專利名稱：喜樹堿類似物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新型化合物及其制備方法，具體說涉及甲硅烷基喜樹堿衍生物或類似物和這種甲硅烷基喜樹堿類似物的制備方法。
背景技術(shù)：
(20S)-喜樹堿(CPT，如下)及其衍生物是最有希望用于化療來治療實(shí)體腫瘤的化合物。見如Wall，M.E.等人，民族藥物學(xué)雜志，51，239(1996)，“喜樹堿新型抗癌藥”，Potmesil，M.和Pinedo，H.，編輯；CRC，Boca Raton，F(xiàn)L(1995)，Bonneterre，J.，Bull.Canc.，82，623(1995)；Sinha，D.K.，藥物，49，11(1995)。1996年Wall首先從一種中國植物旱蓮木(Camptotheca accuminata)提取物中分離出天然喜樹堿。Wall，M.E.等人，J.Am.Chem.Soc.，88，3888(1996)。如下所述，喜樹堿含有一稠環(huán)系統(tǒng)，通常包括與2-吡啶酮環(huán)(環(huán)D)稠合的吡咯并[3，4-b]喹啉系統(tǒng)(環(huán)ABC)，且前者還稠合于內(nèi)酯環(huán)(環(huán)E)。 (20S)-喜樹堿，CPT自左向右標(biāo)記環(huán)A-E 拓?fù)涮婵?，TPT 依立替康，IRT G1-147211C喜樹堿屬于局部異構(gòu)酶I毒物。見如Froelich-Ammo，S.J.等人，J.Biol.Chem.，270，21429(1995)。現(xiàn)有的研究有力地表明這種分子通過細(xì)胞內(nèi)酶化局部異構(gòu)酶I(一種通常在惡性細(xì)胞中過量表達(dá)的酶)，起到干擾超螺旋DNA解旋的作用。在高度復(fù)制的癌細(xì)胞中，這將引發(fā)導(dǎo)致細(xì)胞調(diào)亡和細(xì)胞程序死亡的串聯(lián)事件。見Slichenmyer，W.J.等人，J.Natl.Cancer Inst.，85，271(1993)。Pommier，Y.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，92，8861(1995)評論了在分子藥理學(xué)水平的新發(fā)展。
由于喜樹堿在生理相容性介質(zhì)中的低溶解性，使其在最初的臨床試驗(yàn)中受到限制。此外，早期通過用氫氧化鈉打開內(nèi)酯環(huán)企圖形成一種水溶性喜樹堿鈉鹽，而形成的化合物抗腫瘤活性很差。后來有報(bào)道說閉合的內(nèi)酯形式是抗腫瘤活性絕對需要的。見Wani，M.C.等人，J.Med.Chem.，23，554(1980)。最近，結(jié)構(gòu)-活性研究鑒定了具有較好的溶解性和較佳的抗腫瘤活性的類似化合物。如最近許可在美國出售的拓?fù)涮婵?topotecan)(TRT)和依立替康(irinotecan)(IRT)，而GI-147211C已進(jìn)入后期臨床試驗(yàn)。這些類似物能有效的抵抗各種頑固性實(shí)體瘤，如惡性黑色素瘤、胃癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌和結(jié)腸直腸癌，且似乎特別有希望用于治療分裂慢的癌系。見如Kingsbury，W.D.等人，J.Med.Chem.，34，98(1991)；Sawada，S.等人，Chem Pharm.Bull.，39，1446(1991)；Luzzio，M.J.等人，J.Med.Chem.，38，395(1995)；Abigerges，D.等人，J.Clin.Oncol.，13，210(1995)。另外，當(dāng)與順鉑、放療或熱療聯(lián)合治療時(shí)，還觀察到有協(xié)同或附加的效應(yīng)。見Fukuda，M.等人，Canc.Res.，56，789(1996)；Goldwasser，F(xiàn).等人，Clin.Canc.Res.，2，687(1996)；Wang，D.S.等人，Biol.Pharm.Bull.，19，354(1996)。
雖然大多數(shù)研究的重點(diǎn)是開發(fā)喜樹堿的水溶性衍生物，但最近開發(fā)出了新型制劑，如脂類絡(luò)合物、脂質(zhì)體膠囊和濕磨技術(shù)。這些制劑為用水難溶性喜樹堿進(jìn)行治療提供了新的機(jī)會。見Daoud，S.S.等人，Anti-Cancer Drug，6，83(1996)；Merisko-Liversidge，E.等人，Pharm.Res.，13，272(1996)和Pantazis，P.，Leukemia Res.，19，775(1995)。這些制劑有吸引力的特征是它們對藥物體內(nèi)分布的影響。Sugarman及其合作者最近報(bào)道了游離喜樹堿在肺實(shí)體中達(dá)到最大濃度，而脂類復(fù)合的喜樹堿在腸胃道濃度最高。這些結(jié)果對治療結(jié)腸癌提供了一個(gè)嶄新的和令人感興趣的視角。見Sugarmn，S.M.等人，Canc.Chemother.Pharmacol.，37，531(1996)。用不溶性喜樹堿類似物的另一個(gè)令人感興趣的方面是它們通常比它們的水溶性同類分子(congener)更有活性，且看似不易產(chǎn)生藥物引起的抗性，可能是因?yàn)樗鼈儾皇莗-糖蛋白多藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的底物。見Pantazis，P.，Clin.Canc.Res.，1，1235(1995)。
在本文中，新型的喜樹堿類似物將極佳的抗腫瘤活性與不同的溶解性和體內(nèi)分布特性結(jié)合，在治療各種類型癌癥中它能起治療火藥庫的關(guān)鍵作用。
由于喜樹堿及其類似物有利的生物活性，希望開發(fā)其他的喜樹堿類似物和制備喜樹堿類似物的方法。
發(fā)明概述本發(fā)明主要提供一種呈下式(1)的化合物 本發(fā)明還提供一種合成下式(2)化合物的方法 通過4+1自由基成環(huán)/環(huán)化作用，其中將前體 與下式的芳基異腈反應(yīng) R1和R2各是相同的或不同的，較佳地是氫、烷基、鏈烯基、炔基、烷氧基、芳氧基、酰氧基、-OC(O)ORd，其中Rd是烷基、氨基甲酰氧基、鹵素、羥基、硝基、氰基、疊氮基、甲?；㈦禄?、酰基(-C(O)Rf，式中Rf較佳是烷基、烷氧基、氨基或羥基)，氨基、-SRc，式中Rc是氫、?；?、烷基或芳基，或R1和R2一起形成式-O(CH2)nO-基團(tuán)，其中n代表整數(shù)1或2。
R3較佳地是H、鹵素、硝基、氨基、羥基或氰基。R2和R3也可結(jié)合在一起形成式-O(CH2)nO-基團(tuán)，其中n代表整數(shù)1或2。
R4較佳地是H、F、三烷基甲硅烷基、C1-3烷基基團(tuán)、C2-3鏈烯基、C2-3炔基或C1-3烷氧基。R5較佳地是C1-10烷基。優(yōu)選的烷基是乙基。對R5而言優(yōu)選的取代的烷基是烯丙基、炔丙基和芐基。
R6、R7和R8較佳地各自是(相同的或不同的)C1-10烷基、C2-10鏈烯基、C2-10炔基，或芳基。對R6、R7和R8而言優(yōu)選取代的烷基是-(CH2)NR9基團(tuán)，式中N是范圍在1-10的整數(shù)，R9是羥基、烷氧基、氨基、鹵素原子、氰基或硝基。對R9而言優(yōu)選的氨基包括烷基氨基和二烷基氨基。
R11較佳地是亞烷基、亞鏈烯基(alkenylene)或亞炔基(alkynylene)。R12優(yōu)選地是-CH＝CH-CH2-或-C≡C-CH2-。X優(yōu)選地是Cl、Br或I。較佳地，X是Br或I。更佳地，X是Br。
本發(fā)明還提供一種下式(2)的化合物 式中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R11的定義如上。本發(fā)明還提供一種呈上式的化合物，其中R1、R2、R3和R4中的一個(gè)不是H。本發(fā)明還提供一種呈上式的化合物，其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R11的定義如上，且式中R5是甲基、C3-10烷基、烯丙基、芐基或炔丙基。
本發(fā)明還提供一種呈下式(3)的化合物 本發(fā)明還提供一種呈下式(4)的化合物 除特別指出的以外，術(shù)語“烷基”、“芳基”和其他基團(tuán)通常指未取代的或取代的基團(tuán)。除特別指出以外，烷基是烴類基團(tuán)，且優(yōu)選的是C1-15(即有1-15個(gè)碳原子)烷基，更佳的是C1-10烷基，且可以是支鏈或非支鏈的、非環(huán)狀或環(huán)狀的。當(dāng)基團(tuán)是其他基團(tuán)上的取代基時(shí)(如烷基是烷基氨基或二烷基氨基上的取代基)，上述對烷基的定義以及其他定義也同樣適用。術(shù)語“芳基”指苯基或萘基(napthyl)。如本文所用，術(shù)語“鹵素”或“鹵”指氟、氯、溴和碘。
術(shù)語“烷氧基”指-ORd，式中Rd是烷基。術(shù)語“芳氧基”指-ORe，式中Re是芳基。術(shù)語?；?C(O)Rf。術(shù)語“鏈烯基”指直鏈或支鏈的至少有一個(gè)雙鍵的烴類基團(tuán)，較佳地含有2-15個(gè)碳原子，更佳地帶有3-10個(gè)碳原子(如-CH＝CHRg)。術(shù)語“炔基”指直鏈或支鏈的含有至少一個(gè)三鍵的烴類基團(tuán)，較佳地含有2-15個(gè)碳原子，更佳地含有3-10個(gè)碳原子(如-C≡CRh)。術(shù)語“亞烷基”、“亞鏈烯基”和“亞炔基”分別指烷基、鏈烯基和炔基的二價(jià)形式。
上述基團(tuán)可被許多不同的取代基取代，來合成保留活性的喜樹堿類似物。例如，烷基較佳地可被一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代，這些取代基包括(但不限于)芐基、苯基、烷氧基、羥基、氨基(包括，如游離的氨基、烷基氨基、二烷基氨基和芳基氨基)、鏈烯基、炔基和酰氧基。當(dāng)是氨基(-NRaRb)時(shí)，Ra和Rb較佳地各是氫、?；?、烷基或芳基。較佳地酰基(即Rf)可以被烷基、鹵代烷基(如全氟烴基)、烷氧基、氨基和羥基取代。較佳地，炔基和鏈烯基(即分別指Rg和Rh)可被一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代，這些取代基包括(但不限于)烷基、烷氧基烷基、氨基烷基和芐基。
本文所用的術(shù)語“酰氧基”指基團(tuán)-OC(O)Rd。
本文所用的術(shù)語“烷氧基羰基氧基”指基團(tuán)-OC(O)ORd。
本文所用的術(shù)語“氨基甲酰氧基”指基團(tuán)-OC(O)NRaRb。
氨基和羥基可包括本領(lǐng)域已知的保護(hù)基團(tuán)。氨基的優(yōu)選保護(hù)基團(tuán)包括叔-丁氧基羰基、甲酰基、乙酰基、芐基、對-甲氧基芐氧基羰基、三苯甲基。本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其他保護(hù)基團(tuán)公開于Greene，T.，Wuts，P.G.M.，“有機(jī)合成中的保護(hù)基團(tuán)”，Wiley(1991)，本文將其納入作為參考。
通常，R1、R2、R3、R6、R7和R8較佳地不是過度的龐大，以維持產(chǎn)生的喜樹堿類似物的活性。較佳地，R1、R2、R3、R6、R7和R8各分子量小于約250。更佳的是，R1、R2、R3、R6、R7和R8各分子量小于約200。
可將本發(fā)明的一些喜樹堿類似物制備成與無機(jī)酸如(但不限于)鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸和硝酸的鹽，來作為藥物。也可將喜樹堿類似物制成與有機(jī)酸如(但不限于)乙酸、酒石酸、延胡索酸、丁二酸、檸檬酸、甲磺酸、對-甲苯磺酸和硬脂酸的鹽。其他酸可在制備本發(fā)明化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽的過程中作為中間物。
對于純化、給藥或其他目的而言，可用堿金屬如(但不限于)氫氧化鈉或氫氧化鈣來打開E-環(huán)(內(nèi)酯環(huán))，形成E-環(huán)開環(huán)的式(1)化合物的類似物，如上述式(4)的化合物。如此得到的中間體在水中的溶解性更大，用酸處理后可純化產(chǎn)生純化形式的本發(fā)明喜樹堿類似物。
也可修飾E-環(huán)從而產(chǎn)生在水中或其他溶劑中具有不同溶解性的式(1)化合物的類似物。實(shí)現(xiàn)此目的的方法包括(但不限于)用氫氧化物或水溶性氨基打開E-環(huán)或用水溶性基團(tuán)如聚乙二醇基團(tuán)將E-環(huán)20位的羥基官能化。如此制備的類似物可作為前體藥物。換而言之，當(dāng)給予活生物時(shí)這些類似物能再生出式(1)化合物(含有閉合的E-環(huán)結(jié)構(gòu))。見Greenwald，R.B.等人，J.Med.Chem.，39，1938(1996)。
本發(fā)明的類似物高度親脂性且在體內(nèi)和體外表現(xiàn)出活性提高。另外，它們的A-環(huán)取代顯示出提高血液穩(wěn)定性。
本發(fā)明還提供治療患者的方法，所述的方法包括給予藥用有效劑量的式(1)和/或(2)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。通過常規(guī)給藥方式包括(但不限于)靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、口服、皮下、腫瘤內(nèi)、皮內(nèi)和腸胃外給藥，化合物可以例如給予患癌癥和/或白血病的患者。藥用有效量或劑量較佳地為每千克體重0.01到60mg一種式(1)和(2)的化合物。更佳的是，藥用有效量或劑量是每千克體重0.1到40mg一種式(1)和(2)的化合物。通常藥用有效量或劑量所含的一種式(1)和(2)化合物的量能有效起到抗白血病和/或抗腫瘤(抗癌)作用。含有一種式(1)和(2)活性成分或其藥學(xué)上可接受的鹽，并結(jié)合有藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑的藥物組合物也含蓋在本發(fā)明范圍中。
本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，含有任何式(1)和(2)的化合物和藥學(xué)上可接受的載體。該組合物可例如含有0.1mg到3g，較佳地為0.1mg到500mg式(1)、(2)和/或(4)的化合物，且可以制成任何適合于給藥模式的形式。
附圖簡述

圖1是制備式(1)化合物的一般合成流程示意圖。
圖2是合成(20S)-11-氟-7-三甲基甲硅烷基喜樹堿的示意圖。
圖3是合成(20S)-10-乙酰氧基-7-三甲基甲硅烷基喜樹堿和(20S)-10-羥基-7-三甲基甲硅烷基喜樹堿的示意圖。
圖4是合成(20S)-10-氨基-7-三甲基甲硅烷基喜樹堿的示意圖。
圖5是合成(20S)-10-氨基-11-氟-7-三甲基甲硅烷基喜樹堿的示意圖。
圖6是合成新型依立替康類似物的示意圖。
圖7是三種代表性式(2)甲硅烷基喜樹堿類似物的示意圖。
圖8是合成炔丙基溴前體的示意圖。
圖9是合成式(3)基前體的示意圖。
圖10是圖9的自由基前體與三種異腈反應(yīng)的示意圖。
圖11是合成圖(7)代表性甲硅烷基喜樹堿類似物的最后步驟的示意圖。
圖12是1μM(20S)-7-[(2-三甲基甲硅烷基)乙基]喜樹堿、7-TMSEt CPT、(36c)(DB-172)的激發(fā)和發(fā)射熒光光譜。
圖13是1μM(20S)-10-氨基-7-[(2-三甲基甲硅烷基)乙基]喜樹堿、10-NH2-7-TMSEt CPT(DB-173)的發(fā)射熒光光譜。
圖14是1μM(20S)-10-羥基-7-[(2-三甲基甲硅烷基)乙基]喜樹堿、10-OH-7-TMSEt CPT(DB-174)的發(fā)射熒光光譜。
圖15是1μM(20S)-10-羥基-7-(叔-丁基二甲基甲硅烷基)乙基]喜樹堿、10-OH-7-TBS CPT(DB-67)，在乙醇、0.29M DMPG和PBS中的發(fā)射熒光光譜。
圖16是喜樹堿類似物與DMPC平衡結(jié)合的示意圖。
圖17是本發(fā)明的高度親脂性喜樹堿類似物與DMPC平衡結(jié)合的示意圖。
圖18是本發(fā)明的高度親脂性喜樹堿類似物與DMPG平衡結(jié)合的示意圖。
圖19是本發(fā)明的高度親脂性喜樹堿類似物與DMPC小單層(unilamellar)微泡體(SUVs)在37℃結(jié)合的雙重-倒數(shù)圖。
圖20是本發(fā)明的高度親脂性喜樹堿類似物與DMPG SUVs在37℃結(jié)合的雙重-倒數(shù)圖。
圖21是37℃在pH7.4的PBS緩沖液中DB-172的穩(wěn)定性示意圖。
圖22是DB-172熒光強(qiáng)度與時(shí)間和藥物濃度的相關(guān)性示意圖。
圖23是DB-172熒光強(qiáng)度與時(shí)間和濃度的相關(guān)性示意圖。
圖24是羧化物形式DB-172的總熒光強(qiáng)度與時(shí)間和pH的相關(guān)性示意圖。
圖25是本發(fā)明幾種喜樹堿類似物的總熒光強(qiáng)度與時(shí)間的相關(guān)性示意圖。
圖26是磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)和人血液中本發(fā)明幾種喜樹堿類似物的藥物穩(wěn)定性示意圖。
圖27是在PBS、全血和PBS/人血清白蛋白(HSA)中本發(fā)明的幾種喜樹堿類似物的藥物穩(wěn)定性示意圖。
圖28是口服后DB-67的血漿濃度示意圖。
發(fā)明詳述化合物在式(1)和(2)化合物中，那些在E-環(huán)20位具有(S)-構(gòu)型的化合物在藥用中是優(yōu)選的。
R1和R2較佳地各是(相同的或不同的)H、羥基、鹵素、氨基、硝基、氰基、C1-3烷基、C1-3全鹵烷基、C1-3鏈烯基、C1-3炔基、C1-3烷氧基、C1-3氨基烷基、C1-3烷基氨基、C1-3雙烷基氨基，或R1和R2一起形成式-O(CH2)nO-基團(tuán)，其中n代表整數(shù)1或2。更佳的是，R1和R2各是(相同的或不同的)H、甲基、氨基、硝基、氰基、羥基、羥甲基、甲基氨基、二甲基氨基、乙基氨基、二乙基氨基、氨基甲基、甲基氨基甲基、二甲基氨基甲基等。
較佳地R3是F、氨基或羥基。較佳地，R4是H、三烷基甲硅烷基或F。較佳地R5是乙基。較佳地，R6、R7和R8各是(相同的或不同的)C1-6烷基、苯基或-(CH2)NR10基團(tuán)，其中N是1-6之間的整數(shù)，R10是鹵素或氰基。
制備方法可按圖(1)所示的一般合成流程制備本發(fā)明的式(1)化合物。在圖(1)的合成流程中，首先用炔丙基衍生物(3)將碘代吡啶酮(2)N-烷基化，產(chǎn)生自由基前體(4)。然后用芳基異腈讓自由基前體(4)經(jīng)歷串聯(lián)式自由基反應(yīng)，生成產(chǎn)物(1)。N-烷基化反應(yīng)在如下優(yōu)化條件下進(jìn)行。見Curran，D.P.等人，TetrahedronLett.，36，8917(1995)，本文將其納入作為參考。碘代吡啶酮(2)的合成和串聯(lián)式自由基反應(yīng)的條件先前已有報(bào)道。用適當(dāng)?shù)募坠柰榛噭㏑6R7R8SiX將炔丙醇的雙陰離子進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)甲硅烷基化，然后將炔丙醇轉(zhuǎn)化成離去基團(tuán)如溴、碘或磺酸鹽，從而易制備出炔丙基化試劑(3)。見Curran，D.F.等人，Angew.Chem.Int.Ed.Engl.，34，2683(1995)本文將其納入作為參考，和1995年5月8日遞交的美國專利申請NO.08,436,799，本文將其納入作為參考。
通常，在自由基串聯(lián)式反應(yīng)中可用各種試劑，包括(但不限于)六甲基二錫、六甲基乙硅烷、或四(三甲基甲硅烷基)甲硅烷。該反應(yīng)的能量來源是太陽燈或紫外燈。較佳地將溫度設(shè)在約25-150℃。更佳地將溫度設(shè)置在約70℃。除對自由基串聯(lián)式反應(yīng)是惰性的溶劑以外，對溶劑的選擇一般沒有限制。優(yōu)選的溶劑包括苯、甲苯、乙腈、THF和叔-丁醇。同樣對炔烴和異腈上的取代基的選擇范圍也非常廣，因?yàn)榉磻?yīng)條件很溫和。
圖2顯示了合成(20S)-11-氟-7-三甲基甲硅烷基喜樹堿(12)的一般合成流程的實(shí)例。這種合成流程存在的問題是當(dāng)芳基異腈的兩個(gè)鄰位都可能發(fā)生環(huán)化時(shí)，對自由基串聯(lián)式反應(yīng)的區(qū)域選擇性的控制(即在式(1)最終化合物中R4是H)。這個(gè)問題的一種解決方案是在芳基異腈上引入三甲基甲硅烷基(如3-氟-2-三甲基甲硅烷基苯基異腈(9))。三甲基甲硅烷基封阻了環(huán)化中異腈的一個(gè)鄰位，且在串聯(lián)式反應(yīng)后通過氫化脫硅烷化反應(yīng)可除去。在該實(shí)例中，該選擇性還要繼續(xù)進(jìn)行到在最后一步中僅除去一個(gè)三甲基甲硅烷基基團(tuán)。
圖3-6和實(shí)施例中還顯示了式(1)幾種新型喜樹堿衍生物的一般合成流程的其他實(shí)例。
圖7-11顯示了式(2)化合物的制備。由此圖7顯示了三種代表性的、新型A、B環(huán)取代的甲硅烷基喜樹堿化合物(36a)、(36b)和(36c)。
合成這些類似物的第一步是制備炔丙基溴(41)，如圖8所示。將購得的三甲基甲硅烷基丙醇(37)進(jìn)行Swem氧化可得到三甲基甲硅烷基丙醛(38)，收率為85％。Sakar，T.K.等人，Tetrahedron 46，1885(1990)。按照Corey，E.J.和Fuchs，P.L.，Tetrahedron Lett.，36，3769(1972)的步驟A，將醛(38)轉(zhuǎn)化成二溴烯烴(39)，收率為55％。Piers，E.和Gaval，A.V.J.Org.Chem.，55，2374(1990)。-78℃在THF中加入2當(dāng)量n-BuLi，然后升溫至22℃，回流時(shí)用聚甲醛淬滅，產(chǎn)生(40)，收率為84％。最后，用無水CH2Cl2配制的三苯基膦和Br2溶液產(chǎn)生炔丙基溴(41)，收率為87％。
制備完炔丙基溴(41)后，如圖9所示制備自由基前體(43)。按照N-烷基化程序，用(41)將(42)烷基化產(chǎn)生所需的自由基前體(43)，收率為74％。(43)分別與異腈(44a)或(44b)的反應(yīng)，形成被保護(hù)的甲硅烷基喜樹堿衍生物(45a)和(45b)，收率分別為55％和56％，如圖10所示。最后，用MeOH/H2O配制的2當(dāng)量K2CO3溶液去保護(hù)，產(chǎn)生收率為47％的10-羥基衍生物(36a)，如圖10所示。最后用CH2C12配制的三氟乙酸處理將(45b)轉(zhuǎn)化成10-氨基衍生物(36b)，收率為65％。
本發(fā)明的方法還提供(20S)-7-[(2-三甲基甲硅烷基)乙基]喜樹堿(36c，圖7)的合成。將苯基異腈與碘代吡啶酮(43)反應(yīng)，以52％收率產(chǎn)生此衍生物(圖10)。最近由Hausheer等人在國際專利申請公開號WO98/07727中描述了(20S)-7-[(2-三甲基甲硅烷基)乙基]喜樹堿(36c)和(20S)-7-(2-三甲基甲硅烷基)喜樹堿(美國專利申請No.08/436，799所公開的)的結(jié)構(gòu)。國際專利申請公開號WO 98/07727中公開的這些化合物的特征信息似乎不正確。具體說，提供的這些化合物的光譜數(shù)據(jù)與指定的結(jié)構(gòu)不符，且與本專利實(shí)施例中所報(bào)道的光譜數(shù)據(jù)也不吻合。另外，WO 98/07727的所有含甲硅烷基的喜樹堿的光譜數(shù)據(jù)看來都與指定的結(jié)構(gòu)不一致。
本發(fā)明因此提供了一種非常適用于喜樹堿家族中已知結(jié)構(gòu)-活性關(guān)系的快速且有效的合成流程。實(shí)際上，喜樹堿骨架的生物活性對7和/或9-11位以外上的取代基通常是敏感的或耐性非常弱。合成后，這些取代基分別通過炔基衍生物(3)和芳基異腈(5)引入。
抗腫瘤活性和人血液穩(wěn)定性特性表1列出了式(1)若干化合物的抗腫瘤活性，且用以下所述的分析方法將它們與一些熟知的喜樹堿類似物作了比較。表1中所列出的本發(fā)明的各種示范化合物的合成將在本文實(shí)施例部分進(jìn)行詳細(xì)描述。
表1.(20S)-7-甲硅烷基-喜樹堿衍生物的生物活性 癌細(xì)胞生長的抑制TopoI介導(dǎo)的 Topo I介導(dǎo)IC50(nM) DNA切割的 的DNA馳提高豫的抑制實(shí)例 7a9 10 11 12 HL-60 833K DC-3FCPT H H H H H 5 106-9 +++ +++IRT Et H OPPaH H 270487 372 - -1TMS H H H H 3.85.6 4.2 ++++ +++2TBDMS H H H H 0.12 1.2 2.9 ++++ +++3TBDPS H H H H 339243 663 +++4TMS H OAc H H 2.7 6.7 ++++ +++++5TMS H OH H H 2.67.0 6.9 ++++ +++++5a 實(shí)例5，打開的E環(huán) 9.715.0 14.2 +++ +6TMS H OPPaH H 66 214 256 - -7TMS H H F H 0.75 0.92 2.0 ++++ +++++7a TMS F H H H 3.02.9 8.2 ++++ ++++TMS H H F H (2∶1)8TMS H NH2H H 0.52 5.7 0.72 - -9TMS H H NH2H 2.67.4 6.4 - -10 TMS H NH2F H 0.07 0.14 0.29 ++++ ++++11 TMS H H F F 1.01 2.1 2.5 +++ +++TMS F F H H(3/1)12 TIPSH H H H 1506 10730 1038 - -13 TES H H H H 31.9 122 57.1 - -14 DMNPS H H H H 66.9 197 64.1 - -15 DMCPS H H H H 0.91 2.7 2.7 - -16 DMHPS H H H H 2.15.4 2.3 - -17 TBDMS H OAc H H 1.86 - 3.57 - -18 TBDMS H OH H H 2.60 - 5.20 - -a)OPP＝依立替康的氨基甲酸吡咯烷基吡咯烷酯；TMS＝三甲基甲硅烷基；TVDMS＝叔-丁基二甲基甲硅烷基；TBDPS＝叔-丁基二苯基甲硅烷基；TES＝三乙基甲硅烷基；TIPS＝三異丙基甲硅烷基；DMNPS＝二甲基降蒎基(dimethylynorpinyl)甲硅烷基；DMCPS＝二甲基-3-氰基丙基甲硅烷基；DMHPS＝二甲基-3-鹵丙基甲硅烷基；b)用BD2F1小鼠測試在S-180中比CPT活性高。c)用BD2F1小鼠測試在Lewis肺癌中比CPT活性高。符號“-”表示“未測試到”。
如表1所示，與喜樹堿(CPT)和依立替康(IRT)相比本發(fā)明的化合物表現(xiàn)出良好至極佳的抗腫瘤活性。
細(xì)胞毒性分析體外評估喜樹堿衍生物對HL-60(人早幼粒細(xì)胞性白血病)、833K(人畸胎癌)和DC-3F(倉鼠肺)細(xì)胞生長的細(xì)胞毒性作用。將初始密度為5×10-4個(gè)細(xì)胞/ml的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。37℃5％CO2潮濕氣氛中將它們維持在RPMI-1640介質(zhì)(GIBCO-BRL Grand Island，New York)中，該介質(zhì)含有青霉素(10μ/ml)/鏈霉素(100μg/ml)(GIBCO-BRL)和10％熱滅活的胎牛血清。用96孔微板一式二份進(jìn)行該分析。培養(yǎng)72小時(shí)后，用XTT-顯微培養(yǎng)四唑分析確定化合物對HL-60的細(xì)胞毒性。Scudiero，D.A.，等人，Cancer Res.，48，4827(1988)，本文將其納入作為參考。在預(yù)熱的(37℃)無血清的介質(zhì)中制備1mg/ml2′，3′-二(-甲氧基-4-硝基-5-磺基苯基(sulfhenyl)-5-[(苯基氨基)羰基]-2H-氫氧化四唑(XTT)。將吩嗪硫酸甲酯(PMS)與新配制的XTT混合得到0.075mM PMS-XTT溶液(每5ml 1mg/ml XTT中加入25μl 5mM PMS原液)。在培養(yǎng)72小時(shí)后將55μl這種混合物加到細(xì)胞培養(yǎng)物的各孔中。37℃培養(yǎng)4小時(shí)后，用微板讀數(shù)儀(EL340，Bio-Tek Instruments，Inc.，Winooski，Vermont)測定450nm和630nm的吸光度。
用Skehan等人所述的用于測定細(xì)胞內(nèi)蛋白含量的方法，測定喜樹堿混合物對833K畸胎癌實(shí)體瘤細(xì)胞和DC-3F倉鼠肺細(xì)胞的細(xì)胞毒性。Skehan等人，“用于抗癌藥物篩選的新型細(xì)胞毒性比色分析”，J.Nat′l Cancer Inst.，82，1107(1990)，本文將其納入作為參考。用三氯乙酸固定培養(yǎng)物，然后用溶解在1％乙酸中的0.4％磺基羅丹明(sulforhodamine)B染色30分鐘。用乙酸沖洗除去未結(jié)合的染料，用非緩沖的Tris堿[三(羥基-甲基)氨基甲烷]提取結(jié)合蛋白質(zhì)的染料，以測定在96孔微板讀數(shù)儀中570nm時(shí)的吸光度。該試驗(yàn)用5-6種濃度的測試藥物一式二份進(jìn)行。用計(jì)算機(jī)軟件分析數(shù)據(jù)。見Chou，J.和Chou，T.C.，“微型計(jì)算機(jī)進(jìn)行劑量影響的分析ED50、LD50的定量、協(xié)同作用、拮抗作用、低劑量風(fēng)險(xiǎn)、受體-配體結(jié)合和酶動力學(xué)”，第二版，Biosoft，Cambridge(1987)；和Chou，T.C.，“中值有效理論和協(xié)同作用和拮抗作用定量的組合指數(shù)”，Synergism and Antagonism inChemotherapy，Academic Press，San Diego，61-102(1991)，本文將它們納入作為參考。
Topo I介導(dǎo)的DNA切割的分析對DNA切割分析而言，反應(yīng)混合物含有10mM Tris-HCl緩沖液(pH 7.5)；0.125μg/ml PBR322超螺旋雙鏈環(huán)狀DNA(4363個(gè)堿基對，來自Bochringer MannheimBiochemicals)；濃度為1、10和100μM的藥物(喜樹堿或其衍生物)；純化的DNA局部異構(gòu)酶I，終體積為如上所述的20μl。Hsiang，Y.H.等人“通過哺乳動物DNA局部異構(gòu)酶I喜樹堿誘導(dǎo)的連接蛋白質(zhì)的DNA斷裂”，J.Biol.Chem.，260，14873(1985)，本文將其納入作為參考。在37℃培養(yǎng)60分鐘。加入加樣緩沖液染料(2％十二烷基硫酸鈉、0.05％溴酚藍(lán)和6％甘油)終止反應(yīng)。用1％瓊脂糖凝膠及溴化乙錠(1μg/ml)在TBE緩沖液(Tris-堿-硼酸-EDTA)中進(jìn)行電泳，在25V跑樣18小時(shí)。用55/N型號的Polaroid膠片在UV燈下拍攝照片，如制造商所示顯影。
抑制Topo I介導(dǎo)的超螺旋DNA的馳豫為了研究對DNA局部異構(gòu)酶I介導(dǎo)的DNA馳豫的抑制作用，使用Liu和Miller所述的方法。Liu，H.F.等人，“用哺乳動物DNA局部異構(gòu)酶II切割DNA”，J.Biol.Chem.，258，15365(1980)，本文將其納入作為參考。在該分析中，在37℃在反應(yīng)混合物(20μl，含有50mM Tris-HCl，pH7.5，120mM KCl、10mM MgCl2、0.5mM DTT、0.5mM EDTA、30μg/ml BSA、20μg/ml PBR322DNA和不同含量的酶)中培養(yǎng)0.18μgPBR322DNA、0.5U Topo I(GIBCO-BRL)、各種濃度(1-100μM)喜樹堿或其類似物30分鐘，用5％SBS和150μg/ml蛋白酶K終止反應(yīng)。將樣品加樣到在TAE電泳緩沖液中的1％瓊脂糖上，39V電泳過夜，用EtBr染色，在UV光下拍照。
體內(nèi)抗腫瘤活性用患有肉瘤-180或鼠類Lewis肺實(shí)體瘤的B6D2F1小鼠進(jìn)行喜樹堿衍生物的抗腫瘤活性測試。對S-180，在第3天皮下接種3×106個(gè)細(xì)胞。在第1天每天兩次進(jìn)行腹腔內(nèi)抗腫瘤處理，共5天。第7天和第14天測量腫瘤的體積。平均腫瘤體積表示為處理組的相對于未處理對照組的比例(T/C)。第7天和第14天對照組(僅用DMSO載體處理)的腫瘤體積分別為0.11cm3和0.61cm3。將T/C喜樹堿設(shè)定為“+++.”。第14天2mg/kg劑量，相對于喜樹堿T/C增加或減少10％分別指示為增加或減少一個(gè)“+”單位。
對于Lewis肺癌，在第0天皮下接種腫瘤細(xì)胞(1×106)，第1天開始處理，腹腔內(nèi)每天兩次共5天。如上所述將作用分級。
如表1所示，在1-3種細(xì)胞系，許多在體外測試抗腫瘤細(xì)胞毒性的式(1)喜樹堿衍生物表現(xiàn)比喜樹堿高的效力。大部分表現(xiàn)出較高抗腫瘤細(xì)胞毒性的那些化合物同樣也表現(xiàn)出在提高DNA-局部異構(gòu)酶I-介導(dǎo)的PBR322DNA切割中也有較高的效力，或在抑制DNA-局部異構(gòu)酶I-介導(dǎo)的PBR322DNA馳豫中也有較高的效力。這些結(jié)果表明喜樹堿化合物的抗腫瘤細(xì)胞毒性與它們抑制DNA-局部異構(gòu)酶I功能間有很強(qiáng)的關(guān)聯(lián)。
對于患腫瘤的小鼠的體內(nèi)化療作用，如7-三甲基甲硅烷基喜樹堿與喜樹堿相比顯示出在B6D2F1小鼠中一些相當(dāng)?shù)膭┝恳詣┝恳蕾囆孕问皆谀[瘤體積減少中，抗肉瘤的活性比喜樹堿高。類似地對Lewis肺癌而言，7-三甲基甲硅烷基-11-氟喜樹堿在比喜樹堿劑量低4倍時(shí)，對減少腫瘤體積方面表現(xiàn)出與喜樹堿類似的抗腫瘤作用。所以，在體內(nèi)抗腫瘤作用中7-三甲基甲硅烷基-11-氟喜樹堿比喜樹堿更有效。
人血液中的穩(wěn)定性最近研究了內(nèi)酯和羥基形式喜樹堿的內(nèi)在熒光發(fā)射，以評估它們與人血液成分的明顯不同的相互作用。Burke，T.G.和Mi，Z.，“7位上的乙基取代延長了10-羥基喜樹堿在人血清白蛋白中的半衰期”，J.Med.Chem.362580-2582(1993)；Burke，T.G.，Mishra，A.K，Wani，M.C.和Wall，M.E.，“喜樹堿藥物的脂雙層分配及其穩(wěn)定性”，Biochemistry，325352-5364(1993)；Burke，T.G.和Mi，Z.，“人血清白蛋白與羧酸形式喜樹堿的擇優(yōu)結(jié)合”(1993)Anal.Biochem.212，285-287；Burke，T.G.和Mi，Z.，“喜樹堿與人血清白蛋白相互作用的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)對藥物穩(wěn)定性的影響”(1994)J.Med.Chem.37，40-46；Burke，T.G.Munshi，C.B.，Mi，Z.，和Jiang，Y.，“在決定喜樹堿抗癌藥物相對的人血液穩(wěn)定性中白蛋白的重要作用”(1995)J.Pharma.Sci.84，518-519；Mi，Z.和Burke，T.G.，“喜樹堿內(nèi)酯和羧酸形式喜樹堿與人血液成分間的不同相互作用”，(1994)Biochemsitry，33，10325-10336；Mi，Z.和Burke，T.G.，“不同品種喜樹堿與血清白蛋白相互作用的顯著差異頻域熒光光譜研究”，(1994)Biochemistry 33，12540-12545；Mi，Z.，Malak，H.，和Burke，T.G.，“減少白蛋白結(jié)合促進(jìn)拓?fù)涮婵翟谌搜褐械姆€(wěn)定性和活性”，(1995)Biochemistry，34，13722-13728，本文將它們?nèi)考{入作為參考。
在pH7.4的磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)中，頻域熒光生存期光譜揭示出人血清白蛋白(HSA)擇優(yōu)地結(jié)合有羧酸形式的喜樹堿，此結(jié)合能力比內(nèi)酯形式喜樹堿的結(jié)合高200倍。這些相互作用導(dǎo)致與無HSA相比，存在HSA時(shí)喜樹堿開環(huán)更迅速且更完全。在人血漿中，pH 7.4和37℃，喜樹堿內(nèi)酯迅速、完全開環(huán)成喜樹堿羧酸形式，t1/2值為11分鐘，且處于平衡值的內(nèi)酯％幾乎可忽略，為0.2％。與血漿相比，在全血中，喜樹堿顯示出穩(wěn)定性提高(t1/2值為22分鐘，處于平衡值的內(nèi)酯％為5.3％)。已發(fā)現(xiàn)人血液中喜樹堿內(nèi)酯穩(wěn)定性的提高是因?yàn)樗幬锱c紅血細(xì)胞脂雙層的結(jié)合。喜樹堿與紅細(xì)胞膜結(jié)合，藥物局限在?；渽^(qū)域，從而相應(yīng)地保留了抗水解的保護(hù)。
已比較了有臨床重要性的若干喜樹堿類似物的人血液穩(wěn)定性。如在喜樹堿中所觀察到的，觀察到9-氨基喜樹堿在含有HSA的PBS溶液中幾乎完全水解(＞97％)。雖然由于它們顯著減少的熒光量子產(chǎn)率(相對于喜樹堿)，沒有嘗試用光譜定量內(nèi)酯和羧酸形式的9-氨基喜樹堿的相對結(jié)合親和力，但HPLC數(shù)據(jù)與HSA擇優(yōu)結(jié)合羧酸形式喜樹堿(與內(nèi)酯形式相比)相一致。在血漿中，觀察到＞99.5％9-氨基類似物轉(zhuǎn)化成羧化物，這一發(fā)現(xiàn)與用喜樹堿觀察到的穩(wěn)定性數(shù)據(jù)非常平行。在全血中，9-氨基喜樹堿和喜樹堿分別有＜0.5％和5.3％處于平衡的內(nèi)酯形式。相對于9-氨基喜樹堿，保持在喜樹堿平衡的內(nèi)酯的水平要高約10倍，這部分可能是因?yàn)橛H脂性的提高和喜樹堿較高的從含水環(huán)境轉(zhuǎn)移入全血中紅細(xì)胞膜的能力。
與全人血中殘留的處于平衡的低水平內(nèi)酯(即喜樹堿和9-氨基喜樹堿分別為＜0.5％和5.3％)完全相反，拓?fù)涮婵?11.9％)、CPT-11(21.0％)和SN-38(19.5％)都表現(xiàn)出改善的血液穩(wěn)定性。平衡中的拓?fù)涮婵祪?nèi)酯水平比9-氨基喜樹堿的高20倍，對IRT(CPT-11)和10-羥基-7-乙基喜樹堿(SN-38)的相應(yīng)內(nèi)酯水平約比9-氨基喜樹堿的高40倍。拓?fù)涮婵?、CPT-11和SN-38相對穩(wěn)定性的如此顯著增效可能與它們和HSA有利的相互作用有關(guān)。這些試劑在7-和9-位含有結(jié)構(gòu)取代基，這阻礙和防止了羧基藥物形式與HSA的擇優(yōu)結(jié)合。最近將時(shí)間分辨熒光向異性技術(shù)用于確定在喜樹堿羧化物與HSA結(jié)合并在溶液中翻滾都與該蛋白質(zhì)密切相關(guān)的實(shí)驗(yàn)條件下，羧化物形式的拓?fù)涮婵岛虲PT-11不與HSA結(jié)合。對于SN-38而言，獲得的直接光譜表明HSA擇優(yōu)結(jié)合于該試劑的內(nèi)酯形式，因此內(nèi)酯-羧化物平衡偏向內(nèi)酯。
所以，從這些觀察中可以清楚看出HSA在決定喜樹堿的相對人血液穩(wěn)定性中起著重要作用。對喜樹堿和9-氨基喜樹堿而言，HSA作為羧化物形式藥物的接受器，結(jié)合開環(huán)物并因此將內(nèi)酯-羧化物平衡偏向羧化物。但對拓?fù)涮婵怠PT-11和SN-38而言，未觀察到HSA對羧化物形式藥物的這種擇優(yōu)結(jié)合。與喜樹堿及其9-氨基類似物的情況相反，HSA擇優(yōu)地結(jié)合于內(nèi)酯形式的SN-38，從而促進(jìn)該生物活性物的較高循環(huán)水平。
活性藥物(現(xiàn)有臨床相關(guān)的喜樹堿)迅速和大量的損失表明迫切需要一種與蛋白質(zhì)結(jié)合相互作用性低的喜樹堿，且在人血液中的穩(wěn)定性也要提高。由此來看，本發(fā)明的喜樹堿類似物表現(xiàn)出獨(dú)有的特性表現(xiàn)出改善的在人血液中的穩(wěn)定性，同時(shí)維持很高的抗癌活性。
測定脂雙層分配(即親脂性)和內(nèi)酯環(huán)穩(wěn)定性的試驗(yàn)方法化學(xué)制劑所有喜樹堿類似物都是呈(20S)構(gòu)型，且用熒光檢測的HPLC分析都是高純度的(＞98％)。所有其他試劑都是試劑等級的，且使用時(shí)無需進(jìn)一步純化。在所有試驗(yàn)中使用由Milli-Q UV PLUS純化系統(tǒng)(Bedfor，MA)提供的高純度水。
藥物原液的制備用二甲基亞砜(A.C.S.分光光度級，Aldrich，Milwaukee，WI)制備藥物原液，濃度為2×10-3M，且儲存在4℃暗處。從Avanti Polar Lipids，Alabaster，Al獲得L-α-二肉豆蔻?；字Ｄ憠A(DMPC)和L-α-二肉豆蔻?；字８视?DMPG)，且無需進(jìn)一步純化直接使用。所有其他活性制劑都是試劑等級的，均不經(jīng)過其他純化可直接使用。
微泡體的制備在試驗(yàn)當(dāng)天用Burke和Tritton，在“單層磷脂酰膽堿微泡體蒽環(huán)類抗生素選擇性的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)平衡binoinl研究”，Biochem 241768-1776(1985)中的方法制備單層微泡體(SUV)。簡單地說，通過渦流混合5-10分鐘(超過脂類的TM)，用磷酸鹽緩沖鹽水(PBS，pH7.4)配制含有200mg/ml脂類的脂類懸浮原液。然后用浴式超聲處理器(Laboratory Supplies C.，Hicksville，NY)超聲處理脂類懸浮液3-4小時(shí)直到其看上去呈清澈。用DMPG制備SUV時(shí)觀察到pH從7.4降至6.8，因此用少量PBS配制的2.5M NaOH將這些SUV懸浮液調(diào)節(jié)到7.4，然后再進(jìn)行超聲處理。37℃將各種類型的微泡體懸浮液退火30分鐘，然后再用于試驗(yàn)。
熒光設(shè)備由裝配有恒溫比色杯室的SLM型號9850熒光分光光度計(jì)進(jìn)行穩(wěn)態(tài)熒光測量。將該設(shè)備與IBM PS/2型號55SX計(jì)算機(jī)連接。記錄激發(fā)和發(fā)射光譜，激發(fā)分辨率為8nm，發(fā)射分辨率為4nm。通過減去空白的光譜，所有光譜都與由未標(biāo)記的脂質(zhì)或由溶劑產(chǎn)生的背景熒光和散射校準(zhǔn)。穩(wěn)態(tài)熒光強(qiáng)度測量是在無偏光器的條件下進(jìn)行的。穩(wěn)態(tài)向異性(a)測定是用處于“T-格式”的測量設(shè)備進(jìn)行的同時(shí)測定兩種極化強(qiáng)度。按常規(guī)，用水配制的0.25μm聚苯乙烯微球體(Polysciences，Inc，Warrington，PA)的稀釋懸浮液校正偏光器的定位，且得到向異性值為＞0.99。另外，用水配制的糖元稀釋液校正偏光器的取向。用式a＝(IVV-GIVH)/(IVV+GIVH)計(jì)算向異性，其中G＝IVH/IHH)，下標(biāo)分別指激發(fā)和發(fā)射偏光器的垂直和水平取向。
在每個(gè)發(fā)射道用370nm的激發(fā)光和長程濾波器進(jìn)行喜樹堿向異性的測定，以從背景散射和/或殘留熒光中分離出藥物熒光信號。所有發(fā)射濾波器都是從OrielCorp(Stamford，CT)購得的。激發(fā)光和發(fā)射濾波器的聯(lián)合使用可以從背景信號中充分分離出熒光。背景熒光以及發(fā)射光的貢獻(xiàn)通常小于總強(qiáng)度的1％。因?yàn)橄矘鋲A及其相關(guān)化合物的內(nèi)酯環(huán)在水性介質(zhì)中發(fā)生水解，半衰期約為20分鐘，所以這些測定都要在將藥物原液與熱預(yù)平衡溶液混合后最短時(shí)間內(nèi)(0.5-1分鐘)完成，從而使實(shí)驗(yàn)在無水解產(chǎn)物的情況下完成。
平衡結(jié)合常數(shù)的確定將Burke，T.G.，Mishra，A.K.，Wani，M.C.和Wall，M.E.“喜樹堿藥物的脂雙層分配和穩(wěn)定性”，Biochemsitry.325352-5364(1993)中報(bào)道的熒光向異性滴定的方法用于，測定含有總藥物濃度為1×10-6M和各種濃度脂質(zhì)的脂質(zhì)體懸浮液中游離的和結(jié)合的藥物的的濃度。所有試驗(yàn)都在玻璃管中進(jìn)行?？偨Y(jié)合常數(shù)的定義為K＝[AB]/[AF][L]，其中[AB]代表結(jié)合的藥物濃度，[AF]代表游離藥物的濃度，[L]表示樣品中總脂質(zhì)濃度。結(jié)合等溫線的雙倒數(shù)圖{1/(藥物的結(jié)合分?jǐn)?shù))對1/(脂質(zhì))}是線性的，用線性最小二乘法從它們的斜率確定K值?；贙＝[AB]/[AF][L]關(guān)系式編寫計(jì)算機(jī)程序，以預(yù)計(jì)特定K值和總藥物條件下的結(jié)合藥物水平。
內(nèi)酯開環(huán)的動力學(xué)用文獻(xiàn)中所述的定量C18反相高效液相色譜(HPLC)測定存在不同血液成分時(shí)喜樹堿的水解動力學(xué)。Mi和Burke(1994)見上。如前所述制備全血和分級血樣。使用Sigma Chemical(St.Louis，MO)的高純度(＞97％)結(jié)晶HSA。用PBS緩沖液制備的HSA的終pH為7.40±0.05。在278nm用消光系數(shù)39,800M-1cm-1(Porter，1992)的UV吸光度測定HSA的濃度。所有其他試劑都是試劑等級的，且使用時(shí)無需進(jìn)一步純化。在所有試驗(yàn)中使用由Milli-Q UV PLUS純化系統(tǒng)(Bedfor，MA)提供的高純度水。
在細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)中體外測定本發(fā)明高度親脂性喜樹堿的抗癌活性細(xì)胞用MDA-MB-435致瘤人乳腺癌細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞毒性測定。將細(xì)胞與一定范圍濃度的藥物接觸72小時(shí)，然后用磺基若丹明B(SRB)分析其生命力。用標(biāo)準(zhǔn)分析進(jìn)行SRB分析。
熒光向異性滴定證明本發(fā)明的喜樹堿類似物對脂質(zhì)微泡體表現(xiàn)出特別高的平衡結(jié)合常數(shù)。
圖12-15顯示幾種新型喜樹堿類似物的熒光激發(fā)和發(fā)射光譜。圖12顯示在磷酸鹽緩沖鹽水中1μM DB-172的激發(fā)和發(fā)射光譜。該圖表明，將脂雙層引入樣品后，化合物的熒光激發(fā)增加，表明藥物和膜間發(fā)生了相互作用。將溶劑變成乙醇，熒光也改變。圖13-15分別顯示存在或不存在膜時(shí)，DB-173、DB-174和DB-67的發(fā)射光譜。當(dāng)藥物分配到脂雙層時(shí)，每種藥物的熒光強(qiáng)度都有顯著增加。在每種情況下，當(dāng)藥物與膜相互作用時(shí)，發(fā)射光譜都發(fā)生藍(lán)移或移向較短波長。圖12-15顯示的光譜數(shù)據(jù)清晰地表明新型試劑是熒光性的且一旦脂雙層膜加到樣品中時(shí)藥物的光譜常數(shù)就發(fā)生改變。表2將新型喜樹堿類似物的最大激發(fā)和發(fā)射波長與已有的類似物進(jìn)行了比較。喜樹堿的內(nèi)在熒光性使得在測定各種類似物與脂雙層結(jié)合相互作用強(qiáng)度的測定中可以使用穩(wěn)態(tài)熒光向異性滴定的敏感方法。
表2溶液中和結(jié)合于DMPC和DMPG SUVs喜樹堿類似物的熒光光譜參數(shù)
以下是所用的命名DB-172，(20S)-7-[(2-三甲基甲硅烷基)乙基]喜樹堿(36c)；DB-173，(20S)-10-氨基-7-[(2-三甲基甲硅烷基)乙基]喜樹堿(36b)；DB-174，(20S)-10-羥基-7-[(2-三甲基甲硅烷基)乙基]喜樹堿(36a)；DB-67，(20S)-10-羥基-7-(叔-丁基二甲基甲硅烷基)喜樹堿；DB-148，(20S)-7-(3-氯丙基二甲基甲硅烷基)喜樹堿；DB-158，(20S)-10-羥基-7-(3-氯丙基二甲基硅烷基)喜樹堿；DB-202，(20S)-7-(叔-丁基二甲基甲硅烷基)喜樹堿；CHJ-792，10-氨基-7-三甲基甲硅烷基喜樹堿(20)；DB-124，10-羥基-7-(3-二甲基氨基丙基二甲基甲硅烷基)喜樹堿鹽酸鹽；和DB-104，7-(3-二甲基氨基丙基二甲基甲硅烷基)喜樹堿鹽酸鹽。
通過如下的Perrin方程式穩(wěn)態(tài)熒光向異性(a)的量度與熒光分子的旋轉(zhuǎn)速率相關(guān)a0/a＝1+(τ/φ)式中a0是無去極化旋轉(zhuǎn)時(shí)的極限熒光向異性，τ是激發(fā)態(tài)生存期，和φ是熒光團(tuán)的旋轉(zhuǎn)相關(guān)時(shí)間。上述等式表明，熒光化合物的τ或φ值的變化都能調(diào)節(jié)其穩(wěn)態(tài)向異性。
37℃測定在PBS、乙醇和甲醇中喜樹堿的激發(fā)態(tài)生存期值。測得生存期值分別為4.7ns、3.8ns和3.5ns。類似地，在37℃測得當(dāng)與DMPC雙層結(jié)合時(shí)喜樹堿的生存期值，得到與膜結(jié)合的藥物的平均值為3.7ns。
由上述生存期測定表明激發(fā)態(tài)喜樹堿的激發(fā)態(tài)生存期對微環(huán)境中的變化(如溶劑變化或熒光團(tuán)從水性環(huán)境易位到磷脂膜)相對不敏感。對于在強(qiáng)烈影響其轉(zhuǎn)動運(yùn)動的變遷中(如溶劑粘度的變化或熒光團(tuán)結(jié)合于大分子量的組件如脂質(zhì)體顆粒)，τ值仍保持相對穩(wěn)定的熒光而言，Perrin方程式表明a和φ值間存在直接的相關(guān)性(即，隨著熒光化合物φ值的增加，其穩(wěn)態(tài)向異性值也增加)。
喜樹堿類似物的穩(wěn)態(tài)熒光向異性值對溶劑粘度高度敏感，且對與小單層脂質(zhì)微泡體結(jié)合也極敏感。例如，拓?fù)涮婵翟赑BS中的a值為0.008，而在粘性溶劑辛醇和甘油中該a值分別增加9倍和40倍。當(dāng)藥物與由DMPC或DMPG構(gòu)成的微泡體結(jié)合時(shí)，觀察到喜樹堿的a值提高了21倍。由于喜樹堿a值對膜結(jié)合的敏感性，可用熒光向異性滴定來研究喜樹堿類似物與脂雙層的平衡結(jié)合。如上所述，試驗(yàn)包括確定一系列樣品的a值，各樣品中藥物的濃度維持恒定(通常為1或2μM)，而膜中脂質(zhì)的濃度設(shè)為在0-0.29M間變化。
由于新合成的喜樹堿的明亮(brilliant)的熒光發(fā)射的結(jié)果(表2中列出了光譜參數(shù)的概略)，圖16-18中總結(jié)的吸附等溫線相對無任何背景信號。用濃度為1μM的藥物和長程濾波器將背景信號(即，因可能存在的雜質(zhì)而引起的散射激發(fā)光和外界熒光信號)與發(fā)射光分離，溶解在PBS緩沖液中的藥物信號水平無膜時(shí)通常為99.97％，存在膜時(shí)則大于98％。用吸附等溫線確定喜樹堿藥物的總結(jié)合常數(shù)?？偨Y(jié)合常數(shù)的定義如下K＝[AB]/[AF][L]式中[AB]表示結(jié)合藥物的濃度，[AF]代表游離藥物的濃度，和[L]表示微泡體懸浮液中總的脂質(zhì)濃度。當(dāng)游離脂質(zhì)的濃度與總脂質(zhì)濃度幾乎相同時(shí)(即游離脂質(zhì)的濃度顯著超過結(jié)合藥物的濃度)，這個(gè)方程式有效。如果滿足條件，K可從雙倒數(shù)圖的斜率的倒數(shù)測得。在該雙倒數(shù)圖中(圖19和20顯示了代表性數(shù)據(jù))，總結(jié)合藥物的1/分?jǐn)?shù)相對于1/脂質(zhì)濃度作圖，其中y截距為1(對表現(xiàn)出結(jié)合位點(diǎn)均一的系統(tǒng)而言)。新型喜樹堿類似物與DMPC和DMPG小單層微泡體(SUV)制劑締合的雙倒數(shù)圖是線性的，具有很好的相關(guān)系數(shù)。這些圖的線性以及藥物與其他類型膜制劑締合的相應(yīng)的圖表明在這些脂質(zhì)濃度的熒光團(tuán)結(jié)合適合于用上述方程式描述。
表3所總結(jié)的研究檢測了喜樹堿與脂雙層結(jié)合的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。在這些研究中包括了兩種類型的膜，研究在接近生理?xiàng)l件的pH和溫度中進(jìn)行；這些膜包括液相和電中性的L-α-二肉豆蔻?；字Ｄ憠A(DMPC)；和液相和帶負(fù)電荷的L-α-二肉豆蔻?；字８视?DMPG)。DMPC和DMPG具有相同的鏈長，但端部的基團(tuán)上的電荷有差異。
表3.37℃在pH 7.4的PBS緩沖液中喜樹堿類似物與電中性的DMPC、帶負(fù)電荷的DMPG的單層微泡體相互作用的總結(jié)合常數(shù)
在表3的研究中，用熒光向異性滴定該構(gòu)建結(jié)合等溫線，由雙倒數(shù)圖的斜率確定K值。K值的有10％的誤差。大體來說，表3中所列出的數(shù)據(jù)的最顯著的特點(diǎn)是在7位的單取代或在7和10位的雙取代能實(shí)現(xiàn)強(qiáng)調(diào)制。表3中所包括的是已知的喜樹堿化合物。所列出的這些數(shù)據(jù)表現(xiàn)出相對于已知的化合物，新型喜樹堿具有高度親脂性特性。已發(fā)現(xiàn)拓?fù)涮婵祵MPC脂質(zhì)體的K值比喜樹堿的小約10倍。表3清楚地顯示，本發(fā)明的化合物比喜樹堿或拓?fù)涮婵蹈H脂得多。例如，DB67對DMPC或DMPG構(gòu)成的膜的親和力比喜樹堿相應(yīng)的數(shù)據(jù)分別大27倍和28倍。DB172和DB174比喜樹堿與DMPC的結(jié)合要高100倍和90倍。DB173同樣也具有高度親脂性，表現(xiàn)出對DMPC的K值比喜樹堿的高約58倍?？偠灾?，發(fā)現(xiàn)表3所列出的本發(fā)明的新型化合物與其他化合物(已有的含有相同α-羥基-δ-內(nèi)酯環(huán)系統(tǒng)的喜樹堿類似物)相比具有最高的膜親和力。
在水溶液中比較高度親脂性的喜樹堿的表現(xiàn)圖21顯示了在生理溫度pH 7.4的磷酸鹽緩沖鹽水中DB172的穩(wěn)定性。如圖所示，在不同濃度DB172內(nèi)酯部分作為時(shí)間的函數(shù)。將藥物從濃DMSO原液加至溶液中，使得相對于水的體積DMSO的體積非常小(小于0.5％)。發(fā)現(xiàn)藥物的穩(wěn)定性明顯取決于所添加的藥物濃度。在較稀的藥物濃度，藥物的水解如先前在其他含有α-羥基-δ-內(nèi)酯部分的喜樹堿中所觀察到的。在高藥物濃度則觀察到DB-172的內(nèi)酯環(huán)明顯穩(wěn)定化，而這通常在其他喜樹堿中沒有觀察到。
圖22顯示了DB172的熒光強(qiáng)度是時(shí)間和pH的函數(shù)。在這些試驗(yàn)中，將DB172以內(nèi)酯形式加入溶液中。在低pH，藥物保持內(nèi)酯形式，強(qiáng)度隨時(shí)間的變化最低。在pH10，內(nèi)酯較易水解形成羧化物，觀察到熒光強(qiáng)度有明顯的變化?？磥碓趐H10由內(nèi)酯構(gòu)成的非熒光的膠束聚集體發(fā)生解聚集，并形成開環(huán)的羧化物形式(在溶液中趨于以單體熒光分子存在)。
圖23研究了DB172的強(qiáng)度密度作為濃度的函數(shù)。在將低濃度內(nèi)酯藥物添加到溶液后，熒光信號變化最大，而在高濃度藥物(10μM)時(shí)熒光強(qiáng)度的變化最小。據(jù)信，在低濃度熒光度低的DB172的膠束聚集可以解聚集并形成熒光的羧化物分子，但在較高的藥物的濃度平衡有利于使試劑保持團(tuán)聚或低熒光的狀態(tài)。圖24顯示了當(dāng)將羧化物形式的DB172加到pH10的溶液中時(shí)，熒光信號沒有觀察到變化，而在較低的pH值(可能形成內(nèi)酯)熒光強(qiáng)度隨著時(shí)間減少。同樣在pH下降時(shí)發(fā)生的熒光的降低看來是由于形成了低熒光量子產(chǎn)率的內(nèi)酯聚集體。
圖21-24是與在微摩爾藥物濃度的DB172內(nèi)酯自身結(jié)合和形成膠束的獨(dú)特的能力一致的。DB172聚集體表現(xiàn)出熒光減少。如果條件允許發(fā)生水解使得形成羧化物形式，樣品的熒光強(qiáng)度將增加。圖25比較了在將內(nèi)酯藥物形式添加到溶液之后樣品熒光發(fā)射的相對變化。在這些試驗(yàn)中，在0時(shí)將各藥物的值歸一化為1，隨著時(shí)間觀察各種類似物解締合的能力(如果在0時(shí)藥物聚集體)。對一些藥物而言，形成羧化物的水解在溶液中進(jìn)行。由于羧化物形式較不易自身結(jié)合，且表現(xiàn)出減少的熒光，藥物水解使聚集體解體將增加熒光強(qiáng)度。在0時(shí)DB172以特別高的程度自身結(jié)合，而其他藥劑自身結(jié)合程度要低許多，所以隨時(shí)間的變化它們的信號比較穩(wěn)定，對水解反應(yīng)也不是很敏感。相對于DB172，DB173和DB67更易在溶液中以單體藥物存在。這于要將溶液給予患者而言是有利的特征，因?yàn)楸染奂腄B172懸浮液更均勻。
在人血液中高度親脂性喜樹堿穩(wěn)定性的顯著增加還證明了與水溶性類似物相比，本發(fā)明的高度親脂性喜樹堿的內(nèi)酯形式在人組織如血液中保持的時(shí)間更長。圖26比較了一些游離形式的新型喜樹堿類似物在PBS緩沖液(圖A)與全血(圖B)中的穩(wěn)定性。這些化合物包括7-叔-丁基二甲基甲硅烷基喜樹堿(DB202)、7-叔-丁基二甲基甲硅烷基-10-羥基喜樹堿(DB67)、7-(3-氯丙基)二甲基甲硅烷基喜樹堿(DB148)和7-(3-氯丙基)-二甲基甲硅烷基-10-羥基喜樹堿(DB158)。圖27總結(jié)了DB172、DB173和DB174在PBS緩沖液中(圖A)、含有相當(dāng)于生理30mg/ml水平HSA的PBS緩沖液(圖B)和人血(圖C)的穩(wěn)定性數(shù)據(jù)。所有試驗(yàn)都在生理溫度進(jìn)行。
發(fā)現(xiàn)高度生物活性和親脂性化合物7-叔-丁基二甲基甲硅烷基-10-羥基喜樹堿(DB-67)在人血中表現(xiàn)出極佳的穩(wěn)定性，t1/2為130分鐘，處于平衡值的％內(nèi)酯為30(與在人全血中％內(nèi)酯的平衡值相比分別為9-氨基喜樹堿(＜0.3％)、喜樹堿(5.3％)、拓?fù)涮婵?8.6％)、CPT-11(21.0％)和SN-38(19.5％))。表4列出了穩(wěn)定性數(shù)據(jù)。發(fā)現(xiàn)新型DB67的親脂性比喜樹堿高25倍，發(fā)現(xiàn)其10-羥基官能團(tuán)明顯促進(jìn)它的穩(wěn)定性(存在HSA時(shí))。DB67可能是治療腦癌的理想候選藥物。由于固有活性比喜樹堿高若干倍，DB67在人血液中表現(xiàn)出非常高的平衡內(nèi)酯水平，且不象喜樹堿和9-氨基喜樹堿那樣與人白蛋白緊密結(jié)合，且所具有的高度親脂性使該藥劑更易透過血腦屏障。
表3 在不同生物液體中喜樹堿類似物的穩(wěn)定性參數(shù)
同樣值得注意的是DB-173(36％內(nèi)酯處于平衡)和DB174(33％內(nèi)酯處于平衡)的高人血穩(wěn)定性。這些值明顯高于臨床相關(guān)的水溶性喜樹堿，且它們與親脂性喜樹堿如含有未取代A-環(huán)的DB-172有利地競爭。
高度親脂性喜樹堿表現(xiàn)出口服的生物可利用性圖28所包括的數(shù)據(jù)證明DB-67由腸胃道吸收。為了評估在5mg/kg劑量所到達(dá)的血液水平，使四只動物胃內(nèi)注射0.1ml溶解在DMSO中的DB-67。原液含有濃度為1.6mg/ml的DB67。在30分鐘、1小時(shí)、2小時(shí)和4小時(shí)采集1ml血樣，用心穿刺法收集。將血樣離心3分鐘，冰凍儲存直至進(jìn)行分析。觀察到DB67水平超過40ng/ml水平，大部分藥物仍保持為活性內(nèi)酯藥物。所以，本文所述的新型高度親脂性類似物可以口服給藥，且在給藥后將在血流中出現(xiàn)。
即使存在人血清白蛋白時(shí)高度親脂性喜樹堿也表現(xiàn)出高度抗癌效力。
如上所述，在水溶液中喜樹堿的自發(fā)性水解產(chǎn)生開環(huán)羧化物形式，其比閉環(huán)內(nèi)酯形式的活性低許多。所以，內(nèi)酯和羧化物形式間的平衡是藥物活性的最重要的決定性因素。已有的研究表明人血清白蛋白(HSA)對此平衡有很大的影響，且因偏向與羧化物形式相互作用而使平衡有利于喜樹堿的羧化物。由于這種HSA的作用，在腫瘤位點(diǎn)生物活性的喜樹堿內(nèi)酯形式的水平減弱。通過藥物結(jié)構(gòu)的修飾可控制這種藥物-HSA間的相互作用10-OH取代使藥物與HSA的親和力約減少20倍，7-乙基的取代進(jìn)一步以有利于內(nèi)酯的形式改變此結(jié)合。為了測定HSA對本發(fā)明血液穩(wěn)定的喜樹堿類似物的細(xì)胞毒性的影響，對喜樹堿類似物的細(xì)胞毒性作用進(jìn)行了研究。
使用磺基若丹明B(SRB)分析法。該分析法測定活細(xì)胞中總的蛋白質(zhì)水平。裂解死細(xì)胞的蛋白質(zhì)，將其在TCA固定前在沖洗步驟中除去。但是可能處于死亡初期的細(xì)胞的膜還是完整的，所以其中還含有蛋白質(zhì)。因此，490nm的光密度有時(shí)會過高，細(xì)胞毒性則被低估了。為了使SRB分析有效，已在多種腫瘤細(xì)胞系中測試了多范圍的化療試劑，發(fā)現(xiàn)與標(biāo)準(zhǔn)四唑(MIT)分析和促克隆形成(clonogenic)分析有密切關(guān)聯(lián)。如今SRB分析已是很成熟的分析方法，最近由NCI推薦為抗癌藥物篩選的標(biāo)準(zhǔn)分析方法。
表5列出了，存在或不存在1mg/mlHSA時(shí)，各種喜樹堿對MDA-MB-436致腫瘤轉(zhuǎn)移人乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性。表5中列出了細(xì)胞與藥物接觸72小時(shí)后的細(xì)胞毒性值?？偟膩碚f，HSA能強(qiáng)烈減弱喜樹堿的IC50值，但HSA調(diào)節(jié)新型高度親脂性類似物的細(xì)胞毒性的程度顯著降低。事實(shí)上，1mg/ml HSA對DB173的細(xì)胞毒性沒有影響。存在HAS時(shí)，DB173顯示出低nM的抗人乳腺癌細(xì)胞的效力。即使存在白蛋白時(shí)該藥劑保持效力的能力是有潛在的重要性的，因?yàn)樵谏眢w的血液和組織中該蛋白存在的量非常大。
表4 存在或不存在人血清白蛋白時(shí)，喜樹堿和其類似物抗MDA-MB-435致瘤轉(zhuǎn)移人乳腺癌細(xì)胞的IC50值。
因此，本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，在喜樹堿結(jié)構(gòu)的7位引入甲硅烷基或甲硅烷基烷基基團(tuán)(如三甲基甲硅烷基或三甲基甲硅烷基乙基基團(tuán))，通常得到的化合物與喜樹堿(見如，將實(shí)施例1的化合物與(20S)-CPT和其他已有的喜樹堿類似物相比)相比具有更好的抗腫瘤活性和人血液穩(wěn)定性。在7和10位雙取代的是更優(yōu)選的(如見化合物DB-173和DB-174)。在依立替康系列中甲硅烷基或甲硅烷基烷基基團(tuán)也是有益的(見如，實(shí)施例6化合物與依立替康相比)。
當(dāng)將羥基引入實(shí)施例1化合物的10位以生成實(shí)施例5的化合物時(shí)，抗腫瘤活性保持基本不變。實(shí)施例6的化合物是SN-38的相關(guān)物，是依立替康的活性代謝產(chǎn)物。最近將三甲基甲硅烷基引入的同時(shí)將氟原子引入11位(見如，實(shí)施例7的化合物)或在10或11位引入伯胺(分別見實(shí)施例8和9)的研究中也觀察到很高的活性。在12位引入氟原子形成的類似物的效力也僅比喜樹堿低約2倍(見如，實(shí)施例11與(20S)-CPT相比)?？紤]到先前所報(bào)道的12-取代的喜樹堿的低活性，該結(jié)果是令人驚奇的。
本發(fā)明的新型喜樹堿類似物具有獨(dú)特的生物物理和生理特性。這些高度親脂性的喜樹堿類似物，含有B-環(huán)修飾和A-和B-環(huán)修飾，在人血液中表現(xiàn)出明顯改善的α-羥基-δ-內(nèi)酯環(huán)穩(wěn)定性。本發(fā)明的喜樹堿類似物還表現(xiàn)出口服生物可利用性和強(qiáng)烈的抗癌活性(即使存在人血清白蛋白)。
因此哺乳動物(人或動物)可用如下方法治療給予藥用有效劑量的式(1)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。由此可改善哺乳動物的病癥。
本發(fā)明的化合物可以各種劑型給予，包括如腸胃外給藥(如靜脈內(nèi)、皮內(nèi)、肌內(nèi)或皮下)；口服(如以片劑、錠劑、膠囊、懸浮液或水溶液的形式)；以栓劑的形式直腸或陰道給藥；或表面給藥(如軟膠、乳膏或洗液)。
可由本領(lǐng)域技術(shù)人員確定給藥的最佳劑量，且根據(jù)所使用的式(1)化合物、制劑的強(qiáng)度、給藥的模式、給藥的時(shí)間和頻率、和患者病癥的階段而不同。其他取決于特定患者的因素也需要對劑量進(jìn)行調(diào)節(jié)。這些因素包括患者的年齡、體重、性別和飲食。在不同的時(shí)間間隔可-次給藥或分成若干較小的劑量給藥。
實(shí)施例提供以下實(shí)施例來說明本發(fā)明，但對本發(fā)明沒有限制作用。
實(shí)施例1制備(20S)-7-三甲基甲硅烷基喜樹堿 (1)(S)-4-乙基-4-羥基-6-碘-3-氧代-7-(3-三甲基甲硅烷基-2-丙炔基)-1H-吡喃并[3，4-c]-8-吡啶酮0℃氬氣下，在用DME(2.5ml)和DMF(0.60ml)配制的(S)-4-乙基-4-羥基-6-碘-3-氧代-1H-吡喃并[3，4-c]-8-吡啶酮[碘代吡啶酮(2)，250mg，0.746mmol]中加入用礦物油配制的60％NaH(31.3mg，0.783mmol)。10分鐘后加入LiBr(150mg，1.75mmol)。室溫15分鐘后，注射入3-三甲基甲硅烷基-2-丙炔溴(430mg，2.24mmol)，暗處在65℃加熱此反應(yīng)混合物的20小時(shí)。將最終的溶液傾倒入鹽水(20ml)中，用AcOEt(6×15ml)提取并干燥(Na2SO4)。除去溶劑后，將殘留物進(jìn)行快速層析(CHCl3/AcOEt 95∶5)，得到283mg(85％)泡沫狀物[α]20D+36.7(c 1，CHCl3)；IR(純，cm-1)3384，2940，2166，1730，1634，1518，1406，1130，841，752；1H NMR(300 MHz，CDCl3)δ0.14(s，9 H)，0.95(t，J＝7.4 Hz，3 H)，1.77(m，2 H)，3.66(s，1 H)，5.00(d，J＝17.2 Hz，1 H)，5.10(d，J＝16.4 Hz，1 H)，5.15(d，J＝17.2 Hz，1 H)，5.49(d，J＝16.4 Hz，1 H)，7.16(s，1 H)；13C NMR(75 MHz，CDCl3)δ-0.40，7.7，31.5，44.5，66.3，71.8，90.9，97.9，116.5，118.1，148.6，157.9，173.3；HRMS(EI)m/zC16H20INO4Si(M+)的計(jì)算值445.0206，實(shí)測值445.0203；LRMS(EI)m/z 445(M+)，430，416，386.
(2)(20S)-7-三甲基甲硅烷基喜樹堿70℃，在275W GE太陽燈照射下，將(1)中制備的化合物(36.6mg，0.082mmol)、苯基異腈(0.25mmol)和六甲基二錫(42mg，0.123mmol)的苯溶液(1.3ml)中攪拌10小時(shí)。將最終的反應(yīng)混合物的濃縮，作快速層析(CHCl3/MeOH 96∶4)得到18.8mg(54％)淡黃色固體[α]D20+39.0(c 0.2，CHCl3/MeOH 4∶1)；1H NMR(300 MHz，CDCl3/CD3OD 3∶1)δ 0.50(s，9 H)，0.83(t，J＝7.4 Hz，3 H)，1.74(m，2 H)，3.72(brs，1 H)，5.12(d，J＝16.4 Hz，1 H)，5.16(brs，2 H)，5.47(d，J＝16.4 Hz，1 H)，7.49(t，J＝8.1 Hz，1 H)，7.54 (s，1 H)，7.62(t，J＝8.1 Hz，1 H)，8.02(d，J＝8.1 Hz，1 H)，8.07(d，J＝8.1 Hz，1 H)；13C NMR(75 MHz，CDCl3/CD3OD 3∶1)δ0.9，7.2，29.3，31.0，51.7，65.5，98.3，118.4，127.3，128.0，129.7，130.0，131.8，134.3，144.7，145.6，147.3，151.1，173.5；HRMS(EI)m/z C23H24N2O4Si(M+)的計(jì)算值420.1505，實(shí)測值420.1501；LRMS(EI)m/z 420(M+)，391，376，361，347，320，291.
實(shí)施例2制備(20S)-7-叔-丁基二甲基甲硅烷基喜樹堿(DB-202) (1)(S)-4-乙基-4-羥基-6-碘-3-氧代-7-(3-叔-丁基二甲基甲硅烷基-2-丙炔基)-1H-吡喃并[3，4-c]-8-吡啶酮按實(shí)施例1-(1)所述的流程，用碘代吡啶酮(2)(200mg，0.60mmol)和3-叔-丁基二甲基甲硅烷基-2-丙炔溴(280mg，1.20mmol)進(jìn)行反應(yīng)，快速層析(CH2Cl2/AcOEt 9∶1)后，得到173mg(59％)白色泡沫狀物[α]D20+58(c 0.2，CHCl3)；IR(CHCl3，cm-1)3548，2950，2927，2859，1745，1648，1526；1H NMR(300 MHz，CDCl3)δ 0.08(s，6 H)，0.92(m，12 H)，1.79(m，2 H)，3.77(br s，1 H)，5.00-5.25(m，3 H)，5.50(d，J＝16.4 Hz，1 H)7.19(s，1 H)；13C NMR(75 MHz，CDCl3)δ-4.9，7.63，16.6，26.0，31.6，44.5，66.3，71.8，89.4，98.6，100.0，116.5，118.1，148.6，158.0，173.2；HRMS(EI)m/z C19H26INO4Si(M+)的計(jì)算值 487.0679，實(shí)測值487.0676；LRMS(EI)m/z 487(M+)，430，386，96，81，57.
(2)(20S)-7-叔-丁基二甲基甲硅烷基喜樹堿按實(shí)施例1-(2)所述的流程，用(1)制備的化合物(48.7mg，0.10mmol)進(jìn)行反應(yīng)，快速層析(CH2Cl2/丙酮9∶1)后，得到24.8mg(54％)灰黃色固體[α]D20+35.5(c 0.2，CHCl3)；IR(CHCl3，cm-1)3028，2980，2960，2932，2859，1741，1658，1600，1555，1257，1198，1158，1045；1H NMR(300 MHz，CDCl3)δ 0.69(s，6H)，0.98(s，9 H)，1.03(t，J＝7.3 Hz，3 H)，1.86(m，2H)，3.86(s，1H)，5.29(d，J＝16.3 Hz，1 H)，5.31(s，2H)，5.73(d，J＝16.3 Hz，1 H)，7.60(t，J＝6.3 Hz，1H)，7.60(t，J＝7.0 Hz，1 H)，7.66(s，1 H)，7.74(t，J＝7.3 Hz，1 H)8.20(t，J＝8.1 Hz，2 H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ-0.56，7.80，19.2，27.1，31.6，52.4，66.3，72.8，97.7，118.2，127.0，129.5，129.6，130.8，132.7，136.0，143.0，146.4，148.0，150.1，150.6，157.4，173.9；HRMS(EI)m/z C26H30N2O4Si(M+)的計(jì)算值462.1974，實(shí)測值462.1975；LRMS(EI)m/z 462(M+)，450，361，331，304，245，223，57.
實(shí)施例3制備(20S)-7-叔-丁基二苯基甲硅烷基喜樹堿 (1)(S)-4-乙基-4-羥基-6-碘-3-氧代-7-(3-叔-丁基二苯基甲硅烷基-2-丙炔基)-1H-吡喃并[3，4-c]-8-吡啶酮按實(shí)施例1-(1)所述的流程，用碘代吡啶酮(2)(200mg，0.60mmol)和3-叔-丁基二苯基甲硅烷基-2-丙炔溴(428mg，1.20mmol)進(jìn)行反應(yīng)，快速層析(CH2Cl2/AcOEt 9∶1)后，得到258mg(70％)白色泡沫狀物[α]D20+45.1(c 0.2，CHCl3)；IR(CHCl3，cm-1)3546，2928，2855，1741，1658，1526；1HNMR(300 MHz，CDCl3)δ 0.97(t，J＝7.3 Hz，3 H)，1.08(s，9 H)，1.80(m，J＝7.1 Hz，2 H)，3.76(brs，1 H)，5.13(d，J＝16.4 Hz，1 H)，5.29(d，J＝2.5 Hz，2 H)，5.52(d，J＝16.4 Hz，1 H)，7.22(s，1 H)，7.32-7.40(m，6 H)，7.76-7.78(m，4 H)；13C NMR(75 MHz，CDCl3)δ 7.6，18.6，27.0，31.6，44.6，60.4，66.3，71.8，86.5，99.9，102.2，116.6，127.7，129.6，132.6，135.6，148.7，157.8，173.2；HRMS(EI)m/zC25H21INO4Si(M-C4H9+)的計(jì)算值 554.0279，實(shí)測值554.0285；LRMS(EI)m/z 554(M-C4H9+)，587，510，220，143，105.
(2)(20S)-7-叔-丁基二苯基甲硅烷基喜樹堿按實(shí)施例1-(2)所述的流程，用(1)制備的化合物(61.1mg，0.10mmol)，快速層析(CH2Cl2/MeOH 96∶1；CH2Cl2/丙酮9∶1)后，得到26.5mg(45％)淡黃色固體[α]20D+35.2(c 0.2，CHCl3)；IR(CHCl3，cm-1)3003，2984，2969，2958，2935，1741，1658，1599，1555，1428，1226，1216，1158，1102；1H NMR(300 MHz，CDCl3)δ1.00(t，J＝7.3 Hz，3 H)，1.44(s，9 H)，1.84(m，2 H)，3.75(s，1 H)，4.21(d，J＝ 5.7 Hz，2 H)，5.19(d，J＝16.3 Hz，1 H)，5.64(d，J＝16.3 Hz，1 H)，7.43(m，5 H)，7.51(t，J＝7.3 Hz，2 H)，7.62(s，1 H)，7.69(m，5 H)，8.10(d，J＝8.5 Hz，1 H)，8.22(d，J＝8.2 Hz，1 H)；13C NMR(75 MHz，CDCl3)δ7.9，20.4，30.2，31.6，52.2，66.4，72.8，97.5，118.2，126.3，128.6，129.8，130.3，130.7，131.9，132.2，134.6，134.64，136.4，136.5，138.1，140.9，146.2，148.4，149.9，151.3， 157.1，174.1；HRMS(EI)m/z C36H34N2O4Si (M+) 的計(jì)算值586.2281，實(shí)測值586.2288； LRMS(EI)m/z 586(M+)，542，529，485，428，407，321，181，131，69.
實(shí)施例4制備(20S)-10-乙酰氧基-7-三甲基甲硅烷基喜樹堿(見圖3) (1)4-乙酰氧基苯基異腈(14)0℃在用CH2Cl2(10ml)配制的4-乙酰氧基甲酰苯胺(13)(358mg，1.0mmol)溶液中加入四溴甲烷(0.70g，2.1mmol)、三苯基膦(525mg，2.1mmol)和三乙胺(320ml，2.1mmol)，暗處將此化合物回流3小時(shí)。蒸發(fā)掉溶劑后，在冰凍的Et2O(20ml)中研磨粗品，過濾。蒸發(fā)掉溶劑快速層析(己烷/AcOEt 8∶2)純化殘留物，得到243mg(76％)微棕色固體IR(neat，cm-1)2127，1768，1501，1370，1201，1180，909；1H NMR(300 MHz，CDCl3)δ2.29(s，3 H)，7.11(d，J＝8.8 Hz，2 H)，7.38(d，J＝8.8 Hz，2 H)；13C NMR (75 MHz，CDCl3)δ21.0，122.8，127.6，150.8，164.3，168.8；HRMS(EI)m/z C9H7NO2(M+)的計(jì)算值161.0477，實(shí)測值161.0474；LRMS(EI)m/z 161(M+)，133，119，91.
(2)(20S)-10-乙酰氧基-7-三甲基甲硅烷基喜樹堿(15)按實(shí)施例1-(2)所述的流程，用實(shí)施例1-(1)制備的化合物(44.5mg，0.10mmol)和(1)制備的化合物(48.3mg，0.30mmol)進(jìn)行反應(yīng)，快速層析(CHCl3/丙酮10∶1)后，得到29.9mg(63％)淡黃色油[α]D20+29.9(c 0.5，CHCl3)；1H NMR(300 MHz，CDCl3)δ0.61(s，9 H)，0.98(t，J＝7.4 Hz，3 H)，1.86(m，2 H)，2.38(s，3 H)，4.13(brs，1 H)，5.24(d，J＝16.4 Hz，1H)，5.27(s，2 H)，5.68(d，J＝16.4 Hz，1 H)，7.46(dd，J＝9.2，2.5 Hz，1 H)，7.60(s，1 H)，7.96(d，J＝2.5Hz，1 H)，8.13(d，J＝9.2 Hz，1 H)；13C NMR (75 MHz，CDCl3)δ1.4，7.8，21.4，31.5，51.7，66.2，97.6，118.3，118.9，124.6，132.1，135.0，145.7，146.1，148.9，150.1，150.7，157.3，169.1，173.7；HRMS(EI) m/z C25H26N2O6Si(M+)的計(jì)算值 478.1560，實(shí)測值478.1582；LRMS(EI)m/z 478(M+)，436，392，377，336，277.
實(shí)施例5制備(20S)-10-羥基-7-三甲基甲硅烷基喜樹堿(16)
室溫，將實(shí)施例5-(2)制備的化合物(15)(16.8mg，0.035mmol)和K2CO3(9.6mg，0.070mmol)在MeOH(100ml)和H2O(100ml)中攪拌1小時(shí)30分鐘。用AcOH(2滴)酸化反應(yīng)混合物，用鹽水(10ml)稀釋，AcOEt(10×10ml)提取。干燥(Na2SO4)合并的有機(jī)層，蒸發(fā)，快速層析(CHCl3/MeOH/AcOH 90∶10∶2；CHCl3/丙酮2∶1)對殘留物進(jìn)行純化，得到15.1mg(99％)白色固體[α]D20+18.9(c 0.2，CHCl3/MeOH4∶1)；1H NMR(300 MHz，CDCl3/CD3OD 4∶1)δ0.45(s，9 H)，0.84(t，J＝7.3 Hz，3 H)，1.75(m，2 H)，5.12(br s，2H)，5.12(d，J＝16.3 Hz，1 H)，5.48(d，J＝16.3 Hz，1H)，7.24(dd，J＝9.1，2.5 Hz，1 H)，7.39(d，J＝2.5 Hz，1 H)，7.87(d，J＝9.1 Hz，1 H)；13C NMR(75 MHz，CDCl3/CD3OD 4∶1)δ 0.8，7.4，31.1，51.8，65.7，97.5，109.8，117.5，122.3，131.3，133.7，134.6，141.7，142.6，146.3，147.5，151.1，156.3，157.6；HRMS (EI)m/zC23H24N2O5Si(M+)的計(jì)算值436.1454，實(shí)測值436.1450；LRMS(EI)m/z 436(M+)，392，377，336，323.
將此化合物與NH2CH2CH2NMe2進(jìn)行反應(yīng)，然后與EtCOCl進(jìn)行反應(yīng)，得到E-環(huán)開環(huán)的類似物，進(jìn)行生物測試。
實(shí)施例6制備(20S)-三甲基甲硅烷基-依立替康(見圖6) (1)[1，4′]聯(lián)哌啶基-1′-羧酸4-硝基-苯酯(32)-78℃，在150ml干THF配制的氯甲酸4-硝基苯酯(31)(5.15g，25.6mmol)溶液中加入三乙胺(10.7ml，76.2mmol)，然后再加入用40ml THF配制的4-哌啶子基哌啶(30)(4.51g，25.6mmol)。攪拌此溶液2小時(shí)，然后除去溶劑，用AcOEt提取殘留物，過濾、蒸發(fā)。用AcOEt作為洗脫液，將粗制黃色固體通過中性氧化鋁層，蒸發(fā)后得到6.73g(79％)白色固體IR(CHCl3，cm-1)3046，2937，2859，1704，1620，1513，1466，1242，1197；1H NMR(300 MHz，CDCl3)δ 1.20-1.80(m，8 H)，1.90(d，J＝12.7 Hz，2 H)，2.20-2.70(m，5 H)，2.87(t，J＝12 Hz，1 H)，3.01 (t，J＝12 Hz，1 H)，4.30(br s，2 H)，7.29(d，J＝9 Hz，2 H)，8.26(d，J＝9 Hz，2 H)；13CNMR(75 MHz，CDCl3)δ 24.6，26.3，27.5，28.2，40.1，44.4，50.1，62.0，122.2，124.9，144.8，151.9，156.3； HRMS(EI)m/z C17H23N3O4(M+)的計(jì)算值 333.1676，實(shí)測值333.1688；LRMS(EI)m/z 333(M+)，195，167，124，110，96，55.
(2)[1，4′]聯(lián)哌啶基-1′-羧酸4-氨基-苯酯在用AcOEt(125ml)配制的(1)中制備的化合物(1.012g，3.03mmol)溶液中加入10％Pd/C(0.15g)。用氬氣吹掃此系統(tǒng)若干次，加入1L氣瓶的H2。室溫?cái)嚢璐嘶旌衔?2小時(shí)后，用硅藻土過濾除去催化劑，蒸發(fā)掉溶劑，得到835mg(91％)白色固體IR(CHCl3，cm-1)3453，3400，3028，2936，2859，1703，1513，1429，1242，1226，1210，1197；1H NMR(300 MHz，CDCl3)δ1.30-1.70(m，8 H)，1.86(d，J＝12.6Hz，2 H)，2.33-2.62(m，5 H)，2.68-3.04(m，2 H)，3.58(brs，2 H)，4.30(brs，2 H)，6.64(d，J＝6.0 Hz，2 H)，6.87(d，J＝6.0 Hz，2 H)；13C NMR(75 MHz，CDCl3)δ24.6，26.3，27.5，28.1，43.8，43.9，50.1，62.3，115.4，122.3，143.4，143.7，154.1；HRMS(EI)m/z C17H25N3O2(M+)的計(jì)算值 303.1944，實(shí)測值803.1947；LRMS(EI)m/z303(M+)，195，167，124，108，96，80，65，55.
(3)[1，4′]聯(lián)哌啶基-1′-羧酸4-甲酰氨基-苯酯(33)
0℃，攪拌用CH2Cl2(5ml)配制的二環(huán)己基碳二亞胺(272mg，1.32mmol)溶液，逐滴加入98％甲酸(60.7mg，1.32mmol)。10分鐘后，0℃用注射器將此混合物加到用吡啶(5ml)配制的實(shí)施例2制備的化合物(200mg，0.66mmol)溶液中。然后讓反應(yīng)混合物升溫至室溫，攪拌3小時(shí)。蒸去吡啶，用CH2Cl2提取殘留物，過濾、蒸發(fā)，直接加樣到堿性氧化鋁柱上(CH2Cl2/MeOH 95∶5)，得到118mg(83％)白色固體，室溫時(shí)該固體是由順式和反式旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體(由受阻的圍繞甲酰胺碳-氮鍵旋轉(zhuǎn)而產(chǎn)生的)構(gòu)成IR(CHCl3，cm-1)3025，3013，2937，2888，2861，1703，1517，1466，1275，1226，1210；1H NMR(300 MHz，CDCl3)δ 1.38-1.80(m，8 H)，1.90(d，J＝12Hz，2 H)，2.40-2.70(m，5 H)，2.83(t，J＝12 Hz，1 H)，2.97(t，J＝12 Hz，1 H)，4.32(m，2 H)，7.03-7.11(m，3H)，7.37(brs，5 H)(cis)，7.46(d，J＝10 Hz，1 H)，7.53(d，J＝11 Hz，5 H)(trans)，8.32(d，J＝2 Hz，.5H)(cis)，8.59(d，J＝11 Hz，.5 H)(trans)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ 24.6，26.3，27.6，28.1，44.2，44.0，50.1，82.2，120.0，121.0，122.1，123.0，133.9，134.3，147.5，148.9，153.9，153.4，159.1，162.5；HRMS(EI)m/z C18H25N3O3(M+)的計(jì)算值331.1884，實(shí)測值331.1896；LRMS(EI)m/z 331(M+)，244，202，167，124，80，55.
(4)[1，4′]聯(lián)哌啶基-1′-羧酸4-異腈基-苯酯(34)0℃，在用CH2Cl2(5ml)配制的實(shí)施例(3)制備的化合物(90.1mg，0.272mmol)的溶液中依次加入三乙胺(69.5mg，0.688mmol)，然后逐滴加入用干C2HCl2(10ml)配制的三光氣溶液(68mg，0.229mmol)。室溫?cái)嚢璐嘶旌衔?小時(shí)，用7％NaHCO3(5ml)洗滌，并干燥(MgSO4)。蒸發(fā)掉溶劑后，得到的粗制棕色殘留物進(jìn)行快速層析(Et2O/Et2NH 95∶5)，得到67.2mg(79％)白色固體IR(CHCl3，cm-1)3034，2937，2131，1718，1504，1429，1233，1224，1213，1198，1184；1HNMR(300 MHz，CDCl3)δ 1.32-1.75(m，8 H)，1.90(br d，J＝12.4 Hz，2 H)，2.32-2.65(m，5 H)，2.84(t，J＝12.3Hz，1 H)，2.98(t，J＝12.1 Hz，1 H)，4.20-4.40(m，2 H)，7.14(d，J＝8.8 Hz，2 H)，7.37(d，J＝8.8 Hz，2 H)；13C NMR(75 MHz，CDCl3)δ 25.0，26.5，27.8，28.5，44.4，50.6，62.7，123.3，127.8，152.1，153.1，164.4 ；HRMS(EI)m/z C18H23N3O2(M+)的計(jì)算值313.1779，實(shí)測值313.1790；LRMS(EI)m/z 313(M+)，195，167，124，110，84，55(5)(20S)-7-三甲基甲硅烷基-依立替康(35)按實(shí)施例1-(2)所述的流程，70℃在275W GE太陽燈照射下，在干苯(1.5ml)中攪拌實(shí)施例1-(1)制備的化合物(44.5mg，0.10mmol)、(4)制備的化合物(93.9mg，0.3mmol)和六甲基二錫(50mg，0.15mmol)9小時(shí)。蒸發(fā)反應(yīng)物，溶解在帶有幾滴DMSO(輔助溶解)的MeOH中，注射到Waters反相HPLC中。以下為用于進(jìn)行分離的條件。使用Waters 600E系統(tǒng)控制器，其裝備有Waters 490E程控多波長探測器、Sargent Welch繪圖儀和Waters C-18 25×10柱體。梯度洗脫，[5∶95MeCN/H2O(0.1％TFA)到30∶70 MeCN/H2O(0.1％TFA)]，進(jìn)行40分鐘，20ml/分，干凍后得到半純化灰色的固體。用1mm板在層析管(chromatotron)上進(jìn)一步純化(CH2Cl2/EtOH 70∶30)此灰色固體，得到12mg(19％)黃色固體[α]D20+14.8(c 0.2，CHCl3)；IR(CHCl3，cm-1)3023，2957，2933，1720，1659，1601，1216，1191，1175，1158；1H NMR(300 MHz，CDCl3)δ0.64(s，9 H)，1.03(t，J＝7.3 Hz，3 H)，1.50-1.51(brm，2 H)，1.51-1.52(brm，6 H)，1.84(m，J＝7.3 Hz，2H)，2.01-2.10(br m，2 H)，2.60-2.75(br s，5 H)，2.75-3.12(br m，2 H)，4.30-4.50(br m，2 H)，5.30(d，J＝16.3 Hz，1 H)，5.31(s，2 H)，5.74(d，J＝16.3 Hz，1 H)，7.55(dd，J＝9.0，2.4 Hz，1 H)，7.63(s，1 H)，8.01(d，J＝2.3 Hz，1 H)，8.19(d，J＝9 Hz，1 H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ 1.5，7.8，25.4，29.7，31.5，43.8，50.1，51.8，62.5，66.3，72.8，97.5，118.1，119.0，125.1，132.0，132.3，134.9，143.4，145.6，146.4，150.1，150.5，152.8，157.4，174.0；HRMS(EI)m/z C34H42N4O6Si(M+)的計(jì)算值630.2898，實(shí)測值630.2874； LRMS(EI)m/z 630(M+)，586，501，457，195，167，153，124，111，96，84.
實(shí)施例7制備(20S)-11-氟-7-三甲基甲硅烷基喜樹堿(見圖2) (1)3-氟-2-三甲基甲硅烷基苯甲醛(7)通過鄰位金屬取代制備3-氟-2-三甲基甲硅烷基苯甲醛。見Comins，D.L.等人，J.Org.Chem.，49，1078(1984)。還可參見Snieckus，V.，Chem.Rev.，90，879(1990)。-20℃，在用THF(50ml)配制的N，N，N′-三甲基乙二胺(2.70ml，20mmol)溶液中慢慢加入用己烷配制的1.6N正-BuLi(13ml，21mmol)，15分鐘后再加入3-氟苯甲醛(2.10ml，20mmol)。該溫度15分鐘后，注射入用己烷配制的1.6N正-BuLi(38ml，60mmol)，-35℃攪拌此溶液1小時(shí)。加入氯代三甲基硅烷(15ml，120mmol)，室溫?cái)嚢璐朔磻?yīng)混合物的過夜。將最終的溶液傾倒入冰凍1NHCl(150ml)中，用Et2O(3×100)迅速提取，鹽水洗滌，干燥(Na2SO4)。蒸發(fā)掉溶劑后，快速層析(己烷/AcOEt 95∶5)純化，得到3.25g(83％)油IR(純，cm-1)1701，1440，1252，1233，1109，848，764；1H NMR(300 MHz，CDCl3)δ 0.40(d，J＝2.6 Hz，9 H)，7.18(brt，J＝9.0 Hz，1 H)，7.47(ddd，J1＝J2＝8.1 Hz，J3＝5.4 Hz，1 H)，7.70(br d，J＝7.5 Hz，1 H)；13C NMR(75 MHz，CDCl3)δ1.8，120.8(d，JCF＝29 Hz)，126.8，128.2，131.2，143.3，167.6(d，JCF＝244 Hz)，192.4；HRMS(EI)m/z C9H10FDSi(M-CH3+)的計(jì)算值181.0485，實(shí)測值181.0482；LRMS(EI)m/z 181(M-CH3+)，151，125，103，91.
(2)3-氟-2-三甲基甲硅烷基苯甲酸然后進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)氧化成游離酸。見Hill，L.R.等人，J.Org.Chem.，50，470(1985)。在叔-丁醇(20ml)配制的(1)制備的化合物(3.41g，17.3mmol)溶液中，逐次加入用THF配制的2N 2-甲基-2-丁烯(55ml，110mmol)溶液，然后在10分鐘內(nèi)緩慢加入用水(18ml)配制的80％NaClO2(2.55g，22.5mmol)和NaH2PO4·H2O(3.10g，22.5mmol)溶液。室溫?cái)嚢璧玫交旌衔?6小時(shí)，蒸發(fā)掉叔-丁醇，用1N NaOH(50ml)吸收殘留物，用己烷(3×20ml)洗滌。用1N HCl將水層酸化至pH 2，用NaCl飽和，用Et2O(3×50ml)提取。干燥(Na2SO4)混合的有機(jī)層，蒸發(fā)得到3.13g(85％)白色固體IR(NaCl，cm-1)2982，1700，1434，1294，1271，1253，1230，849，763；1H NMR(300 MHz，CDCl3)δ 0.39(d，J＝2.6 Hz，9 H)，7.16(brt，J＝9.1 Hz，1 H)，7.41(ddd，J1＝J2＝7.9 Hz，J3＝5.6 Hz，1 H)，7.73(br d，J＝7.7 Hz，1 H)；13C NMR(75 MHz，CDCl3)δ 1.3，119.5(d，JCF＝27 Hz)，126.0，127.3，130.9，138.0，167.5(d，JCF＝243 Hz)，174.5；HRMS(EI)m/z C9H10FO2Si(M-CH3+)的計(jì)算值197.0434，實(shí)測值197.0433；LRMS(EI)m/z 197(M-CH3+)，179，133，115，105.
(3)3-氟-2-三甲基甲硅烷基苯基異氰酸酯(8)用Curtius重排法進(jìn)行中間體異氰酸酯的制備。見Capson，T.L.等人，TetrahedronLett.，25，3515(1984)和其中的參考文獻(xiàn)。在用CH2Cl2(20ml)配制的(2)制備的化合物(3.03g，14.3mmol)的溶液中加入草酰氯(1.30ml，15.0mmol)，室溫?cái)嚢璧玫降幕旌衔?小時(shí)。蒸發(fā)掉溶劑后將得到的殘留物用THF(10ml)稀釋，注射到劇烈攪拌的冰凍的用H2O(20ml)和丙酮(50ml)配制的NaN3(3.70g，57mmol)溶液中。0℃15分鐘、室溫1分鐘后，用Et2O(4×50ml)提取溶液并干燥(Na2SO4)。蒸發(fā)掉溶劑后得到的殘留物在甲苯中回流1小時(shí)30分鐘，除去上述溶劑后得到2.85g(79％)淡黃色油IR(純，cm-1)2269，1598，1433，1252，1228，846，788；1HNMR(300 MHz，CDCl3)δ0.38(d，J＝1.9 Hz，9 H)，6.82(br t，J＝8.3 Hz，1 H)，6.90(br d，J＝8.2 Hz，1 H)，7.25(ddd，J1＝J2＝8.1 Hz，J3＝6.6 Hz，1 H)；13C NMR(75 MHz，CDCl3)δ 0.4，112.6(d，JCF＝26 Hz)，120.5，122.5，131.5，139.2，167.4(d，JCF＝241 Hz).
(4)3-氟-2-三甲基甲硅烷基苯基異腈(9)然后進(jìn)行脫氧反應(yīng)得到期望的異腈。見Baldwin，J.E.等人，Tetrahedron，39，2989(1983)。0℃緩慢地將三乙胺(4.10ml，29.3mmol)加到用CH2Cl2配制的2N三氯硅烷(8.40ml，16.8mmol)溶液中，5分鐘后加入實(shí)施例(3)制備的化合物(2.35g，11.2mmol)。0℃1小時(shí)30分鐘和室溫30分鐘后，用NH3飽和此溶液，硅藻土過濾，用5％NaH2PO4洗滌，干燥(Na2SO4)。蒸發(fā)掉溶劑后得到的粗品進(jìn)行快速層析(己烷/AcOEt 95∶5)，得到1.42g(66％)淡紫色液體IR(純，cm-1)2114，1598，1440，1254，1237，1110，943，848，793；1H NMR(300 MHz，CDCl3)δ 0.45(d，J＝1.8 Hz，9 H)，7.01(br t，J＝8.3 Hz，1 H)，7.17(br d，J＝7.7Hz，1 H)，7.32(ddd，J1＝J2＝8.0 Hz，J3＝6.1 Hz，1 H)；13C NMR(75 MHz，CDCl3)δ 0.1，116.5(d，JCF＝26 Hz)，124.3，131.6，166.8(d，JCF＝243 Hz)，166.9；HRMS(EI)m/z C10H12FNSi(M+)的計(jì)算值193.0723，實(shí)測值193.0715；LRMS(EI)m/z 193(M+)，178，150，116，105.
(5)(20S)-11-氟-7，12-二(三甲基甲硅烷基)喜樹堿(11)按實(shí)施例1-(2)所述的流程，用實(shí)施例1-(1)制備的化合物(43.5mg，0.098mmol)和實(shí)施例(4)制備的化合物(76mg，0.39mmol)進(jìn)行反應(yīng)，快速層析(CH3Cl/丙酮20∶1)后得到33.4mg(67％)淡黃色油[α]D20+23.6(c 0.2，CHCl3)；1H NMR(300 MHz，CDCl3)δ 0.53(d，J＝1.7 Hz，9 H)，0.60(s，9 H)，1.02(t，J＝7.4 Hz，3 H)，1.88(m，2 H)，3.82(br s，1 H)，5.28(d，J＝16.3 Hz，1 H)，5.29(br s，2 H)，5.72(d，J＝16.3 Hz，1 H)，7.31(t，J＝8.7 Hz，1 H)，7.46(s，1 H)，8.18(dd，J＝9.2，5.9 Hz，1 H)；13C NMR(75 MHz，CDCl3)δ1.6，1.7，7.7，31.4，51.8，66.3，72.7，97.2，117.8(d，JCF＝33 Hz)，124.3(d，JCF＝28 Hz)，128.9，131.1，133.1，144.4，146.7，150.1，153.4，157.4，167.6(d，JCF＝245Hz)，173.9；HRMS(EI)m/z C26H31FN2O4Si2(M+)的計(jì)算值510.1806，實(shí)測值510.1806；LRMS(EI)m/z 510(M+)，495，466，451，395，319.
(6)(20S)-11-氟-7-三甲基甲硅烷基喜樹堿(12)50℃加熱用48％HBr(1ml)配制的實(shí)施例(5)制備的化合物(19.5mg，0.038mmol)溶液20小時(shí)。緩慢將反應(yīng)混合物的傾倒到劇烈攪拌的飽和NaHCO3(10ml)中，用AcOEt(6×20ml)提取，并干燥(Na2SO4)。蒸發(fā)掉溶劑后，快速層析(CHCl3/丙酮8∶1)純化殘留物，得到12.5mg(83％)淡黃色固體[α]D20+39.6(c 0.2，CHCl3)；1H NMR(300 MHz，CDCl3)δ 0.62(s，9 H)，1.01(t，J＝7.4 Hz，3 H)，1.87(m，2 H)，3.81(br s，1H)，5.28(d，J＝16.4 Hz，1 H)，5.28(br s，2 H)，5.72(d，J＝16.4 Hz，1 H)，7.31(ddd，J＝9.6，7.8，2.8 Hz，1H)，7.61(s，1 H)，7.78(dd，J＝9.7，2.7 Hz，1 H)，8.19(dd，J＝9.4，5.8 Hz，1 H)；13C NMR(75 MHz，CDCl3)δ1.6，7.8，31.5，51.7，66.3，72.7，97.8，114.3(d，JCF＝20 Hz)，117.7(d，JCF＝26 Hz)，118.5，128.9，130.0，133.9，144.4，146.1，149.3，150.1，151.7，157.4，162.6(d，JCF＝250 Hz)，173.9；HRMS(EI)m/z C23H23FN2O4Si(M+)的計(jì)算值 438.1411，實(shí)測值438.1412；LRMS(EI)m/z 438(M+)，409，394，379，365，338，309.實(shí)施例8制備(20S)-10-氨基-7-三甲基甲硅烷基喜樹堿(見圖4)(CHJ-792) (1)4-叔-丁氧基羰基氨基苯基異腈(18)通過標(biāo)準(zhǔn)Boc保護(hù)和脫水反應(yīng)分兩步制備該異腈。見Einhorn，J.等人，Synlett，37(1991)。清洗浴(cleaning bath)中超聲處理用純EtOH(50ml)配制的4-氨基甲酰苯胺(1.71g，12.6mmol)、焦碳酸二-叔-丁酯(2.87g，13.2mmol)和NaHCO3(1.11g，13.2mmol)混合物4小時(shí)。將最終的溶液用硅藻土片過濾，濃縮至干燥。殘留物吸收到半鹽水(half brine)(50ml)中，用AcOEt(6×30mL)提取，并干燥(Na2SO4)。蒸發(fā)掉溶劑后，將殘留的油進(jìn)行快速層析(CHCl3/MeOH 95∶5)，得到2.85g(96％)呈白色固體的4-叔-丁氧基羰基氨基甲酰苯胺。將此中間體(945g，4.0mmol)進(jìn)行如實(shí)施例5-(1)所述的條件下進(jìn)行處理，快速層析(己烷/AcOEt9∶1)后，得到502mg(58％)微棕色固體IR(純，cm-1)3370，2121，1691，1524，1412，1364，1239，1158，832；1H NMR(300 MHz，CDCl3)δ1.48(s，9 H)，6.75(brs，1 H)，7.26(d，J＝8.8 Hz，2 H)，7.37(d，J＝8.8 Hz，2 H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ 28.2，81.3，118.5，127.1，139.4，152.3，162.7；HRMS(EI)m/z C12H14N2O2(M+)的計(jì)算值 218.1055，實(shí)測值218.1044；LRMS(EI)m/z 218(M+)，162，144.
(2)(20S)-10-叔-丁氧基羰基氨基-7-三甲基甲硅烷基喜樹堿(19)按實(shí)施例1-(2)所述的流程，用實(shí)施例1-(1)制備的化合物(44.5mg，0.10mmol)和實(shí)施例(1)制備的化合物(65mg，0.30mmol)進(jìn)行，快速層析(CHCl3/丙酮6∶1)后，得到32.5mg(60％)淡黃色固體[α]D20+28.0(c 0.2，CHCl3)；1H NMR(300 MHz，CDCl3)δ0.63(s，9 H)，0.99(t，J＝7.4 Hz，3 H)，1.53(s，9H)，1.86(m，2 H)，4.03(brs，1 H)，5.24(d，J＝16.2Hz，1 H)，5.26(s，2 H)，5.70(d，J＝16.2 Hz，1 H)，7.00(brs，1 H)，7.47(dd，J＝9.2，2.3 Hz，1 H)，7.55(s，1H)，8.02(d，J＝9.2 Hz，1 H)，8.56(brs，1 H)；13C NMR(75 MHz，CDCl3)δ 1.3，7.8，28.2，31.5，51.8，66.3，72.8，97.1，114.4，117.8，122.6，131.3，132.8，135.0，137.2，142.9，144.3，146.6，149.2，150.1，157.4，173.9；HRMS(EI)m/z C23H25N3O4Si(M+)的計(jì)算值(M-Boc+)435.1614，實(shí)測值435.1612；LRMS(EI)m/z 535(M+)，479，435，391，362，335.
(3)(20S)-10-氨基-7-三甲基甲硅烷基喜樹堿(20)室溫?cái)嚢栌肅H2Cl2(2ml)配制的實(shí)施例(2)制備的化合物(75.5mg，0.141mmol)和FFA(500ml)溶液3小時(shí)。然后將反應(yīng)混合物的傾倒入飽和的NaHCO3(50ml)中，用AcOEt(10×15ml)提取并干燥(Na2SO4)。蒸發(fā)掉溶劑后，快速層析(CHCl3/MeOH95∶5)殘留物，得到55.4mg(90％)黃色固體[α]D20+18.7(c0.15，CHCl3/MeOH 4∶1)；1H NMR(300 MHz，CDCl3/CD3OD 4∶1)δ0.40(s，9 H)，0.80(t，J＝7.4 Hz，3 H)，1.70(m，2H)，5.05(s，2 H)，5.08(d，J＝16.3 Hz，1 H)，5.43(d，J＝16.3 Hz，1 H)，7.05(br s，1 H)，7.07(d，J＝8.0 Hz，1H)，7.38(s，1 H)，7.74(d，J＝8.0 Hz，1 H)；13C NMR(75 MHz，CDCl3/CD3OD 4∶1)δ 0.6，7.2，30.8，51.8，65.5，72.7，97.0，107.2，116.8，122.0，130.7，134.0，134.7，139.9，141.7，145.8，146.9，151.2，157.5，173.7；HRMS(EI)m/z C23H25N3O4Si(M+)的計(jì)算值 435.1614，實(shí)測值435.1613；LRMS(EI)m/z 435(M+)，391，376，335，290.實(shí)施例9制備(20S)-11-氨基-7-三甲基甲硅烷基喜樹堿 (1) 3-叔-丁氧基羰基氨基苯基異腈按實(shí)施例9-(1)所述的相同流程分兩步制備該異腈。在第一步中，對3-氨基甲酰苯胺(1.80g，13.2mmol)進(jìn)行Boc-保護(hù)，快速層析(CHCl3/MeOH 95∶5)后得到呈白色固體的2.65g(85％)3-叔-丁氧基羰基氨基甲酰苯胺。然后將此中間體(412mg，1.74mmol)置于實(shí)施例5-(1)所述的條件下，快速層析(己烷/AcOEt 9∶1)后得到190mg(50％)褐色固體IR(純，cm-1)3318，2126，1715，1603，1547，1433，1236，1162，782；1H NMR(300 MHz，CDCl3)δ1.49(s，9 H)，6.67(brs，1 H)，7.00(m，1 H)，7.20-7.30(m，2 H)，7.60(brs，1 H)；13C NMR(75 MHz，CDCl3)δ 28.2，81.3，116.0，118.9，120.6，129.8，139.5，152.3，163.6；HRMS(EI)m/z C12H14N2O2(M+)的計(jì)算值218.1055，實(shí)測值218.1047；LRMS(EI)m/z 218(M+)，196，162，152，118.
(2)(20S)-11-氨基-7-三甲基甲硅烷基喜樹堿按實(shí)施例1-(2)所述的流程，用實(shí)施例1-(1)制備的化合物(44.5mg，0.10mmol)和實(shí)施例(1)制備的化合物(65.5mg，0.3mmol)進(jìn)行，快速層析(CHCl3/MeOH95∶5；CHCl3/丙酮5∶1)后，得到23.1mg(43％)淡黃色油。然后在實(shí)施例9-(3)所述的條件下將此中間體(14.7mg，0.027mmol)去保護(hù)，快速層析(CHCl3/MeOH 9∶1)后，得到11.8mg(99％)呈黃色固體的(20S)-11-氨基-7-三甲基甲硅烷基喜樹堿，不含其他異構(gòu)體[α]D20+15.0(c0.1，CHCl3/MeOH 4∶1)；1H NMR(300 MHz，CDCl3/CD3OD 4∶1)δ 0.44(s，9 H)，0.86(t，J＝7.4 Hz，3 H)，1.76(m，2H)，5.08(s，2 H)，5.14(d，J＝16.4 Hz，1 H)，5.50(d，J＝16.3 Hz，1H)，6.97(dd，J＝9.2，2.5 Hz，1 H)，7.07(d，J＝2.5 Hz，1 H)，7.50(s，1 H)，7.84(d，J＝9.2 Hz，1 H)；13C NMR(75 MHz，CDCl3/CD3OD 4∶1)δ 1.1，7.4，31.0，51.7，65.6，97.9，107.9，117.8，119.7，125.9，127.1，129.0，130.4，135.4，144.3，149.5，149.9，151.1，157.6，175.3；HRMS(EI)m/z C23H25N3O4Si(M+)的計(jì)算值435.1614，實(shí)測值435.1626； LRMS(EI)m/z 435(M+)，406，391，376，335.
實(shí)施例10制備(20S)-11-氟-10-氨基-7-三甲基甲硅烷基喜樹堿(見圖5) (1) 4-叔-丁氧基羰基氨基-3-氟-1-硝基苯(22)在用CH2Cl2(25ml)配制的2-氟-4-硝基苯胺(21)[按Katrtsky，A.R.等人，J.Org.Chem.，51，5039(1986)所述的方法制備](2.16g，13.9mmol)溶液中逐次加入焦碳酸二-叔-丁酯(3.19g，14.6mmol)、三乙胺(2.95ml，20.8mmol)和4-二甲基氨基吡啶(210mg，1.67mmol)，室溫?cái)嚢璐朔磻?yīng)混合物的16小時(shí)。用CH2Cl2(75ml)稀釋最終的溶液，用冰凍5％檸檬酸(4×50ml)洗滌，干燥(Na2SO4)。蒸發(fā)掉溶劑后，將殘留物進(jìn)行快速層析(己烷/AcOEt 9∶5)，按洗脫順序首先得到1.95g(55％)單保護(hù)的衍生物4-叔-丁氧基羰基氨基-3-氟-1-硝基苯，然后得到1.13g(23％)雙-保護(hù)衍生物，4-二-叔-丁氧基羰基氨基-3-氟-1-硝基苯。單保護(hù)衍生物的特性如下1H NMR(300 MHz，CDCl3)δ 1.52(s，9 H，6.99(brs，1 H)，7.95(m，1 H)，8.03(brd，J＝9.2 Hz，1 H)，8.34(brt，J＝8.5 Hz，1 H)；13C NMR(75 MHz，CDCl3)δ28.1，82.5，110.9(d，JCF＝23 Hz)，118.3，120.8，133.5，141.7，150.1(d，JCF＝243 Hz)，151.4 ；HRMS(EI)m/z C11H13FN2O4(M+)的計(jì)算值 256.0859，實(shí)測值258.0854；LRMS(EI)m/z 256(M+)，200，182，57.
(2)4-叔-丁氧基羰基氨基-3-氟苯胺(24)按如下常規(guī)流程將硝基還原成胺官能團(tuán)。見Ram，S.等人，TetrahedronLett，25，3415(1984)。在用無水MeOH(12ml)配制的實(shí)施例(1)制備的化合物(1.62g，6.32mmol)和甲酸銨(1.70g，27mmol)溶液中加入10％Pd-C(400mg)。室溫2小時(shí)后，用硅藻土過濾最終的溶液，濃縮，直接將殘留物進(jìn)行快速層析(CHCl3/MeOH9∶1)，得到1.40g(98％)微黃色油1H NMR(300 MHz，CD3SOCD3)δ1.40(s，9 H)，5.22(s，2 H)，6.25-6.35(m，2 H)，6.93(brt，J＝8.0 Hz，1 H)，8.29(brs，1 H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ 28.5，80.4，102.1(d，JCF＝24 Hz)，110.7，117.2，122.8，143.4，153.1，154.1(d，JCF＝244 Hz)；HRMS(EI)m/z C11H15FN2O2(M+)的計(jì)算值 226.1118，實(shí)測值226.1116；LRMS(EI)m/z 226(M+)，170，126，83，57.
(3)4-叔-丁氧基羰基氨基-3-氟苯基異腈(25)0℃在攪拌的CH2Cl2(15ml)配制的二環(huán)己基碳二亞胺(1.51g，7.31mmol)溶液中逐滴加入甲酸(275ml，7.31mmol)。10分鐘后，0℃將得到的混合物加到用CH2Cl2(10ml)和吡啶(0.61ml，5.66mol)配制的實(shí)施例2制備的化合物(1.28g，5.66mol)溶液中，為時(shí)5分鐘。然后讓反應(yīng)混合物升溫至室溫，并攪拌16小時(shí)。用硅藻土過濾后，濃縮最終的溶液，作快速層析(CHCl3/AcOEt 85∶15)得到1.44g(100％)白色固體4-叔-丁氧基羰基氨基-3-氟甲酰胺。將此中間體(1.38g，5.43mmol)溶解在CH2Cl2(20ml)中，在0℃依次加入四溴甲烷(1.93g，5，80mmol)、三苯基膦(1.52g，5.80mmol)和1，4-二氮雜二環(huán)[2.2.2]辛烷(DABCO，650mg，5.80mol)。讓反應(yīng)混合物升溫至室溫，攪拌2小時(shí)。蒸發(fā)掉溶劑后，在冰凍的Et2O(20ml)中研磨此粗品，用硅藻土過濾。蒸發(fā)掉溶解后得到的殘留物用快速層析(己烷/AcOEt 95∶5到9∶1)純化，得到660mg(51％)微棕色固體1H NMR(300 MHz，CDCl3)δ1.51(s，9 H)，6.76(brs，1 H)，7.05-7.20(m，2H)，8.17(brt，J＝8.6 Hz，1 H)；13C NMR(75 MHz，CDCl3)δ 28.1，81.8，113.3(d，JCF＝25 Hz)，119.7，123.0，128.6，150.6(d，JCF＝242 Hz)，151.8，164.2；HRMS(EI)m/z C12H13FN2O2(M+)的計(jì)算值236.0961，實(shí)測值236.0952；LRMS(EI)m/z 236(M+)，180，163，136，08，57.
(4)(20S)-10-叔-丁氧基羰基氨基-11-氟-7-三甲基甲硅烷基-喜樹堿(26)和(20S)-10-叔-丁氧基羰基氨基-9-氟-7-三甲基甲硅烷基喜樹堿(27)(1.9∶1的混合物) 按實(shí)施例1-(2)的流程制備，使用實(shí)施例1-(1)(66.8mg，0.15mmol)和實(shí)施例(3)所述的化合物(110mg，0.50mmol)，快速層析(CHCl3/MeOH 96∶4，CHCl3/丙酮10∶1)后，得到47.6mg(57％)呈微黃色油的上述區(qū)域異構(gòu)體1H NMR(300 MHz，CDCl3)δ 0.54(d，J＝4.9 Hz，9次要)，0.65(s，9主要)，0.99(t，J＝7.3 Hz，3 H)，1.86(m，2H)，3.93(brs，1 H)，5.24(d，J＝16.3 Hz，1次要)，5.25(br s，2主要)，5.25(d，J＝16.3 Hz，1主要)，5.30(br s，2主要)，5.68(d，J＝16.3 Hz，1主要)，5.69(d，J＝16.3 Hz，1主要)，6.98(d，J＝3.6 Hz，1主要)，7.02(d，J＝3.6 Hz，1主要)，7.52(s，1主要)，7.53(s，1主要)，7.74(d，J＝12.1 Hz，1主要)，7.92(br d，J＝9.3 Hz，1主要)，8.60(br t，J＝8.4 Hz，1主要)，9.08(d，J＝8.7 Hz，1主要)；HRMS(EI)m/z 計(jì)算值 C28H32FN3O6Si 553.2044，實(shí)測值553.2022；LRMS(EI)m/z 53(M+)，493，479，453，435，424，409，394，380，353.
(5)(20S)-10-氨基-11-氟-7-三甲基甲硅烷基喜樹堿(28)按實(shí)施例9-(3)所述的條件將實(shí)施例(4)制備的化合物(41.3mg，0.0746mmol)去保護(hù)。后處理(workup)后，將粗品進(jìn)行快速層析(CHCl3/丙酮/MeOH 70∶10∶1.5)，按洗脫的順序，首先得到14.1mg(42％)純(20S)-10-氨基-11-氟-7-三甲基甲硅烷基-喜樹堿，然后是15.2mg約為1∶1混合的(20S)-10-氨基-11-氟-7-三甲基甲硅烷基喜樹堿和(20S)-10-氨基-9-氟-7-三甲基甲硅烷基喜樹堿。(20S)-10-氨基-11-氟-7-三甲基甲硅烷基喜樹堿的特性如下[α]D20+20.0(c 0.2，CHCl3/MeOH4∶1)；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 0.59(s，9 H)，1.00(t，J＝7.4 Hz，3H)，1.86(m，2 H)，3.86(br s，1 H)，4.31(br s，2 H)，5.21(br s，2 H)，5.26(d，J＝16.4 Hz，1 H)，5.69(d，J＝16.4 Hz，1 H)，7.30(d，J＝9.3 Hz，1 H)，7.50(s，1H)，7.69(d，J＝11.8 Hz，1 H)；13C NMR(75 MHz，CDCl3/CD3OD 10∶1)δ 1.4，7.7，31.4，51.9，66.1，72.7，97.1，109.4，113.6 (d，JCF＝20 Hz)，117.3，130.8，134.4，136.4，140.2，142.，146.5，147.6，150.6，153.9，154.0(d，JCF＝251 Hz)，157.6，173.9；HRMS(EI)m/zC23H24FN3O4Si(M+)的計(jì)算值453.1520，實(shí)測值453.1500；LRMS(EI)m/z 453(M+)，424，409，394，352，181，131，119.
實(shí)施例11制備(20S)-11，12-二氟-7-三甲基甲硅烷基喜樹堿和(20S)-9，10-二氟-7-三甲基甲硅烷基喜樹堿(3∶1的混合物) 按實(shí)施例1-(2)所述的流程，用實(shí)施例1-(1)制備的化合物(44.5mg，0.10mmol)和2，3-二氟苯基異腈(以20％收率制備，按Weber，W.P.等人，TetrahedronLett.，13，1637(1972)所述的方案，在后處理前在室溫?cái)嚢?天)(42mg，0.30mmol)，快速層析(CHCl3/MeOH 95∶5；CHCl3/丙酮10∶1到4∶1)后，得到含有上述區(qū)域異構(gòu)體的22.6mg(50％)微黃色油1H NMR(300 MHz，CDCl3)δ 0.56(d，J＝4.8 Hz，1次要)，0.65(s，9主要)，1.00(t，J＝7.4 Hz，3 H)，1.86(m，2 H)，3.87(brs，1次要)，3.97(brs，1主要)，5.0-5.47(m，3 H)，5.68(d，J＝16.5 Hz，1 H)，5.70(d，J＝16.4Hz，1次要)，7.31(m，1次要)，7.44(dt，J＝9.4，7.4Hz，1主要)，7.59(s，1次要)，7.60(s，1主要)，7.68(m，1次要)，7.93(m，1主要)；HRMS(EI)m/z計(jì)算值 C23H22F2N2O4Si(M+)456.1317，實(shí)際值456.1321；LRMS(EI)m/z 456(M+)，438，428，412，383，356，327.
實(shí)施例12制備20S-7-三異丙基甲硅烷基喜樹堿 (1)(S)-4-乙基-4-羥基-6-碘-3-氧代-7-(三異丙基甲硅烷基-2-丙炔基)-1H-吡喃并[3，4-c]-8-吡啶酮按實(shí)施例1-(1)所述的流程，將碘代吡啶酮2(200mg，0.598mmol)與三異丙基甲硅烷基-2-丙炔溴(329mg，1.196mmol)混合。層析(CH2Cl2/AcOEt 9∶1)得到41.1mg(13％)白色泡沫狀物1H NMR(300 MHz，CDCl3)δ 0.91(t，J＝7 Hz，6 H)，0.99(s，18 H)，1.71(m，J＝7 Hz，2H)，3.65(s，1 H)，5.0-5.2(m，3 H)，5.45(d，J＝16 Hz，1 H)，7.13(s，1 H)；13C NMR(75 MHz，CDCl3)δ 7.7，11.2，18.7，31.7，44.6，66.5，71.9，87.7，100.1，116.6，118.2，148.6，158.0，173.4；HRMS(EI)m/zC22H32INO4Si(M+)的計(jì)算值529.1162，實(shí)測值529.1145；LRMS(EI)m/z 529(M+)，486，442，82，59.
(2)(20S)-7-三異丙基甲硅烷基喜樹堿按實(shí)施例1-(2)所述的流程，用所述的吡啶酮(41mg，0.077mmol)得到23.3mg(60％)淡黃色固體[α]D20+31.7(c 0.2，CH2Cl2)；IR(CHCl3，cm-1)3026，3008，2996，2962，2950，2932，2892，2869，1742，1658，1598，1555，1466，1230，1220，1158；1H NMR(300 MHz，CDCl3)δ 1.02(t，J＝7Hz，3 H)，1.18(d，J＝7 Hz，18 H)，1.60-2.0(m，5 H)，2.17(s，1 H)，5.31(d，J＝16 Hz，1 H)，5.41(s，2 H)，5.76(d，J＝16，1 H)，7.61(t，J＝7 Hz，1 H)，7.69(s，1 H)，7.78(t，J＝7 Hz 1 H)，8.20(t，J＝7 Hz，2 H)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ 7.9，13.5，19.2，31.7，52.6，66.5，72.9，98.4，118.6，127.1，129.7，130.2，130.4，133.6，136.3，145.0，146.0，150.3，150.6，157.4，174.1；HRMS(EI)m/z C29H36N2Si(M+)的計(jì)算值504.2444，實(shí)測值504.2436；LRMS(EI)m/z 504(M+)，461，433，419，405，391，375，361，347，311，275，174，93，69，59.實(shí)施例13制備20S-7-三異丙基甲硅烷基喜樹堿 (1)(S)-4-乙基-4-羥基-6-碘-3-氧代-7-(三乙基甲硅烷基-2-炔丙基)-1H-吡喃并[3，4-c]-8-吡啶酮按實(shí)施例1-(1)所述的流程，將碘代吡啶酮2(150mg，0.450mmol)與三乙基甲硅烷基-2-丙炔溴(210mg，0.90mmol)混合。層析(CH2Cl2/AcOEt 9∶1)得到97.0mg(45％)白色泡沫狀物1H NMR(300 MHz，CDCl3)δ0.54(q，J＝8Hz，6 H)，0.92(t，J＝8 Hz，12 H)，1.74(m，J＝7 Hz，2H)，3.57(s，1 H)，4.9-5.1(m，3 H)，5.46(d，J＝16 Hz，1 H)，7.13(s，1 H)；13C NMR(75 MHz，CDCl3)δ 4.1，7.4，7.6，31.5，44.5，66.3，71.8，88.7，99.2，100.0，116.5，118.1，148.5，158.0，173.2；HRMS(EI)m/zC19H26INO4Si(M+)的計(jì)算值487.0676，實(shí)測值487.0688；LRMS(EI)m/z 487(M+)，458，430，420，402，360，332，153，141，125，96，83，68，57.
(2)(20S)-7-三乙基甲硅烷基喜樹堿按實(shí)施例1-(2)所述的流程，用所述的吡啶酮(48.7mg，0.1mmol)得到29.8mg(65％)淡黃色固體[α]D20+35.9(c 0.2，CH2Cl2)；IR(CHCl3，cm-1)3015，3002，2960，2935，1741，1658，1599，1219，1199，1158；1H NMR(300 MHz，CDCl3)δ0.80-1.00(m，12 H)，1.0-1.18(m，6 H)，1.70-1.90(m，2H)，5.22-5.27(m，3 H)，5.69(d，J＝16 Hz，1 H)，7.58(t，J＝7 Hz，1 H)，7.63(s，1 H)，7.72(t，J＝7 Hz 1H)，8.18(m，2 H)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ 5.0，7.6，7.9，31.7，52.1，66.5，72.9，97.7，118.3，127.4，127.9，129.7，131.2，132.6，136.1，142.6，146.6，147.9，150.2，150.9，157.6，174.1；HRMS(EI)m/zC26H30N2O4Si(M+)的計(jì)算值462.1975，實(shí)測值462.1982；LRMS(EI)m/z 462(M+)，433，418，405，389，361，256，220，205，189，178，149，137，123，109，95，81，69，57.
實(shí)施例14制備(20S)-7-(二甲基-(1′S，2′S，5′S)7，7-二甲基降蒎基甲硅烷基)喜樹堿 (1)(S)-4-乙基-4-羥基-6-碘-3-氧代-7-(二甲基-(1S，2S，5S)7，7二甲基降蒎基甲硅烷基-2-丙炔基)-1H-吡喃并[3，4-c]-8-吡啶酮按實(shí)施例1-(1)所述的流程，將碘代吡啶酮2(150mg，0.450mmol)與二甲基-(1S，2S，5S)7，7二甲基降蒎基甲硅烷基-2-丙炔溴(281mg，0.90mmol)混合。層析(CH2Cl2/AcOEt 9∶1)后得到100.8mg(39％)白色泡沫狀物1H NMR(300 MHz，CDCl3)δ 0.10(d，J＝2 Hz，6 H)，0.48-0.70(m，2 H)，0.72(s，3 H)，0.93(t，J＝7 Hz，3 H)，1.10(s，3 H)，1.15-1.40(m，3 H)，1.60-1.85(m，6 H)，1.88-2.00(m，1 H)，2.05-2.20(m，1 H)，3.58(s，1 H)，4.95(m，3 H)，5.46(d，J＝16 Hz，1 H)，7.13(s，1 H)；13C NMR(75 MHz，CDCl3)δ 0.78，7.8，20.2，23.1，24.0，24.8，25.3，27.0，31.3，31.7，39.7，40.7，44.7，49.1，66.5，71.9，91.0，98.5，100.3，116.6，118.3，148.7，158.0，173.4.
(2)(20S)-7-(二甲基-(1′S，2′S，5′S)7，7二甲基降蒎基甲硅烷基)喜樹堿按實(shí)施例1-(2)所述的流程，用上述吡啶酮(57.0mg，0.1mmol)得到29.4mg(54％)淡黃色固體[α]20D+29.2(c0.2，CH2Cl2)；IR(CHCl3，cm-1)3020，3000，2980，2972，2939，2914，2824，2867，1741，1658，1599，1556，1264，1231，1201，1157，843；1H NMR(300 MHz，CDCl3)δ 0.50-0.70(m，8 H)，0.90-1.10(m，9 H)，1.10-1.35(m，4 H)，1.40-1.60(m，3 H)，1.72(m，1 H)，1.80-1.95(m，2 H)，2.05-2.11(m，2 H)，5.25(d，J＝16 Hz 1 H)，5.27(s，2H)，5.69(d，J＝16 Hz，1 H)，7.58(t，J＝8 Hz，1 H)，7.62(s，1 H)，7.72(t，J＝8 Hz，1 H)，8.10-8.2(m，2 H)；13CNMR(125 MHz，CDCl3)δ1.4，7.9，19.9，23.0，24.6，25.3，26.8，31.6，31.7，39.6，40.5，49.3，52.0，66.5，72.9，97.7，118.3，127.3，128.3，129.7，131.2，132.1，134.6，144.6，146.6，148.0，150.2，150.9，157.6，174.0；HRMS(EI)m/z C32H38N2O4Si (M+)的計(jì)算值 542.2601，實(shí)測值542.2588；LRMS(EI)m/z 542(M+)，498，487，460，443，431，406，387，377，362，333，318，304，289，275，219，178，166，141，115，95，67.
實(shí)施例15(20S)-7-(3-氰基丙基二甲基甲硅烷基)喜樹堿 (1)(S)-4-乙基-4-羥基-6-碘-3-氧代-7-(3-氰基丙基二甲基甲硅烷基2-丙炔基)-1H-吡喃并[3，4-c]-8-吡啶酮按Rico及其合作者所述的流程(J.Org.Chem.1994，59，415)，將碘代吡啶酮2(150mg，0.450mmol)與3-氰基丙基二甲基甲硅烷基-2-丙炔溴(165mg，0.678mmol)、K2CO3(124mg，0.90mmol)、Bu4N+Br-(14.5mg，0.045mmol)、H2O(0.02ml)和甲苯(3.6ml)混合。將此混合物回流1小時(shí)。過濾和層析(CH2Cl2/AcOEt 9∶1)后，得到34.0mg(15％)白色的油1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 0.17(s，6 H)，0.70-0.80(m，2 H)，0.98(t，J＝7 Hz，3 H)，1.70-1.90(m，4 H)，2.39(t，J＝7，2H)，3.66(s，1 H)，4.9-5.22(m，3 H)，5.51(d，J＝16 Hz，1 H)，7.19(s，1 H)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ-2.1，7.8，15.4，20.5，20.6，31.6，44.6，66.4，71.9，89.1，99.6，100.0，116.7，118.3，119.7，148.8，158.0，173.3；HRMS(EI)m/zC19H23IN2O4Si(M+)的計(jì)算值 498.0472，實(shí)測值498.0480；LRMS(EI)m/z 498(M+)，483，470，445，430，416，402，392，371，348，335，306，290，266，223，202，185，163，136，126，109，98，81，69，57.
(2)(20S)-7-(3-氰基丙基二甲基甲硅烷基)喜樹堿按實(shí)施例1-(2)所述的流程，用上述吡啶酮(25.0mg，0.05mmol)得到9.8mg(41％)淡黃色固體[α]D20+34.3(c 0.2，CH2Cl2)；IR(CHCl3，cm-1)3025，3016，1741，1659，1600，1264，1222；1H NMR(300 MHz，CDCl3)δ 0.71(s，6 H)，1.05(t，J＝7 Hz，3 H)，1.26(m，2 H)，1.66(m，2H)，1.90(m，2 H)，2.35(t，J＝7 Hz，2 H)，3.76(s，1 H)，5.31(d，J＝16 Hz，1 H)，5.31(s，2 H)，5.75(d，J＝16 Hz，1H)，7.67(m，2 H)，7.82(t，J＝8 Hz，1 H)，8.17(d，J＝8 Hz 1 H)，8.24(d，J＝8 Hz，1 H)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ 0.2，7.9，16.8，20.7，20.73，31.7，50.9，66.5，72.8，97.9，118.5，119.2，127.7，127.8，130.0，131.4，131.9，135.2，141.9，146.3，148.1，150.3，151.1，157.5，174.0；HRMS(EI)m/z計(jì)算值C26H27N3O4Si(M+)473.1771，實(shí)際值473.1755；LRMS(EI)m/z 473(M+)，444，429，414，400，389，373 362，344，331，303，289，2.75，245，219，166，152，130，98，71.
實(shí)施例16制備(20S)-7-(3-鹵代丙基二甲基甲硅烷基)喜樹堿(氯代丙基衍生物為DB--148) (1)(S)-4-乙基-4-羥基-6-碘(和6-溴)-3-氧代-7-(3-氯丙基二甲基甲硅烷基-2-丙炔基)-1H-吡喃并[3，4-c]-8-吡啶酮按實(shí)施例1-(1)所述的流程，將碘代吡啶酮2(150mg，0.450mmol)與3-氯丙基二甲基甲硅烷基-2-丙炔溴(228mg，0.90mmol)混合。層析(CH2Cl2/AcOEt 9∶1)后得到75.4mg(33％)清澈的油。NMR分析顯示除所需的氯代衍生物外還存在烷基溴(以1.6∶1的比例前者居多)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 0.09(s，6 H)，0.60-0.70(m，2 H)，0.85-0.89(t，J＝7 Hz，3 H)，1.60-1.95(m，4 H)，3.33(t，J＝7 Hz，2 H，指定為碘代物)，3.44(t，J＝7 Hz，2 H，指定為溴代物)，3.75(s，1 H)，4.91-5.18(m，3 H)，5.42(d，J＝16 Hz，1 H)，7.12(s，1H).
(2)(20S)-7-(3-鹵代丙基二甲基甲硅烷基)喜樹堿按實(shí)施例1-(2)所述的流程，用上述吡啶酮(51mg，0.1mmol)得到23mg(49％)淡黃色固體。光譜數(shù)據(jù)分析顯示該固體是以1.6∶1∶1.3比例相應(yīng)氯、溴和碘衍生物的混合物[α]D20+30.8(c 0.2，CH2Cl2)；IR(CHCl3，cm-1)3029，3012，2980，2963，2933，1742，1658，1600，1556，1258，1233，1218，1200，1158，1045，843，822，794；1H NMR(300 MHz，CDCl3)δ 0.69(s，6 H)，1.04(t，J＝7 Hz，3 H)，1.18-1.30(m，2 H)，1.60-2.0(m，4 H)，3.15(t，J＝7 Hz，2 H，指定為碘)，3.36(t，J＝7 Hz，2 H，指定為溴)，3.48(t，J＝7Hz，2 H，指定為氧)，3.88(s，1 H)，5.30(d，J＝16 Hz，1 H)，5.31(s，2 H)，5.74(d，J＝16 Hz，1 H)，7.62-7.66(m，2 H)，7.87(t，J＝8 Hz，1 H)，8.18(d，J＝8 Hz，1 H)，8.22(d，J＝8 Hz，1 H)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ 0.2，7.9，14.7，27.5，31.7，47.4，51.9，66.4，72.8，98.2，118.6，127.7，127.9，130.0，131.0，132.0，135.2，146.1，147.6，150.2，157.5，174.0；HRMS(EI)m/zC25H27ClN2O4Si(M+)的計(jì)算值 482.1429，實(shí)測值482.1413；LRMS (EI)m/z 482(M+)，453，438，361，305，275.
實(shí)施例17制備(20S)10-乙酰氧基-7-叔-丁基二甲基甲硅烷基喜樹堿 按實(shí)施例1-(2)所述的流程，用上述吡啶酮(34.5mg，0.071mmol)和對-乙酰氧基異腈得到21.3mg(58％)淡黃色固體[α]D20+36.2(c 0.2，CH2Cl2)；IR(CHCl3，cm-1)3029，3000，2958，2931，2902，2885，2859，1742，1659，1600，1557，1504，1464，1371，1256，1232，1195，1166，1045；1HNMR(300 MHz，CDCl3)δ 0.69(s，6 H)，0.90(s，9 H)，1.04(t，J＝7 Hz，3 H)，1.80-2.00(m，J＝7 Hz，2 H)，2.40(s，3 H)，3.81(s，1 H)，5.30(d，J＝16 Hz 1 H)，5.31.(s，2 H)，5.75(d，J＝16 Hz，1 H)，7.53(dd，J1＝9Hz，J2＝2 Hz，1 H)，7.65(s，1 H)，8.08(d，J＝2 Hz，1H)，8.21(d，J＝9 Hz，1 H)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ0.6，7.9，19.3，21.5，27.2，31.7，52.5，66.5，72.9，97.7，118.4，120.4，124.8，132.1，133.2，136.7，142.8，146.2，146.4，149.0，150.2，150.8，157.5，169.1，174.1；LRMS(EI)m/z 520(M+)，478，463，421，377，347，320，291，57.
實(shí)施例18(2)(20S)10-乙酰氧基-7-叔-丁基二甲基甲硅烷基喜樹堿按實(shí)施例2-(2)所述的流程，用所述的吡啶酮(34.5mg，0.071mmol)在相同的層析條件下得到21.3mg(58％)淡黃色的固體[α]D20+36.2(c 0.2，CH2Cl2)；IR(CHCl3，cm-1)3029，3000，2958，2931，2902，2885，2859，1742，1659，1600，1557，1504，1464，1371，1256，1232，1195，1166，1045；1H NMR(300 MHz，CDCl3)δ0.69(s，6 H)，0.90(s，9 H)，1.04(t，J＝7 Hz，3 H)，1.80-2.00(m，J＝7 Hz，2 H)，2.40(s，3 H)，3.81(s，1H)，5.30(d，J＝16 Hz 1 H)，5.31.(s，2 H)，5.75(d，J＝16 Hz，1 H )，7.53(dd，J1＝9 Hz，J2＝2 Hz，1 H)，7.65(s，1 H)，8.08(d，J＝2 Hz，1 H)，8.21(d，J＝9 Hz，1H)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ 0.6，7.9，19.3，21.5，27.2，31.7，52.5，66.5，72.9，97.7，118.4，120.4，124.8，132.1，133.2，136.7，142.8，146.2，146.4，149.0，150.2，150.8，157.5，169.1，174.1；HRMS(EI)m/zC28H32N2O6Si(M+)的計(jì)算值520.2030，實(shí)測值520.2014 LRMS(EI)m/z520(M+)，478，463，421，377，347，320，291，57.
實(shí)施例19 (20S)10-羥基-7-叔-丁基二甲基甲硅烷基喜樹堿(DB-67)用實(shí)施例5所述的流程，將實(shí)施例18所述的化合物(13.4mg，0.026mmol)轉(zhuǎn)化成羥基衍生物。在TLC制備板上純化(2∶1 CH2Cl2∶丙酮)，得到10.6mg(85％)黃色固體[α]D20+17.4(c0.2，3∶1 CH2Cl2/MeOH)；1H NMR(300 MHz，3∶1 CDCl3/CD3OD)δ0.66(s，6 H)，0.88-1.05(m，12 H)，1.80-2.00(m，2H)，5.25-5.30(m，3 H)，5.70(d，J＝16 Hz，1 H)，7.37(dd，J 1＝9 Hz，J 2＝2 Hz，1 H)，7.54(d，J＝2 Hz，1 H)，7.60(s，1 H)，8.05(d，J＝9 Hz，1 H)；13C NMR(125MHz，(3∶1)CDCl3CD30D)δ 8.1，20.6，27.6，30.4，31.9，53.6，66.5，73.9，98.6，112.1，118.8，123.3，132.1，135.6，137.4，141.6，143.8，147.3，148.4，152.6，157.5，158.7，174.7；HRMS(EI)m/z C26H30N2O5Si(M+)的計(jì)算值478.1924，實(shí)測值478.1947 LRMS(EI)m/z 478(M+)，434，421，377，304，284，227，178，149，137，109，97，83，69，57.
實(shí)施例20制備(20S)-7-(三甲基甲硅烷基甲基)喜樹堿 (1)(S)-4-乙基-4-羥基-6-碘-3-氧代-7-(4-三甲基甲硅烷基-2-丁炔基)-1H-吡喃并[3，4-c]-8-吡啶酮按實(shí)施例1-(1)所述的流程，用碘代吡啶酮2(200mg，0.60mmol)和4-三甲基甲硅烷基-2-丁炔溴(245mg，1.20mmol)，在快速層析后(CH2Cl2/AcOEt 9∶1)后得到77.7mg(28％)白色泡沫狀物[α]D20+62.7(c 0.2，CHCl3)；IR(CHCl3，cm-1)3540，3026，2955，1742，1649，1607，1529，1250，1219，1208，1158，1140；1H NMR(300 MHz，CDCl3)δ0.06(s，9 H)，0.92(t，J＝7.4 Hz，3 H)，1.44(t，J＝2.4 Hz，2 H)，1.76(m，J＝7.4 Hz，2 H)，3.74(s，1 H)，4.98(br s，2 H)，5.07(d，J＝15 Hz，1 H)，5.48(d，J＝16.4 Hz，1 H)，7.15(s，1 H)；13C NMR(75 MHz，CDCl3)δ-1.96，7.5，7.6，31.5，44.8，66.3，71.7，84.3，100.3，116.3，118.1，148.3，157.9，173.3；HRMS(EI)m/zC17H22INO4Si(M+)的計(jì)算值 459.0352，實(shí)測值 459.0363；LRMS(EI)m/z 459(M+)，444，386，348，73，57.
(2)(20S)-7-(三甲基甲硅烷基甲基)喜樹堿按實(shí)施例1-(2)所述的流程，用(1)中制備的化合物(46mg，0.10mmol)，在快速層析(CH2Cl2/MeOH 96∶4，CH2Cl2/丙酮9∶1)后，得到16.2mg(38％)淡黃色固體[α]D20+37.6(c 0.2，CHCl3)；IR(CHCl3，cm-1)3002，2984，2962，1741，1659，1601，1572，1559，1253，1219，1197，1157，849；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ-0.34(s，9 H)，0.62(t，J＝7.3 Hz，3 H)，1.48(m，2 H)，2.31(d，J＝3.0 Hz，2 H)，3.53(s，1 H)，4.74(s，2 H)，4.89(d，J＝16.2 Hz，1 H)，5.34(d，J＝16.2 Hz，1 H)，6.85(s，1 H)，7.20(t，J＝7.8 Hz，1 H)，7.36(t，J＝7.4 Hz，1 H)，7.57(d，J＝8.4 Hz，1 H)，7.78(d，J＝8.4 Hz，1H)；13C NMR(75 MHz，CDCl3)δ-0.32，1.1，7.9，31.6，50.3，66.4，72.9，98.1，112.3，124.4，125.84，126.91，127.2，130.1，130.5，144.6，147.4，149.2，150.3，151.5，157.7，174.1；HRMS(EI)m/zC24H26N2O4Si(M+)的計(jì)算值434.1676，實(shí)測值434.1662；LRMS(EI)m/z 434(M+)，390，362，316，290，242，223，185，147，93，73.
實(shí)施例21(20S)-10-羥基-7-[(2-三甲基甲硅烷)乙基]喜樹堿(36a)(DB-174) (1)(4，4-二溴-丁-3-烯基)三甲基甲硅烷這種已知的化合物是按Piers，E.；Gavai，A.V.J.Org.Chem.1990，55，2374的改進(jìn)流程進(jìn)行制備。在火焰干燥的燒瓶中加入干CH2Cl2(150ml)和三苯基膦(16g，61.2mmol)。將溫度降至0℃，分批加入CBr4(10.15g，30.6mmol)。30分鐘后，加入用干CH2Cl2(20ml)配制的3-三甲基甲硅烷基丙醛(2.0g，15.3mmol)。0℃1小時(shí)后，用乙醚稀釋反應(yīng)物，硅藻土過濾。用乙醚(4×50ml)漂洗硅藻土，然后用H2O(100ml)、飽和的NaHCO3(100ml)、飽和的NH4Cl(100ml)和鹽水(100ml)提取混合的乙醚溶液。干燥(MgSO4)有機(jī)層，過濾、蒸發(fā)得到粗制白色固體。用戊烷洗滌固體殘留物。濃縮戊烷溶液，在硅膠(戊烷100％)上層析油狀殘留物得到3.7g呈清澈油體的(4，4-二溴-丁-3-烯基)三甲基甲硅烷。1H NMR顯示受27％殘留的戊烷的污染，校正的收率為62％IR(neat，cm-1)2953，2922，2898，1620，1443，1413，1249，1176，1034，986，859，837；1H NMR(300 MHz，CDCl3)δ0.03(s，9 H)，0.62-0.67(m，2 H)，2.06-2.14(m，2 H)，6.41(t，J＝7 Hz 1 H)；13C NMR(75 MHz，CDCl3)δ-1.9，15.1，27.7，87.5，141.2.
(2)5-三甲基硅烷基戊-2-炔-1-醇(40)在火焰干燥的燒瓶中加入(4，4-二溴-丁-3-烯基)三甲基甲硅烷(3.43g，12mmol)。加入干THF(150ml)，將混合物冷卻至-78℃。加入用己烷配制的1.6N BuLi(24mmol，15ml)，-78℃攪拌此混合物1小時(shí)，升溫至22℃，再攪拌1小時(shí)。最后，加入聚甲醛(1.4g)，回流混合物。3.5小時(shí)后，將反應(yīng)混合物冷卻至22℃，加入飽和的NH4Cl(50ml)。將燒瓶中的內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到分液漏斗中，用乙醚(3×200ml)提取。干燥(Na2SO4)有機(jī)層，過濾，蒸發(fā)得到粗制黃色油。在硅膠使快速層析(戊烷/乙醚5∶1)得到1.57g(84％)5-三甲基硅烷基戊-2-炔-1-醇IR(純，cm-1)3350，2953，2219，1436，1412，1318，1249，1178，1124，1015，905，853；1H NMR(300 MHz，CDCl3)δ -0.003(s，9 H)，0.76(t，J＝8 Hz 2 H)，1.75(s，1 H)，2.20-2.24(m，2 H)，4.21(brs，2 H)；13C NMR(75 MHz，CDCl3)δ-1.3，13.8，16.4，51.7，78.2，88.9；HRMS(EI)m/z C7H13OSi(M-CH3)的計(jì)算值141.0736，實(shí)測值141.0733 LRMS(EI)m/z 141(M-CH3)，123，113，103，97，91，85，75，66，59.
(3)(5-溴戊-3-炔基)三甲基甲硅烷基(41)在火焰干燥的燒瓶中加入PPh3(1.76g，6.73mmol)，然后加入干CH2Cl2(60ml)。將混合物置于冰浴中，逐滴加入溴(0.34ml，6.41mmol)。加入少量PPh3直到反應(yīng)物從黃色變成無色。0℃0.5小時(shí)后，將5-三甲基甲硅烷基戊-2-炔-1-醇(1.0g，6.41mmol)溶解在CH2Cl2(5ml)中，逐滴加入。0℃4小時(shí)后，將反應(yīng)混合物的傾倒入分液漏斗，用戊烷(250ml)稀釋，用H2O(100ml)和飽和NaHCO3(100ml)提取。干燥(MgSO4)有機(jī)層，過濾，體積減至50ml。在硅膠片上用戊烷(500ml)層析此粗制溶液。蒸發(fā)掉戊烷后，得到呈清澈油體的(5-溴戊-3-炔基)三甲基甲硅烷(1.2g，87％)IR(neat，cm-1)2953，2922，2899，2230，1431，1317，1248，1208，852；1H NMR(300 MHz，CDCl3)δ0.03(s，9 H)，0.79(t，J＝8 Hz，2 H)，2.28(tt，J1＝8Hz，J2＝2 Hz，2 H)，3.92(t，J＝2 Hz，2 H)；13C NMR(75 MHz，CDCl3)δ 1.7，13.6，15.7，15.8，74.6，90.2；HRMS(EI)m/z C7H12BrSi(M-CH3)的計(jì)算值 202.9892，實(shí)測值202.9889 LRMS(EI)m/z 203(M-CH3)，137，73，66.
(4)(20S)-4-乙基-4-炔基-6-碘-3-氧代-7-(5-三甲基甲硅烷基戊-2-炔基)-1H-吡喃并[3，4-c]-8-吡啶酮(43)按實(shí)施例1-(1)所述的流程，用碘代吡啶酮2(0.2g，0.6mmol)和(5-溴戊-3-炔基)三甲基甲硅烷基(260mg，1.19mmol)，在快速層析(CH2Cl2/EtOAc 95∶5)后得到0.21g(74％)呈白色泡沫的(20S)-4-乙基-4-羥基-6-碘-3-氧代-7-(5-三甲基甲硅烷基)-戊-2-炔基)-1H-吡喃并[3，4-c]-8-吡啶酮[α]D20+54.4(c 0.2，CH2Cl2)；IR(CHCl3，cm-1)2952，1746，1648，1528，1427，1138，856，755；1H NMR(300 MHz，CDCl3)δ-0.03(s，9 H)，0.76(t，J＝8 Hz，2 H)，0.96(t，J＝7 Hz，3 H)，1.70-2.00(m，J＝7 Hz，2 H)，2.16(t，J＝8 Hz，2 H)，3.77(s，1 H)，5.04(s，2 H)，5.10.(d，J＝16 Hz，1 H)，5.49(d，J＝16Hz，1 H)，7.16(s，1 H)；13C NMR(75 MHz，CDCl3)δ-1.6，7.8，13.6，15.7，31.7，44.8，66.5，71.9，72.4，88.1，100.5，116.6，118.3，148.6，158.2，173.5；HRMS(EI)m/zC18H24INO4Si(M+)的計(jì)算值 473.0519，實(shí)測值473.0507LRMS(EI)m/z 473(M+)，458，386，360，346，139，73，57.
(5)(20S)-10-乙酰氧基-7-[(2-三甲基甲硅烷基)乙基]喜樹堿(45)按實(shí)施例1-(2)所述的流程，用上述(4)制備的碘代吡啶酮(56.8mg，0.12mmol)和對-乙酰氧基苯基異腈(48mg，0.3mmol)，在快速層析(CH2Cl2/丙酮10∶1)后，得到33.2mg(55％)呈棕褐色固體的(20S)-10-乙酰氧基-7-[(2-三甲基甲硅烷基)乙基]喜樹堿[α]D20+21.0(c 0.2，CH2Cl2)；IR(CHCl3，cm-1)3039，2996，2954，1744，1660，1602，1509，1371，1229，1177；1H NMR(300 MHz，CDCl3)δ0.17(s，9 H)，0.88-0.95(m，2 H)，1.03(t，J＝7 Hz，3 H)，1.80-2.00(m，J＝7 Hz，2 H)，2.42(s，3 H)，3.00(m，2 H)，4.01(brs，1 H)，5.22.(s，2 H)，5.30(d，J＝16 Hz，1 H)，5.74(d，J＝16 Hz，1 H)，7.54(dd，J1＝9 Hz，J2＝2 Hz 1 H)，7.66(s，1 H)，7.72(d，J＝2 Hz，1 H)，8.22(d，J＝2 Hz，1 H)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ-1.8，7.9，17.7，21.4，24.3，31.7，49.3，66.4，72.9，98.1，114.5，118.6，125.4，126.6，127.2，132.2，146.8，147.0，147.5，149.6，150.3，151.9，157.7，169.4，174.0；HRMS(EI)m/z C27H30N2O6Si(M+)的計(jì)算值 506.1873，實(shí)測值506.1869 LRMS(EI)m/z506(M+)，464，436，420，347，336，277，193，151，109，73.
(6)(20S)-10-羥基-7-[(2-三甲基甲硅烷基)乙基]喜樹堿(36a)室溫將上述(5)所制備的化合物(17.7mg，0.035mmol)和K2CO3(9.7mg，0.07mmol)在MeOH(0.2ml)和H2O(0.2ml)中的混合物攪拌1.5小時(shí)。用AcOH(8滴)酸化此混合物，用鹽水(10ml)稀釋，EtOAc(10×20ml)提取。干燥(Na2SO4)混合的有機(jī)層，蒸發(fā)。將粗制殘留物進(jìn)行兩次層析(CH2Cl2/MeOH/AcOH 96∶3∶1，然后用CH2Cl2/丙酮5∶1)得到7.6mg(47％)呈黃色固體的(20S)-10-羥基-7-[(2-三甲基甲硅烷基)乙基]喜樹堿[α]D20+31.3(c 0.2，CH2Cl2/MeOH 3∶1)；1HNMR(300 MHz，CDCl3)δ0.15(s，9 H)，0.84-0.95(m，2 H)，0.99(t，J＝7 Hz，3 H)，1.80-2.00(m，J＝7 Hz，2 H)，2.99-3.05(m，2 H)，5.20(s，2 H)，5.29(d，J＝16 Hz 1H)，5.62.(d，J＝16 Hz 1 H)，7.33(d，J＝2 Hz，1 H)，7.40(dd，J1＝9 Hz，J2＝2 Hz，1 H)，7.63(s，1 H)，8.01(d，J＝9 Hz，1 H)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ-1.8，8.3，17.9，25.1，32.2，66.9，74.4，99.1，106.0，116.1，119.7，124.0，128.4，129.8，132.3，145.5，146.8，148.3，150.1，153.0，158.6，159.4，175.1；HRMS(EI)m/zC25H28N2O5Si(M+)的計(jì)算值464.1767，實(shí)測值464.1788 LRMS(EI)m/z464(M+)，420，405，391，364，347，167，149，104，91，73.
在幾個(gè)膠質(zhì)瘤細(xì)胞(U87、A172、SG388、T98G、LN-Z308)株中，此化合物表現(xiàn)出具有抑制細(xì)胞增生的活性，有效濃度中值為10-100ng/ml。
實(shí)施例22(20S)-10-氨基-7-[2-(三甲基甲硅烷基)乙基]喜樹堿(36b)(DB-173) (1)(20S)-10-叔-丁氧基羰基氨基-7-[(2-三甲基甲硅烷基)乙基]喜樹堿(45b)按實(shí)施例1-(2)所述的流程，將上述實(shí)施例21-(4)制備的碘代吡啶酮(56.8mg，0.12mmol)與4-叔-丁氧基羰基氨基苯基異腈(65.4mg，0.3mmol)反應(yīng)。柱層析(CH2Cl2/丙酮10∶1)得到38mg(56％)呈棕褐色固體的(20S)-10-叔-丁氧基羰基氨基-7-[(2-三甲基甲硅烷基)乙基]喜樹堿[α]D20+18.5(c 0.2，CH2Cl2)；IR(CHCl3，cm-1)3019，1738，1658，1600，1531，1215，1155，761；1H NMR(300 MHz，CDCl3)δ 0.19(s，3 H)，0.90-0.96(m，2 H)，1.03(t，J＝7 Hz，3 H)，1.58(s，9H)，1.8-2.0(m，2 H)，3.02-3.08(m，2 H)，3.89(s，1 H)，5.21.(s，2 H)，5.30(d，J＝16 Hz，1 H)，5.75(d，J＝16Hz，1 H)，6.85(br s，1 H)，7.57(dd，J1＝9 Hz，J2＝2Hz，1 H)，7.61(s，1 H)，8.11(d，J＝9 Hz，1 H)，8.31(br s，1 H)；13C NMR (75 MHz，CDCl3)δ-1.7，8.0，17.5，24.4，28.5，31.8，49.5，66.5，73.0，77.4，81.4，97.7，110.1，118.2， 123.3，126.7，127.6，131.4，137.8，146.2，147.4，150.37，150.4，152.6，157.8，174.1；HRMS(EI)m/zC30H37N3O6Si(M+)的計(jì)算值(M+)563.2452，實(shí)測值563.2426LRMS(EI)m/z 463(M-C5H8O2)，419，404，363，363，346，332，289，246，149，131，73，57.
(2)(20S)-10-氨基-7-[(2-三甲基甲硅烷基)乙基]喜樹堿(36b)將上述(1)制備的喜樹堿衍生物(17.5mg，0.031mmol)溶解在CH2Cl2(1ml)中，加入三氟乙酸(0.25ml)。22℃3小時(shí)后，將混合物傾倒入飽和NaHCO3(20ml)中，用EtOAc(10×15ml)提取。干燥(Na2SO4)有機(jī)層，濃縮、層析，得到9.4mg(65％)黃色固體[a]D20+17.0(c0.2，CH2Cl2/MeOH3∶1)；1H NMR(300 MHz，CDCl3)δ 0.15(s，9 H)，0.85-0.91(m，2 H)，0.99(t，J＝7 Hz，3 H)，1.87-2.05(m，2 H)，2.85-2.98(m，2 H)，5.04(d，J＝19 Hz，1 H)，5.09(d，J＝19 Hz 1 H)，5.29.(d，J＝16 Hz，1 H)，5.58(d，J＝16Hz，1 H)，7.01(d，J＝2Hz，1 H)，7.25(dd，J1＝9 Hz，Js2＝2 Hz，1 H)，7.54(s，1 H)，7.84(d，J＝9 Hz，1 H)；13C NMR(75 MHz，CDCl3)δ 1.8，8.1，17.4，24.5，31.8，50.0，66.4，73.8，98.4，102.3，118.2，123.4，127.2，129.6，131.3，144.1，145.2，147.6，147.9，148.5，152.4，158.7，174.6；HRMS(EI)m/z C25H29N3O4Si(M+)的計(jì)算值463.1927，實(shí)測值463.1941 LRMS(EI)m/z 463(M+)，434，419，404，390，362，346，332，167，131，104，91，73，
實(shí)施例23(20S)-7-[(2-三甲基甲硅烷基)乙基]喜樹堿(36c)(DB-172)按實(shí)施例1-(2)所述的流程，用上述實(shí)施例21-(4)制備的碘代吡啶酮(43)(56.8mg.0.12mmol)和苯基異腈(30.9mg，0.3mmol)的混合物，快速層析(CH2Cl2/丙酮10∶1)后得到28mg(52％)呈棕褐色固體的(20S)-7-[(2-三甲基甲硅烷基)乙基]喜樹堿[α]D20+29.8(c 0.2，CH2Cl2)；IR(CHCl3，cm-1)2996，2954，1742，1659，1601，1557，1250，1158，856；1HNMR(300 MHz，CDCl3)δ 0.18(s，9 H)，0.90-0.96(m，2 H)，1.04(t，J＝7.3 Hz，3.H)，1.86-1.95(m，2 H)，3.07-3.13(m，2 H)，3.87(s，1 H)，5.23.(s，2 H)，5.31(d，J＝16.3Hz，1 H)，5.76(d，J＝16.3 Hz，1 H)，7.64-7.69(m，2 H)，7.80(td，J1＝8 Hz，J2＝0.87 Hz，1 H)，8.03(d，J＝8.3Hz，1 H)，8.23(d，J＝8.3 Hz，1 H)；13C NMR(75 MHz，CDCl3)δ-1.75，7.95，17.9，24.2，31.7，49.4，66.5，72.9，98.1，118.5，123.4，126.1，126.7，127.7，130.3，130.8，147.1，147.2，149.6，150.2，152.0，157.8，174.1；HRMS (EI) m/z C25H28N2O4Si(M+)的計(jì)算值448.1818，實(shí)測值448.1819 LRMS(EI)m/z 448(M+)，431，374，358，311，301，208，195，165，149，131，118，105，93，73.
雖然本發(fā)明用上述實(shí)施例進(jìn)行了詳細(xì)描述，但易看出這些詳細(xì)描述僅用于說明，本領(lǐng)域技術(shù)人員可不脫離本發(fā)明的范圍對本發(fā)明進(jìn)行改善，且本發(fā)明的范圍僅受附帶的權(quán)利要求的限制。
權(quán)利要求
1.一種合成下式化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽的方法 通過4+1自由基成環(huán)/環(huán)化作用，其特征在于將前體 與下式的芳基異腈反應(yīng) R1和R2各是相同的或不同的，為氫、烷基、鏈烯基、炔基、烷氧基、芳氧基、酰氧基、-OC(O)ORd，其中Rd是烷基、氨基甲酰氧基、鹵素、羥基、硝基、氰基、疊氮基、甲?；?、肼基、-C(O)Rf，式中Rf是烷基、烷氧基、氨基或羥基，氨基、-SRc，式中Rc是氫、酰基、烷基或芳基，或R1和R2一起形成式-O(CH2)nO-基團(tuán)，其中n代表整數(shù)1或2；R3是H、鹵素、硝基、氨基、羥基或氰基；或R2和R3也可結(jié)合在一起形成式-O(CH2)nO-基團(tuán)，其中n代表整數(shù)1或2；R4是H、F、C1-3烷基、C2-3鏈烯基、C2-3炔基、三烷基甲硅烷基或C1-3烷氧基；R5是C1-10烷基、烯丙基、芐基或炔丙基；R6、R7和R8各是C1-10烷基、C2-10鏈烯基、C2-10炔基、芳基或-(CH2)NR9基團(tuán)，式中N是范圍在1-10的整數(shù)，R9是羥基、烷氧基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、鹵素原子、氰基或硝基；R11是亞烷基、亞鏈烯基或和亞炔基；R12是-CH＝CH-CH2-或-C≡C-CH2-；X是Cl、Br或I。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的R4是H。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的R1和R2各是相同的或不同的，是H、羥基、鹵素、氨基、硝基、氰基、C1-3烷基、C2-3鏈烯基、C2-3炔基或C1-3烷氧基。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的R1和R2各是相同的或不同的，是H、C1-3全鹵代烷基、C1-3氨基烷基、C1-3烷基氨基或C1-3二烷基氨基。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的R1和R2各是相同的或不同的，是H、甲基、氨基、硝基、氰基或羥基。
6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的R1和R2各是相同的或不同的，是H、甲基氨基、二甲基氨基、乙基氨基、二乙基氨基、羥甲基、氨基甲基、甲基氨基甲基、或二甲基氨基甲基。
7.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的R3是F、氨基或羥基。
8.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的R5是乙基。
9.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的R6、R7和R8各是相同的或不同的，是C1-6烷基、苯基或-(CH2)NR9，其中N是范圍在1-6的整數(shù)，R9是羥基、烷氧基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、鹵原子、氰基或硝基。
10.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的R6、R7和R8是甲基。
11.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的R2和R3形成亞甲基二氧基或1，2-亞乙基二氧基。
12.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的R2是OH。
13.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的R2是NH2。
14.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的R11是C1-C10亞烷基、C2-C10亞鏈烯基或C2-C10亞炔基。
15.如權(quán)利要求14所述的方法，其特征在于，所述的R11是C1-C6亞烷基、C2-C6亞鏈烯基或C2-C6亞炔基。
16.如權(quán)利要求14所述的方法，其特征在于，所述的R11是(CH2)m，其中m是1-6的整數(shù)。
17.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的X是Br或I。
18.一種呈下式的化合物 及其藥學(xué)上可接受的鹽，其特征在于，R1和R2各是相同的或不同的，為氫、烷基、鏈烯基、炔基、烷氧基、芳氧基、酰氧基、-OC(O)ORd，其中Rd是烷基、氨基甲酰氧基、鹵素、羥基、硝基、氰基、疊氮基、甲?；?、肼基、-C(O)Rf，式中Rf是烷基、烷氧基、氨基或羥基，氨基、-SRc，式中Rc是氫、酰基、烷基或芳基，或R1和R2一起形成式-O(CH2)nO-基團(tuán)，其中n代表整數(shù)1或2；R3是H、鹵素、硝基、氨基、羥基或氰基；或R2和R3也可結(jié)合在一起形成式-O(CH2)nO-基團(tuán)，其中n代表整數(shù)1或2；R4是H、F、C1-3烷基、C2-3鏈烯基、C2-3炔基、三烷基甲硅烷基或C1-3烷氧基；R5是C1-10烷基、烯丙基、芐基或炔丙基；R6、R7和R8各是C1-10烷基、C2-10鏈烯基、C2-10炔基、芳基或-(CH2)NR9基團(tuán)，式中N是范圍在1-10的整數(shù)，R9是羥基、烷氧基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、鹵素原子、氰基或硝基；R11是亞烷基、亞鏈烯基或和亞炔基。
19.如權(quán)利要求18所述的化合物，其特征在于，所述的R4是H。
20.如權(quán)利要求18所述的化合物，其特征在于，所述的R1和R2各是相同的或不同的，是H、羥基、鹵素、氨基、硝基、氰基、C1-3烷基、C2-3鏈烯基、C2-3炔基或C1-3烷氧基。
21.如權(quán)利要求18所述的化合物，其特征在于，所述的R1和R2各是相同的或不同的，是H、C1-3全鹵代烷基、C1-3氨基烷基、C1-3烷基氨基或C1-3二烷基氨基。
22.如權(quán)利要求18所述的化合物，其特征在于，所述的R1和R2各是相同的或不同的，是H、甲基、氨基、硝基、氰基或羥基。
23.如權(quán)利要求18所述的化合物，其特征在于，所述的R1和R2各是相同的或不同的，是H、甲基氨基、二甲基氨基、乙基氨基、二乙基氨基、羥甲基、氨基甲基、甲基氨基甲基、或二甲基氨基甲基。
24.如權(quán)利要求18所述的化合物，其特征在于，所述的R3是F、氨基或羥基。
25.如權(quán)利要求18所述的化合物，其特征在于，所述的R5是乙基。
26.如權(quán)利要求18所述的化合物，其特征在于，所述的R6、R7和R8各是相同的或不同的，是C1-6烷基、苯基或-(CH2)NR9，其中N是范圍在1-6的整數(shù)，R9是羥基、烷氧基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、鹵原子、氰基或硝基。
27.如權(quán)利要求18所述的化合物，其特征在于，所述的R6、R7和R8是甲基。
28.如權(quán)利要求18所述的化合物，其特征在于，所述的R2和R3形成亞甲基二氧基或1，2-亞乙基二氧基。
29.如權(quán)利要求18所述的化合物，其特征在于，所述的R2是OH。
30.如權(quán)利要求18所述的化合物，其特征在于，所述的R2是NH2。
31.如權(quán)利要求18所述的化合物，其特征在于，所述的R11是C2-C10亞烷基、C2-C10亞鏈烯基或C1-C10亞炔基。
32.如權(quán)利要求31所述的化合物，其特征在于，所述的R11是C2-C6亞烷基、C2-C6亞鏈烯基或C1-C6亞炔基。
33.如權(quán)利要求31所述的化合物，其特征在于，所述的R11是(CH2)m，其中m是1-6的整數(shù)。
34.如權(quán)利要求18所述的化合物，其特征在于，所述的R1、R2、R3和R4中至少一個(gè)不是H。
35.如權(quán)利要求18所述的化合物，其特征在于，所述的R5是甲基、C3-10烷基、烯丙基、芐基或炔丙基。
36.一種呈下式的化合物 其特征在于，式中R5是C1-10烷基、烯丙基、芐基或炔丙基；R6、R7和R8各是C1-10烷基、C2-10鏈烯基、C2-10炔基、芳基或-(CH2)NR9基團(tuán)，式中N是范圍在1-10的整數(shù)，R9是羥基、烷氧基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、鹵素原子、氰基或硝基；R11是亞烷基或亞鏈烯基；和R12是-CH＝CH-CH2-或-C≡C-CH2-；X是Cl、Br或I。
37.如權(quán)利要求36所述的化合物，其特征在于，所述的R6、R7和R8各是相同的或不同的，為C1-6烷基、苯基、或-(CH2)NR9基團(tuán)，式中N是范圍在1-6的整數(shù)，R9是羥基、烷氧基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、鹵素原子、氰基或硝基。
38.如權(quán)利要求36所述的化合物，其特征在于，所述的R6、R7和R8是甲基。
39.如權(quán)利要求36所述的化合物，其特征在于，所述的X是Br或I。
40.一種呈下式的化合物 及其藥學(xué)上可接受的鹽，其特征在于，R1和R2各是相同的或不同的，為氫、烷基、鏈烯基、炔基、烷氧基、芳氧基、酰氧基、-OC(O)ORd，其中Rd是烷基、氨基甲酰氧基、鹵素、羥基、硝基、氰基、疊氮基、甲?；?、肼基、-C(O)Rf，式中Rf較佳是烷基、烷氧基、氨基或羥基，氨基、-SRc，式中Rc是氫、?；⑼榛蚍蓟騌1和R2一起形成式-O(CH2)nO-基團(tuán)，其中n代表整數(shù)1或2；R3是H、鹵素、硝基、氨基、羥基或氰基；或R2和R3也可結(jié)合在一起形成式-O(CH2)nO-基團(tuán)，其中n代表整數(shù)1或2；R4是H、F、C1-3烷基、C2-3鏈烯基、C2-3炔基、三烷基甲硅烷基或C1-3烷氧基；R5是C1-10烷基、烯丙基、芐基或炔丙基；R6、R7和R8各是C1-10烷基、C2-10鏈烯基、C2-10炔基、芳基或-(CH2)NR9基團(tuán)，式中N是范圍在1-10的整數(shù)，R9是羥基、烷氧基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、鹵素原子、氰基或硝基；R11是亞烷基、亞鏈烯基或和亞炔基；1R13是H、-C(O)Rf、或-C(O)ORd。
41.如權(quán)利要求40所述的化合物，其特征在于，所述的R4是H。
42.如權(quán)利要求40所述的化合物，其特征在于，所述的R1和R2各是相同的或不同的，是H、羥基、鹵素、氨基、硝基、氰基、C1-3烷基、C2-3鏈烯基、C2-3炔基或C1-3烷氧基。
43.如權(quán)利要求40所述的化合物，其特征在于，所述的R1和R2各是相同的或不同的，是H、C1-3全鹵代烷基、C1-3氨基烷基、C1-3烷基氨基或C1-3二烷基氨基。
44.如權(quán)利要求40所述的化合物，其特征在于，所述的R1和R2各是相同的或不同的，是H、甲基、氨基、硝基、氰基或羥基。
45.如權(quán)利要求40所述的化合物，其特征在于，所述的R1和R2各是相同的或不同的，是H、甲基氨基、二甲基氨基、乙基氨基、二乙基氨基、羥甲基、氨基甲基、甲基氨基甲基、或二甲基氨基甲基。
46.如權(quán)利要求40所述的化合物，其特征在于，所述的R3是F、氨基或羥基。
47.如權(quán)利要求40所述的化合物，其特征在于，所述的R5是乙基。
48.如權(quán)利要求40所述的化合物，其特征在于，所述的R6、R7和R8各是相同的或不同的，是C1-6烷基、苯基或-(CH2)NR9，其中N是范圍在1-6的整數(shù)，R9是羥基、烷氧基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、鹵原子、氰基或硝基。
49.如權(quán)利要求40所述的化合物，其特征在于，所述的R6、R7和R8是甲基。
50.如權(quán)利要求40所述的化合物，其特征在于，所述的R2和R3形成亞甲基二氧基或1，2-亞乙基二氧基。
51.如權(quán)利要求40所述的化合物，其特征在于，所述的R2是OH。
52.如權(quán)利要求40所述的化合物，其特征在于，所述的R2是NH2。
53.如權(quán)利要求40所述的化合物，其特征在于，所述的R11是C1-C10亞烷基、C2-C10亞鏈烯基或C2-C10亞炔基。
54.如權(quán)利要求53所述的化合物，其特征在于，所述的R11是C1-C6亞烷基、C2-C6亞鏈烯基或C2-C6亞炔基。
55.如權(quán)利要求53所述的化合物，其特征在于，所述的R11是(CH2)m，其中m是1-6的整數(shù)。
56.一種治療癌癥或白血病患者的方法，其特征在于，所述的方法包括如下步驟給予藥用有效劑量的權(quán)利要求18的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
57.如權(quán)利要求56所述的方法，其特征在于，治療所述患者的腦癌、乳腺癌或白血病。
58.一種治療癌癥或白血病患者的方法，其特征在于，所述的方法包括如下步驟給予藥用有效劑量的權(quán)利要求41的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
59.如權(quán)利要求58所述的方法，其特征在于，治療所述的患者的腦癌、乳腺癌或白血病。
全文摘要
一種呈通式(1)的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽和它們的制備方法:式中R
文檔編號C07D471/14GK1352646SQ99815768
公開日2002年6月5日 申請日期1999年12月15日 優(yōu)先權(quán)日1998年12月15日
發(fā)明者D·P·柯倫, H·喬森, D·博, T·G·伯克 申請人:匹茲堡大學(xué)