本發(fā)明涉及富硒技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種富硒蟲(chóng)草菌，以及該富硒蟲(chóng)草菌的培養(yǎng)方法，同時(shí)，還涉及由該富硒蟲(chóng)草菌制得的富硒黃酒及制備方法。
背景技術(shù)：
硒(Se)是人和動(dòng)物生命活動(dòng)所必需的微量元素之一，多存在于人體的肝、腎、胰、心、脾、牙釉質(zhì)和指甲中，硒在自然界中以無(wú)機(jī)硒和有機(jī)硒兩種形式存在，無(wú)機(jī)硒毒性較大，對(duì)動(dòng)植物及微生物細(xì)胞有一定的毒害作用，因此通常在食物中補(bǔ)充的硒以有機(jī)硒形式存在，目前，有機(jī)硒多是利用生物轉(zhuǎn)化的方法獲得。
冬蟲(chóng)夏草(Cordyceps sinensis)，又名中華蟲(chóng)草，主產(chǎn)于四川、西藏、云南等海拔在4000～5000米的高山草甸土中?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究結(jié)果證實(shí)，青海冬蟲(chóng)夏草中含有蟲(chóng)草酸約7％，碳水化合物約28.9％，脂肪約8.4％，蛋白質(zhì)約25％，脂肪中82.2％為不飽和脂肪酸，此外還含有蟲(chóng)草多糖、多種氨基酸、核苷及多種堿基、麥角甾醇及其氧化物、甘露醇、硬脂酸、揮發(fā)油以及多種礦物質(zhì)元素。蟲(chóng)草性甘溫平，是著名的滋補(bǔ)強(qiáng)壯藥，適用于治療肺氣虛和肺腎兩虛、改善心肌缺血、擴(kuò)張支氣管、祛痰平喘，另外對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)能起鎮(zhèn)靜、抗驚厥、降溫作用，是一味不可多得的珍貴藥材。然而，由于蟲(chóng)草藥源緊張，價(jià)格昂貴，遠(yuǎn)不能滿足國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)的需要，近年來(lái)，人們采用以天然蟲(chóng)草真菌發(fā)酵法獲得人工蟲(chóng)草菌，并研究證明，人工蟲(chóng)草菌與天然冬蟲(chóng)夏草具有相似的化學(xué)成分、藥理作用和臨床療效，且毒性比天然者小，因此蟲(chóng)草菌及相關(guān)產(chǎn)品得到不斷發(fā)展，如蟲(chóng)草菌發(fā)酵制劑、蟲(chóng)草菌發(fā)酵酒等。
利用蟲(chóng)草菌發(fā)酵液進(jìn)行硒的生物轉(zhuǎn)化、富集獲得富硒蟲(chóng)草菌，對(duì)于開(kāi)發(fā)蟲(chóng)草功能性食品、藥品具有重要意義，但由于無(wú)機(jī)硒的毒性，在蟲(chóng)草菌發(fā)酵培養(yǎng)過(guò)程，無(wú)機(jī)硒的加量會(huì)受到限制，無(wú)機(jī)硒量超出則會(huì)對(duì)菌絲體產(chǎn)生抑制或毒害作用，使菌絲生長(zhǎng)緩慢或停止，因此限制了菌絲體中有機(jī)硒的含量，影響硒的功能性發(fā)揮。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
為解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，本發(fā)明提供了一種富硒蟲(chóng)草菌的培養(yǎng)方法，可以顯著提高無(wú)機(jī)硒的加入量，以獲得高有機(jī)硒含量的富硒蟲(chóng)草菌。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的富硒蟲(chóng)草菌的培養(yǎng)方法，是在蟲(chóng)草菌的發(fā)酵培養(yǎng)過(guò)程采用兩次加入無(wú)機(jī)硒的方式進(jìn)行富硒培養(yǎng)，第一次加入無(wú)機(jī)硒的時(shí)間為蟲(chóng)草菌進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期初期，加入量為140～150μg/mL；第二次加入無(wú)機(jī)硒的時(shí)間為蟲(chóng)草菌處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期旺盛期，加入量為50～60μg/mL。
本發(fā)明通過(guò)將無(wú)機(jī)硒加入到蟲(chóng)草菌的深層液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中，利用蟲(chóng)草菌的高效生物轉(zhuǎn)化作用對(duì)微量元素硒進(jìn)行富集，以獲得富含有機(jī)硒的蟲(chóng)草菌。根據(jù)蟲(chóng)草菌菌絲體在不同生長(zhǎng)階段對(duì)硒的耐受性能、吸收性能及轉(zhuǎn)化性能等影響，確定在蟲(chóng)草菌的發(fā)酵培養(yǎng)過(guò)程采用兩次加入無(wú)機(jī)硒的方式進(jìn)行富硒培養(yǎng)，其中第一次加入無(wú)機(jī)硒是在蟲(chóng)草菌進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期初期，利用此生長(zhǎng)階段的蟲(chóng)草菌菌絲體基本適應(yīng)了發(fā)酵環(huán)境，對(duì)無(wú)機(jī)硒具有較強(qiáng)的抗性，以及菌體的富硒能力得到較好馴化的基礎(chǔ)上，加入140～150μg/mL的無(wú)機(jī)硒，使第一次獲得較大的富硒量，同時(shí)避免無(wú)機(jī)硒過(guò)量造成的毒性影響；繼續(xù)發(fā)酵培養(yǎng)，在蟲(chóng)草菌菌絲體進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期旺盛期，菌體生長(zhǎng)較快，富硒能力較佳，此時(shí)第一次加入的無(wú)機(jī)硒已基本轉(zhuǎn)化、消耗完全，可以繼續(xù)吸收、轉(zhuǎn)化無(wú)機(jī)硒，再加入50～60μg/mL的無(wú)機(jī)硒，使蟲(chóng)草菌進(jìn)一步富硒，大大促進(jìn)有機(jī)硒的生成，從而獲得高有機(jī)硒含量的富硒蟲(chóng)草菌。通過(guò)本發(fā)明的富硒培養(yǎng)方式，可以顯著提高富硒量，解決了無(wú)機(jī)硒的毒性對(duì)富硒量的限制瓶頸，進(jìn)而提高蟲(chóng)草菌的功能性。該富硒培養(yǎng)方法中，無(wú)機(jī)硒的加入時(shí)間與加入量是與蟲(chóng)草菌菌絲體的生長(zhǎng)性能相互關(guān)聯(lián)、相互對(duì)應(yīng)的，從而進(jìn)行高效富硒。
作為對(duì)上述方式的限定，所述第一次加入無(wú)機(jī)硒的時(shí)間為發(fā)酵培養(yǎng)7～8h，所述第二次加入無(wú)機(jī)硒的時(shí)間為發(fā)酵培養(yǎng)48～50h。
明確無(wú)機(jī)硒加入操作對(duì)應(yīng)的發(fā)酵時(shí)間，確定更優(yōu)的富硒培養(yǎng)過(guò)程。
作為對(duì)上述方式的限定，所述富硒蟲(chóng)草菌的培養(yǎng)方法包括以下步驟：
a、斜面培養(yǎng)蟲(chóng)草菌；
b、培養(yǎng)蟲(chóng)草菌種子液；
c、將蟲(chóng)草菌種子液進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵進(jìn)行到7～8h加入無(wú)機(jī)硒140～150μg/mL，攪拌均勻后繼續(xù)發(fā)酵培養(yǎng)，進(jìn)行到48～50h再加入無(wú)機(jī)硒50～60μg/mL，攪拌均勻后繼續(xù)發(fā)酵到結(jié)束，分離得到富硒蟲(chóng)草菌的菌絲體。
作為對(duì)上述方式的限定，所述步驟a中斜面培養(yǎng)基為馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基；所述步驟b中種子培養(yǎng)基包括葡萄糖40g/L，蛋白胨10.0～12.0g/L，磷酸二氫鉀0.5～0.7g/L，硫酸鎂0.5～0.7g/L；所述步驟c中發(fā)酵培養(yǎng)基包括葡萄糖53.0～54.0g/L，蛋白胨26.0～27.0g/L，硫酸鎂2.0～3.0g/L，磷酸二氫鉀0.5～0.7g/L；蟲(chóng)草菌種子液的接種量為每1L發(fā)酵培養(yǎng)基接種1.25～1.50mL蟲(chóng)草菌種子液；所述步驟a、b、c中蟲(chóng)草菌的培養(yǎng)溫度均為32～35℃。
按常規(guī)真菌培養(yǎng)方法，對(duì)蟲(chóng)草菌依次進(jìn)行斜面培養(yǎng)、種子培養(yǎng)和發(fā)酵培養(yǎng)，在發(fā)酵培養(yǎng)過(guò)程中進(jìn)行富硒，通過(guò)兩次加硒培養(yǎng)，顯著提高富硒量。在蟲(chóng)草菌的培養(yǎng)中，優(yōu)化各培養(yǎng)階段的培養(yǎng)基組成，利于蟲(chóng)草菌的生長(zhǎng)繁殖、及對(duì)硒的生物轉(zhuǎn)化。富硒蟲(chóng)草菌菌絲體的分離可通過(guò)常規(guī)分離手段實(shí)現(xiàn)，其中采用離心機(jī)分離操作效果較優(yōu)，以離心轉(zhuǎn)速3000～5000r/min，離心時(shí)間10～15min，重復(fù)3次進(jìn)行分離，得到菌絲體。
同時(shí)，本發(fā)明還提供了一種富硒蟲(chóng)草菌，由如上所述的富硒蟲(chóng)草菌的培養(yǎng)方法獲得，所述富硒蟲(chóng)草菌的菌絲體中硒含量為0.150～0.159mg/g。
通過(guò)本發(fā)明的培養(yǎng)方法獲得的富硒蟲(chóng)草菌中硒含量達(dá)到0.150～0.159mg/g，相較于常規(guī)有機(jī)硒含量0.061～0.094mg/g，得到顯著提高。
此外，本發(fā)明還提供了一種富硒黃酒的制備方法，包括以下步驟：
(一)、將由如上所述的富硒蟲(chóng)草菌的培養(yǎng)方法獲得的富硒蟲(chóng)草菌菌絲體進(jìn)行細(xì)胞壁破碎處理，得到富硒蟲(chóng)草菌菌漿；
(二)、配制復(fù)合蟲(chóng)草菌營(yíng)養(yǎng)液，所述復(fù)合蟲(chóng)草菌營(yíng)養(yǎng)液包括以下重量份組分：富硒蟲(chóng)草菌菌漿5份、枸杞干粉1～2份、大棗干粉2～3份、水1份。
(三)、將熟黍米、復(fù)合蟲(chóng)草菌營(yíng)養(yǎng)液與水混合，接種酒曲，進(jìn)行糖化發(fā)酵，得到富硒黃酒。
黃酒(Chinese rice wine)又稱(chēng)老酒，是以稻米、黍米、玉米、小米、小麥等谷物為主要原料，經(jīng)蒸煮、加曲、糖化發(fā)酵、壓榨、過(guò)濾、煎酒、貯存、勾兌而成的釀造酒，釀造中以麥曲或小曲做糖化發(fā)酵劑。將本發(fā)明的富硒蟲(chóng)草菌，與黃酒相結(jié)合，經(jīng)傳統(tǒng)制作工藝，釀造出一款色澤呈橙黃色、清亮透明、有光澤，且香氣協(xié)調(diào)的富硒蟲(chóng)草保健酒，其酒體豐滿協(xié)調(diào)、醇和爽口，具有黃酒和蟲(chóng)草菌的典型香氣，同時(shí)兼具了蟲(chóng)草菌抗菌、抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、降低血壓、擴(kuò)張氣管等作用和有機(jī)硒的抗腫瘤、提高機(jī)體免疫力、具有抗衰老和預(yù)防心血管疾病、克山病和骨節(jié)病等功效，是一款具有保健功能的新型富硒蟲(chóng)草黃酒。在富硒蟲(chóng)草黃酒的釀造過(guò)程，將復(fù)合蟲(chóng)草菌營(yíng)養(yǎng)液與熟黍米混合后進(jìn)行糖化發(fā)酵，一方面利用復(fù)合蟲(chóng)草菌營(yíng)養(yǎng)液有效掩蓋蟲(chóng)草菌帶來(lái)的特殊味道，另一方面通過(guò)加入枸杞、大棗得到的復(fù)合蟲(chóng)草菌營(yíng)養(yǎng)液可以增加蟲(chóng)草菌營(yíng)養(yǎng)與有機(jī)硒之間的相須、相配伍的關(guān)系，再一方面利用枸杞、大棗還可改善酒的口感和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。由于紅棗味甘性溫、歸脾胃經(jīng)，有補(bǔ)中益氣、養(yǎng)血安神、緩和藥性的功能，還能提高體內(nèi)吞噬細(xì)胞系統(tǒng)的吞噬功能，有保護(hù)肝臟、增強(qiáng)體力的作用；枸杞性平和，味甘甜，有滋補(bǔ)肝腎，強(qiáng)壯筋骨，養(yǎng)血明目之功效，尤其適宜于中老年人服用，有延年益壽的效果；將大棗和枸杞與富硒蟲(chóng)草菌菌漿復(fù)合制成富硒蟲(chóng)草菌營(yíng)養(yǎng)液，添加到黃酒中以增強(qiáng)黃酒的固本功效。
作為對(duì)上述方式的限定，所述步驟(一)中細(xì)胞壁破碎處理包括以下步驟：將富硒蟲(chóng)草菌菌絲體以1kg量加入到1L水的比例進(jìn)行調(diào)漿，然后進(jìn)行生物酶酶解，最后進(jìn)行超聲波細(xì)胞破碎；所述生物酶包括纖維素酶和蛋白酶，纖維素酶加入量為0.1～0.2g/L，蛋白酶加入量為0.1～0.2g/L，酶解時(shí)間為0.4～0.5h；超聲波細(xì)胞破碎的頻率為20KH，功率為150W，破碎時(shí)間為2.0～2.5h。
采用生物酶酶解與超聲波細(xì)胞破碎相結(jié)合的方法對(duì)蟲(chóng)草菌菌絲體進(jìn)行破壁，彌補(bǔ)單一破碎法可能帶來(lái)的破碎不完全、菌絲細(xì)胞內(nèi)有效成分不能完全釋放出來(lái)的缺點(diǎn)，以盡量完全獲得菌絲體內(nèi)營(yíng)養(yǎng)組分。
作為對(duì)上述方式的限定，所述步驟(三)中熟黍米、復(fù)合蟲(chóng)草菌營(yíng)養(yǎng)液與水的混合比例為20～25kg:1kg:18～20kg；酒曲接種量為每10kg熟黍米加入1～1.2kg酒曲；糖化發(fā)酵溫度為30～32℃；糖化發(fā)酵至糖分含量降至16.0～18.0g/L，停止發(fā)酵。
進(jìn)一步限定熟黍米與復(fù)合蟲(chóng)草菌營(yíng)養(yǎng)液混合釀酒的釀造條件，獲得性能最優(yōu)的富硒黃酒。
同時(shí)，本發(fā)明還提供了一種富硒黃酒，由如上所述的富硒黃酒的制備方法制得，所述富硒黃酒的理化指標(biāo)為酒精度(20℃)/(％Vol)16.0～18.0，氨基酸態(tài)氮2.0～3.0g/L，18種氨基酸總含量8900～9500μg/L，有機(jī)酸含量28.0～30.0g/L，硒含量10.0～11.0μg/L，蟲(chóng)草酸2.0～3.0mg/L，蟲(chóng)草素0.5～1.0mg/L。
采用本發(fā)明的釀造方法獲得的富硒黃酒，硒含量及其它功能性有效成分均得到顯著提高，從而使該富硒黃酒具有顯著的保健功效。
綜上所述，采用本發(fā)明的技術(shù)方案，在蟲(chóng)草菌發(fā)酵培養(yǎng)過(guò)程采用兩次加入無(wú)機(jī)硒的方式進(jìn)行蟲(chóng)草菌的富硒培養(yǎng)，通過(guò)限定兩次加入無(wú)機(jī)硒的時(shí)間和加入量，解決了無(wú)機(jī)硒的毒性對(duì)富硒量的限制瓶頸，顯著提高蟲(chóng)草菌的富硒量，以獲得富含有機(jī)硒的蟲(chóng)草菌。另外，本發(fā)明還將富含有機(jī)硒的蟲(chóng)草菌與大棗、枸杞復(fù)配成復(fù)合蟲(chóng)草菌營(yíng)養(yǎng)液，與熟黍米混合，通過(guò)傳統(tǒng)的黃酒釀造工藝，釀造出一款色澤呈橙黃色、清亮透明、有光澤，且香氣協(xié)調(diào)的富硒蟲(chóng)草保健酒，其酒體豐滿協(xié)調(diào)、醇和爽口，具有黃酒和蟲(chóng)草菌的典型香氣，同時(shí)兼具了蟲(chóng)草菌和有機(jī)硒的營(yíng)養(yǎng)、功效，是一款具有保健功能的新型富硒黃酒。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例一
本實(shí)施例涉及富硒蟲(chóng)草菌及其培養(yǎng)方法。
實(shí)施例1.1
本實(shí)施例涉及一種富硒蟲(chóng)草菌的培養(yǎng)，包括以下步驟：
a、斜面培養(yǎng)蟲(chóng)草菌：配制馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基作為蟲(chóng)草菌的斜面培養(yǎng)基，斜面培養(yǎng)基組分為馬鈴薯粉6.0g/L、葡萄糖20.0g/L和瓊脂20.0g/L；無(wú)菌操作下將蟲(chóng)草菌菌種接種到斜面培養(yǎng)基上，在32～35℃下培養(yǎng)48h，然后放入4℃冰箱內(nèi)保存，得到蟲(chóng)草菌斜面；
b、培養(yǎng)蟲(chóng)草菌種子液：配制種子培養(yǎng)基，組分為葡萄糖40g/L，蛋白胨10.0g/L，磷酸二氫鉀0.5g/L，硫酸鎂0.5g/L；無(wú)菌操作下取蟲(chóng)草菌斜面以0.5cm3/L的接種量接種到種子培養(yǎng)基內(nèi)，在32～35℃下靜置培養(yǎng)3天，得到蟲(chóng)草菌種子液；
c、將蟲(chóng)草菌種子液進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)：配制發(fā)酵培養(yǎng)基，組分為葡萄糖53.0g/L，蛋白胨26.0g/L，硫酸鎂2.0g/L，磷酸二氫鉀0.5g/L；無(wú)菌操作下將蟲(chóng)草菌種子液接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中，接種量為每1L發(fā)酵培養(yǎng)基接種1.25mL蟲(chóng)草菌種子液，在32～35℃下進(jìn)行搖床發(fā)酵培養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速為100r/min，當(dāng)發(fā)酵進(jìn)行到8h時(shí)向發(fā)酵液加入無(wú)機(jī)硒140μg/mL，攪拌均勻后繼續(xù)在32～35℃下發(fā)酵，進(jìn)行到48h時(shí)向發(fā)酵液再加入無(wú)機(jī)硒60μg/mL，攪拌均勻后在32～35℃下仍繼續(xù)發(fā)酵，發(fā)酵8天結(jié)束，得到富硒蟲(chóng)草菌的發(fā)酵液，用離心機(jī)進(jìn)行分離，離心機(jī)轉(zhuǎn)速3500r/min，每次離心時(shí)間15min，用清水清洗后再次離心，重復(fù)3次，得到富硒蟲(chóng)草菌菌絲體，測(cè)定該富硒蟲(chóng)草菌菌絲體中硒含量為0.150mg/g。
實(shí)施例1.2
本實(shí)施例涉及一種富硒蟲(chóng)草菌的培養(yǎng)，包括以下步驟：
a、斜面培養(yǎng)蟲(chóng)草菌：配制馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基作為蟲(chóng)草菌的斜面培養(yǎng)基，斜面培養(yǎng)基組分為馬鈴薯粉6.0g/L、葡萄糖20.0g/L和瓊脂20.0g/L；無(wú)菌操作下將蟲(chóng)草菌的菌種接種斜面培養(yǎng)基上，在32～35℃下培養(yǎng)48h，然后放入4℃冰箱內(nèi)保存，得到蟲(chóng)草菌斜面；
b、培養(yǎng)蟲(chóng)草菌種子液：配制種子培養(yǎng)基，組分為葡萄糖40g/L，蛋白胨12.0g/L，磷酸二氫鉀0.7g/L，硫酸鎂0.7g/L；無(wú)菌操作下取蟲(chóng)草菌斜面以0.5cm3/L的接種量接種到種子培養(yǎng)基內(nèi)，在32～35℃下靜置培養(yǎng)3天，得到蟲(chóng)草菌種子液；
c、將蟲(chóng)草菌種子液進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)：配制發(fā)酵培養(yǎng)基，組分為葡萄糖54.0g/L，蛋白胨27.0g/L，硫酸鎂3.0g/L，磷酸二氫鉀0.7g/L；無(wú)菌操作下將蟲(chóng)草菌種子液接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中，接種量為每1L發(fā)酵培養(yǎng)基接種1.5mL蟲(chóng)草菌種子液，在32～35℃下進(jìn)行搖床發(fā)酵培養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速為100r/min，當(dāng)發(fā)酵進(jìn)行到7h時(shí)向發(fā)酵液加入無(wú)機(jī)硒150μg/mL，攪拌均勻后繼續(xù)在32～35℃下發(fā)酵，進(jìn)行到50h時(shí)向發(fā)酵液再加入無(wú)機(jī)硒50μg/mL，攪拌均勻后在32～35℃下仍繼續(xù)發(fā)酵，發(fā)酵9天結(jié)束，得到富硒蟲(chóng)草菌的發(fā)酵液，用離心機(jī)進(jìn)行分離，離心機(jī)轉(zhuǎn)速5000r/min，每次離心時(shí)間10min，用清水清洗后再次離心，重復(fù)3次，得到富硒蟲(chóng)草菌菌絲體，測(cè)定該富硒蟲(chóng)草菌菌絲體中硒含量為0.159mg/g。
采用本發(fā)明富硒蟲(chóng)草菌的培養(yǎng)方法，得到的富硒蟲(chóng)草菌菌絲體中硒含量為0.150～0.159mg/g，富硒蟲(chóng)草菌發(fā)酵液中蟲(chóng)草菌菌絲體含量為3.91g/L。
實(shí)施例二
本實(shí)施例涉及富硒黃酒及其制備方法。
實(shí)施例2.1
本實(shí)施例涉及一種富硒黃酒的釀造，包括以下步驟：
(一)、將實(shí)施例1.1得到的富硒蟲(chóng)草菌菌絲體按1kg菌絲體加入1L水的比例進(jìn)行調(diào)漿，然后加入纖維素酶0.2g/L和蛋白酶0.1g/L進(jìn)行酶解，酶解時(shí)間為0.5h，之后使用超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)進(jìn)行細(xì)胞壁破碎處理，超聲破碎頻率20KH，功率150W，破碎時(shí)間2.5h，得到富硒蟲(chóng)草菌菌漿；
(二)、按質(zhì)量份數(shù)取富硒蟲(chóng)草菌菌漿5份、枸杞干粉1份、大棗干粉3份、水1份，混合均勻，配制復(fù)合蟲(chóng)草菌營(yíng)養(yǎng)液；
(三)、取熟黍米、復(fù)合蟲(chóng)草菌營(yíng)養(yǎng)液與水按20kg:1kg:18kg的質(zhì)量配比混合均勻，接種酒曲，進(jìn)行糖化發(fā)酵，所述酒曲接種量為每10kg熟黍米接種1kg酒曲，發(fā)酵溫度為30～32℃，待發(fā)酵酒中總糖含量降至17g/L時(shí)停止發(fā)酵，進(jìn)行壓榨、過(guò)濾，得到富硒黃酒的發(fā)酵原酒，再經(jīng)陳釀、勾兌、包裝，得到富硒黃酒產(chǎn)品。
對(duì)富硒黃酒的發(fā)酵原酒進(jìn)行檢測(cè)，其各項(xiàng)理化指標(biāo)為總糖(以葡萄糖計(jì))16.0g/L，非糖類(lèi)固形物26.2g/L，總酸(以乳酸計(jì))6.5g/L，酒精度(20℃)/(％Vol)17.5，氨基酸態(tài)氮2.1g/L，同時(shí)18種氨基酸總含量為8999μg/L，有機(jī)酸含量為28.3g/L，硒含量為10.1μg/L，蟲(chóng)草酸2.2mg/L，蟲(chóng)草素0.5mg/L。
實(shí)施例2.2
本實(shí)施例涉及一種富硒黃酒的釀造，包括以下步驟：
(一)、將實(shí)施例1.2得到的富硒蟲(chóng)草菌菌絲體按1kg菌絲體加入1L水的比例進(jìn)行調(diào)漿，然后加入纖維素酶0.1g/L和蛋白酶0.2g/L進(jìn)行酶解，酶解時(shí)間為0.4h，之后使用超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)進(jìn)行細(xì)胞壁破碎處理，超聲破碎頻率20KH，功率150W，破碎時(shí)間2.0h，得到富硒蟲(chóng)草菌菌漿；
(二)、按質(zhì)量份數(shù)取富硒蟲(chóng)草菌菌漿5份、枸杞干粉2份、大棗干粉2份、水1份，混合均勻，配制復(fù)合蟲(chóng)草菌營(yíng)養(yǎng)液；
(三)、取熟黍米、復(fù)合蟲(chóng)草菌營(yíng)養(yǎng)液與水按25kg:1kg:20kg的質(zhì)量配比混合均勻，接種酒曲，進(jìn)行糖化發(fā)酵，所述酒曲接種量為每10kg熟黍米接種1kg酒曲，發(fā)酵溫度為30～32℃，待發(fā)酵液中總糖含量降至17g/L時(shí)停止發(fā)酵，進(jìn)行壓榨、過(guò)濾，得到富硒黃酒的發(fā)酵原酒，再經(jīng)陳釀、勾兌、包裝，得到富硒黃酒產(chǎn)品。
對(duì)富硒黃酒的發(fā)酵原酒進(jìn)行檢測(cè)，其各項(xiàng)理化指標(biāo)為總糖(以葡萄糖計(jì))17.1g/L，非糖類(lèi)固形物28.2g/L，總酸(以乳酸計(jì))7.0g/L，酒精度(20℃)/(％Vol)18.5，氨基酸態(tài)氮2.5g/L，同時(shí)18種氨基酸總含量為9002μg/L，有機(jī)酸含量為28.8g/L，硒含量為11.0μg/L，蟲(chóng)草酸2.9mg/L，蟲(chóng)草素0.8mg/L。
采用本發(fā)明富硒黃酒的制備方法得到的富硒黃酒，其發(fā)酵原酒的各項(xiàng)理化指標(biāo)為總糖(以葡萄糖計(jì))16.0～18.0g/L，非糖類(lèi)固形物26.0～28.0g/L，總酸(以乳酸計(jì))6.0～8.0g/L，酒精度(20℃)/(％Vol)16.0～18.0，氨基酸態(tài)氮2.0～3.0g/L，同時(shí)18種氨基酸總含量為8900～9500μg/L，有機(jī)酸含量為28.0～30.0g/L，硒含量為10.0～11.0μg/L，蟲(chóng)草酸2.0～3.0mg/L，蟲(chóng)草素0.5～1.0mg/L。
實(shí)施例三
本實(shí)施例涉及富硒蟲(chóng)草菌培養(yǎng)過(guò)程無(wú)機(jī)硒加入方式對(duì)富硒蟲(chóng)草菌及富硒黃酒質(zhì)量的影響，以及富硒黃酒釀造條件對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量的影響。
對(duì)比例1
本實(shí)施例與實(shí)施例1.1大致相同，唯一不同之處在于無(wú)機(jī)硒的加入方式，采用在蟲(chóng)草菌種子液發(fā)酵培養(yǎng)開(kāi)始時(shí)向發(fā)酵液加入200μg/L無(wú)機(jī)硒，得到富硒蟲(chóng)草菌，其菌絲體中硒含量為0.088mg/g；將該富硒蟲(chóng)草菌用于制備富硒黃酒，釀造過(guò)程與實(shí)施例2.1相同，得到富硒黃酒的發(fā)酵原酒，其各項(xiàng)理化指標(biāo)為總糖(以葡萄糖計(jì))16.1g/L，非糖類(lèi)固形物26.5g/L，總酸(以乳酸計(jì))6.1g/L，酒精度(20℃)/(％Vol)17.5，氨基酸態(tài)氮2.0g/L，同時(shí)18種氨基酸總含量為7985μg/L，有機(jī)酸含量為28.4g/L，硒含量為4.1μg/L，蟲(chóng)草酸1.5mg/L，蟲(chóng)草素0.2mg/L。
將對(duì)比例1與實(shí)施例1.1、2.1的結(jié)果比較可見(jiàn)，對(duì)比例1得到的蟲(chóng)草菌菌絲體的富硒量遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于實(shí)施例1.1，進(jìn)一步得到的黃酒的有機(jī)硒、蟲(chóng)草酸和蟲(chóng)草素等有效物質(zhì)含量也都顯著低于實(shí)施例2.1。
對(duì)比例2
本實(shí)施例與實(shí)施例1.1大致相同，唯一不同之處在于無(wú)機(jī)硒的加入方式，采用在蟲(chóng)草菌種子液發(fā)酵培養(yǎng)開(kāi)始時(shí)向發(fā)酵液加入60μg/L無(wú)機(jī)硒，在發(fā)酵進(jìn)行到48h時(shí)再次加入140μg/L的無(wú)機(jī)硒，得到富硒蟲(chóng)草菌，其菌絲體中硒含量為0.112mg/g；將該富硒蟲(chóng)草菌用于制備富硒黃酒，釀造過(guò)程與實(shí)施例2.1相同，得到富硒黃酒的發(fā)酵原酒，其各項(xiàng)理化指標(biāo)為總糖(以葡萄糖計(jì))17.2g/L，非糖類(lèi)固形物24.3g/L，總酸(以乳酸計(jì))6.1g/L，酒精度(20℃)/(％Vol)18.1，氨基酸態(tài)氮2.1g/L，同時(shí)18種氨基酸總含量為8985μg/L，有機(jī)酸含量為28.1g/L，硒含量為6.1μg/L，蟲(chóng)草酸1.7mg/L，蟲(chóng)草素0.3mg/L。
將對(duì)比例2與對(duì)比例1、實(shí)施例1.1、2.1的結(jié)果比較可見(jiàn)，對(duì)比例1得到的蟲(chóng)草菌菌絲體的富硒量雖然較對(duì)比例1有所提高，但仍遠(yuǎn)低于實(shí)施例1.1，進(jìn)一步得到的黃酒的有機(jī)硒、蟲(chóng)草酸和蟲(chóng)草素等有效物質(zhì)含量也都顯著低于實(shí)施例2.1。
綜上所述，富硒過(guò)程無(wú)機(jī)硒的加入方式直接影響富硒效果及后續(xù)富硒產(chǎn)品的保健功效，采用本發(fā)明的富硒方法，獲得的富硒蟲(chóng)草菌能顯著提高富硒量，打破目前富硒技術(shù)的瓶頸，采用本發(fā)明的釀造方法，獲得的富硒黃酒不僅具有高富硒量，而且能獲得更多的蟲(chóng)草營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，顯著提高該黃酒的保健功效。
對(duì)比例3
本實(shí)施例與實(shí)施例2.1大致相同，唯一不同之處在于直接將蟲(chóng)草菌菌絲體與熟黍米、水混合后，接種酒曲，糖化發(fā)酵，而不是采用復(fù)合蟲(chóng)草菌營(yíng)養(yǎng)液，得到富硒黃酒的發(fā)酵原酒，該發(fā)酵原酒具有濃重的泥土氣味，黃酒香氣典型性不足，其各項(xiàng)理化指標(biāo)為總糖(以葡萄糖計(jì))17.8g/L，非糖類(lèi)固形物23.35g/L，總酸(以乳酸計(jì))6.38g/L，酒精度(20℃)/(％Vol)17.2，氨基酸態(tài)氮1.98g/L，同時(shí)18種氨基酸總含量為8256μg/L，有機(jī)酸含量為24.52g/L，硒含量為3.25μg/L，蟲(chóng)草酸1.02mg/L，蟲(chóng)草素0.152mg/L。
將對(duì)比例3與實(shí)施例2.1的結(jié)果比較可見(jiàn)，對(duì)比例3得到的黃酒具有濃重的泥土氣味，其有機(jī)硒、蟲(chóng)草酸和蟲(chóng)草素等有效物質(zhì)含量也都顯著低于實(shí)施例2.1。
對(duì)比例4
本實(shí)施例與實(shí)施例2.1大致相同，唯一不同之處在于蟲(chóng)草菌菌絲體的細(xì)胞壁破碎處理方式，僅采用超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)進(jìn)行細(xì)胞壁破碎，超聲破碎條件同實(shí)施例2.1，得到富硒黃酒的發(fā)酵原酒，其各項(xiàng)理化指標(biāo)為總糖(以葡萄糖計(jì))17.3g/L，非糖類(lèi)固形物24.2g/L，總酸(以乳酸計(jì))5.8g/L，酒精度(20℃)/(％Vol)17.6，氨基酸態(tài)氮1.9g/L，同時(shí)18種氨基酸總含量為7986μg/L，有機(jī)酸含量為24.4g/L，硒含量為5.1μg/L，蟲(chóng)草酸1.2mg/L，蟲(chóng)草素0.1mg/L。
將對(duì)比例4與實(shí)施例2.1的結(jié)果比較可見(jiàn)，對(duì)比例4得到的黃酒的有機(jī)硒、蟲(chóng)草酸和蟲(chóng)草素等有效物質(zhì)含量也都顯著低于實(shí)施例2.1。
本發(fā)明富硒黃酒的制備方法中，使用復(fù)合蟲(chóng)草菌營(yíng)養(yǎng)液與熟黍米發(fā)酵，能夠有效改善黃酒的品質(zhì)，采用生物酶與超聲破碎的方式相結(jié)合進(jìn)行菌絲體的破壁，能夠顯著提高黃酒的保健功效。