專(zhuān)利名稱(chēng)：一種制備具有抗腫瘤活性銀條多糖的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及從水蘇屬植物根狀莖中提取相關(guān)成分的技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種制備具有抗腫瘤活性銀條多糖的方法。
背景技術(shù)：
銀條(Stachys Floridana Schuttl. exBenth.)是唇形科水蘇屬一年生草本植物， 別名銀白條、銀苗、地靈、一串紫等，是原產(chǎn)于中國(guó)的傳統(tǒng)蔬菜，栽培歷史悠久，零星種植遍及全國(guó)，其中以洛陽(yáng)偃師最為有名，十九世紀(jì)曾傳入日本，后又引至歐美。其根狀莖潔白脆嫩、肉質(zhì)多汁，炒食、煮食、醬漬或制成蜜餞等，風(fēng)味獨(dú)特，營(yíng)養(yǎng)豐富，具有消腥除膩、解酒、清神、增進(jìn)食欲、幫助消化之功能。銀條含有多種礦物質(zhì)、維生素、粗蛋白、氨基酸、有機(jī)酸、糖類(lèi)、酚類(lèi)，還含有水蘇糖(其含量比國(guó)際上通用的大豆原料的含量高2-3倍)、水蘇堿、膽堿、 胡盧巴堿等生理活性物質(zhì)，具有潤(rùn)肺、補(bǔ)血、益腎之功效，可治療氣喘、肺虛咳嗽、腎虛腰痛、 淋巴結(jié)核、咯血等病癥，有軟化血管、降低血液濃度、改善血液循環(huán)的獨(dú)特作用。大量藥理及臨床研究證實(shí)，植物多糖有抗癌、抗肥胖、控制血糖、降膽固醇、降血脂和增強(qiáng)免疫功能等生理功能。但是迄今為止，國(guó)內(nèi)外對(duì)銀條多糖的研究鮮見(jiàn)于報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的旨在提供一種高效、環(huán)保的制備具有抗腫瘤活性銀條多糖的方法，實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的具體方案如下(1)取新鮮銀條洗凈，55°C烘干，粉碎，過(guò)60目篩，得顆粒均勻的粉碎物；(2)將步驟(1)制得的粉碎物，用85%乙醇80°C水浴脫脂兩次，每次2h，5000rpm、 15min離心，去掉上清液，所得殘留物自然晾干；(3)將步驟( 所得殘留物按液料比5_25mL/g，加去離子水進(jìn)行熱水浸提，提取溫度75-100°C，時(shí)間l_5h，提取次數(shù)1-4次，得提取液；(4)將步驟(3)所得提取液離心分離(離心分離條件5000rpm，15min)，取上清液；(5)將步驟(4)所得提取液在50°C條件下，減壓濃縮至合適的體積，得濃縮液，在濃縮液中加3倍無(wú)水乙醇，4°C沉淀過(guò)夜，離心取沉淀，離心分離條件5000rpm，15min ；(6)將步驟( 所得沉淀物依次用乙醇、丙酮洗滌2次，55°C烘干至恒重，即為銀條多糖。(7)將步驟(6)所得多糖用DMEM培養(yǎng)基分別配制成一系列濃度溶液，MTT法測(cè)定其對(duì)人胃癌BGC-823細(xì)胞體外增殖的抑制能力。制備的銀條多糖為淺褐色粉末，其中多糖含量68. 86%，多糖對(duì)胃癌BGC-823細(xì)胞增殖的抑制作用呈現(xiàn)劑量和時(shí)間依賴(lài)關(guān)系，當(dāng)多糖濃度為800 μ g/mL與作用7 時(shí)，最大抑制率為78. 35%。2、根據(jù)專(zhuān)利要求1所述的一種熱水提取具有抗胃癌活性的銀條多糖的方法，其特征在于所述步驟O)的液料比19mL/g，提取溫度94°C，提取時(shí)間4h，提取次數(shù)3次。制備的銀條多糖為淺褐色粉末，其中多糖含量68. 86%，多糖對(duì)胃癌BGC-823細(xì)胞增殖的抑制作用呈現(xiàn)劑量和時(shí)間依賴(lài)關(guān)系，當(dāng)多糖濃度為800 μ g/mL與作用7 時(shí)，最大抑制率為78. 35%。


圖1提取溫度(V )和液料比(mL/g)對(duì)多糖提取率的影響圖2銀條多糖對(duì)人胃癌細(xì)胞BGC-823的抑制作用(72h)
具體實(shí)施例方式下面通過(guò)實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步描述。實(shí)施例1 (1)取新鮮銀條洗凈，55°C烘干，粉碎，過(guò)60目篩，得顆粒均勻的粉碎物；(2)將步驟(1)制得的粉碎物，用85%乙醇80°C水浴脫脂兩次，每次2h，5000rpm、 15min離心，去掉上清液，所得殘留物自然晾干；(3)將步驟( 所得殘留物按液料比5_25mL/g，加去離子水進(jìn)行熱水浸提，提取溫度75-100°C，時(shí)間l_5h，提取次數(shù)1-4次，得提取液；(4)將步驟(3)所得提取液離心分離(離心分離條件5000rpm，15min)，取上清液；(5)將步驟(4)所得提取液在50°C條件下，減壓濃縮至合適的體積，得濃縮液，在濃縮液中加3倍無(wú)水乙醇，4°C沉淀過(guò)夜，離心取沉淀，離心分離條件5000rpm，15min ；(6)將步驟( 所得沉淀物依次用乙醇、丙酮洗滌2次，55°C烘干至恒重，即為銀條多糖。(7)將步驟(6)所得多糖用DMEM培養(yǎng)基分別配制成一系列濃度溶液，MTT法測(cè)定其對(duì)人胃癌BGC-823細(xì)胞體外增殖的抑制能力。制備的銀條多糖為淺褐色粉末，其中多糖含量68. 86%，多糖對(duì)胃癌BGC-823細(xì)胞增殖的抑制作用呈現(xiàn)劑量和時(shí)間依賴(lài)關(guān)系，當(dāng)多糖濃度為800 μ g/mL與作用7 時(shí)，最大抑制率為78. 35%。采用苯酚-硫酸法測(cè)定銀條提取物中多糖的含量，多糖提取率按下面公式計(jì)算多糖提取率(％ )=[多糖提取物中多糖質(zhì)量(g)/脫脂殘?jiān)|(zhì)量(g)]X100%。腫瘤抑制率(％ ) = (1-測(cè)定孔吸光度/空白孔吸光度)X 100%實(shí)施例2 制備具有抗腫瘤活性銀條多糖的提取條件優(yōu)化實(shí)驗(yàn)(1)制備具有抗腫瘤活性銀條多糖的提取條件優(yōu)化的單因素實(shí)驗(yàn)①提取溫度對(duì)銀條多糖提取率的影響提取溫度設(shè)置75、80、85、90、95和100°C六個(gè)梯度，提取時(shí)間、液料比和提取次數(shù)分別為4h、15ml/g和1次。不同提取溫度的多糖提取率見(jiàn)表1 :
權(quán)利要求
1.一種熱水浸提制備具有抗腫瘤活性的銀條多糖的方法，其特征在于包括以下操作步驟(1)取新鮮銀條洗凈，55°c烘干，粉碎，過(guò)60目篩，得顆粒均勻的粉碎物；(2)將步驟(1)制得的粉碎物，用85%乙醇80°C水浴脫脂兩次，每次ai，5000rpm、 15min離心，去掉上清液，所得殘留物自然晾干；(3)將步驟(2)所得殘留物按液料比5-25mL/g，加去離子水進(jìn)行熱水浸提，提取溫度 75-100°C，時(shí)間l_5h，提取次數(shù)1-4次，得提取液；(4)將步驟(3)所得提取液離心分離(離心分離條件5000rpm，15min)，取上清液；(5)將步驟(4)所得提取液在50°C條件下，減壓濃縮至合適的體積，得濃縮液，在濃縮液中加3倍無(wú)水乙醇，4°C沉淀過(guò)夜，離心取沉淀，離心分離條件5000rpm，15min ；(6)將步驟( 所得沉淀物依次用乙醇、丙酮洗滌2次，55°C烘干至恒重，即為銀條多糖。(7)將步驟(6)所得多糖用DMEM培養(yǎng)基分別配制成一系列濃度溶液，MTT法測(cè)定其對(duì)人胃癌BGC-823細(xì)胞體外增殖的抑制能力。制備的銀條多糖為淺褐色粉末，其中多糖含量68. 86%，多糖對(duì)胃癌BGC-823細(xì)胞增殖的抑制作用呈現(xiàn)劑量和時(shí)間依賴(lài)關(guān)系，當(dāng)多糖濃度為800 μ g/mL與作用7 時(shí)，最大抑制率為 78. 35%。
2.根據(jù)專(zhuān)利要求1所述的一種熱水提取具有抗胃癌活性的銀條多糖的方法，其特征在于所述步驟O)的液料比19mL/g，提取溫度94°C，提取時(shí)間4h，提取次數(shù)3次。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種熱水浸提制備具有抗腫瘤活性的銀條多糖的方法。該方法包括銀條烘干、粉碎→乙醇脫脂→熱水浸提→離心取上清液→堿壓濃縮→乙醇沉淀→離心取沉淀乙醇和丙酮依次洗滌→烘干至恒重，即為銀條多糖。MTT法分析銀條多糖的抗腫瘤活性，發(fā)現(xiàn)其對(duì)胃癌BGC-823細(xì)胞增殖具有顯著的抑制能力。本發(fā)明的工藝方法具有提取條件溫和、不破壞多糖結(jié)構(gòu)、成本低、對(duì)環(huán)境友好等優(yōu)點(diǎn)，制備的銀條多糖具有顯著的抗腫瘤活性，因此具有廣闊的應(yīng)用前景。
文檔編號(hào)C08B37/00GK102174117SQ201110007318
公開(kāi)日2011年9月7日 申請(qǐng)日期2011年1月14日 優(yōu)先權(quán)日2011年1月14日
發(fā)明者張佳, 徐希妍, 曾曉雄, 韓文慶, 馬麗蘋(píng) 申請(qǐng)人:南京農(nóng)業(yè)大學(xué)