專利名稱：：蛋白質(zhì)可魯可林及其用途的制作方法本申請(qǐng)是發(fā)明專利申請(qǐng)CN89104332.2的分案申請(qǐng)。本發(fā)明涉及新穎的蛋白質(zhì)可魯可林(Curculin)及其作為味覺修飾劑的用途。在已有的技術(shù)中，作為作用于舌頭的感受膜上，使食品的味覺發(fā)生變化的味覺修飾物質(zhì)，已知的有含在口中之后再食用甜味物質(zhì)時(shí)、或者與甜味物質(zhì)一起食用時(shí)，使之不感覺到有甜味的匙羹藤(Gymnemasylvestre)的葉中所含的匙羹藤酸及棗木葉里所含的棗堿，另外，還知道與上述同樣作為在食用酸味物質(zhì)時(shí)使之感覺到甜味的Synsepulmdulcificum的果實(shí)中所含的米蘭庫林(miraculin)。作為在口香糖中使用味覺修飾物質(zhì)的例子，可參閱將米蘭庫林摻入口香糖組合物中或被覆于口香糖組合物上的口香糖的制造方法(特公昭49-32068號(hào)公報(bào))。此外，作為在清潔口腔用組合物中使用味覺修飾物的例子，有將米蘭庫林摻入口腔清潔用組合物中，以防止因口腔中殘留的十二烷基硫酸鈉引起的汁液味變化的口腔清洗用組合物的例子(參見特開昭61-36214號(hào)公報(bào))。另外，Curculigolatifolia是西馬來西亞及泰國南部等地自生的石蒜科仙茅屬的植物，其果實(shí)適于食用，已知具有增進(jìn)食欲的效果。上述的米蘭庫林如上所述具有味覺修辭劑的功能，但是穩(wěn)定性上存在問題，尚未作為味覺修飾物質(zhì)而實(shí)用化，使用米蘭庫林的口香糖組合物以及口腔清潔用組合物也尚未實(shí)用化。此外，Curculigolatifolia的果實(shí)的上述外的性質(zhì)方面還不了解。本發(fā)明的第一個(gè)目的在于提供穩(wěn)定性高的，新穎的味覺修飾物質(zhì)。本發(fā)明的第二個(gè)目的在于提供飲食酸性物質(zhì)、在口中呈酸性的物質(zhì)或含有這些物質(zhì)的食物(以下稱為酸味物質(zhì))時(shí)產(chǎn)生味覺修飾效果的、穩(wěn)定度高的、新穎的、酸味物質(zhì)的味覺修飾劑。本發(fā)明的第三個(gè)目的在于，提供具有新穎的味覺修飾效果、且味覺修飾功能穩(wěn)定的口香糖組合物。本發(fā)明的第四個(gè)目的在于，提供具有新穎的味覺修飾效果的，且味覺修飾功能穩(wěn)定的口腔清潔用組合物。本發(fā)明的發(fā)明者們發(fā)現(xiàn)食用了Curculigolatifolia的果實(shí)后，食用酸味物質(zhì)或水時(shí)會(huì)產(chǎn)生甜味，隨后又對(duì)其誘因物質(zhì)是什么進(jìn)行了專門研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Curculigolatifolia的果實(shí)中所含的特定的蛋白質(zhì)(命名為可魯可林(Curculin))為產(chǎn)生甜味感覺的誘因物質(zhì)。另外，本發(fā)明的發(fā)明者們發(fā)現(xiàn)食用Curculigolatifolia的果實(shí)后再飲食酸味物質(zhì)時(shí)會(huì)感覺到甜味，因而該果實(shí)能夠成為達(dá)到上述目的的酸味物質(zhì)的味覺修飾劑。此外，本發(fā)明的發(fā)明者們經(jīng)過進(jìn)一步銳意研究之后，結(jié)果發(fā)現(xiàn)將Curculigolatifolia的果實(shí)或其干燥物、或者從這些物質(zhì)得到的含有可魯可林的成分摻入口香糖而可制成達(dá)到上述的目的口香糖。此外，本發(fā)明的發(fā)明者們經(jīng)過進(jìn)一步銳意研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)將Curculigolatifolia的果實(shí)或其干燥物、或者從這些物質(zhì)得到的含有可魯可林的成分摻入口腔清潔劑中而可制成達(dá)到上述目的的口腔清潔劑。本發(fā)明就是以上述所見為根據(jù)進(jìn)行的，通過提供由Curculigolatifolia的果實(shí)或其干燥物中用0.01M以上濃度的鹽的水溶液抽提出的蛋白質(zhì)可魯可林(第一發(fā)明)從而達(dá)到上述第一目的。上述的第一發(fā)明的新穎物質(zhì)可魯可林的穩(wěn)定度高、可適用作味覺修飾物質(zhì)，例如，在事前食用了本發(fā)明的可魯可林或其含有物之后，飲食酸味物質(zhì)或水等之時(shí)可以產(chǎn)生甜味，因而在食用因保存性等理由而不得不制成酸性的食品、或因健康或營(yíng)養(yǎng)上的理由而不含有砂糖的食品時(shí)可使之產(chǎn)生所希望的甜味，因此，在廣泛的用途方面具有利用的可能。此外，本發(fā)明通過提供由Curculigolatifolia的果實(shí)或者其干燥物或者含有從這些物質(zhì)中得到的可魯可林成分所組合物酸味物質(zhì)的味覺修飾劑(第二發(fā)明)而達(dá)到上述的第二個(gè)目的。上述第二發(fā)明的酸味物質(zhì)的味覺修飾劑的穩(wěn)定度高、如事前食用本發(fā)明的味覺修飾劑或其含有物，則在飲食酸味物質(zhì)時(shí)可感到甜味，使食用為了保藏等原因而非制成酸性不可的食品時(shí)能使之產(chǎn)生所希望的甜味，另外，在含有具有苦味、澀味或辣味的食物上可使之產(chǎn)生較強(qiáng)的甜味，因而可以在更為廣泛的用途方面得以利用。本發(fā)明借提供以含有Curculigolatifolia的果實(shí)或其干燥物，或者從中得到的含可魯可林的成分為特征的口香糖的組合物(第三發(fā)明)而達(dá)到上述的第三個(gè)目的。上述的第三發(fā)明的口香糖組合物有新穎的味覺修飾效果且為味覺修飾功能穩(wěn)定的口香糖組合物，不僅能長(zhǎng)時(shí)間地保持口香糖的風(fēng)味，而且嚼食口香糖之后食用的酸味物質(zhì)及水感覺甜味，減輕酸味物質(zhì)的酸性，增強(qiáng)甜味，能使具有酸味的食物成為具有甜味的易食用的食品。另外，本發(fā)明借提供以含有可Curculigolatifolia的果實(shí)或其干燥物，或者從中得到的含有可魯可林的成分為特征的口腔清潔用組合物(第四發(fā)明)而達(dá)到上述的第四個(gè)目的。上述第四發(fā)明的口腔清潔用組合物，具有新穎的味覺修飾效果，且為味覺修飾功能穩(wěn)定的口腔清潔用組合物，不僅使清潔口腔用的水產(chǎn)生甜味，而且使在使用口腔清潔用組合物之后食用的酸味物質(zhì)及水產(chǎn)生甜味，另外即便在口腔清潔用組合物中摻合了十二烷基硫酸鈉，也不會(huì)產(chǎn)生因該十二烷基硫酸鈉而產(chǎn)生的余味的惡化。首先，對(duì)本發(fā)明的第一發(fā)明的蛋白質(zhì)可魯可林作詳細(xì)敘述。本發(fā)明的可魯可林為用0.01M以上濃度的鹽水溶液自Curculigolatifolia的果實(shí)或其干燥物抽提而得到的。作為上述的鹽，可以采用下述的鹽類，即，氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、氯化鎂或氯化銨，磷酸鈉、磷酸鉀、磷酸鎂或磷酸銨，碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸鎂或碳酸銨，鈉、鎂、鈣或銨的硫酸鹽或亞硫酸鹽，鈉或鉀的硝酸鹽或亞硝酸鹽、鈉或鈣的乳酸鹽、明礬、燒明礬、乙酸鈉、鈉或鉀的焦磷酸鹽，鈉或鉀的丙酸鹽、安息香酸鈉、富馬酸鈉、聚丙烯酸鈉等。另外，作為上述的Curculigolatifolia的果實(shí)的干燥物，對(duì)其干燥手段并無特別的限制，日曬干燥物、熱風(fēng)干燥物、及凍結(jié)干燥漿等凍結(jié)干燥物等均可使用。作為用上述鹽水溶液抽提可魯可林的方法，其代表性例子如下所述。向Curculigolatifolia的果實(shí)或其干燥物中加入上述鹽水溶液，經(jīng)勻化后，進(jìn)行過濾、離心等便可抽提出來，由于可魯可林被含于Curculigolatifolia的果實(shí)的果肉中的水不溶部分，因而在上述的果實(shí)或其干燥物中加水進(jìn)行勻化，充分水洗，除去水溶液后用上述鹽水溶液從該殘?jiān)谐樘岬姆椒傻玫礁呒兌鹊目婶斂闪郑蚨抢硐氲?。因用低?.01M濃度的鹽水溶液不能充分地抽出可魯可林，因而0.01M以上的濃度的鹽的水溶液是必要的。另一方面，太高濃度的鹽在抽提后的脫鹽工序較麻煩，因而從抽提效率與抽提后的精制手續(xù)之間均衡考慮，0.1-1.0M濃度的鹽水溶液是理想的。對(duì)從上述鹽水溶液而得的抽提液進(jìn)行脫鹽、干燥，可得到供充分使用的含有可魯可林的物質(zhì)，但通過對(duì)抽提液進(jìn)一步用CM-瓊脂糖的離子交換、使用凝膠柱的HPLC進(jìn)行精制，可提高純度，此后，經(jīng)脫鹽、干燥而得純的可魯可林。當(dāng)然，除上述的精制法之外，采用鹽析抽提液，溶劑沉淀及其它公知的蛋白精制法進(jìn)行分離也可使可魯可林的純度提高。作為由此而得的本發(fā)明的可魯可林的具體例，可舉分子量約2,500道爾頓，氨基酸殘基數(shù)為97，等電點(diǎn)為7.1的蛋白質(zhì)，該蛋白質(zhì)以分子量約為26,000道爾頓的二聚體存在。另外，上述蛋白質(zhì)的氨基酸的組成如以下的表1所示，上述蛋白質(zhì)為含天冬氨酸、亮氨酸及甘氨酸量比較多的氨基酸。表1氨基酸組成上述的本發(fā)明的蛋白質(zhì)可魯可林適合作為味覺修飾劑使用。由上述的可魯可林制成的本發(fā)明的味覺修飾劑可直接攝取，也可以適當(dāng)?shù)負(fù)饺胧称?、飲料或藥劑中使用。至于?duì)食品等的摻合量，可參考下述可魯可林呈現(xiàn)甜味的活性，隨目的及用途而定。另外，含有自可魯可林制成的味覺修飾劑的食品等，可根據(jù)該食品等的性狀，加工成為粉末狀、溶液狀、薄片狀、噴霧狀或者乳化物狀。本發(fā)明的可魯可林，含入口中之后，食用酸味物質(zhì)、無味物質(zhì)或水等時(shí)，或者與酸味物質(zhì)、無味物質(zhì)或水等一起食用時(shí)，具有與舌部的感受膜作用，而產(chǎn)生甜味的效果，如果事先食用本發(fā)明的可魯可林或含該可魯可林的制劑或食品等，則在此后的三十分鐘之內(nèi)，食用酸味物質(zhì)、無味物質(zhì)或水時(shí)可產(chǎn)生甜味。對(duì)于各種水溶液的純可魯可林(4×10M濃度)的呈現(xiàn)甜味活性如下述的表2所示，對(duì)于酸味物質(zhì)，活性尤其高。表2</tables>另外，本發(fā)明的可魯可林不同于ミラクルフ-ツ的果實(shí)中所含的米蘭庫林(miraculin)，在水溶液中也是穩(wěn)定的，因而可以容易地將可魯可林及含可魯可林的制劑或食品等制成粉末狀、片劑狀、薄片狀，此外還可制成溶液狀、乳化物狀、噴霧狀。此外，本發(fā)明的可魯可林其自身也有微弱的甜味。以下，對(duì)本發(fā)明的第二發(fā)明的酸味物質(zhì)的味覺修飾劑進(jìn)行詳述。本發(fā)明的味覺修飾劑并不限于Curculigolatifolia的果實(shí)，其干燥物也是可以的，作為該干燥物，其干燥手段無特別的限制，可以列舉日曬干燥物、熱風(fēng)干燥物及凍結(jié)干燥漿等凍結(jié)干燥物等。Curculigolatifolia的果實(shí)及其干燥物的使用形態(tài)無特別的限制，通常采用適宜的破碎、粉碎、膏狀化等方法。另外，本發(fā)明的味覺修飾劑，如為上述的Curculigolatifolia的果實(shí)或自其干燥物制得的含可魯可林的成分也是可以的，作為該成分，可例舉對(duì)上述果實(shí)或其干燥物中抽提出的可魯可林、或上述果實(shí)或其干燥物進(jìn)行適當(dāng)處理，分離除去不含可魯可林的成分而剩下的殘?jiān)?。?duì)于果實(shí)或其干燥物中抽提出的上述可魯可林的精制純度無任何限制，除高純度物之外，也可為含多量非可魯可林成分之物，另外，在抽提物中混合其他的成分也是可以的。上述的可魯可林的抽提法，雖然不一定受限制，但利用前述的第一發(fā)明中例示的抽提方法，即從Curculigolatifolia的果實(shí)或其干燥物中用0.01M以上濃度的鹽水溶液抽提的方法是較好的。上述的本發(fā)明的酸味物質(zhì)的味覺修飾劑既可直接攝取，也可適宜地?fù)胶先胧称?、飲料或藥劑等中進(jìn)行使用。本發(fā)明的味覺修飾劑對(duì)于食品等的摻合量，隨其使用形態(tài)及摻合使用的食品等的差異而不同，雖不能一概而論，但通常對(duì)于100重量份的食品等，可魯可林在0.001-1重量份的范圍中選擇。本發(fā)明的味覺修飾劑，進(jìn)一步通過含有具苦味、澀味或辣味的物質(zhì)，而使其對(duì)于酸味物質(zhì)的味覺修飾效果進(jìn)一步增強(qiáng)。也就是說，本發(fā)明的味覺修飾劑在苦味、澀味或辣味的物質(zhì)與酸味物質(zhì)同時(shí)存在于口中時(shí)，可產(chǎn)生更強(qiáng)的甜味感覺。不過并不一定要使有苦味、澀味或辣味的物質(zhì)與酸味物質(zhì)或本發(fā)明的味覺修飾劑同時(shí)攝取，可在其少許前些或少許后些攝取也行，只要和本發(fā)明的味覺修飾劑及酸味物質(zhì)同時(shí)存在于口中便可。另外，含有本發(fā)明的味覺修飾劑的食品等，根據(jù)該食品等的性狀，可以加工成為粉末狀、溶液狀、薄片狀、噴霧狀或乳化物狀等。本發(fā)明的酸味物質(zhì)的味覺修飾劑，在口中含食后，飲食酸味物質(zhì)時(shí)，具有作用于舌部感受膜而產(chǎn)生甜味的效果，如果事前食用本發(fā)明的味覺修飾劑或含該味覺修飾劑的制劑，可以在三十分鐘之內(nèi)飲食酸味物質(zhì)時(shí)引起甜味的感覺。另外，本發(fā)明的酸味物質(zhì)的味覺修飾劑其本身也有微弱的甜味。以下，對(duì)本發(fā)明的第三個(gè)發(fā)明的口香糖組合物進(jìn)行詳述。含有在本發(fā)明的口香糖組合物中的可與Curculigolatifolia的果實(shí)、或其干燥物、或其中得到的含有可魯可林的成分，具有如下的效果。(1)長(zhǎng)時(shí)間保持口香糖的風(fēng)味。(2)通過食用口香糖而對(duì)舌部的味覺感受器官進(jìn)行味覺修飾、對(duì)食用口香糖之后食用的酸味物質(zhì)及水添加甜味。(3)可避免使用以往為長(zhǎng)期保持口香糖風(fēng)味而加入的砂糖或人工甜味劑，或者可以實(shí)質(zhì)上減少其使用量。(4)不僅使口香糖成分及/或口香糖中的香料味改善，而且其自身也呈現(xiàn)香味，該味可以持續(xù)1小時(shí)或更長(zhǎng)。這一點(diǎn)與市售的口香糖通常在咀嚼約2、3分鐘之間即失去味道形成了對(duì)照。(5)使普通摻合于口香糖中的有酸味的水果香料味得以改善。對(duì)于作為第三發(fā)明中所用的Curculigolatifolia的果實(shí)、其干燥物及從中所得的含可魯可林的成分，可以列舉與構(gòu)成前述第二發(fā)明的味覺修飾劑的Curculigolatifolia的果實(shí)或其干燥物或從中得到的含可魯可林的成分相同的物質(zhì)。作為使上述的Curculigolatifolia的果實(shí)或其干燥物或從中所得的含可魯可林的成分摻入口香糖組合物的方法，可以列舉將上述的果實(shí)、干燥物或含可魯可林的成分與口香糖基混合的方法，或?qū)⑸鲜龅墓麑?shí)、干燥物或含可魯可林的成分被覆于由口香糖基形成的膠質(zhì)周圍的方法，但被覆于膠質(zhì)周圍的后一種方法，為了改善或持續(xù)所希望的香味，所需上述果實(shí)干燥物或含可魯可林的成分的量較少，故較為理想。對(duì)于上述的被覆，可以用上述果實(shí)的粉末撒在膠質(zhì)四周，或用上述果實(shí)等的膏狀物涂敷于膠質(zhì)的四周等，或按任意的方法進(jìn)行。作為本發(fā)明的口香糖的組合物的合適的膠基，可以列舉未變性的滂阡樹脂膠、glutacathyan、糖膠樹脂、美國專利第1930436說明書中記載的膠乳基、同一美國專利第2137746號(hào)說明書中記載的節(jié)路頓膠膠基及它們的混合物，用石蠟變性的膠基等。對(duì)于Curculigolatifolia的果實(shí)或其干燥物、或者由此得到的含可魯可林的成分的配比量、不受口香糖形狀如何的影響，單位膠質(zhì)，可魯可林0.01以上，特別在0.1-1mg時(shí)為佳。使用多量的Curculigolatifolia果實(shí)或其干燥物，或者從中得到的含可魯可林的成分也是可以的，但對(duì)味覺修飾效果，多量使用實(shí)質(zhì)上并不有益。本發(fā)明的口香糖組合物中，可以加入薄荷、或水果香料、或按需要也可加入砂糖。另外，本發(fā)明的口香糖組合物，可以含有無毒性的酸。該無毒性的酸，在Curculigolatifolia的果實(shí)或其干燥物，或者從中所得的含可魯可林的成分對(duì)舌的味覺感覺器官進(jìn)行味覺修飾之后，可以增加甜味，使口香糖的口味提高，而且為含熱量低的高甜度的口香糖。作為合適的無毒性的酸，可以列舉，羧酸(例如檸檬酸、蘋果酸、抗壞血酸、醋酸、酒石酸)、低濃度的無機(jī)酸及其混合物。上述酸是以可獲0.001M乃至0.1M的有效摩爾濃度的量進(jìn)行使用的?！坝行枬舛取奔丛谌芙獾那闆r下，使口香糖組合物中所含酸的量為，可提供與該摩爾濃度酸溶液同等甜味效果的量。另外，Curculigolatifolia的果實(shí)，其自身也有微弱的甜味，僅將此加入膠基也能制成水果風(fēng)味的口香糖。以下，對(duì)于本發(fā)明的第四個(gè)發(fā)明一口腔清潔用組合物進(jìn)行詳述。本發(fā)明的口腔清潔用組合物中所含的Curculigolatifolia的果實(shí)或其干燥物，或從中得到的含可魯可林的成分，具有以下的效果。(1)口腔清潔用組合物使用之后，對(duì)舌部的味覺感受器官進(jìn)行味覺修飾，而后使清潔口腔的水產(chǎn)生甜味。(2)使口腔清潔用組合物使用后食用的酸味物質(zhì)及水添加甜味。(3)在口腔清潔用組合物中摻入十二烷基硫酸鈉的場(chǎng)合，可防止該口腔清潔用組合物使用后，因口腔中殘存十二烷基硫酸鈉所引起的食物味道的惡化，并添加好吃的甜味。(4)通過將Curculigolatifolia的果實(shí)或其干燥物、或者從中得到的含可魯可林成分摻合于口腔清潔劑中，從而不使用小兒用的帶甜味的口腔清潔劑，也可用作小兒用口腔清潔劑。本發(fā)明的口腔清潔劑組合物的特征是作為漱口劑、液狀口腔清涼劑、液態(tài)牙膏、牙膏等形式使用，含有可魯可林的果實(shí)或其干燥物、或從中得到的含可魯可林的成分。作為第四發(fā)明所用的Curculigolatifoia的果實(shí)、其干燥物、及從中得到的含可魯可林的成分，可以列舉如上述的第三發(fā)明相同之物。上述Curculigolatifolia的果實(shí)或其干燥物、或者從中所得的含可魯可林的成分，在摻合入口腔清潔用組合物之時(shí)對(duì)摻合形式無特別的限制，直接摻合也行，但為了穩(wěn)定配合的目的，也可將Curculigolatifolia的果實(shí)或其干燥物、或者從中所得的含可魯可林的成分微型膠囊化或以葡聚糖等包覆后摻入。另外，對(duì)于Curculigolatifolia的果實(shí)或其干燥物、或從中所得的含可魯可林的成分的配比量，相對(duì)于組合物總量，以1-10-3％(重量％、以下相同)可魯可林、特別是10-1-10-2％為宜。用多于此量的Curculigolatifolia的果實(shí)或其干燥物，或從中所得的含有可魯可林的成分也是允許的，然而對(duì)于味覺修飾效果而言，多量使用在實(shí)質(zhì)上并無利益。作為本發(fā)明的口腔清潔用組合物的成分，根據(jù)組合物的種類的不同可以采用適宜的成分。例如，在漱口劑等為液狀組合物的場(chǎng)合下，除了水、乙醇等溶液外，還可加入聚乙二醇、山梨糖醇、甘油、丙二醇等粘稠劑；十二烷基硫酸鈉等烷基的碳原子數(shù)為8-16的烷基硫酸酯的水溶性鹽、十二烷基苯磺酸鈉、氫化椰子脂肪酸單甘油酯一硫酸鈉、十二烷基硫代醋酸鈉、十二烷基酰肌氨酸鈉鹽、N-?；劝彼猁}、十二烷基二乙醇酰胺、蔗糖脂肪酸酯等界面活性劑；還有薄荷、留蘭香等精油；1-薄荷醇、香芹酮、丁子香酚、大茴香醚等香料原料之類的香料、糖精鈉、蛇菊苷、新桔皮苷二氫查爾酮、甘草酸、紫蘇糖、p-甲氧基肉桂醛等甜味劑、防腐劑等等。另外，對(duì)凝膠狀或練狀組合物的場(chǎng)合，可以摻入羧甲基纖維素鈉鹽、羥乙基纖維素、褐藻酸鹽、角叉萊膠、阿拉伯樹脂、聚乙烯醇等粘結(jié)劑。此外，對(duì)于牙膏類，可以摻入亞磷酸鈣、碳酸鈣、焦磷酸鈣、不溶性偏磷酸鈉、非晶體二氧化硅、晶體二氧化硅、硅鋁酸鹽、氧化鋁、氫氧化鋁、樹脂等研磨劑。另外，對(duì)于本發(fā)明的口腔清潔劑用組合物，可以摻入Chlorohexidin鹽、葡聚糖酶、mutanase、山梨糖酸、アレキシジソ、日扁柏醇、氯化十六烷基吡啶鹽、烷基甘氨酸、烷基二氨基乙基甘氨酸鹽、尿囊素、1-氨基己酸、凝血酸、甘菊環(huán)、維生素E、水溶性磷酸二氫鹽或磷酸氫鹽、季銨化合物、氯化鈉、生藥提取物等有效成分。本發(fā)明的口腔清潔用組合物、可以采用適應(yīng)其種類的公知的方法來制造。以下表示實(shí)施例，并對(duì)本發(fā)明作具體的說明。實(shí)施例1在Curculigolatifolia的果實(shí)的凍結(jié)干燥漿30g中加入600ml水，用混合器在2分鐘內(nèi)進(jìn)行勻化之后，在10,000r.p，m下用30分鐘離心分離。除去上清液(著色)后，在殘?jiān)屑尤?00ml水、勻化、離心分離、隨后直至上清液不帶色為止重復(fù)四次去除上清液，得到殘?jiān)?。隨后，在此殘?jiān)屑尤?.5MNaCl水溶液250ml，用混合器在2分鐘內(nèi)勻化后，進(jìn)行抽濾。濾液分取后、再向殘?jiān)屑尤?50ml的0.5MNaCl溶液，進(jìn)行勻化及吸濾之后分取濾液。接著，將濾液合并，之后在30,000r.p.m.下離心分離1小時(shí)，得到上清液(可魯可林粗提取液)。從該粗提取液經(jīng)脫鹽，凍結(jié)干燥，得到含有可魯可林的物質(zhì)(粗可魯可林)。實(shí)施例2用超濾法使由實(shí)施例1所得的可魯可林粗抽提液500ml濃縮至30ml，在此濃縮液中加入70ml0.01M磷酸緩沖液(pH6.8)，以100ml作為試料液，進(jìn)行CM-葡聚糖柱層析[用0.01M磷酸緩沖液(pH6.8)平衡的CM-葡聚糖CL-6B]。使試料液在床體積為130ml高度為17cm的柱中流下，用0.01M磷酸緩沖液(pH6.8)洗凈之后，用0-1.0MNaCl/0.01M磷酸緩沖液(pH6.8)作梯度洗脫，收集活性部分。從該活性部分中，經(jīng)脫鹽、凍結(jié)干燥而得到含有可魯可林的物質(zhì)(粗精制可魯可林)。實(shí)施例3用超濾法對(duì)實(shí)施例2所得的活性部分進(jìn)行濃縮之后，進(jìn)行采用凝膠柱(東洋索達(dá)(ソ-ダ)制TSK凝膠G3,000SW)的HPL，用0.01M磷酸緩沖液(pH6.8)洗脫。洗脫出的可魯可林對(duì)應(yīng)于具有強(qiáng)活性的銳利的吸收峰。對(duì)該活性部分進(jìn)行脫鹽、凍結(jié)干燥得到精制的可魯可林。另外，對(duì)該精制的可魯可林在8.0M尿素存在下，用SDS-PAGE進(jìn)行測(cè)試，在分子量為12,500道爾頓處顯示單一的吸收帶，從而確認(rèn)為純品可魯可林。對(duì)應(yīng)于30gCurculinlatifolia的果實(shí)的凍結(jié)干燥漿，各實(shí)施例所得的可魯可林的蛋白質(zhì)、活性收率及比活性如下面的表3所示。表3實(shí)施例4將實(shí)施例1所得的粗的可魯可林10mg及食鹽1mg溶于20ml水中，成為0.05％的水溶液。該水溶液于室溫下(25℃前后)放置1個(gè)月之后也是穩(wěn)定的。將該水溶液1ml含于口中1分鐘再吐出后，分別飲用0.02M檸檬酸、水、紅茶。將此時(shí)的甜味感示于下記的表4。表4對(duì)于紅茶，如同飲用普通的添加砂糖的紅茶的感覺一樣。實(shí)施例5用下記的表5所示的配比，制成清咖啡凍膠(A)及加入砂糖的咖啡果凍(B)。表5</tables>另一方，將市售的新鮮奶油(C)中加入實(shí)施例1所得的粗可魯可林0.005％，制成含有可魯可林的新鮮奶油(D)。將咖啡凍膠(A)溶解后，注入杯中，在冷卻而結(jié)成的凍狀物之上，擠上新鮮奶油(D)中加入10％砂糖加以攪拌之物約10g，得到奶油咖啡凍膠。另外用和上述同樣方法可得到在咖啡凍膠(B)之上，澆有新鮮奶油(C)中加入10％砂糖攪拌而成之物的奶油咖啡凍膠。食用攪拌奶油(D)之后食用咖啡凍膠(A)時(shí)，感受到如同食用攪拌奶油(C)之后食用咖啡凍膠(B)時(shí)一樣的風(fēng)味。實(shí)施例6代替實(shí)施例5中所用的攪拌奶油(D)，把加入實(shí)施例1所得的粗可魯可林0.2％而作成的可食用的薄膜0.2g在兼有防止干燥的情況下以薄膜狀蓋在實(shí)施例5的咖啡凍膠(A)的表面。食用該可食性薄膜之后，再食用咖啡凍膠時(shí)，感受到如同食用實(shí)施例5的咖啡凍膠(B)時(shí)一樣的風(fēng)味。實(shí)施例7在30gCurculigolatifolia的果實(shí)的干燥物中加入600ml水，用混合器勻化2分鐘之后，在30分鐘內(nèi)以10,000r.p.m.進(jìn)行離心分離。除去上清液(著色)之后，在殘?jiān)屑尤?00ml水，勻化，離心分離，直至上清液不再著色為止，重復(fù)除去上清液四次，得到殘?jiān)?。接著，在該殘?jiān)屑尤?.5MNaCl水溶液250ml，用混合器勻化2分鐘之后，進(jìn)行吸濾。分取濾液后，再在殘?jiān)屑尤?50ml0.5MNaCl水溶液，進(jìn)行勻化和抽濾，分取濾液。隨后，合并濾液之后，以30,000r.p.m.離心分離1小時(shí)，得到上清液(可魯可林粗抽提液)。從該粗抽提液經(jīng)脫鹽、干燥而得到含可魯可林(粗可魯可林)的物質(zhì)。實(shí)施例8對(duì)實(shí)施例7所得的可魯可林抽提液500ml通過超濾濃縮至30ml，向此濃縮液中加入0.01M磷酸緩沖液(pH6.8)70ml，以100ml為試料液，進(jìn)行CM-瓊脂糖柱層析[用0.01M磷酸緩沖液(pH6.8)平衡的CM-瓊脂糖CL-6B]。使試料液自床體積為130ml高度為17cm的柱中流下，用0.01M磷酸緩沖液(pH6.8)洗凈后，用0-1.0MNaCl/0.01M磷酸緩沖液(pH6.8)的梯度洗脫液進(jìn)行洗脫，收集活性部分。從該活性部分經(jīng)脫鹽、干燥，得到含有可魯可林(粗精制的可魯可林)的物質(zhì)。實(shí)施例9用超濾法對(duì)實(shí)施例8所得的活性部分進(jìn)行濃縮之后，向用凝膠柱(東洋索達(dá)制TSK凝膠G3,000SW)的HPLC進(jìn)行上柱，用0.01M磷酸緩沖液(pH6.8)進(jìn)行洗脫。洗脫出的可魯可林相應(yīng)于特強(qiáng)活性的尖銳的吸收峰。對(duì)該活性部分進(jìn)行脫鹽、干燥、得到精制的可魯可林。另外，該精制的可魯可林在8.0M尿素存在下用SDS-PAGE進(jìn)行測(cè)試，在12,500道爾頓之處顯示單一的吸收帶，確認(rèn)為可魯可林的純品。對(duì)于平均30gCurculigolatifolia的果實(shí)的干燥物，各實(shí)施例中所得的可魯可林的蛋白量、活性收率及比活性如下記的表6所示。表6</tables>實(shí)施例10用20ml水溶解實(shí)施例7所得的可魯可林100mg及食鹽1mg，配成0.5％的水溶液。該水溶液在室溫(25℃前后)放置1個(gè)月后也是穩(wěn)定的。將該水溶液1ml含于口中1分鐘，吐出之后，分別食用0.02M檸檬酸、水、紅茶(清)。此時(shí)所感到的甜味示于下記的表7。表7紅茶(清)與普通的添加砂糖的紅茶有同樣的味道。實(shí)施例11用下記的表8所示的配方制成清紅茶咖啡凍膠(A)及加入砂糖的咖啡凍膠(B)。表8另一方面，在市售的新鮮奶油(C)加入0.05％實(shí)施例7所得的粗可魯可林，制成含有可魯可林的新鮮奶油(D)。將咖啡凍膠(A)溶解后，注入杯中，冷卻而固結(jié)成凍膠狀，在其之上加蓋由新鮮奶油(D)中加入10％砂糖攪拌而成之物10g，得到奶油咖啡凍膠。另外，用與上述同樣方法，即在咖啡凍膠(B)之上澆蓋由新鮮奶油(C)中加入10％砂糖并攪拌而成之物，制得奶油咖啡凍膠。在食用攪拌奶油(D)后食用咖啡凍膠(A)之時(shí)，與食用攪拌奶油(C)之后食用咖啡凍膠(B)時(shí)，產(chǎn)生同樣的味覺。實(shí)施例12代替實(shí)施例11所用的攪拌奶油(D)，將添加實(shí)施例7所得的粗可魯可林0.5％制成的可食性薄膜0.2g在兼防止干燥下，以薄膜狀蓋在實(shí)施例11的咖啡凍膠(A)的表面。食用該可食性薄膜之后再食用咖啡凍膠(A)時(shí)，與食用實(shí)施例11的咖啡凍膠(B)時(shí)產(chǎn)生同樣的味覺。實(shí)施例13-18除分別采用0.5MKCl水溶液(實(shí)施例13)、0.5MCaCl2水溶液(實(shí)施例14)、0.5MNaHCO3水溶液(實(shí)施例15)、0.5MMgCO3水溶液(實(shí)施例16)、0.2MKH2PO4水溶液(實(shí)施例17)、0.2MNaH2PO4水溶液(實(shí)施例18)代替實(shí)施例7所用的0.5MNaCl水溶液之外，其余均以與實(shí)施例7相同的方法分別制成含有可魯可林(粗可魯可林)的物質(zhì)。實(shí)施例19將Curculigolatifolia的果實(shí)在乳缽中研碎，得到漿狀的樣品(本發(fā)明的味覺修飾劑)。將該漿狀樣品0.5g含于口中使與整個(gè)舌面接觸。1分鐘后，將100ml檸檬果汁含于口中，可使檸檬果汁增加甜味而呈桔汁般的味道。實(shí)施例20將Curculigolatifolia的果實(shí)剝皮并除去種子，僅取出果肉。將該果肉于4℃干燥24小時(shí)，用混合器粉碎2分鐘，得粉碎狀樣品(本發(fā)明的味覺修飾劑)。將該粉末狀樣品0.2g含于口中，使之與整個(gè)舌面接觸。1分鐘后，將0.5gl-抗壞血酸粉末含于口中，因此甜味將酸味遮蓋而呈爽口的甘甜微酸的口感。實(shí)施例21將0.9g實(shí)施例20的粉末狀樣品及0.1g檸檬酸粉末形成的混合物含于口中，產(chǎn)生酸甜而適口的良好味覺。實(shí)施例22在Curculigolatifolia的果肉20Kg中加入100l水，勻化之后，在10,000r.p.m下離心分離30分鐘。除去上清液之后，在殘?jiān)屑尤?00l水，再次進(jìn)行上述的勻化，離心分離。清除上清液，得到殘?jiān)＝又?，在該殘?jiān)屑尤?.5MNaCl水溶液30l，用混合器在2分鐘之內(nèi)進(jìn)行勻化，之后進(jìn)行抽濾。分取濾液后，再在殘?jiān)屑尤?.5MNaCl水溶液30l，進(jìn)行勻化并抽濾，分取濾液。隨后，合并濾液，再在30,000r.p.m.下離心分離1小時(shí)、得到上清液(可魯可林的粗抽提液)。用超濾法對(duì)該粗抽提液進(jìn)行脫鹽，凍結(jié)干燥而得含有可魯可林的成分。采用該含可魯可林的成分，根據(jù)下述的配方制得咖啡飲料，對(duì)該咖啡飲料采用阿魯法拉巴魯公司制的VTIS殺菌裝置，在140℃下殺菌3秒鐘之后，無菌充填在容器內(nèi)而制得無糖咖啡飲料。配方咖啡抽提物2％咖啡抽出液8％焦糖0.1％焦糖苦堿0.5％含可魯可林的成0.5％分水88.9％飲用該無糖的咖啡飲料時(shí)，未感到有苦味，而比僅僅飲食酸味物質(zhì)之時(shí)感到更強(qiáng)的甜味。實(shí)施例23按照以下的配方，如下所述制成含有檸檬香料的口香糖。糖膠樹膠130.00g石蠟37.00g吐魯香脂油6.50g金雞納香脂3.00g檸檬酸55.00g食鹽5.00g水170.00g黃色人工色素1.00g人工檸檬香料10.00g采用混合攪拌機(jī)在90℃對(duì)上述材料混合20分鐘。接著，將膠體制成棒狀。用Curculigolatifolia的果實(shí)經(jīng)干燥、粉碎而成的粉末(干燥粉末)撒到該棒狀口香糖上使各個(gè)棒狀口香糖上被覆20至30mg干燥粉末。如嚼食由此所得的含有檸檬香料的口香糖，可長(zhǎng)時(shí)間保持口香糖的風(fēng)味，盡管不含有砂糖也能感到甜味。另外嚼食口香糖之后食用檸檬時(shí)，味覺可變成飲用了桔汁似的。實(shí)施例24將Curculigolatifolia的果實(shí)剝皮并除去種子，而僅取其果肉。將該果肉于40℃下干燥24小時(shí)，用混合器粉碎2分鐘，使成粉末狀。采用該果肉粉末以下述的配方制成牙膏制劑。磷酸氫鈣45.0％羥甲基纖維素鈉0.8％山梨糖醇15.0％丙二醇3.0％二氧化硅凝膠3.0％十二烷基硫酸鈉1.5％香料1.0％可魯可林果·蘭其弗利阿2.0％果肉粉末水余量100％如使用由此所得的牙膏制劑，牙膏制劑其自身帶甜味，而且漱口水也可感到甜味。另外，使用牙膏制劑之后食用檸檬時(shí)，味覺變成似乎食用了甜桔子一般。實(shí)施例25將Curculigolatifolia的果實(shí)剝皮，除去種子，僅取出果肉。將該果肉30g在乳缽中研碎之后，向果肉中加入100ml水。接著用混合器勻化2分鐘后，以10,000r.p.m.離心分離30分鐘。除去上清液后，向殘?jiān)屑尤?00ml水，再次進(jìn)行上述的勻化、離心分離并除去上清液，得到殘?jiān)?Curculigolatifolia的果實(shí)處理物)。使用該殘?jiān)瞥梢韵屡浞降氖趧?。乙?0.0％十二烷酰肌氨酸鈉0.5％十二烷酰肌氨酸鈉0.5％香料1.0％一氟代磷酸鈉0.15％磷酸氫二鈉0.3％磷酸二氫鈉0.7％Curculigolatifolia果實(shí)處理物0.5％水余量100％如使用由此而得的漱口劑，漱口后食用不加砂糖的咖啡也可感到很甜。權(quán)利要求1.一種口腔清潔用組合物，其特征在于，該組成物含有自Curculigolatifolia的果實(shí)或其干燥物或兼自這兩者中所得的含可魯可林的成分。全文摘要本發(fā)明涉及自Curculigolatifolia的果實(shí)或其干燥物或兼自這兩者中用0.01M以上濃度的鹽的水溶液抽提出可魯可林(Curculin)蛋白質(zhì)的方法及利用該蛋白質(zhì)對(duì)味覺產(chǎn)生修飾的方法，以及采用抽提出的可魯可林蛋白質(zhì)或含有可魯可林蛋白質(zhì)的成分制成的酸味性物質(zhì)的味覺修飾劑、口香糖組合物及口腔清潔用組合物。文檔編號(hào)C07K14/43GK1158721SQ96122700公開日1997年9月10日申請(qǐng)日期1996年10月28日優(yōu)先權(quán)日1988年6月21日發(fā)明者栗原良枝,河野博繁,加藤雅章,池田憲司,三宅雅子申請(qǐng)人:栗原良枝,旭電化工業(yè)株式會(huì)社