本發(fā)明涉及生物防治領(lǐng)域，具體涉及一種芽孢桿菌及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：芽孢桿菌(Bacillus)因可以產(chǎn)生具有抑菌、抗腫瘤、免疫增強(qiáng)等活性的多糖、蛋白質(zhì)等物質(zhì)而成為人們研究的熱點(diǎn)。此外，芽孢桿菌還可以用于生物防治。除蘇云金芽孢桿菌產(chǎn)生的伴孢晶體可以毒殺鱗翅目的幼蟲(chóng)而被開(kāi)發(fā)為細(xì)菌殺蟲(chóng)劑外，芽孢桿菌產(chǎn)生的孢子可以長(zhǎng)久存在于自然環(huán)境中因而可以開(kāi)發(fā)為經(jīng)濟(jì)實(shí)用的生物農(nóng)藥。解淀粉芽孢桿菌(B.amyloliquefaciens)，枯草芽孢桿菌(B.subtilis)，巴氏芽孢桿菌(B.pasteurii)，蠟樣芽孢桿菌(B.cereus)和蕈狀芽孢桿菌(B.mycoides)都可以用作控制不同作物真菌疾病的生物制劑。蠟樣芽孢桿菌(B.cereus)AR156可以有效誘導(dǎo)擬南芥抑制由丁香假單胞菌番茄致病變種DC3000引起的病變；解淀粉芽孢桿菌(B.amyloliquefaciens)FLN13對(duì)從病變小麥中篩選的5種鐮刀菌都具有抗性作用，并且解淀粉芽孢桿菌FLN13與植物乳桿菌(Lactobacillusplantarum)SLG17的混合物應(yīng)用于大田中的抽穗期至開(kāi)花期小麥時(shí)可以降低小麥赤霉病指數(shù)；兩種植物內(nèi)生菌B.oryzicola菌株YC7007和YC7010T具有抗微生物、促進(jìn)水稻生長(zhǎng)和系統(tǒng)誘導(dǎo)抑制活性。但是，上述生防菌都僅對(duì)農(nóng)作物或水果疾病有防治作用，目前還沒(méi)有對(duì)引起谷類(lèi)(小麥、大麥、玉米)和蔬菜水果(黃瓜、番茄)疾病的某些植物病原菌都有抑制作用的生物制劑的報(bào)道?；谏鲜霈F(xiàn)狀，經(jīng)檢索，2013年王洪梅等研究的甲基營(yíng)養(yǎng)芽孢桿菌N5對(duì)番茄青枯病致病菌茄科勞爾氏菌(Ralstoniasolanacearum)具有抑制作用。但是，N5顯現(xiàn)如下特性：第一，N5菌落周邊不規(guī)則；第二，N5培養(yǎng)溫度為30℃；第三，N5發(fā)酵液提取的脂肽類(lèi)物質(zhì)具有抑菌作用；第四，N5發(fā)酵液用硫酸銨提取的粗蛋白僅30％～50％飽和度具有抑菌作用。2013年和2014年，黃霄等研究的甲基營(yíng)養(yǎng)芽孢桿菌BM-24對(duì)香蕉枯萎病菌尖孢鐮刀菌古巴專(zhuān)化型Fusariumoxysporumf.sp.cubense(FOC)具有抑菌活性，并且，BM-24菜籽餅發(fā)酵液對(duì)粉蕉枯萎病具有一定的防治作用，還可以促進(jìn)粉蕉苗的生長(zhǎng)。粉蕉枯萎病是制約粉蕉生產(chǎn)的主要因素，粉蕉是芭蕉屬一個(gè)不可替代的香蕉雜交栽培種，易被香蕉枯萎病菌1號(hào)生理小種侵染。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷，本發(fā)明的目的是提供一種芽孢桿菌及其應(yīng)用。本發(fā)明所涉的芽孢桿菌菌株為甲基營(yíng)養(yǎng)型芽孢桿菌(Bacillusmethylotrophicus)C1，保藏號(hào)為GDMCCNo.60046，能夠作為生防菌株起到拮抗作物病原菌中的作用；能夠作為抑制作物病原菌的脂肽類(lèi)和/或蛋白質(zhì)的發(fā)酵菌株，能夠作為促生菌株促進(jìn)作物生長(zhǎng)，能夠作為植物生長(zhǎng)素的發(fā)酵菌株本發(fā)明菌株具有廣譜抑菌活性；不產(chǎn)生對(duì)禾谷鐮刀菌具有抑制作用的脂肽類(lèi)物質(zhì)，但產(chǎn)生對(duì)對(duì)禾谷鐮刀菌具有抑制作用的蛋白質(zhì)。本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：第一方面，本發(fā)明提供一種芽孢桿菌，所述芽孢桿菌菌株為甲基營(yíng)養(yǎng)型芽孢桿菌(Bacillusmethylotrophicus)C1，保藏號(hào)為GDMCCNo.60046。優(yōu)選地，所述芽孢桿菌的16SrDNA序列如SEQIDNO.3所示。優(yōu)選地，所述芽孢桿菌的形態(tài)特征包括：短桿狀，0.5～1.7×1.6～4.3μm；革蘭氏染色呈紫色；菌落乳白色、圓形、較濕潤(rùn)、邊緣較規(guī)則。優(yōu)選地，所述芽孢桿菌的培養(yǎng)條件包括：溫度為25～46℃、pH值為4～9、裝液量為每250mL體積裝培養(yǎng)液25～200mL。更優(yōu)選地，所述芽孢桿菌的培養(yǎng)條件包括：溫度為39℃、pH值為7、裝液量為每250mL體積裝培養(yǎng)液25mL。優(yōu)選地，所述芽孢桿菌的生理生化特征包括如表2和表3所示的特性。第二方面，本發(fā)明提供一種所述芽孢桿菌作為生防菌株在拮抗作物病原菌中的應(yīng)用。優(yōu)選地，所述病原菌包括串珠鐮刀菌、禾谷鐮刀菌、瓜類(lèi)炭疽病菌、尖孢鐮刀菌、玉米彎孢菌。第三方面，本發(fā)明提供一種所述芽孢桿菌作為抑制作物病原菌的蛋白質(zhì)的發(fā)酵菌株的用途。優(yōu)選地，所述病原菌包括禾谷鐮刀菌。第四方面，本發(fā)明提供一種所述芽孢桿菌作為促生菌株在促進(jìn)作物生長(zhǎng)中的應(yīng)用。優(yōu)選地，所述作物包括玉米。第五方面，本發(fā)明提供一種所述芽孢桿菌作為植物生長(zhǎng)素發(fā)酵菌株的用途。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下的有益效果：1、從抗菌譜上來(lái)講，本發(fā)明的菌株甲基營(yíng)養(yǎng)型芽孢桿菌(Bacillusmethylotrophicus)C1是一株對(duì)禾谷鐮刀菌(Fusariumgraminearum，引起小麥、大麥赤霉病和玉米穗腐病)、串珠鐮刀菌(Fusariummoniliforme，引起玉米穗腐病、玉米彎飽菌(Curvularialunata，引起玉米葉斑點(diǎn)病)、尖孢鐮刀菌(Fusariumoxysporium，引起番茄鐮刀菌枯萎病)和瓜類(lèi)炭疽病菌(Colletotrichumorbiculare，引起黃瓜炭疽病)等5種植物病原菌都有抑制作用的菌株。2、從抗菌機(jī)制上來(lái)講，本發(fā)明甲基營(yíng)養(yǎng)型芽孢桿菌C1菌株是通過(guò)產(chǎn)生抗性蛋白對(duì)禾谷鐮刀菌的生長(zhǎng)具有抑制作用，并且，菌株C1對(duì)玉米的生長(zhǎng)具有促進(jìn)作用。3、現(xiàn)有甲基營(yíng)養(yǎng)芽孢桿菌N5(2013年王洪梅等報(bào)道)相比，本發(fā)明的菌株具備如下特性：(1)C1菌落規(guī)則、較圓，而N5菌落周邊不規(guī)則；(2)C1最適培養(yǎng)溫度為39℃，而N5培養(yǎng)溫度為30℃；(3)C1發(fā)酵液提取的脂肽類(lèi)物質(zhì)不具有抑菌作用，而N5發(fā)酵液提取的脂肽類(lèi)物質(zhì)具有抑菌作用；(4)C1發(fā)酵液用硫酸銨不同飽和度(0～30％飽和度、30％～50％飽和度和50％～80％飽和度)提取的粗蛋白質(zhì)都具有抑菌作用，而N5發(fā)酵液用硫酸銨提取的粗蛋白僅30％～50％飽和度具有抑菌作用。4、與現(xiàn)有甲基營(yíng)養(yǎng)芽孢桿菌BM-24(2013年和2014年，黃霄等)相比，本發(fā)明菌株C1抑制的尖孢鐮刀菌主要引起番茄鐮刀菌枯萎病。因此，菌株C1與BM-24抑制的病原菌不同。附圖說(shuō)明通過(guò)閱讀參照以下附圖對(duì)非限制性實(shí)施例所作的詳細(xì)描述，本發(fā)明的其它特征、目的和優(yōu)點(diǎn)將會(huì)變得更明顯：圖1拮抗菌株對(duì)病原菌的抑制；其中：A為菌株C1抑制彎孢菌；C為菌株C1抑制禾谷鐮刀菌；E為菌株C1抑制瓜類(lèi)炭疽菌；圖2菌株C1菌落形態(tài)；圖3菌株C1革蘭氏染色顯微觀察(1000×)；圖4菌株C116SrDNA序列進(jìn)化樹(shù)；圖5溫度對(duì)菌株C1的影響；圖6pH值對(duì)菌株C1的影響；圖7裝液量對(duì)菌株C1的影響；圖8菌株C1的生長(zhǎng)曲線；圖9菌株C1脂肽類(lèi)物質(zhì)抗菌活性的檢測(cè)；其中，A是檢測(cè)平板的反面，B是檢測(cè)平板的正面，A和B中:1為脂肽類(lèi)物質(zhì)，2為脂肽類(lèi)物質(zhì)，3為酸沉淀后的上清液，4為甲醇；圖10菌株C1發(fā)酵液經(jīng)硫酸銨不同飽和度分級(jí)沉淀的抑菌效果；其中，1、0～30％飽和度2、30％～50％飽和度3、50％～80％飽和度4、80％～100％飽和度；圖11菌株C1促進(jìn)玉米生長(zhǎng)的效果；圖12菌株C1分泌植物生長(zhǎng)素的測(cè)定；其中，1是對(duì)照(無(wú)菌水)，2是菌株C1。具體實(shí)施方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。以下實(shí)施例將有助于本領(lǐng)域的技術(shù)人員進(jìn)一步理解本發(fā)明，但不以任何形式限制本發(fā)明。應(yīng)當(dāng)指出的是，對(duì)本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)。這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。1材料與方法1.1供試菌株本發(fā)明提供的芽孢桿菌(Bacillus)C1菌株已在廣東省微生物菌種保藏中心(GDMCC)保藏，地址為廣州市先烈中路100號(hào)大院59號(hào)樓5樓，廣東省微生物研究所，郵政編碼510075；本發(fā)明菌株的信息為：芽孢桿菌屬(Bacillus)C1，分離自土壤；保藏號(hào)為GDMCCNo.60046；保藏日期為2016年6月13日。1.2供試病原菌玉米彎飽菌(Curvularialunata)，禾谷鐮刀菌(Fusariumgraminearum)，尖孢鐮刀菌(Fusariumoxysporium)，串珠鐮刀菌(Fusariummoniliforme)，瓜類(lèi)炭疽病菌(Colletotrichumorbiculare)。1.3培養(yǎng)基PDA培養(yǎng)基：新鮮馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂15～20g(液體不加瓊脂)蒸餾水定容至1000mL，pH自然，121℃滅菌20min。LB培養(yǎng)基：蛋白胨20g，酵母浸粉5g，氯化鈉10g，瓊脂15-20g(液體不加瓊脂)，最后蒸餾水定容至1000mL，pH7.0-7.2，121℃滅菌20min。1.4方法1.4.1供試菌拮抗真菌病原菌性能測(cè)定采用平板對(duì)峙方法，于不同PDA平板中央接不同病原菌菌絲塊(直徑為4mm)，同時(shí)在距平板中央20mm位置接供試菌菌塊(直徑為4mm)，重復(fù)4次，以只接對(duì)應(yīng)病原菌的平板為對(duì)照，28℃培養(yǎng)，當(dāng)對(duì)照組平板長(zhǎng)滿(mǎn)病原菌，測(cè)量C1拮抗處理后的病原菌菌苔直徑，并計(jì)算抑菌率＝(對(duì)照組病原菌菌苔直徑－處理組病原菌菌苔直徑)/對(duì)照組菌苔直徑×100％。1.4.2菌株C1的鑒定根據(jù)菌株C1的形態(tài)學(xué)特征、生理生化特征和16SrDNA序列分析進(jìn)行鑒定。16SrDNA基因序列以通用引物為引物進(jìn)行擴(kuò)增：27f(SEQIDNO.1)：5’-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3’；1541r(SEQIDNO.2)：5’-AAGGAGGTGATCCAGCC-3’；用BLAST程序(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/)分析序列，通過(guò)MEGAversion5.1軟件，以鄰近法建立系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)，采用1000次重復(fù)取樣進(jìn)行Bootstrap檢驗(yàn)(Kumaretal.,2004)。1.4.3不同培養(yǎng)條件對(duì)菌株C1的影響1.4.3.1溫度對(duì)菌株C1的影響：將C1菌液按0.1％的接種量接種試管中的LB培養(yǎng)基(10mL/管)，分別在4℃、11℃、18℃、25℃、32℃、39℃、46℃、53℃條件下培養(yǎng)12h，以LB培養(yǎng)基為空白對(duì)照，測(cè)定各管中菌液的OD600。重復(fù)三次。1.4.3.2pH值對(duì)菌株C1的影響：將C1菌液按0.1％的接種量接種不同pH值(4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0)的LB培養(yǎng)基(5mL/管)，150rpm、37℃搖床培養(yǎng)12h，測(cè)定各管中菌液的OD600。重復(fù)三次。1.4.3.3裝液量對(duì)菌株C1的影響：將C1菌液按0.1％的接種量接種到不同裝液量(25mL、50mL、75mL、100mL、150mL、200mL/250mL三角瓶)的LB中，150rpm、37℃搖床培養(yǎng)12h，測(cè)定各瓶中菌液的OD600。重復(fù)三次。1.4.4菌株C1生長(zhǎng)曲線的測(cè)定將C1菌液按0.1％的接種量接種LB培養(yǎng)基(5mL/管)，150rpm、37℃搖床培養(yǎng)，分別培養(yǎng)0、2、4、6、8、10、12、14、16、18h，以LB培養(yǎng)基為空白對(duì)照，測(cè)定各管中菌液的OD600。重復(fù)三次。1.4.5脂肽類(lèi)物質(zhì)的提取及抗禾谷鐮刀菌活性的檢測(cè)將菌株C1接種于液體LB培養(yǎng)基中，37℃170rpm搖床培養(yǎng)72h。8000rpm離心15min，取上清，上清液加入6mol/LHCl調(diào)pH至2.0，4℃過(guò)夜。離心收集沉淀，加入甲醇后用1mol/LNaOH調(diào)節(jié)pH至7.0，再用甲醇抽提2次，獲得脂肽類(lèi)化合物粗提物。采用牛津杯法檢測(cè)脂肽粗提物抑菌效果。取禾谷鐮刀病原菌平板，用無(wú)菌水將禾谷鐮刀孢子洗下，吸取100μL禾谷鐮刀菌孢子懸液涂布于PDA平板上，每平板放4個(gè)牛津杯，其中2個(gè)杯中加入脂肽粗提物100μL，一個(gè)杯中加入甲醇100μL，一個(gè)杯中加入上清100μL。28℃培養(yǎng)72h，觀察抑菌效果。1.4.6蛋白質(zhì)的提取及抗禾谷鐮刀菌活性的檢測(cè)將菌株C1培養(yǎng)液離心，取上清液，加入固體硫酸銨分別至四個(gè)飽和度(0～30％、30％～50％、50％～80％和80％～100％)進(jìn)行分級(jí)沉淀，得到四種蛋白質(zhì)，4℃下過(guò)夜。10000rpm、4℃離心20min。每50mL培養(yǎng)液所得沉淀用2mL濃度為20mmol/LTris-HCl(pH7.5)緩沖液懸浮。牛津杯法比較不同飽和度鹽沉淀的蛋白的抑菌活性。用無(wú)菌水將禾谷鐮刀病原菌孢子洗下，吸取100μL孢子懸液涂布于PDA平板上，每個(gè)平板放五個(gè)牛津杯，其中四個(gè)牛津杯加入不同飽和度鹽沉淀蛋白100μL，另一杯加入20mmol/LTris-HCl(pH7.5)100μL作為對(duì)照。28℃培養(yǎng)72h，觀察抑菌效果。1.4.7菌株C1對(duì)玉米種子的促生作用將菌株C1接種于200mL液體LB培養(yǎng)基中，37℃170rpm搖床培養(yǎng)72h。8000rpm離心15min，取沉淀，加入200mL無(wú)菌水混勻。配制得C1菌懸液。取重量相近的玉米種子60粒，均分到6個(gè)鋪有無(wú)菌濾紙的培養(yǎng)皿中，其中3為個(gè)實(shí)驗(yàn)組，3個(gè)為對(duì)照組。在3組實(shí)驗(yàn)組培養(yǎng)皿內(nèi)各加入600μLC1菌懸液，另外3組對(duì)照組內(nèi)各加入600μL無(wú)菌水作為對(duì)照，都置于28℃恒溫生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h。培養(yǎng)結(jié)束后，取出觀察玉米長(zhǎng)勢(shì)，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組隨機(jī)選出10粒玉米種子，分別稱(chēng)量玉米種子根的總質(zhì)量、莖的總質(zhì)量和種子總質(zhì)量，玉米根的長(zhǎng)度、莖的長(zhǎng)度。記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。1.4.8菌株C1分泌植物生長(zhǎng)素測(cè)定挑取菌株C1的單菌落分別接種到含有L-色氨酸(100mg/L)的LB液體培養(yǎng)基中，37℃、180rpm的條件下?lián)u床培養(yǎng)24h。分別取2mL菌懸液于小試管中，加入等量的Salkowski比色液；以2mL無(wú)菌水加入等量的比色液為對(duì)照，將小試管室溫避光放置30min后觀察其顏色變化，若溶液顏色變紅，說(shuō)明此菌可以分泌生長(zhǎng)素，顏色越深表示此菌分泌生長(zhǎng)素的能力越強(qiáng)。若顏色無(wú)變化，則表明該菌不能分泌生長(zhǎng)素。2結(jié)果與分析2.1供試菌拮抗真菌病原菌性能測(cè)定平板對(duì)峙法培養(yǎng)結(jié)果顯示：C1對(duì)5株病原菌都具有抑制作用，見(jiàn)圖1，抑菌率在38.63％～58.9％之間(表1)，且對(duì)禾谷鐮刀菌的抑制作用最好(抑制率為58.9％)，即C1具有廣譜抑菌活性。表1病原菌串珠鐮刀菌禾谷鐮刀菌瓜類(lèi)炭疽病菌尖孢鐮刀菌玉米彎孢菌抑制率(％)4558.940.8338.6356.432.2菌株C1的鑒定菌株C1短桿狀，0.5～1.7×1.6～4.3μm；革蘭氏染色呈紫色(見(jiàn)圖2)，屬于革蘭氏陽(yáng)性菌；菌落乳白色、圓形、較濕潤(rùn)、邊緣較規(guī)則(見(jiàn)圖3)。將菌株C1進(jìn)行生理生化特性檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)表2、表3。表2表3提取菌株C1基因組，以該基因組為模板，采用細(xì)菌16SrDNA通用引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，將PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序，其大小為1,422bp，所得序列已提交至Genebank；并將測(cè)得的序列通過(guò)BLASTN軟件進(jìn)行比對(duì)，比對(duì)結(jié)果顯示菌株C1屬于芽孢桿菌屬(Bacillus)，與甲基營(yíng)養(yǎng)芽孢桿菌(Bacillusmethylotrophicus)CBMB205基因序列EU194897的同源性高達(dá)99.93％，并在系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)中C1與甲基營(yíng)養(yǎng)芽孢桿菌EU194897聚在一起(圖4)，表明菌株C1是甲基營(yíng)養(yǎng)芽孢桿菌。2.3不同培養(yǎng)條件對(duì)菌株C1的影響2.3.1溫度對(duì)菌株C1的影響如圖5所示，C1在25℃～46℃溫度范圍內(nèi)生長(zhǎng)明顯，在39℃時(shí)生長(zhǎng)最好。2.3.2pH值對(duì)菌株C1的影響如圖6所示，在pH值4～9范圍內(nèi)，菌株C1在pH值為7時(shí)生長(zhǎng)最好。2.3.3裝液量對(duì)菌株C1的影響裝液量明顯影響菌株C1的生長(zhǎng)(圖7)，當(dāng)裝液量為25mL時(shí)菌體生長(zhǎng)最好，并且菌體的生長(zhǎng)量隨裝液量的增加呈下降趨勢(shì)。2.4菌株C1生長(zhǎng)曲線的測(cè)定菌株C1接種后搖床培養(yǎng)，0～4h處于延滯期，4～14h處于指數(shù)期，14～16h處于穩(wěn)定期，隨后菌體生長(zhǎng)進(jìn)入了衰亡期(圖8)。2.5脂肽類(lèi)物質(zhì)的提取及抗禾谷鐮刀菌活性的檢測(cè)牛津杯法檢測(cè)甲醇提取保存的脂肽類(lèi)物質(zhì)抗禾谷鐮刀菌活性。結(jié)果如圖9所示，沒(méi)有抑菌圈的形成，C1菌中的脂肽類(lèi)物質(zhì)對(duì)禾谷鐮刀菌沒(méi)有抑制作用。2.6蛋白質(zhì)的提取及抗禾谷鐮刀菌活性的檢測(cè)利用分級(jí)飽和的硫酸銨(0～30％、30％～50％、50％～80％和80％～100％)從C1發(fā)酵上清液中提取得到1、2、3、4四種蛋白質(zhì)。牛津杯法，將四種蛋白質(zhì)分別加入杯中，置于涂有禾谷鐮刀菌孢子的PDA平板上，28℃培養(yǎng)48h，取出觀察。由圖10可見(jiàn)添加的蛋白1、2、3對(duì)禾谷鐮刀菌具有明顯的抑制作用，且抑菌圈直徑分別為1.4cm、1.1cm、1.7cm，而蛋白4對(duì)禾谷鐮刀菌無(wú)抑制作用。2.7菌株C1對(duì)玉米種子的促生作用將實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組玉米種子28℃培養(yǎng)48h，取出測(cè)定、稱(chēng)量。由圖11可見(jiàn)，含有C1菌培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)組玉米長(zhǎng)勢(shì)比僅用無(wú)菌水培養(yǎng)的對(duì)照組好，測(cè)量相關(guān)數(shù)據(jù)(表4)。由表2可見(jiàn)：實(shí)驗(yàn)組的根、莖都明顯比對(duì)照組長(zhǎng)，分別是對(duì)照組的3.15倍、3.05倍；實(shí)驗(yàn)組的根、莖、種子重量也明顯比對(duì)照組的重，分別是對(duì)照組5.02倍、4.33倍、1.4倍。因此，菌株C1具有明顯的促生作用。表4玉米種子平均莖長(zhǎng)(cm)平均根長(zhǎng)(cm)根的質(zhì)量(g)莖的質(zhì)量(g)種子總質(zhì)量(g)對(duì)照組1.992.690.0650.3634.908實(shí)驗(yàn)組6.088.260.9752.0147.3452.8菌株C1分泌植物生長(zhǎng)素的定性測(cè)定由圖12可見(jiàn)，實(shí)驗(yàn)組C1與對(duì)照組無(wú)菌水進(jìn)行比較，含菌株的實(shí)驗(yàn)組呈淺紅色，表明菌株C1僅產(chǎn)生少量的生長(zhǎng)素。綜上所述，本發(fā)明獲得了1株菌株C1，即本發(fā)明的甲基營(yíng)養(yǎng)型芽孢桿菌(Bacillusmethylotrophicus)C1，保藏號(hào)為GDMCCNo.60046，對(duì)玉米彎飽菌、禾谷鐮刀菌、尖孢鐮刀菌、串珠鐮刀菌和瓜類(lèi)炭疽菌都具有抑制作用，具有廣譜抑菌活性。綜合菌株C1的形態(tài)學(xué)特征、生理生化特征和16SrDNA序列分析，確定菌株C1為甲基營(yíng)養(yǎng)芽孢桿菌。當(dāng)PDA培養(yǎng)基pH值為7、裝液量為25mL/250mL三角瓶、39℃培養(yǎng)時(shí)菌株C1生長(zhǎng)最好；生長(zhǎng)曲線測(cè)定的結(jié)果表明菌株C1在4～14h處于指數(shù)期，穩(wěn)定期較短(14～16h)。菌株C1不產(chǎn)生對(duì)禾谷鐮刀菌具有抑制作用的脂肽類(lèi)物質(zhì)，但產(chǎn)生對(duì)對(duì)禾谷鐮刀菌具有抑制作用的蛋白質(zhì)；并且，菌株C1對(duì)玉米的生長(zhǎng)具有促進(jìn)作用，與對(duì)照相比，實(shí)驗(yàn)組玉米的根長(zhǎng)、莖長(zhǎng)分別是對(duì)照組的3.15倍、3.05倍，根、莖、種子重量分別是對(duì)照組的5.02倍、4.33倍、1.4倍。但是，菌株C1僅產(chǎn)生少量的生長(zhǎng)素。以上對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施例進(jìn)行了描述。需要理解的是，本發(fā)明并不局限于上述特定實(shí)施方式，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以在權(quán)利要求的范圍內(nèi)做出各種變形或修改，這并不影響本發(fā)明的實(shí)質(zhì)內(nèi)容。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3