專利名稱：1－(3－氨基吲唑－5－基)－3－苯甲基－環(huán)脲作為hiv蛋白酶抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明的范圍本發(fā)明涉及作為HIV蛋白酶抑制劑的1-(3-氨基吲唑-5-基)-3-苯基甲基-環(huán)脲，含有該化合物的藥用組合物和診斷試劑盒以及使用該化合物治療病毒性感染或作為檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品或試劑的方法。
本發(fā)明背景兩種不同的逆轉(zhuǎn)錄病毒，人免疫缺陷病毒(HIV)1型(HIV-1)或2型(HIV-2)在病原學(xué)上與免疫抑制疾病，即獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)有關(guān)。HIV血清陽(yáng)性個(gè)體在初期是無(wú)癥狀的，但隨后通過(guò)AIDS，通常發(fā)展為AIDS相關(guān)綜合征(ARC)。受影響的個(gè)體表現(xiàn)出嚴(yán)重的免疫抑制，使他們衰弱，最后易受致命的機(jī)會(huì)致病菌的感染。
AIDS病是HIV-1或HIV-2病毒經(jīng)進(jìn)行其自身復(fù)雜的生活周期的最終結(jié)果。通過(guò)病毒體保護(hù)性外殼表面上的糖蛋白與淋巴細(xì)胞上的CD4糖蛋白的粘合，使病毒體自身粘附于宿主人T-4淋巴免疫細(xì)胞上便開始病毒體的生活周期。病毒體一旦粘附上，就脫掉它的糖蛋白外殼，穿透宿主的細(xì)胞膜，并使它的無(wú)復(fù)蓋的RNA進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。病毒體酶(逆轉(zhuǎn)錄酶)直接將RNA轉(zhuǎn)錄成單鏈DNA。病毒RNA降解并產(chǎn)生第二條DNA鏈。此時(shí)雙鏈DNA整合進(jìn)入人細(xì)胞的基因，這些基因可用于細(xì)胞繁殖。
在這一點(diǎn)上，人細(xì)胞經(jīng)使用自身RNA聚合酶進(jìn)行它的繁殖過(guò)程，使整合的DRA轉(zhuǎn)錄成病毒的RNA。病毒RNA轉(zhuǎn)譯成前體gog-pol融合聚蛋白。然后通過(guò)HIV蛋白酶裂解所述的聚蛋白，得到成熟的病毒蛋白。這樣，負(fù)責(zé)調(diào)節(jié)級(jí)聯(lián)裂解的HIV蛋白酶將使病毒顆粒成熟化，成為具備完全傳染性的病毒。
一般人免疫系統(tǒng)應(yīng)答負(fù)責(zé)殺死入侵的病毒體，因?yàn)榇蟛糠值牟《倔w生活周期是在免疫細(xì)胞中以潛伏狀態(tài)渡過(guò)的。另外，病毒的逆轉(zhuǎn)錄酶，即在產(chǎn)生新的病毒體顆粒中所用的酶并不是非常特異性的，可引起錯(cuò)誤轉(zhuǎn)錄，導(dǎo)致病毒保護(hù)外殼上的糖蛋白的連續(xù)改變。這種特異性的缺乏將降低免疫系統(tǒng)的有效性，因?yàn)閷?duì)抗一種糖蛋白特異產(chǎn)生的抗體可能對(duì)另一種糖蛋白不起作用，因此，減少了可對(duì)抗病毒的抗體數(shù)目。在免疫系統(tǒng)不斷衰弱的同時(shí)病毒卻不斷復(fù)制。最后，HIV超過(guò)人體免疫系統(tǒng)而占支配地位，在不給予抗病毒劑、免疫調(diào)節(jié)劑或兩者情況下，將引起機(jī)會(huì)致病菌感染，并導(dǎo)致死亡。
在病毒生活周期中至少有三個(gè)臨界點(diǎn)已確認(rèn)為抗病毒藥物的可能靶向(1)病毒體對(duì)T-4淋巴細(xì)胞或巨噬細(xì)胞部位的起初粘附，(2)病毒RNA到病毒DNA的轉(zhuǎn)錄過(guò)程(逆轉(zhuǎn)錄酶，RT)、以及(3)繁殖期間新病毒粒子的聚集(如HIV天門冬氨酸蛋白酶或HIV蛋白酶)。
逆轉(zhuǎn)錄病毒基因組編碼的蛋白酶是負(fù)責(zé)一個(gè)或多個(gè)聚蛋白前體如pol和gag基因產(chǎn)物的蛋白水解過(guò)程。[參見Wellink,Arch.981(1988)]。逆轉(zhuǎn)錄病毒蛋白酶通常將gag前體處理成核蛋白，也可以將pol前體處理成可逆轉(zhuǎn)錄酶和逆轉(zhuǎn)錄病毒蛋白酶。
經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄病毒蛋白酶校正處理前體聚蛋白對(duì)感染性病毒體的裝配是必要的。已發(fā)現(xiàn)經(jīng)體外誘變產(chǎn)生的蛋白酶缺陷病毒可導(dǎo)致產(chǎn)生缺乏感染力的未成熟核心形式。[參見Crawford et a1.,J.Virol.53 899(1985)；Katoh et al.,Virology 145 280(1985)]。因此，逆轉(zhuǎn)錄病毒蛋白酶抑制將為抗病毒治療提供有吸引力的靶子。[參見Mitsuya,Nature325 775(1987)]。
抑制病毒蛋白酶的這種能力為阻止病毒復(fù)制提供了方法，因此，對(duì)治療病毒疾病如AIDS而言，與目前的治療相比，幾乎無(wú)副作用且更有效，極少有耐藥性。結(jié)果三種HIV蛋白酶抑制劑，Roche的Saquinavir、Abbott的ritonanavir和Merck的indinavir已上市，并且還有大量的潛在蛋白酶抑制劑正處于臨床試驗(yàn)階段，如Vertex的VX-478,Agouron的nelfinavir、日本Energy的KNI-272和Ciba-Geigy的CGP 61755。
正如目前上市和在臨床試驗(yàn)中的蛋白酶抑制劑的所表明的那樣，已研究了各種化合物來(lái)作為潛在的HIV蛋白酶抑制劑。一種核心，即環(huán)脲已引起充分注意。例如在PCT申請(qǐng)?zhí)朩O 94/19329中，Lam等概述了下式的環(huán)脲
以及制備這些脲的方法。雖然本發(fā)明化合物屬于Lam等人的描述范圍內(nèi)，但這些化合物在此并不特別公開。
即使已有目前成功的蛋白酶抑制劑，但已發(fā)現(xiàn)HIV患者對(duì)單一蛋白酶抑制劑的耐受性也在增強(qiáng)。這樣，需要開發(fā)其它的蛋白酶抑制劑進(jìn)一步抑制HIV感染。
本發(fā)明概述因此，本發(fā)明一個(gè)目的是提供新的蛋白酶抑制劑。
本發(fā)明另一個(gè)目的是提供具有蛋白酶抑制活性的藥用組合物，它含有藥學(xué)上可接受的載體和有效治療量的至少一種本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或其藥物前體形式。
本發(fā)明另一個(gè)目的是提供治療HIV感染的新方法，它包括對(duì)需要此治療的宿主給予有效治療量的至少一種本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或其藥物前體形式。
本發(fā)明另一個(gè)目的是提供治療HIV感染的新方法，它包括對(duì)其需發(fā)此治療的宿主給予(a)一種本發(fā)明化合物和(b)選自HIV逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑和HIV蛋白酶抑制劑的一種或多種化合物的有效治療的組合物。
本發(fā)明另一個(gè)目的是提供抑制存在于體液樣中HIV的方法，它包括用有效量的本發(fā)明化合物處理體液樣品。
本發(fā)明另一個(gè)目的是提供含有有效量的至少一種本發(fā)明化合物用作標(biāo)準(zhǔn)品或試劑的診斷盒或容器，用于測(cè)定或分析潛在藥物抑制HIV蛋白酶，HIV生長(zhǎng)或兩者的能力。
在下列的詳述中將更清楚地說(shuō)明這些和其它的目的，通過(guò)發(fā)明者的發(fā)現(xiàn)，即式Ⅰ和式Ⅱ化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或藥物前體形式
是有效的蛋白酶抑制劑這一發(fā)現(xiàn)可以達(dá)到這些和其它目的。
優(yōu)選實(shí)施方案詳述在第一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供新的式Ⅰ或式Ⅱ化合物
或其藥學(xué)上可接受的鹽或藥物前體形式。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供新的式Ⅰ化合物。
在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供新的式Ⅱ化合物。
在第二個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供新的藥用組合物，它含有藥學(xué)上可接受的載體和有效治療量的式Ⅰ或Ⅱ化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或前體藥物形式。
在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述的化合物具有式Ⅰ結(jié)構(gòu)。
在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述的化合物具有式Ⅱ結(jié)構(gòu)。
在第三個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供治療HIV感染的新方法，它包括對(duì)需要此治療的宿主給予有效治療量的式Ⅰ或Ⅱ化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或藥物前體形式。
在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述的化合物具有式Ⅰ結(jié)構(gòu)。
在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述的化合物具有式Ⅱ結(jié)構(gòu)。
在第四個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供治療HIV感染的新方法，它包括對(duì)其需要此治療宿主聯(lián)合給予有效治療量的下列物質(zhì)(a)式Ⅰ或Ⅱ化合物；和(b)選自HIV逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑和HIV蛋白酶抑制劑的至少一種化合物。
在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述的化合物具有式Ⅰ結(jié)構(gòu)。
在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述的化合物具有式Ⅱ結(jié)構(gòu)。
在另一優(yōu)選實(shí)施方案中，逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑是核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑。
在另一更優(yōu)選的實(shí)施方案中，核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑選自AZT、3TC、ddI、ddC和d4T以及蛋白酶抑制劑選自saquinavir、ritonavir、indinavir、VX-478、nelfinavir、KNI-272、CGP-61755和U-103017。
在甚至更優(yōu)選的實(shí)施方案中，核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑選自AZT和3TC以及蛋白酶抑制劑選自saquinavir、ritonavir和indinavir。
在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑是AZT。
在另一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，蛋白酶抑制劑是indinavir。
在第五個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供用于治療HIV感染的藥劑盒，它含有下列有效治療量的物質(zhì)(a)式Ⅰ或Ⅱ化合物；和(b)選自HIV逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑和HIV蛋白酶抑制劑的至少一種化合物，在一個(gè)或多個(gè)無(wú)菌的容器內(nèi)。
在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述的化合物具有式Ⅰ結(jié)構(gòu)。
在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述的化合物具有式Ⅱ結(jié)構(gòu)。
在第六個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供抑制存在于體液樣品中的HIV的新方法，它包括用有效量的式Ⅰ或Ⅱ化合物處理體液樣品。
在第七個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供新的診斷盒或容器，它含有有效量的式Ⅰ或Ⅱ的化合物作為標(biāo)準(zhǔn)品或試劑，用于檢測(cè)或分析潛在藥物抑制HIV蛋白酶，HIV生長(zhǎng)或兩者的能力。
定義如在此所用的下列術(shù)語(yǔ)及措詞均有指定的意義。將理解的是本發(fā)明化合物含有不對(duì)稱取代的碳原子并以旋光活性或外消旋形式分離出來(lái)。本領(lǐng)域熟知如何制備旋光活性形式，例如經(jīng)析分外消旋形式或從有旋光活性的原料合成。除非特別指明特殊的立體化學(xué)或異構(gòu)體形式外，所有手性、非對(duì)映體、外消旋體的形式和結(jié)構(gòu)的所有幾何異構(gòu)體均在所指的范圍內(nèi)如在此所用的“HIV逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑”是指HIV逆轉(zhuǎn)錄酶(RT)的兩個(gè)核苷和非核苷抑制劑。核苷RT抑制劑的實(shí)例包括(但不限于此)AZT、ddC、ddI、d4T和3TC。非核苷RTR抑制劑的實(shí)例包括(但不限于此)Viviradine(Pharmacia和Upjohn U901 52S),TIBO衍生物、BI-RG-587、nevirapine、L-697.661,LY 73497和Ro 18,893(Roche)。
如在此所用的“HIV蛋白酶抑制劑”是指抑制HIV蛋白酶的化合物。實(shí)例包括(但不限于此)saquinavir(Roche,Ro 31-8959)、ritonavir(Abbott,ABT-538)、indinavir(Merck,MK-639)、VX-478(Vertex/Glaxo Wellcome)、nelfinavir(Agouron,AG-1343)、KNI-272(日本Energy)、CGP-61755(Ciba-Geigy)和U-103017(Pharmacia和Upjohn)。另外的實(shí)例包括在WO 93/07128、WO 94/19329、WO94/22840和PCT申請(qǐng)?zhí)朥S 96/03426中所公開的環(huán)蛋白質(zhì)抑制劑。
如在此所用的“藥學(xué)上可接受的鹽”是指所公開化合物的衍生物，其中通過(guò)制成其酸或堿的鹽來(lái)修飾母體化合物。藥學(xué)上可接受的鹽的實(shí)例包括(但不限于此)堿殘基如胺的無(wú)機(jī)或有機(jī)酸鹽；酸性殘基如羧酸的堿或有機(jī)鹽等。藥學(xué)上可接受的鹽包括例如由無(wú)毒的無(wú)機(jī)或有機(jī)酸形成母體化合物的常用的無(wú)毒的鹽或季銨鹽。例如，這樣的常用的無(wú)毒的鹽包括從無(wú)機(jī)酸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等衍生的鹽，以及從有機(jī)酸如乙酸、丙酸、丁二酸、葡萄糖酸、硬脂酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、抗壞血酸、撲酸、馬來(lái)酸、羥基馬來(lái)酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水楊酸、磺胺酸、2-乙酰氧苯甲酸、富馬酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙二磺酸、草酸、羥乙磺酸等制備的鹽。
用常規(guī)的化學(xué)方法從含有堿或酸部分的母體化合物可以合成本發(fā)明的藥學(xué)上可接受的鹽。一般講，通過(guò)使這些化合物的游離酸或堿的形式與化學(xué)計(jì)量的適當(dāng)堿或酸在水或有機(jī)溶劑，或兩者混合物中反應(yīng)可以制備這樣的鹽；一般優(yōu)選非水介質(zhì)如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或乙腈。在Remington’s Pharmaceutical Sciences(第17版，Mack出版公司，Easton、PA 1985年，第1418頁(yè))中列出了適當(dāng)?shù)柠}，在此結(jié)合本公開做具體參考。
在此所用的詞語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的”是指在合理的醫(yī)學(xué)判斷范圍內(nèi)，適當(dāng)?shù)氖褂媚切┗衔铩⒃?、組合物和/或劑型與人和動(dòng)組織接觸而不產(chǎn)生過(guò)度的毒性、刺激性、變態(tài)反應(yīng)或其它問(wèn)題或與合理的益處/風(fēng)險(xiǎn)比相配的并發(fā)癥。
所指明的“藥物前體”包括任何共價(jià)鍵連接的載體，當(dāng)這樣的藥物前體給予哺乳動(dòng)物時(shí)，在體內(nèi)可以釋放出本發(fā)明的式Ⅰ或Ⅱ化合物或其它式化合物的活性母體藥物。通過(guò)修飾存在于化合物中的官能團(tuán)來(lái)制備例如式Ⅰ的本發(fā)明化合物的藥物前體，以這樣方式用常規(guī)處理或在體內(nèi)中裂解修飾物得母體化合物。藥物前體包括本發(fā)明的化合物，其中羥基或氨基基團(tuán)鍵合到任何基團(tuán)，當(dāng)藥物前體給予哺乳動(dòng)物時(shí)，會(huì)分別分解形成游離的羥基或游離的氨基。前體藥體實(shí)例包括(但不限于此)乙酸鹽、甲酸鹽或式Ⅰ或Ⅱ化合物中醇和胺基官能團(tuán)的苯甲酸酯衍生物；式Ⅰ或Ⅱ化合物中醇官能團(tuán)的磷酸酯、二甲基甘氨酸酯、氨基烷基芐酯、氨基烷基酯和羧烷基酯等。另外的實(shí)施例包括這些化合物，其中式Ⅰ或Ⅱ的兩個(gè)羥基連接形成環(huán)氧化物；-OCH2SCH2O-；-OC(=O)O-；-OCH2O-；-OC(=S)O-；-OC(=O)C(=O)O-；-OC(CH3)2O-；-OC((CH2)3NH2)(CH3)O-；-OC(OCH3)(CH2CH2CH3)O-或-OS(=O)O-。
“穩(wěn)定的化合物”和“穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)”的意義是指從反應(yīng)混合物中足以分離出有用純度的化合物并配制成有效的治療劑。本發(fā)明所考慮的僅是穩(wěn)定的化合物。
“被取代的”意指所用于“被取代”措詞中所指原子上的一個(gè)或多個(gè)氫被選自所指的基團(tuán)置換，條件是所指原子并不超過(guò)其正?；蟽r(jià)，這樣的取代產(chǎn)生穩(wěn)定的化合物。當(dāng)取代基是酮(即是=o)基團(tuán)時(shí)，則所述原子上的兩個(gè)氫被置換。
“有效治療量”包括本發(fā)明化合物的用量或權(quán)利要求的化合物的組合物的用量能有效抑制HIV感染或治療宿主HIV感染癥狀。優(yōu)選的化合物的組合物是協(xié)同組合物。例如像Chou和Talalay[Adv.EnzymeRegul.22:27-55(1984)]所介紹的，當(dāng)以組合物形式給予化合物的作用(在該情況中，抑制HIV復(fù)制)大于當(dāng)以單味藥單獨(dú)給予化合物的相加作用時(shí)，就產(chǎn)生協(xié)同作用。一般講，在次優(yōu)(suboptimal)的化合物濃度下可最清楚地表示協(xié)同作用。協(xié)同作用是根據(jù)組合物與單一組分相比具有較低細(xì)胞毒性，增加抗病毒作用或一些其它的有利作用。
本發(fā)明的其它特點(diǎn)因下列示例性實(shí)施方案中的敘述將變得更加清楚，這些實(shí)施例是說(shuō)明本發(fā)明的，并不對(duì)其構(gòu)成限制。
實(shí)施例在實(shí)施例中所使用的縮寫定義如下“℃”為攝氏度；“d”雙重峰，“dd”為兩重峰，“eq”為當(dāng)量，“g”為克，“mg”為毫克、“ml”為毫升、“H”為氫、“hr”為小時(shí)、“m”為多重峰、“M”為摩爾、“min”為分鐘、“MHz”為兆赫、“MS”為質(zhì)譜、“nmr”或“NMR”為核磁共振譜，“t”為三重峰和“TLC”為薄層層析。
實(shí)施例1制備(4R,5S,6S,7R)-六氫-1-[5-(3-氨基吲唑)甲基]-5,6-二羥基-4,7-雙[苯甲基]-3-苯甲基-2H-1,3-二氮雜-2-酮(diazapin-2-one)(Ⅰ)
用已知的方法制備化合物1。例如，Rossano等的圖式1所示的化合物1的制備[Tetr,Lett.1995,36(28),4967,4968)]，該內(nèi)容通過(guò)引用結(jié)合到本文中。在美國(guó)專利5530124的實(shí)施例6中表明了制備化合物1的另一方法，該內(nèi)容結(jié)合到本文中。
A部分向化合物1(10.0g；27.3mol)的1,2-二氯乙烷(100ml)懸浮液中加入三氟甲磺酸甲酯(3.4ml,30mmol)。回流過(guò)夜后，用飽和NaHCO3、飽和NaCl、洗滌反應(yīng)液、干燥(Na2SO4)并蒸發(fā)得到12.5g的黃色油狀物。經(jīng)柱層析(快速SiO2；25％EtOAc/乙烷得到7.86g的淺黃色油狀物化合物2，放置結(jié)晶(收率為75％),m.p.=97-100℃,MH+=381。
B部分向異脲2(4.43g；11.7mmol)和3-氰基-4-氟芐溴(5.00g；23.3mmol)的DMF(50ml)的0℃溶液中加入NaH(60％礦物油中；1.40g；35.0mmol)。溫?zé)嶂潦覝夭嚢柽^(guò)夜后，將反應(yīng)液加到25％Et2O/EtOAc中。用水(3X)、飽和NaCl洗滌有機(jī)相，干燥(Na2So4)并蒸發(fā)留下黃色油狀物。柱層析(快速SiO2；25％。EtOAc/已烷)得到5.55g的3，為無(wú)色油狀物(收率92％)MH+=514。
C部分(4R,5S,6S,7R)-六氫-1-[(3-氰基-4-氟苯基)甲基]-5,6-O-異亞丙基-4,7-雙(4-苯甲基)-3-苯甲基-2H-1,3-二氮雜-2-酮(4)。
將異脲3(2.78g；5.41mmol)和芐基溴(1.93ml；16.2mmol)的乙腈(15ml)溶液回流過(guò)夜。蒸發(fā)反應(yīng)液并經(jīng)柱層析(快速SiO2；20％EtOAc/已烷)得到3.02g的4，為白色泡狀物(收率95％)。MH+=590。
D部分(4R,5S,6S,7R)-六氫-1-[5-(3-氨基吲唑)甲基]-5,6-O-異亞丙基-4,7-雙(4-苯甲基)-3-苯甲基-2H-1,3-二氮雜-2-酮(5)。
將腈化物4(3.02g；5.13mmol)的n-BuoH(30ml)溶液和水合肼(6ml)回流過(guò)夜。將反應(yīng)液加入EtOAc中并用10％檸檬酸(2X)，飽和NaCl、飽和NaHCO3、飽和NaCl洗滌，干燥(NaSO4)并蒸發(fā)留下3.09g的5,為白色泡狀物(收率100％)。MH+=602。
E部分(4R、5S、6S、7R)-六氫-1-[5-(3-氨基吲唑)甲基]-5、6-二羥基-4,7-雙(苯甲基)-3-苯甲基-2H-1,3-二氮雜-2-酮(Ⅰ)。
將化合物5(3.09g；5.14mmol)的3N HCl(10ml)和THF(40ml)溶液攪拌過(guò)夜。將反應(yīng)液加到EtOAc中并用飽和NaHCO3、飽和NaCl洗滌，干燥(NaSO4)并蒸發(fā)留下橙色油狀物。柱層析(快速SiO2,7％MeOH/CH2Cl2和0.8％NH4OH)得到2.15g的粉紅色透明固體。用3∶1CH2Cl2/Et2O結(jié)晶得到1.7g的(Ⅰ)，為淡粉紅色結(jié)晶，在高真空下，于85℃干燥過(guò)夜，mp=134-139℃。
實(shí)施例2制備(4R,5S,6S,7R)-六氫-1-[5-(3-氨基吲唑)甲基]-5,6-二羥基-4,7-雙[(4-甲基苯基)甲基]-3-苯甲基-2H-1,3-二氮雜-2-酮(Ⅱ)。
A部分(2R,3S,4S,5R)-2,5-雙(2,2-二甲基聯(lián)亞氨基)-1,6-雙(4-甲基苯基)-3,4-O-異亞丙基已烷二醇(10)。
用Rossano等人的方法[參見Tetr.Lett.1995,36(28),4967-70的4968頁(yè)的式3a]制備起始原料腙，該內(nèi)容在此結(jié)合本發(fā)明作為參考。
在15℃向?qū)?二甲苯(57ml,464mmol)中用5分鐘滴加仲-丁基鋰(95ml,123mmol,1.3M的環(huán)已烷液)。將溶液冷至-15℃并滴加THF(30ml)。攪拌1小時(shí)后，滴加腙(10.2g,42mmol)的THF(30ml)溶液。攪拌反應(yīng)混合物20分鐘并溫?zé)嶂?℃。用水小心地驟冷反應(yīng)液并用EtOAc提取。用1N HCl提取合并的有機(jī)層并用50％NaOH水溶液強(qiáng)堿化合并的水層。用EtOAc提取得到的混合物，用鹽水洗滌并干燥(MgSO4)。在減壓下除去溶劑得到雙-肼10，為油狀物(19.25g,99％):1HNMR(CDCl3)δ7.08(s,8H),4.09(s,2H),3.02(t,J=7.1Hz,2H),2.67(m,4H),2.31(s,6H),2.17(s,12H),1.43(s,6H)；IR(kBr)V 2980,2940、1680、1510、1240cm-1；LRMS(ESI)m/z:455(M+H+,6％),228(M+2H+,100％)；HRMS計(jì)算值(C27H43N4O2)(M+H+)455.3386；實(shí)測(cè)值455.3393。
B部分(2R,3S,4S,5R)-2,5-二氨基-1,6-雙(4-甲基苯基)-3,4-O-異亞丙基已二醇(11)。
向雙-肼10(18.64g,41mmol)的甲醇(150ml)溶液加入Raney鎳(20g,50％淤漿)。向懸浮液通入氫(250psi)并在100℃加熱16小時(shí)。冷卻懸浮液，過(guò)硅藻土層過(guò)濾，在減壓下除去溶劑。層析(硅膠，10％甲醇/CH2Cl2)得到二胺11，為油狀物(12.49g,83％):1H NMR(CDCl3)δ7.08(ab,J=8.1Hz,ΔV=15.2Hz,8H),4.01(s,2H),2.94(m,2H),2.77(ABX的A,JAB=13.4Hz,JAX=4.6Hz,2H),2.51(ABX的B,JAB=13.4Hz,JBX=9.7Hz,2H),2.32(s,6H),1.45(s,6H)；IR(kBr)V 2980,2920,1510cm-1；LRMS(ESI)m/z:3 69(M+H+,16％),185(M+2H+,100％)；HRMS計(jì)算值(C23H33N2O2)(M+H+)369.2542；實(shí)測(cè)值369.2534。
C部分(4R,5S,6S,7R)-六氫-5,6-O-異亞丙基-4,7-雙[(4-甲基苯基)甲基]-2H-1,3-二氮雜-2-酮(12)。
向二胺11(12.48g,33.9mmol)的1,1,2,2-四氯乙烷(130ml)溶液中加入1,1’-羰基二咪基(5.67g,35.0mmol)。10分鐘后，回流下用45分鐘，將該溶液滴加到1,1,2,2-四氯乙烷(600ml)中。冷卻溶液，用水，鹽水洗滌并干燥(MgSO4)。在減壓下除去溶劑，層析殘留物(硅膠，33％乙酸乙酯/已烷)，隨后重結(jié)晶(乙酸乙酯/已烷)得到環(huán)脲12，為白色固體(6.18g,46％):mp=228-230℃；1H NMR(CDCl3)δ7.12(brs,8H),4.93(d,J=6.2Hz,2H),4.25(s,2H),3.50(m,2H),3.01(app.d,J=13.2Hz,2H),2.78(app.t,J=11.8Hz,2H),2.33(s,6H),1.54(s,6H)；IR(kBr)V 3260,2930、1670、1090cm-1；LRMS(ESI)m/z；395(M+H+,100％),HRMS計(jì)算值(C24H31N2O3)(M+H+)395.2335；實(shí)測(cè)值395.2333。
D部分(4R,5S,6S,7R)-六氫-5,6-O-異亞丙基-4,7-雙[(4-甲基苯基)甲基]-1-苯甲基-2H-1,3-二氮雜-2-酮(13)。
向0℃，向環(huán)脲12(3.0g,7.6mmol)和芐溴(1.59g,9.3mmol)的THF(300ml)溶液中用30分鐘滴加叔-丁醇鉀(8.4ml,8.4mmol,1.0M的THF溶液)。將溶液溫?zé)嶂潦覝夭嚢柽^(guò)夜。用鹽水稀釋反應(yīng)混合物，并用EtOAc提取。用鹽水洗滌合并的有機(jī)層并干燥(MgSO4)。在減壓下除去溶劑并層析殘留物(硅膠，25％乙酸乙酯/已烷)得到環(huán)脲13，為玻璃狀物(2.57g,70％):1H NMR(CDCl3)δ7.28(m,3H),7.15(m,10H),5.12(d,J=14.6Hz,1H),4.88(d,J=6.6Hz,1H),4.23(m,1H),3.75(m,2H),3.47(m,1H),3.01(m,3H),2.86(d,J=14.6Hz,1H),2.66(m,1H),2.37(s,3H),2.34(s,3H),1.45(s,3H)；1.40(s,3H)；IR(kBr)V 2930、1650、1240、1090cm-1；LRMS(ESI)m/z:485(M+H+,100％),HRMS計(jì)算值(C31H37N2O3)(M+H+)485.2804；實(shí)測(cè)值485.2789。
E部分(4R,5S,6S,7R)-六氫-1-[(3-氰基-4-氟苯基)甲基]-5,6-O-異亞丙基-4,7-雙[(4-甲基苯基)甲基]-3-苯甲基-2H-1,3-二氮雜-2-酮(14)。
在0℃，向環(huán)脲13(2.30g,4.75mmol)和3-氰基-4-氟芐基溴(1.07g,5.0mmol)的THF(200ml)溶液中加入叔-丁醇鉀(4.8ml,4.8mmol,1.0M的THF溶液)。將溶液溫?zé)嶂潦覝夭嚢柽^(guò)夜。用鹽水稀釋反應(yīng)混合物并用EtOAc提取。用鹽水洗滌合并的有機(jī)層并干燥(MgSO4)。在減壓下除去溶劑并層析殘留物(硅膠，25％乙酸乙酯/乙烷)得到環(huán)脲14，為玻璃狀物(2.43g,82％):1H NMR(CDCl3)δ7.33(m,5H),7.13(d,J=7.7Hz,4H),6.95(m,7H),4.89(d,J=14.3Hz,1H),4.46(d,J=14.3Hz,1H),3.97(m,1H),3.78(m,3H),3.65(d,J=14.3Hz,,1H),3.07(d,J=14.3Hz,1H),2.83(m,4H),2.36(s,3H),2.34(s,3H),1.44(s,3H),1.38(s,3H)；IR(kBr)V 2980、2930、2240、1630、1230cm-1；CIMS(NH4)m/z；635(M+NH4+,100％),HRMS計(jì)算值(C39H41N3OF3)(M+H+)618.3132；實(shí)測(cè)值618.3119。
F部分(4R、5S、6S、7R)-六氫-1-[5-(3-氨基吲唑)甲基]-5,6-O-異亞丙基-4,7-雙[(4-甲基苯基)甲基]-3-苯甲基-2H-1,3-二氮雜-2-酮(15)。
向環(huán)脲14(2.40g,3.89mmol)的正-丁醇(40ml)的溶液中加入肼一水合物(19.8g,395mmol)，將得到的溶液回流過(guò)夜。用水稀釋反應(yīng)混合物并用EtOAc提取。用鹽水洗滌合并的有機(jī)層并干燥(MgSO4)。減壓下除去溶劑并層析殘留物(硅膠，10％甲醇/二氯甲烷)得到氨基吲唑15，為白色固體(2.34g,95％):mp=120-124℃；1H NMR(CDCl3)δ7.25(m,12H),6.97(t,J=7.7Hz,4H),4.98(dd,J=14.3,2.0Hz,2H),3.80(s,2H),3.76(m,2H),3.27(d,J=14.3Hz,1H),3.09(d,J=14.3Hz,1H),2.86(m,4H),2.35(s,6H),1.32(s,6H)；IR(kBr)V 3310、2930、1630、1430、1230cm-1；CIMS(NH4)m/z:630(M+H+,100％),HRMS計(jì)算值(C39H44N5O3)(M+H+)630.3444；實(shí)測(cè)值630.3428。
G部分(4R,5S,6S,7R)-六氫-1-[5-(3-氨基吲唑)甲基]-5,6-二羥基-制備的-4,7-雙[(4-甲基苯基)甲基]-3-苯甲基-2H-1,3-二氮雜-2-酮(Ⅱ)。
將環(huán)脲15(1.90g,3.02mmol)溶解于10％濃HCl的甲醇液(40ml)中。2小時(shí)后，加入飽和的Na2CO3并用EtOAc提取懸浮液。用鹽水洗滌合并的有機(jī)層并干燥(MgSO4)。在減壓下除去溶劑并層析殘留物(硅膠，10％甲醇/二氯甲烷)得到標(biāo)題化合物，為白色的固體(1.71g,96％):mp=142-146℃；1H NMR(CD3OD)δ7.37(s,1H),7.28(m,3H),7.22(s,2H),7.15(m,6H),6.94(m,4H),4.77(d,J=14.3Hz,1H),4.72(d,J=14.3Hz,1H),3.59(m,2H),3.51(br s,2H),3.11(d,J=14.3Hz,1H)；2.93(m,5H),2.31(brs,6H)；IR(kBr)V 3330、2920、1610、1470、1230cm-1；CIMS(NH3)m/z；590(M+H+,100％),HRMS計(jì)算值(C36H40N5O3)(M+H+)590.3131；實(shí)測(cè)值590.3132；分析(C36H39N5O3)C,H,N。
應(yīng)用式Ⅰ和Ⅱ化合物具有HIV蛋白酶抑制劑的活性，并可作為抗病毒劑治療HIV感染及相關(guān)疾病。式Ⅰ和Ⅱ化合物具有HIV蛋白酶抑制的活性可作為HIV生長(zhǎng)的有效抑制劑。以病毒生長(zhǎng)或感染性的標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法，例如使用下述方法確定本發(fā)明化合物抑制病毒生長(zhǎng)或感染性的能力。
本發(fā)明式Ⅰ和Ⅱ化合物也可用于在含有HIV的體外(ex vivo)樣品中對(duì)HIV的抑制或期望對(duì)接觸HIV者有影響。這樣，本發(fā)明化合物可用于抑制存在于體液樣品(例如，血清或精液樣品)中所含有的或懷疑含有的HIV或?qū)佑|HIV者有影響。
通過(guò)本發(fā)明提供的化合物也可以作為標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌坊衔?，用于測(cè)定抑制病毒克隆復(fù)制和/或HIV蛋白酶的分析或檢測(cè)中，例如在藥物研究項(xiàng)目中的應(yīng)用。因此，本發(fā)明化合物可作為這些檢測(cè)中的對(duì)照或參照化合物和作為質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)?？梢砸陨虡I(yè)用試劑盒或容器來(lái)提供本發(fā)明化合物或作為標(biāo)準(zhǔn)或參照化合物。
由于本發(fā)明化合物對(duì)HIV蛋白酶表現(xiàn)出特異性，所以本發(fā)明化合物在測(cè)定HIV蛋白酶的診斷分析中作為診斷試劑。這樣，在分析(如在此介紹的分析)中，經(jīng)本發(fā)明化合物表現(xiàn)的蛋白酶活性的抑制，將作為HIV蛋白酶和HIV病毒的存在的指標(biāo)。
如在此所用的“μg”指微克、“mg”指毫克、“g”指克，“μl”指微升、“ml”指毫升、“L”指升、“nm”指毫微摩爾、“μM”指微摩爾、“mM”指毫摩爾、“M”摩爾和“nm”指毫微米?！癝igma”代表Sigma-Aldrich公司(St.Lauis.Mo)。
HIV RNA分析DNA質(zhì)粒和體外RNA轉(zhuǎn)錄根據(jù)Erickson-Viitanen等人的方法(AIDS Researck and HumanRetro Viruses 1989,5,577)可制備含有g(shù)ag和pol兩個(gè)序列的BH10(bp113-1816)并可克隆到PTZ 19R的質(zhì)粒pDAB 72。在體外RNA轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生之前，使用具有T7 RNA聚合酶的Riboprobe Gemini系統(tǒng)Ⅱ藥劑盒(Promega)，用Bam HI使質(zhì)粒線性化。用RNase游離DNAse(Promega)、苯酚-氯仿提取和乙醇沉淀等處理方法來(lái)純化已合成的RNA。將RNA轉(zhuǎn)錄物溶于水中并在-70℃貯存。用A260測(cè)定RNA的濃度。
探針使用Cocuzza的生物素-亞磷酰胺(biotin-phosphoramidite)試劑(Tet、Lett.1989,30,6287)，通過(guò)將生物素加到低聚核苷酸的5’末端，在Applied Biosystems(Foster City.CA)DNA合成器中合成，之后經(jīng)HPLC純化生物素化捕獲的探針。gag生物素化捕獲探針(5-生物素-CTAGCTCCCTGCTTGCCCATACTA 3’)對(duì)HXB2的核苷酸889-912是互補(bǔ)的以及pol生物素化捕獲的探針(5’生物素-CCCTATCATTTTTGGTTTCCAT 3’)對(duì)HXB2的核苷酸2374-2395是互補(bǔ)的。通過(guò)同系基因(Syngene)(San Diego.CA.)制備連接低聚核苷酸的堿性磷酸酶作為報(bào)告探針。pol報(bào)告探針(5’CTGTCTTACTTTGATAAAACCTC 3’)對(duì)HXB2的核苷酸2403-2425是互補(bǔ)的。gag報(bào)告探針(5’CCCAGTATTTGTCTACAGCCTTCT 3’)對(duì)HXB2的核苷酸950-931是互補(bǔ)的。正如通過(guò)Genetics ComputerGroup Sequence Analysis Software Package(Devereau Nucleic AcidsResearch 1984,12,387)讀取數(shù)據(jù)，所有核苷酸位置均在GenBank基因序列數(shù)據(jù)庫(kù)中。按2×SSC(0.3M NaCl,0.03M檸檬酸鈉)中0.5μM原液，0.05M Tri pH8.8、1mg/ml BSA制備報(bào)告探針。按水中100μM原液制備生物素化捕獲的探針。鏈霉抗生物素涂布平板從Du Pont Biotechnology Systems(Boston MA)可獲得鏈霉抗生物素涂布平板。
細(xì)胞和病毒原液(Boston,MA)在RPMI 1640中，對(duì)MT-2細(xì)胞補(bǔ)充5％胎牛血清(FCS)或?qū)T-4細(xì)胞補(bǔ)充10％FCS，以及再加入2mM L-谷氨酰胺和50μg/mL慶大霉素的介質(zhì)中維持MT-2和MT-4細(xì)胞，所有物質(zhì)均來(lái)自Gibco。以相同介質(zhì)在MT-4細(xì)胞中繁殖HIV-I RF。急性感染MT-4細(xì)胞后約10天可制得病毒原液，并分成等份在-70℃貯存。對(duì)MT-2細(xì)胞經(jīng)蝕斑分析(參見下述)測(cè)得HIV-1(RF)原液的感染效價(jià)是1-3×107PFU(蝕斑形成的單位)/ml。用于感染的每份病毒原液僅解凍一次。
對(duì)評(píng)價(jià)抗病毒效果來(lái)講，在感染之前，將被感染細(xì)胞再培養(yǎng)一天。在進(jìn)行感染那天，以5×105細(xì)胞/ml在RPMI 1640中重新懸浮細(xì)胞，對(duì)大量感染加5％FCS或在微量滴定板中感染，以2×106/ml，在Dulbecco氏改良的Eagles培養(yǎng)基(含有5％FCS)中重新懸浮細(xì)胞。加入病毒并在37℃連續(xù)培養(yǎng)3天。HIV RNA檢測(cè)將3M或5M GED中的細(xì)胞溶解產(chǎn)物或純化的RNA與5M GED和捕獲的探針混合成3M最終濃度的異硫氰酸胍鹽和30nM最終濃度的生物素低聚核苷酸。在37℃，于密封的U形底96孔組織培養(yǎng)平板(Nunc或Costar)進(jìn)行雜交16-20小時(shí)。用3倍去離子水稀釋RNA雜交反應(yīng)物，使之成為1M的最終濃度異硫氰酸胍鹽并將其等份量(150μl)轉(zhuǎn)移至鏈霉抗生物素涂布的微量滴定板孔中。在室溫下進(jìn)行兩小時(shí)的捕獲的探針及捕獲探針-RNA雜交成固化的鏈霉抗生物素的結(jié)合，之后用Dupont ELISA平板洗滌緩沖液(磷酸鹽緩沖鹽水(PBS),0.05％吐溫)洗滌平板6次。在洗滌的鏈霉抗生物素涂布孔中加入120μl的雜交混合物(含有4×SSC、0.66％Triton×100、6.66％去離子甲酰胺、1mg/mlBSA和5nM報(bào)告基因探針)進(jìn)行報(bào)告基因探針的第二次雜交，將捕獲的探針和雜交靶向RNA固化成復(fù)合物。在37℃雜交1小時(shí)以后，再次洗滌平板6次。通過(guò)加入緩沖液δ〔2.5M二乙醇胺PH8.9(JBL scientific)、10mM MgCl2、5mM乙酸鋅二水合物和5mMN-羥基乙基-亞乙基-二胺-三乙酸〕中100μL的0.2mM 4-methylumbelliferyl磷酸酯(MUBP,JBL scientific)測(cè)定固化的堿性磷酸酶的活性。在37℃孵化平板。使用微量培養(yǎng)板熒光儀(Dymateck)在365nM激發(fā)測(cè)定450nM的熒光。
以HIV-1感染MT-2細(xì)胞來(lái)評(píng)價(jià)微量板基化合物(Microplate basedcompound)將所要評(píng)價(jià)的化合物溶解于DMSO中并在培養(yǎng)基中稀釋至所試驗(yàn)最高濃度的兩倍量及2％的最大DMSO濃度。在U形底微量滴定板(Nunc)中，直接將化合物于培養(yǎng)基中進(jìn)一步稀釋為三倍量系列稀釋液。化合物稀釋后，加入MT-2細(xì)胞(50μl)成最終濃度為5×105/每毫升(每孔為1×105)。在37℃于CO2培養(yǎng)中將細(xì)胞與化合物一起孵化30分鐘。為了評(píng)價(jià)抗病毒能力，將HIV-1(RF)病毒原液(50ml)的適當(dāng)稀釋液加到含有細(xì)胞和試驗(yàn)化合物稀釋液的培養(yǎng)孔中。每孔中最后體積為200μl。每板留有8個(gè)未感染孔，用加入50μl培養(yǎng)基代替病毒，而同時(shí)在不加任何抗病毒化合物情況下，感染8個(gè)孔。為了評(píng)價(jià)化合物毒性，培養(yǎng)未感染病毒的平行平板。
在CO2培養(yǎng)箱內(nèi)潤(rùn)濕室中，于37℃培養(yǎng)3天后，除25μl培養(yǎng)基/孔外全部從HIV感染的平板中移出。將含有生物素化捕獲探針的37μl的5M GED加到固定的細(xì)胞中并保持每孔3M GED的最終濃度和30nM捕獲探針。用平板保護(hù)條(Costar)密封平板來(lái)培養(yǎng)病毒，使用相同的微量培養(yǎng)板孔在細(xì)胞溶解產(chǎn)物中將捕獲探針雜交到HIV RNA上，并在37℃的孵化器中孵化16-20小時(shí)。然后，加入蒸餾水到每孔中稀釋雜交反應(yīng)液至3倍量并轉(zhuǎn)移150μl該稀釋混合物至鏈霉抗生物素涂布的微量滴定板中。如上所述定量HIV RNA。通過(guò)將已知量的體外RNA轉(zhuǎn)錄的pDAB 72加入含有未感染細(xì)胞溶解物的孔中，對(duì)每個(gè)微量滴定板制訂標(biāo)準(zhǔn)曲線，以測(cè)定感染過(guò)程中制行的病毒RNA的數(shù)量。
在評(píng)價(jià)化合物抗病毒活性時(shí)，為了使所用病毒接種物標(biāo)準(zhǔn)化，選擇對(duì)0.2μg/ml的二脫氧胞苷(ddc)產(chǎn)生IC90值(減少HIV RNA90％水平所需化合物濃度)的病毒稀釋液。進(jìn)行該方法時(shí)，用幾種HIV-1(RF)原液使其它抗病毒化合物，或比ddc更強(qiáng)和更弱的化合物再現(xiàn)IC90值。該病毒濃度相應(yīng)每測(cè)定孔為～3×105PFU(經(jīng)MT-2細(xì)胞蝕斑檢測(cè)測(cè)定)并且在任何病毒接種物中一般產(chǎn)生約75％的最大病毒RNA水平。為了HIV RNA檢測(cè)，在與感染細(xì)胞、相同培養(yǎng)板中未處理的細(xì)胞(8孔平均值)有關(guān)的凈信號(hào)(net signal)的RNA測(cè)定中，由凈信號(hào)(感染細(xì)胞樣品的信號(hào)減去未感染細(xì)胞樣品的信號(hào))減少的百分率來(lái)確定IC90值。根據(jù)三項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)判定各個(gè)感染的有效程度和RNA檢測(cè)的試驗(yàn)。所要求的是病毒感染導(dǎo)致RNA檢測(cè)信號(hào)應(yīng)等于或大于產(chǎn)生在體外RNA轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生2ngp DAB 72的信號(hào)。在每個(gè)檢測(cè)中測(cè)定的ddc IC90應(yīng)在0.1-0.3μg/ml之間。最后，經(jīng)有效蛋白酶抑制劑產(chǎn)生的病毒RNA平穩(wěn)期水平應(yīng)少于在未抑制感染中獲取的10％水平。如果發(fā)現(xiàn)化合物的IC90小于1μM，則可認(rèn)為它是有活性的。
對(duì)抗病毒能力試驗(yàn)而言，在開始將2×濃度的化合物溶液加到單排孔中后，使用Perkin Elmer/Cetus ProPette在微量滴定板中進(jìn)行所有操作方法。劑量與制劑通過(guò)使活性藥劑在哺乳動(dòng)物體內(nèi)與藥劑作用部位(即病毒蛋白酶)產(chǎn)生接觸的任何方法，可給予本發(fā)明的抗病毒化合物以治療病毒感染。通過(guò)任何可行的常規(guī)方法，與藥物一起使用，作為單一治療劑或組合治療劑來(lái)給予本發(fā)明的抗病毒化合物。可以單獨(dú)給藥，但優(yōu)選與藥物載體一起給藥，藥物載體的選用基于所選的給藥途徑及標(biāo)準(zhǔn)的藥物實(shí)施方法。
當(dāng)然，給藥劑量將隨已知的各種因素而變化，如具體藥劑的藥物動(dòng)力學(xué)特性和給藥方式和途徑；接受者的年齡、健康狀況和體重；癥狀的性質(zhì)及程度；同時(shí)治療的種類；治療次數(shù)以及所需的效果。預(yù)期活性成分的日劑量是每公斤體重約0.001-約1000毫克，優(yōu)選劑量是約0.1-約30mg/kg。
適合于給藥的組合物劑型，其每單位劑型含有約1mg-約100mg的活性成分。在這些藥物組合物中，活性成分的用量一般為組合物總重的約0.5-95％(重量)?；钚猿煞挚梢砸怨腆w劑型口服給予，例如膠囊、片劑和散劑或以液體劑型給藥，例如酏劑、糖漿劑和混懸劑。也可以以無(wú)菌液體劑型胃腸外給藥。
明膠膠囊含有活性成分和粉未載體，如乳糖、淀粉、纖維素衍生物、硬脂酸鎂、硬脂酸等。使用類似的稀釋劑制成可壓制的片劑?？梢陨a(chǎn)緩釋的產(chǎn)物的片劑和膠囊，以便在一定時(shí)間內(nèi)連續(xù)釋放藥物。壓制的片制可制成糖衣片或薄膜衣片，以掩蓋任何不適味道并使片劑隔絕空氣或制成腸溶衣片，以便在胃腸道選擇性溶解?？诜o藥的液體劑型可含有著色劑和矯味劑，使患者易于接受。
一般講，胃腸外溶液制劑的適當(dāng)載體是水，適當(dāng)?shù)挠?、生理鹽水、含水右旋糖(葡萄糖)和有關(guān)糖溶液以及二元醇類如丙二醇或聚乙二醇。
胃腸外給藥的溶液制劑優(yōu)選含有活性成分的水溶性鹽、適當(dāng)?shù)姆€(wěn)定劑以及若需要的緩沖物質(zhì)?？寡趸瘎┤鐏喠蛩釟溻c。亞硫酸鈉或抗壞血酸(可單獨(dú)使用或組合使用)均為適合的穩(wěn)定劑。也可以使用檸檬酸和它的鹽以及EDTA鈉。另外，胃腸外溶液可含有防腐劑如潔爾滅、對(duì)羥基苯甲酸甲酯或丙酯和氯丁醇。在Remington’s PharmaceuticalSciences、supra(本領(lǐng)域中標(biāo)準(zhǔn)參考書)中介紹了適當(dāng)?shù)乃幱幂d體。
給予本發(fā)明化合物所使用的藥用劑型介紹如下膠囊用100mg的粉未活性成分、150mg乳糖、50mg纖維素和6mg的硬脂酸鎂填充標(biāo)準(zhǔn)的兩件(two-piece)硬明膠膠囊制備大量的單位膠囊。軟明膠膠囊制備將活性成分溶于易消化油如豆油、棉子油或橄欖油中的混合物，并通過(guò)正排量泵注入軟明膠膠囊中，形成含有100mg活性成分的軟明膠膠囊。然后洗滌膠囊并干燥。片劑用常規(guī)方法制備大量的片劑，劑量單位為100mg活性成分、0.2mg膠體二氧化硅、5毫克硬脂酸鎂、275mg微晶纖維素、11mg淀粉和98.8mg乳糖?？墒褂眠m當(dāng)?shù)拿乱栽黾涌诟谢蜓泳徫铡；鞈覄┲苽淇诜o藥的含水混懸劑，其每5ml含有25mg細(xì)分散活性成分，200mg羧甲基纖維素鈉、5mg苯甲酸鈉、1.0g山梨醇液(U.S.P.)，和0.025mg香草醛?？勺⑸鋭┬驮?0％(體積)丙二醇和水中攪拌1.5％(重量)活性成分來(lái)制備適合經(jīng)注射給藥的胃腸外組合物。通過(guò)常規(guī)的技術(shù)，將所述的溶液劑型滅菌。
組分(a)和(b)的組合物。
本發(fā)明的每個(gè)治療劑成分可獨(dú)立是任何劑型，例如上述的劑型，也可以是多種方式給藥，如上所述的給藥方式。下面介紹的組分(b)可認(rèn)為是代表如上所述的一種或多種藥劑。這樣，如果組分(a)和(b)作相同或獨(dú)立治療，則組分(b)的每種藥劑也可以作相同或獨(dú)立治療。
本發(fā)明的組分(a)和(b)可以以單一劑量單位中形式(即混合在一個(gè)膠囊、片劑、散劑、液體制劑等中)配制在一起成為組合產(chǎn)物。當(dāng)組分(a)和(b)不能以單一劑量單位配制在一起時(shí)，可以在給予組分(a)的同時(shí)給予組分(b)或是任何順序；例如首先給予本發(fā)明組分(a)，隨后給予組分(b)或以相反順序給藥。如果組分(b)含有一種以上的藥劑(如一種RT抑制劑和一種蛋白酶抑制劑)，這些藥劑可以一起給藥或是以任何順序給藥。當(dāng)不能同時(shí)給藥時(shí)，優(yōu)選組分(a)和(b)的給藥間隔小于約1小時(shí)。優(yōu)選組分(a)和(b)的給藥途徑為口服給藥。在此所用的術(shù)語(yǔ)口服藥劑、口服抑制劑、口服化合物等均指口服給藥的化合物。雖然優(yōu)選組分(a)和組分(b)以相同途徑(即，如兩者均口服給藥)或相同劑型給藥，但是，若需要，它們各自可以不同途徑(即，如組合產(chǎn)物的一個(gè)組分為口服給藥，另一組分為靜脈給藥)或不同劑型給藥。
本領(lǐng)域醫(yī)療技術(shù)人員可以理解，本發(fā)明組合治療的劑量取決于各種因素而變化，如上所述的具體藥劑的藥物動(dòng)力學(xué)特性、給藥方式和途徑，接受者的年齡、健康狀況和體重；癥狀的性質(zhì)及程度；同時(shí)治療的種類；治療次數(shù)以及所需的效果。
根據(jù)本發(fā)明公開，本領(lǐng)域醫(yī)療技術(shù)人員容易查明本發(fā)明組分(a)和(b)的適當(dāng)劑量。根據(jù)總的原則，每組分的日劑量一般為約100毫克-約1.5g。如果組分(b)代表一種以上的化合物，組分(b)的每種藥劑的日劑量為約100毫克-約1.5g。根據(jù)總的原則，以組合物形式給予組分(a)和組分(b)的化合物時(shí)，每種組分的劑量將減少相對(duì)單一藥劑單獨(dú)給藥治療HIV感染時(shí)該組分常用劑量的約70-80％。
雖然以單一劑量單位混合各活性成分，但可以配制本發(fā)明的組合產(chǎn)物以使各活性成分之間的物理接觸達(dá)到最小。例如，為了減少接觸，在口服給予本產(chǎn)物時(shí)，一種活性成分可以是腸溶衣。通過(guò)腸溶包衣一種活性成分，不僅可能減少各混合的活性成分之間的接觸，而且可能控制這些組分中的一種在胃腸道中的釋放，以致這些組分中的一種不在胃中釋放而在腸道中釋放。
本發(fā)明另一個(gè)實(shí)施方案就是所需的口服給藥能提供組合產(chǎn)物，其中一種活性成分用緩釋材料包衣，以致通過(guò)胃腸道時(shí)產(chǎn)生緩釋的效果并也使混合的各活性成分之間保持最小的接觸。進(jìn)一步講，緩釋的組分再加上腸溶衣使該組分僅在腸道中釋放。還有另一方法涉及組合產(chǎn)物的配制，其中它的一個(gè)組分用緩釋和/或腸道釋放聚合物包衣，而其它組分也用聚合物如低粘度羥丙基甲基纖維素或本領(lǐng)域已知的其它適當(dāng)材料包衣，以進(jìn)一步分開活性組分。聚合物包衣可形成附加的屏障以免與其它組分相互作用。在每個(gè)制劑中，用包衣或一些其它材料可以防止組分(a)和(b)的接觸，也可以防止組分(b)的各個(gè)藥劑之間的接觸。
本發(fā)明組合產(chǎn)物的劑型可以是其中一個(gè)活性成分為腸溶衣的片劑形式，以便使腸溶包衣的組分和其它活性成分混合在一起，然后壓制成片或?qū)⒛c溶包衣組分壓成一個(gè)片層而其它活性成分壓制成另一層。為了進(jìn)一步分開兩層，可任選有一層或多層的空白對(duì)照層，而空白對(duì)照層在活性成分之間。另外，本發(fā)明的劑型可以是膠囊形式，其中一種活性成分壓制成片劑或是大量的微片、粒子，顆?；騨on-perils的形式，然后腸溶包衣。然后將這些腸溶包衣的微片，粒子，顆?；騨on-perils置入膠囊中或與其它活性成分的顆粒一起裝入膠囊中。
根據(jù)本公開，無(wú)論以單一劑型給藥或是分開形式但同時(shí)給藥或以相同方式同時(shí)給藥，對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，很容易理解減少本發(fā)明組合產(chǎn)物各組分之間接觸的這些或其它方法。
用于治療HIV感染的藥劑盒也在本發(fā)明范圍內(nèi)，它是在一個(gè)或多個(gè)無(wú)菌容器中含有有效治療量的藥用組合物，其中包含組分(a)和組分(b)的一種或多種化合物。用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的常規(guī)滅菌方法對(duì)容器進(jìn)行滅菌處理。組分(a)和組分(b)可以在同一滅菌容器或分開的容器中。所述滅菌溶器可以包括分開的溶器或若所需為一個(gè)或多個(gè)多部分的容器。組分(a)和組分(b)可以是分開的或經(jīng)物理混合成單一劑型或如上所述的單位。若所需，這樣的藥劑盒可進(jìn)一步包括一種或多種各種常用藥劑盒的組分，例如為一種或多種藥學(xué)上可接受的載體，混合組分的附加小瓶等等。這些對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員容易理解。在藥盒中也包括說(shuō)明書(或插入盒內(nèi)或作為標(biāo)簽)，標(biāo)明給予組分的指示用量，給藥指導(dǎo)和/或混合組分的指導(dǎo)。
顯然，根據(jù)上述指示，本發(fā)明的許多修改和變化是可行的。因此可以理解這些修改均在所附的權(quán)利要求范圍內(nèi)，另外，除本文的專門描述外，也可實(shí)施本發(fā)明。
權(quán)利要求
1．式Ⅰ或Ⅱ的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或藥物前體形式
2．權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物具有式Ⅰ的結(jié)構(gòu)。
3．權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物具有式Ⅱ的結(jié)構(gòu)。
4．藥用組合物，它含有藥學(xué)上可接受的載體和有效治療量的權(quán)利要求1的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或藥物前體形式。
5．權(quán)利要求4的組合物，其中所述化合物具有式Ⅰ的結(jié)構(gòu)。
6．權(quán)利要求4的組合物，其中所述化合物具有式Ⅱ的結(jié)構(gòu)。
7．治療HIV感染的方法，它包括對(duì)需要此治療的宿主給予有效治療量的式Ⅰ或Ⅱ的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或藥物前體形式
8．權(quán)利要求7的方法，其中所述化合物具有式Ⅰ的結(jié)構(gòu)。
9．權(quán)利要求7的方法，其中所述化合物具有式Ⅱ的結(jié)構(gòu)。
10．治療HIV感染的方法，它包括對(duì)需要此治療的宿主以組合物形式給予有效治療量的(a)式Ⅰ或Ⅱ的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或藥物前體形式；和
(b)至少一種選自HIV逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑和HIV蛋白酶抑制劑的化合物。
11．權(quán)利要求10的方法，其中所述化合物具有式Ⅰ的結(jié)構(gòu)。
12．權(quán)利要求10的方法，其中所述化合物具有式Ⅱ的結(jié)構(gòu)。
13．權(quán)利要求10的方法，其中所述逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑是核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑。
14．權(quán)利要求13的方法，其中所述核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑選自AZT、3TC、ddT、ddC、和d4T和所述蛋白酶抑制劑選自saquinavir、ritonavir、indinavir、VX-478+nelfinavir、KNT-272、CGP-61755和U-103017。
15．權(quán)利要求14的方法，其中所述的核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑選自AZT和3TC和所述蛋白酶抑制劑選自saquinavir、ritonavir和indinavir。
16．權(quán)利要求15的方法，其中所述核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑是AZT。
17．權(quán)利要求15的方法，其中所述蛋白酶抑制劑是indinavir。
18．用于治療HIV感染的藥劑盒，它含有有效治療量的(a)權(quán)利要求1的化合物；和(b)至少一種選自HIV逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑和HIV蛋白酶抑制劑的化合物，在一個(gè)或多個(gè)滅菌容器中。
19．權(quán)利要求18的藥劑盒，其中組分(a)是式Ⅰ化合物。
20．權(quán)利要求18的藥劑盒，其中組分(a)是式Ⅱ化合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及式Ⅰ和Ⅱ化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或藥物前體,它用作HIV蛋白酶抑制劑。本發(fā)明還涉及含有該化合物的藥用組合物及診斷試盒,使用該化合物治療病毒感染的方法或作為檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品或試劑。
文檔編號(hào)C07D403/06GK1235602SQ97199419
公開日1999年11月17日 申請(qǐng)日期1997年11月4日 優(yōu)先權(quán)日1996年11月8日
發(fā)明者J·D·羅杰斯, R·F·卡爾滕巴奇三世 申請(qǐng)人:杜邦藥品公司