是hsa-mir-331-5p、hsa-mir-552、hsa-mir-620和hsa-mir-1179。表23.通過(guò)hela和/或hepg2細(xì)胞中的熒光素酶測(cè)定鑒定為ucp1基因表達(dá)調(diào)節(jié)子的mirna：細(xì)胞系mirnahelahsa-mir-130b-5phela+hepg2hsa-mir-19b-2-5phepg2hsa-mir-382-3p/5phelahsa-mir-515-3phelahsa-mir-543hepg2hsa-mir-545hela+hepg2hsa-mir-21-5phelahsa-mir-211-5phela+hepg2hsa-mir-325這9種選擇的mirna中，3種呈現(xiàn)與被研究的ucp1的3個(gè)區(qū)域結(jié)合(hsa-mir-21-5p、hsa-mir-211和hsa-mir-515-3p)；3種呈現(xiàn)與ucp1的2個(gè)區(qū)域結(jié)合(hsa-mir-19b-2-5p、hsa-mir-130b-5p和hsa-mir-325)，并且3種與ucp1的單個(gè)區(qū)域結(jié)合(hsa-mir-331-5p、hsa-mir-543和hsa-mir-545)。除hsa-mir-331-5p以外的所有mirna都顯示與ucp1的3’utr區(qū)結(jié)合(表24)。表24.通過(guò)熒光素酶測(cè)定鑒定為ucp1基因表達(dá)調(diào)節(jié)子的mirna：mirnaucp13′utrucp1增強(qiáng)子ucp1啟動(dòng)子1hsa-mir-21-5pxxx2hsa-mir-211xxx3hsa-mir-515-3pxxx4hsa-mir-19b-2-5pxx5hsa-mir-130b-5pxx6hsa-mir-325xx7hsa-mir-331-5px8hsa-mir-543x9hsa-mir-545x通過(guò)以下來(lái)進(jìn)行進(jìn)一步篩選：將啟動(dòng)子/3′utr文庫(kù)轉(zhuǎn)染至細(xì)胞培養(yǎng)物中的人脂肪細(xì)胞或脂肪來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞中，然后向細(xì)胞培養(yǎng)物中添加mirna試劑(例如agomir或antagomir)。在轉(zhuǎn)染并添加了mirna試劑24小時(shí)后進(jìn)行熒光素酶活性測(cè)量和mrna鑒定。為了在更長(zhǎng)的時(shí)間框架中驗(yàn)證上文記載的轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)結(jié)果，使用包含目的目的mirna試劑(來(lái)自在允許copgfp熒光標(biāo)記表達(dá)的pmirna1sbi載體中表達(dá)的mirna前體的systembiosciences(sbi)收集物)的慢病毒載體進(jìn)行慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)實(shí)驗(yàn)。具體地，根據(jù)供應(yīng)商的使用說(shuō)明，用慢病毒顆粒以1∶10的moi轉(zhuǎn)導(dǎo)包含啟動(dòng)子/3′utr文庫(kù)的細(xì)胞，并且通過(guò)facs分選gfp陽(yáng)性細(xì)胞。在幾個(gè)時(shí)間點(diǎn)(0小時(shí)、3小時(shí)和6小時(shí)；1天、4天和7天)通過(guò)taqman實(shí)時(shí)定量pcr評(píng)估對(duì)照細(xì)胞(hek293細(xì)胞)、人脂肪來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞、人皮下前脂肪細(xì)胞和人增殖皮下脂肪細(xì)胞中成熟的mirna以及它們靶向的mrna的表達(dá)水平。匯集來(lái)自轉(zhuǎn)導(dǎo)后5個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)的rna，任選地用于降低基于qrt-pcr的篩選方法的復(fù)雜性，同時(shí)保持檢測(cè)靈敏性。實(shí)施例5.蛋白質(zhì)組學(xué)分析還使用蛋白質(zhì)組學(xué)分析來(lái)鑒定產(chǎn)熱涉及的新的mirna靶標(biāo)。鳥(niǎo)槍法蛋白質(zhì)組學(xué)是使用高效液相色譜(hplc)聯(lián)合質(zhì)譜(ms)在復(fù)雜混合物中鑒定蛋白質(zhì)的方法。收獲經(jīng)mirna試劑和啟動(dòng)子/3′utr文庫(kù)轉(zhuǎn)染和轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞(如實(shí)施例4中所描述)，并使其裂解以產(chǎn)生粗制的可溶(胞質(zhì))級(jí)分和不溶(核)級(jí)分。然后通過(guò)hplc從這些級(jí)分中分離肽，并使用納電噴霧-離子化串聯(lián)ms使用同位素標(biāo)記技術(shù)silac進(jìn)行分析，以對(duì)蛋白質(zhì)豐度進(jìn)行定量。針對(duì)ensembl公開(kāi)的(release)54種人蛋白質(zhì)編碼序列數(shù)據(jù)庫(kù)，使用sequest(bioworks版本3.3.1，thermoscientific)來(lái)檢索譜。為了避免錯(cuò)過(guò)低豐度蛋白質(zhì)，還使用了靶向蛋白質(zhì)組學(xué)方法以對(duì)作為已知的脂肪生成、脂肪細(xì)胞分化和bat功能之調(diào)節(jié)子的一系列蛋白質(zhì)進(jìn)行精確定量。一些實(shí)例包括ucp1、kdm3a、prdm16、ppara、ppargc1a、cebpb、cidea、bmp7、cox7a1、sirt1、sirt3、dio2、fabp4和adipoq。經(jīng)基于elisa或基于luminex的免疫測(cè)定使用市售抗體來(lái)分析這些蛋白質(zhì)。任選地，在蛋白質(zhì)組學(xué)平臺(tái)上使用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)-質(zhì)譜來(lái)分析蛋白質(zhì)級(jí)分，借此使用lc-ms-ms精確定量產(chǎn)熱通路的僅一種蛋白質(zhì)(例如ucp1)。實(shí)施例6.特異性靶向人脂肪細(xì)胞的克隆dna適配體的開(kāi)發(fā)和表征我們使用了cell-selex技術(shù)來(lái)開(kāi)發(fā)和表征特異性識(shí)別成熟的人皮下脂肪細(xì)胞的dna適配體。使用cell-selex，通過(guò)重復(fù)擴(kuò)增和與活細(xì)胞結(jié)合來(lái)選擇識(shí)別完整細(xì)胞表面上的天然環(huán)境中處于其天然構(gòu)象的特定分子的適配體。在圖23描述的基于細(xì)胞的選擇中，可在其天然環(huán)境中直接靶向特定的已知或未知的細(xì)胞表面標(biāo)志物或膜受體，從而允許對(duì)細(xì)胞特異性適配體的直接富集。cell-selex由靶細(xì)胞的正選擇和非靶標(biāo)細(xì)胞的負(fù)選擇的組合組成。在本發(fā)明的情況下，用新鮮分離的人肝細(xì)胞進(jìn)行負(fù)選擇，用人皮下脂肪細(xì)胞的初級(jí)培養(yǎng)物來(lái)進(jìn)行正選擇。完成了從32聚體文庫(kù)中的兩輪負(fù)選擇和五輪正選擇。對(duì)分離的適配體進(jìn)行測(cè)序、合成并用6-熒光素酰胺(fam)標(biāo)記，用于結(jié)合研究。用飽和濃度(1μm)的fam綴合的適配體在室溫標(biāo)記人肝細(xì)胞(陰性細(xì)胞)和脂肪細(xì)胞(陽(yáng)性細(xì)胞)15分鐘，并通過(guò)熒光活化細(xì)胞分選(facs)來(lái)分析。如圖24所示，一些適配體(例如，適配體974)既不與脂肪細(xì)胞結(jié)合也不與肝細(xì)胞結(jié)合，一些適配體(例如，適配體975與脂肪細(xì)胞和肝細(xì)胞二者都結(jié)合，比率：2.69)，并且另一些適配體優(yōu)選與脂肪細(xì)胞結(jié)合(例如aptamers972和973，比率分別為：4.76和5.40)。這些脂肪細(xì)胞特異性的適配體的進(jìn)一步表征還在進(jìn)行中。實(shí)施例7.表型、基因型和蛋白質(zhì)組學(xué)數(shù)據(jù)集的統(tǒng)一(reconciliation)在此處將實(shí)施例3至5記載的體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)一。具體地，為了將微小rna、mrna和靶蛋白質(zhì)以及通路的初始集合進(jìn)一步精選為相關(guān)的但是可管理的靶標(biāo)數(shù)目，用網(wǎng)絡(luò)檢索和分析壓縮包(david，ingenuitysystemsipa和ariadnepathwaystudio)整合實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。本文中，用businessintelligence工具tibcospotfire來(lái)對(duì)實(shí)施例3至5中記載的體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行全局性分析。這使得能夠使mirna試劑和靶基因之間的關(guān)系可視化。實(shí)施例8.肥胖動(dòng)物模型已經(jīng)開(kāi)發(fā)并驗(yàn)證了數(shù)種肥胖動(dòng)物模型(kanasakik等，j.biomed.biotechnol.，2011：197636(2011)；speakmanj等，obesityreviews：anofficialjournaloftheinternationalassociationforthestudyofobesity，8suppl1：55-61(2007))。最常用的是瘦素信號(hào)缺陷的lepob/ob小鼠模型和leprdb/db小鼠模型，以及c57bl/6j小鼠中的高脂肪膳食模型(wangcy等，methodsinmolecularbiology，821：421-433(2012))。這種膳食誘導(dǎo)的肥胖(diet-inducedobesity，dio)模式近似地模仿了現(xiàn)代社會(huì)中的高脂肪/高密度食物的提高的可獲得性。dio小鼠模型用于體內(nèi)驗(yàn)證本文描述的mirna類似物在提高產(chǎn)熱和/或治療肥胖和另一些代謝疾病的有效性(yinh等，cellmetab.，17(2)：210-224(2013))。向dio小鼠施用以下的一種或更多種：hsa-let-7aagomir、hsa-let-7aantagomir、hsa-mir-1agomir、hsa-mir-1antagomir、hsa-mir-19bagomir、hsa-mir-19bantagomir、hsa-mir-30bagomir和hsa-mir-30bantagomir中。使用羅格列酮作為陽(yáng)性對(duì)照。在處理前和處理后測(cè)量小鼠的食物攝取、血液代謝參數(shù)、身體組成(體重、體脂肪、骨礦物質(zhì)和瘦體重(leanmass)、體脂分布、體溫、o2消耗和co2產(chǎn)生、運(yùn)動(dòng)誘導(dǎo)的產(chǎn)熱、冷誘導(dǎo)的產(chǎn)熱和靜息產(chǎn)熱。體重或體脂肪的降低或者體溫升高或者任何類型的產(chǎn)熱都指示所使用組合物的體內(nèi)有效性。實(shí)施例9.人ucp1和ucp2基因的核酸序列和轉(zhuǎn)錄物表25.人ucp1基因的1,462堿基對(duì)(bp)轉(zhuǎn)錄物enst00000262999的核酸序列(六個(gè)外顯子以大寫(xiě)字母示出)：表26.人ucp1基因(ensg00000109424)的9,371堿基對(duì)(bp)核酸序列(外顯子以黑體字示出)：＞染色體：grch37：4：141479988：141490559：-1表27.人ucp1基因的15,910堿基對(duì)(bp)核酸序列(ncbi參考序列：ng_012139.1，4號(hào)染色體上的refseqgene)：(seqidno：637)表28.人ucp2基因的2,113堿基對(duì)(bp)轉(zhuǎn)錄物enst00000310473的核酸序列(八個(gè)編碼外顯子以大寫(xiě)字母示出)：表29.人ucp2基因的15,174堿基對(duì)(bp)核酸序列(ensg00000175567)，包括5,000bp5’utr和2,000bp3’utr(八個(gè)外顯子突出顯示)：以下內(nèi)容對(duì)應(yīng)于母案申請(qǐng)中的原始權(quán)利要求書(shū)，現(xiàn)作為說(shuō)明書(shū)的一部分并入此處：1.一種調(diào)節(jié)細(xì)胞中的呼吸鏈解偶聯(lián)的方法，所述方法包括使所述細(xì)胞與調(diào)節(jié)至少一種線粒體解偶聯(lián)劑之活性的mirna試劑接觸。2.根據(jù)項(xiàng)1所述的方法，其中所述細(xì)胞是前脂肪細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、脂肪組織來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞、肝細(xì)胞、肌細(xì)胞或其前體。3.一種調(diào)節(jié)組織中的產(chǎn)熱的方法，所述方法包括使所述組織與調(diào)節(jié)至少一種線粒體解偶聯(lián)劑之活性的mirna試劑接觸。4.根據(jù)項(xiàng)3所述的方法，其中所述組織是褐色脂肪、白色脂肪、皮下脂肪組織、肝或肌肉。5.根據(jù)項(xiàng)4所述的方法，其中使所述組織與所述mirna試劑離體接觸。6.一種治療有此治療需要的人對(duì)象之肥胖的方法，所述方法包括向所述人對(duì)象施用有效量的調(diào)節(jié)至少一種線粒體解偶聯(lián)劑之活性或表達(dá)的mirna試劑。7.根據(jù)項(xiàng)6所述的方法，其中所選進(jìn)行治療的所述人對(duì)象具有肥胖的遺傳素質(zhì)或表觀遺傳素質(zhì)。8.根據(jù)前述項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述線粒體解偶聯(lián)劑是ucp1或ucp2。9.根據(jù)前述項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述mirna試劑是選自以下的mirna：hsa-mir-1-1、hsa-mir-1-2、mir-19a-b、hsa-mir-105、hsa-mir-1283、hsa-mir-129、hsa-mir-133a-1、hsa-mir-133a-2、hsa-mir-143、hsa-mir-143-5p、hsa-mir-147、hsa-mir-149、hsa-mir-199a、hsa-mir-199b、hsa-mir-200c、hsa-mir-204、hsa-mir-205、hsa-mir-206、hsa-mir-21、hsa-mir-211、hsa-mir-218、hsa-mir-218-1、hsa-mir-218-2、hsa-mir-219-2、hsa-mir-219-2-3p、hsa-mir-22、hsa-mir-22-3p、hsa-mir-22-5p、hsa-mir-24-2、hsa-mir-30a-e、hsa-mir-3177-5p、hsa-mir-325、hsa-mir-331、hsa-mir-331-5p、hsa-mir-3613-3p、hsa-mir-362、hsa-mir-362-5p、hsa-mir-3658、hsa-mir-367、hsa-mir-371、hsa-mir-371-5p、hsa-mir-377、hsa-mir-378、hsa-mir-378a-5p、hsa-mir-382、hsa-mir-383、hsa-mir-422a、hsa-mir-425、hsa-mir-455-3p、hsa-mir-455-5p、hsa-mir-491、hsa-mir-508、hsa-mir-508-5p、hsa-mir-512-1、hsa-mir-512-2、hsa-mir-515-3p、hsa-mir-519e、hsa-mir-520a、hsa-mir-543、hsa-mir-545、hsa-mir-549、hsa-mir-556和hsa-mir-568、hsa-mir-620、hsa-mir-643、hsa-mir-654-3p、hsa-mir-7a-g、hsa-mir-765、hsa-mir-871、hsa-mir-888、hsa-mir-888-3p、hsa-mir-92b、hsa-mir-93、hsa-mir-96和hsa-mir-99a。10.根據(jù)前述項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述mirna試劑是選自表1、11、13和14中記載的mirna中的mirna。11.根據(jù)前述項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述mirna試劑是選自以下的mirna的agomir或antagomir：hsa-mir-1-1、hsa-mir-1-2、mir-19a-b、hsa-mir-105、hsa-mir-1283、hsa-mir-129、hsa-mir-133a-1、hsa-mir-133a-2、hsa-mir-143、hsa-mir-143-5p、hsa-mir-147、hsa-mir-149、hsa-mir-199a、hsa-mir-199b、hsa-mir-200c、hsa-mir-204、hsa-mir-205、hsa-mir-206、hsa-mir-21、hsa-mir-211、hsa-mir-218、hsa-mir-218-1、hsa-mir-218-2、hsa-mir-219-2、hsa-mir-219-2-3p、hsa-mir-22、hsa-mir-22-3p、hsa-mir-22-5p、hsa-mir-24-2、hsa-mir-30a-e、hsa-mir-3177-5p、hsa-mir-325、hsa-mir-331、hsa-mir-331-5p、hsa-mir-3613-3p、hsa-mir-362、hsa-mir-362-5p、hsa-mir-3658、hsa-mir-367、hsa-mir-371、hsa-mir-371-5p、hsa-mir-377、hsa-mir-378、hsa-mir-378a-5p、hsa-mir-382、hsa-mir-383、hsa-mir-422a、hsa-mir-425、hsa-mir-455-3p、hsa-mir-455-5p、hsa-mir-491、hsa-mir-508、hsa-mir-508-5p、hsa-mir-512-1、hsa-mir-512-2、hsa-mir-515-3p、hsa-mir-519e、hsa-mir-520a、hsa-mir-543、hsa-mir-545、hsa-mir-549、hsa-mir-556、和hsa-mir-568、hsa-mir-620、hsa-mir-643、hsa-mir-654-3p、hsa-mir-7a-g、hsa-mir-765、hsa-mir-871、hsa-mir-888、hsa-mir-888-3p、hsa-mir-92b、hsa-mir-93、hsa-mir-96以及hsa-mir-99a。12.根據(jù)前述項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述mirna試劑是選自表1、11、13和14中記載的mirna的agomir或antagomir。13.根據(jù)前述項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述mirna試劑是選自以下的mirna的antagomir：hsa-mir-19b-2-5p、hsa-mir-21-5p、hsa-mir-130b-5p、hsa-mir-211、hsa-mir-325、hsa-mir-382-3p/5p、hsa-mir-543、hsa-mir-515-3p和hsa-mir-545。14.根據(jù)前述項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述mirna試劑是選自以下的mirna的antagomir：hsa-mir-331-5p、hsa-mir-552、hsa-mir-620和hsa-mir-1179。15.根據(jù)前述項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述mirna試劑與靶向部分連接。16.根據(jù)前述項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述靶向部分是適配體。17.根據(jù)前述項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述靶向部分將所述mirna試劑遞送至特定細(xì)胞類型或組織。18.根據(jù)前述項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述mirna試劑直接與至少一種線粒體解偶聯(lián)劑的mrna或啟動(dòng)子區(qū)結(jié)合。19.根據(jù)前述項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述mirna試劑直接與至少一種線粒體解偶聯(lián)劑之mrna的5’utr或編碼序列結(jié)合。20.根據(jù)前述項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述mirna試劑調(diào)節(jié)線粒體解偶聯(lián)蛋白的激活蛋白或阻抑蛋白的活性。21.根據(jù)項(xiàng)18所述的方法，其中所述激活蛋白或阻抑蛋白選自表2中記載的激活蛋白或阻抑蛋白。22.根據(jù)項(xiàng)20或21所述的方法，其中所述mirna試劑直接與所述激活蛋白或阻抑蛋白的mrna或啟動(dòng)子區(qū)結(jié)合。23.根據(jù)項(xiàng)20或21所述的方法，其中所述mirna試劑直接與所述激活蛋白或阻抑蛋白之mrna的5’utr或編碼序列結(jié)合。24.根據(jù)前述項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的方法，其中上調(diào)所述線粒體解偶聯(lián)蛋白的mrna或蛋白質(zhì)表達(dá)。25.根據(jù)前述項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的方法，其中上調(diào)所述線粒體解偶聯(lián)蛋白的線粒體解偶聯(lián)活性。26.一種篩選調(diào)節(jié)產(chǎn)熱的mirna試劑的方法，所述方法包括：a)提供包含人基因組的指示細(xì)胞；b)使所述指示細(xì)胞與受試mirna試劑接觸；以及c)在存在和不存在所述mirna試劑的情況下，測(cè)定所述指示細(xì)胞中的至少一種產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子的細(xì)胞活性，其中，在存在所述受試mirna試劑的情況下所述產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子活性的改變將所述受試mirna試劑鑒定為調(diào)節(jié)產(chǎn)熱的mirna試劑。27.根據(jù)項(xiàng)26所述的方法，其中所述細(xì)胞是脂肪細(xì)胞、脂肪組織來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞、肝細(xì)胞、肌細(xì)胞或其前體。28.根據(jù)項(xiàng)26所述的方法，其中在步驟(c)中測(cè)定的所述產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子的細(xì)胞活性是所述產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子的mrna表達(dá)水平、蛋白質(zhì)表達(dá)水平或線粒體解偶聯(lián)活性。29.根據(jù)前述項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子是ucp1。30.一種調(diào)節(jié)細(xì)胞中至少一種產(chǎn)熱調(diào)節(jié)子之活性的agomir或antagomir。31.根據(jù)項(xiàng)30所述的agomir或antagomir，其為選自表1、11、13和14中記載的mirna中的mirna的agomir或antagomir。32.根據(jù)項(xiàng)30所述的agomir或antagomir，其為選自以下的mirna的agomir或antagomir：hsa-mir-1-1、hsa-mir-1-2、mir-19a-b、hsa-mir-105、hsa-mir-1283、hsa-mir-129、hsa-mir-133a-1、hsa-mir-133a-2、hsa-mir-143、hsa-mir-143-5p、hsa-mir-147、hsa-mir-149、hsa-mir-199a、hsa-mir-199b、hsa-mir-200c、hsa-mir-204、hsa-mir-205、hsa-mir-206、hsa-mir-21、hsa-mir-211、hsa-mir-218、hsa-mir-218-1、hsa-mir-218-2、hsa-mir-219-2、hsa-mir-219-2-3p、hsa-mir-22、hsa-mir-22-3p、hsa-mir-22-5p、hsa-mir-24-2、hsa-mir-30a-e、hsa-mir-3177-5p、hsa-mir-325、hsa-mir-331、hsa-mir-331-5p、hsa-mir-3613-3p、hsa-mir-362、hsa-mir-362-5p、hsa-mir-3658、hsa-mir-367、hsa-mir-371、hsa-mir-371-5p、hsa-mir-377、hsa-mir-378、hsa-mir-378a-5p、hsa-mir-382、hsa-mir-383、hsa-mir-422a、hsa-mir-425、hsa-mir-455-3p、hsa-mir-455-5p、hsa-mir-491、hsa-mir-508、hsa-mir-508-5p、hsa-mir-512-1、hsa-mir-512-2、hsa-mir-515-3p、hsa-mir-519e、hsa-mir-520a、hsa-mir-543、hsa-mir-545、hsa-mir-549、hsa-mir-556和hsa-mir-568、hsa-mir-620、hsa-mir-643、hsa-mir-654-3p、hsa-mir-7a-g、hsa-mir-765、hsa-mir-871、hsa-mir-888、hsa-mir-888-3p、hsa-mir-92b、hsa-mir-93、hsa-mir-96和hsa-mir-99a。33.根據(jù)項(xiàng)30所述的agomir或antagomir，其為選自以下的mirna的antagomir：hsa-mir-19b-2-5p、hsa-mir-21-5p、hsa-mir-130b-5p、hsa-mir-211、hsa-mir-325、hsa-mir-382-3p/5p、hsa-mir-543、hsa-mir-515-3p和hsa-mir-545。34.根據(jù)項(xiàng)30所述的agomir或antagomir，其為選自以下的mirna的antagomir：hsa-mir-331-5p、hsa-mir-552、hsa-mir-620和hsa-mir-1179。35.根據(jù)項(xiàng)30至34中任一項(xiàng)所述的agomir或antagomir，其中所述agomir或antagomir與靶向部分連接。36.根據(jù)項(xiàng)35所述的agomir或antagomir，其中所述靶向部分是適配體。37.根據(jù)項(xiàng)35或36所述的agomir或antagomir，其中所述靶向部分將所述agomir或antagomir遞送至特定細(xì)胞類型或組織。38.根據(jù)項(xiàng)28至33中任一項(xiàng)所述的agomir或antagomir，其中所述agomir或antagomir直接與至少一種線粒體解偶聯(lián)劑的mrna或啟動(dòng)子區(qū)結(jié)合。39.根據(jù)項(xiàng)30至37中任一項(xiàng)所述的agomir或antagomir，其中所述agomir或antagomir直接與至少一種線粒體解偶聯(lián)劑之mrna的5’utr或編碼序列結(jié)合。40.根據(jù)項(xiàng)30至37中任一項(xiàng)所述的agomir或antagomir，其中所述agomir或antagomir調(diào)節(jié)線粒體解偶聯(lián)蛋白的激活蛋白或阻抑蛋白的活性。41.根據(jù)項(xiàng)30至37中任一項(xiàng)所述的agomir或antagomir，其中所述激活蛋白或阻抑蛋白選自表2中記載的激活蛋白或阻抑蛋白。42.根據(jù)項(xiàng)30至37中任一項(xiàng)所述的agomir或antagomir，其中所述agomir或antagomir直接與所述激活蛋白或阻抑蛋白的mrna或啟動(dòng)子區(qū)結(jié)合。43.根據(jù)項(xiàng)30至37中任一項(xiàng)所述的agomir或antagomir，其中所述agomir或antagomir直接與所述激活蛋白或阻抑蛋白之mrna的5’utr或編碼序列結(jié)合。44.一種藥物組合物，其包含選自以下的兩種或更多種mirna：hsa-let-7aagomir、hsa-let-7aantagomir、hsa-mir-1agomir、hsa-mir-1antagomir、hsa-mir-19bagomir、hsa-mir-19bantagomir、hsa-mir-30bagomir和hsa-mir-30bantagomir。45.根據(jù)項(xiàng)44所述的藥物組合物，其還包含可藥用賦形劑。46.根據(jù)項(xiàng)44所述的藥物組合物，其中所述兩種或更多種mirna由重組載體表達(dá)。47.根據(jù)項(xiàng)47所述的藥物組合物，其中所述重組載體選自dna質(zhì)粒、病毒載體和dna微環(huán)。48.根據(jù)項(xiàng)44所述的藥物組合物，其包含選自以下的兩種或更多種mirna：hsa-let-7aantagomir、hsa-mir-1agomir、hsa-mir-19bagomir和hsa-mir-30bagomir。49.根據(jù)項(xiàng)48所述的藥物組合物，其還包含可藥用賦形劑。50.根據(jù)項(xiàng)48所述的藥物組合物，其中所述兩種或更多種mirna由重組載體表達(dá)。51.根據(jù)項(xiàng)48所述的藥物組合物，其中所述重組載體選自dna質(zhì)粒、病毒載體和dna微環(huán)。52.一種誘導(dǎo)前脂肪細(xì)胞分化成脂肪細(xì)胞的方法，其包括向前脂肪細(xì)胞群施用選自以下的一種或更多種mirna：hsa-let-7aagomir、hsa-let-7aantagomir、hsa-mir-1agomir、hsa-mir-1antagomir、hsa-mir-19bagomir、hsa-mir-19bantagomir、hsa-mir-30bagomir和hsa-mir-30bantagomir。53.根據(jù)項(xiàng)52所述的方法，其中使前脂肪細(xì)胞分化成脂肪細(xì)胞的誘導(dǎo)大于當(dāng)將前脂肪細(xì)胞暴露于100nm羅格列酮兩天接著暴露于維持培養(yǎng)基時(shí)前脂肪細(xì)胞向脂肪細(xì)胞的分化。54.根據(jù)項(xiàng)52所述的方法，其中所述一種或更多種mirna選自hsa-let-7aantagomir、hsa-mir-1agomir、hsa-mir-19bagomir和hsa-mir-30bagomir。55.一種降低脂肪細(xì)胞之脂質(zhì)含量的方法，其包括向脂肪細(xì)胞群施用選自以下的一種或更多種mirna：hsa-let-7aagomir、hsa-let-7aantagomir、hsa-mir-1agomir、hsa-mir-1antagomir、hsa-mir-19bagomir、hsa-mir-19bantagomir、hsa-mir-30bagomir和hsa-mir-30bantagomir。56.根據(jù)項(xiàng)55所述的方法，其中所述脂肪細(xì)胞的脂質(zhì)含量低于暴露于100nm羅格列酮兩天隨后暴露于維持培養(yǎng)基的脂肪細(xì)胞的脂肪含量。57.根據(jù)項(xiàng)55所述的方法，其中所述脂肪細(xì)胞的脂質(zhì)含量低于在培養(yǎng)持續(xù)時(shí)間內(nèi)暴露于100nm羅格列酮之脂肪細(xì)胞的脂質(zhì)含量。58.根據(jù)項(xiàng)57所述的方法，其中所述培養(yǎng)持續(xù)時(shí)間是8天至16天。59.根據(jù)項(xiàng)58所述的方法，其中所述培養(yǎng)持續(xù)時(shí)間是10天至14天。60.根據(jù)項(xiàng)59所述的方法，其中所述培養(yǎng)持續(xù)時(shí)間是14天。61.根據(jù)項(xiàng)55所述的方法，其中所述一種或更多種mirna選自hsa-mir-1agomir、hsa-mir-19bagomir和hsa-mir-30bagomir。62.一種提高有此需要的對(duì)象之胰島素敏感性的方法，其包括向所述對(duì)象施用選自以下的一種或更多種mirna：hsa-let-7aagomir、hsa-let-7aantagomir、hsa-mir-1agomir、hsa-mir-1antagomir、hsa-mir-19bagomir和hsa-mir-19bantagomir、hsa-mir-30bagomir和hsa-mir-30bantagomir。63.根據(jù)項(xiàng)62所述的方法，其中所述對(duì)象是哺乳動(dòng)物。64.根據(jù)項(xiàng)63所述的方法，其中所述哺乳動(dòng)物是人。65.根據(jù)項(xiàng)62所述的方法，其中所述一種或更多種mirna選自：hsa-mir-1agomir、hsa-mir-19bagomir和hsa-mir-30bagomir。66.一種提高細(xì)胞中的一種或更多種解偶聯(lián)蛋白表達(dá)或活性的方法，其包括向所述細(xì)胞施用選自以下的一種或更多種mirna：hsa-let-7aantagomir、hsa-mir-1agomir、hsa-mir-19bagomir和hsa-mir-30bagomir。67.根據(jù)項(xiàng)66所述的方法，其中所述細(xì)胞選自褐色脂肪細(xì)胞、白色脂肪細(xì)胞、皮下脂肪細(xì)胞、肝細(xì)胞或者肌肉細(xì)胞。68.根據(jù)項(xiàng)66所述的方法，其中所述一種或更多種解偶聯(lián)蛋白包括ucp-1或ucp-2。69.一種引起有此需要的對(duì)象之脂肪消耗的方法，其包括向所述對(duì)象施用選自以下的一種或更多種mirna：hsa-let-7aantagomir、hsa-mir-1agomir、hsa-mir-19bagomir和hsa-mir-30bagomir。70.根據(jù)項(xiàng)69所述的方法，其中所述對(duì)象是哺乳動(dòng)物。71.根據(jù)項(xiàng)70所述的方法，其中所述哺乳動(dòng)物是人。72.選自表1、11、13和14中記載的mirna中的一種或更多種mirna的agomir或antagomir在制造用于治療肥胖的藥物中的用途。73.根據(jù)項(xiàng)72所述的用途，其中所述一種或更多種mirna選自has-let-7aantagomir、has-mir-1agomir、has-mir-19bagomir和has-mir-30bagomir。74.根據(jù)項(xiàng)72所述的用途，其中所述agomir或antagomir與靶向部分連接。75.根據(jù)項(xiàng)74所述的用途，其中所述靶向部分是適配體。76.一種用于治療肥胖的組合物，其包含選自表1、11、13和14中記載的mirna之一種或更多種mirna的agomir或antagomir。77.根據(jù)項(xiàng)76所述的組合物，其中所述一種或更多種mirna選自has-let-7aantagomir、has-mir-1agomir、has-mir-19bagomir和has-mir-30bagomir。78.根據(jù)項(xiàng)76所述的組合物，其中所述agomir或antagomir與靶向部分連接。79.根據(jù)項(xiàng)76所述的組合物，其中所述靶向部分是適配體。當(dāng)前第1頁(yè)12