專利名稱：神經(jīng)保護(hù)的苯并二氫吡喃化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及神經(jīng)保護(hù)的(neuroprotective)(抑制缺血性和興奮性氨基酸受體阻滯)3R*4S*3-[4-(4-氟苯基)-4-羥基-哌啶-1-基]-苯并二氫吡喃-4，7-二醇；其對(duì)映體，其藥物可接受的鹽；本發(fā)明還涉及使用這些化合物治療頭部創(chuàng)傷、中風(fēng)或CNS退化疾病如阿爾茨海默氏病、亨廷頓氏病、帕金森氏病以及由于阻滯N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受體可減輕的其它病癥的方法。
興奮性氨基酸是重要的一組神經(jīng)遞質(zhì)，它調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的興奮神經(jīng)傳遞。谷氨酸和天冬氨酸是兩種活化興奮性氨基酸(EAA)受體的內(nèi)源配位體。EAA受體有兩種類型，離子的和代謝的(metabtropic)，差異在于其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)模式上。至少存在三種不同的離子EEA受體，其特征在于活化各種類型NMDA、(N-甲基-D-天冬氨酸)、AMPA(2-氨基-3-(5-甲基-3-羥基異噁唑-4-基)丙酸)、以及紅藻氨酸受體的選擇性興奮劑。離子性EAA受體與可滲透鈉離子通路結(jié)合，而且在NMDA受體的情況下，還可滲透鈣。代謝性受體，與磷酸肌醇連接-通過(guò)與G-蛋白有關(guān)的膜水解，由quisqualic酸、鵝膏 氨酸、和(1S，3R)-1-氨基環(huán)戊烷1，3-二羧酸活化。
NMDA受體是由許多不同的結(jié)合位點(diǎn)組成的大分子配合物，位點(diǎn)控制可滲透鈉和鈣的離子通路。Hansen和Krogsgaard-Larsen，Med.Res.Rev.，10，55-94(1990)。谷氨酸、甘氨酸、和多胺有結(jié)合位點(diǎn)和離子通路內(nèi)部的位點(diǎn)，在那里化合物如phencyclidine(PCP)具有對(duì)抗物的作用。
競(jìng)爭(zhēng)NMDA對(duì)抗物是能通過(guò)與谷氨酸結(jié)合位點(diǎn)相互作用阻滯NMDA受體的化合物。與NMDA谷氨酸受體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合的特定化合物的能力可用放射配體分析法加以測(cè)定。參見(jiàn)Murphy等人，British J.Pharmaco1.95，932-938(1988)。對(duì)抗物不同于使用鼠皮Wedge測(cè)定法的促效劑。見(jiàn)Harrison和Simmonds，British J.Pharmacol.，84，381-391(1984)。競(jìng)爭(zhēng)NMDA對(duì)抗物的實(shí)例包括D-2氨基5-膦酰基戊酸(D-AP5)。和D-2-氨基-7-膦?；?，Schoepp等人，J.Neur.Transm.，85，131-143(1991)。
神經(jīng)遞質(zhì)在NMDA受體上的對(duì)抗物是治療神經(jīng)障礙有效的治療劑。US4,902,695就是針對(duì)一系列用于治療神經(jīng)障礙的競(jìng)爭(zhēng)NMDA對(duì)抗物的，包括癲癇、中風(fēng)、焦慮、大腦局部缺血、肌肉痙攣、和神經(jīng)退化疾病，如阿爾茨海默氏病和亨廷頓氏病。U.S 4,968,878針對(duì)另外系列用于治療類似的神經(jīng)障礙和神經(jīng)退化疾病的競(jìng)爭(zhēng)NMDA受體對(duì)抗物。U.S 5,192,751提供了一種治療哺乳動(dòng)物膀胱失禁的方法，包括施用有效量競(jìng)爭(zhēng)NMDA對(duì)抗物。
NMDA對(duì)抗物也是具有抗驚撅劑、消除焦慮(anxiolytic)、肌肉松弛藥以及抗精神病活性作用的有效治療劑。J.Lehmann，The NMDA Receptor，Drugs of the Future14，No 11，P.1059(1989)。還報(bào)道過(guò)NMDA對(duì)抗物對(duì)治療偏頭痛(Can.J.Neurol.Sci.19(4)，P.487，1992)；藥物癮(Science，251，P.85，1991)；以及與AIDS有關(guān)的神經(jīng)-精神障礙(PIPS 11，P.1，1990)有效。
共同未決的、共同所有的U.S專利申請(qǐng)?zhí)?7/916,130(歐洲專利申請(qǐng)0,441,506A3，1991年1月24日公開(kāi))公開(kāi)了通式 的神經(jīng)保護(hù)化合物及其藥物可接受的鹽。
式中A和B聯(lián)接并為-CH2CH2-或A和B分立并各為H；X是CH2或0；X1是H或OH；Z是H、F、Cl、Br或OH；Z1是H、F、Cl、Br或(C1-C3)烷基；n是0或1；和m是0是1-6的整數(shù)；Ifenprodil是一種外消旋的、所謂dl-erythro化合物，它具有相關(guān)立體化學(xué)式 這種化合物作為低血壓劑銷售，許多類似物都有這樣的功用；Carron等人，U.S3,509,164；Carton等人，Drug Res.，V.21，pp 1992-1999(1971)。最近，已經(jīng)證明ifenprodil具有抑制局部缺血和興奮性氨基酸受體阻滯活性；Gotti等人，J.Pharm.Exp.Therap.，V.247，pp 1211-21(1988)；Carter等人，loc.cit.，pp.1222-32(1988)。也可參見(jiàn)公開(kāi)的歐洲專利申請(qǐng)322,361和法國(guó)專利2546166。由本發(fā)明實(shí)現(xiàn)的目的已發(fā)現(xiàn)了具有良好測(cè)量值的神經(jīng)保護(hù)效應(yīng)的化合物，同時(shí)表現(xiàn)低或無(wú)顯著低血壓效應(yīng)。
還報(bào)道了某些結(jié)構(gòu)相關(guān)的1-苯基-3-(4-芳基-4-酰氧基哌啶子基)-1-丙醇作為鎮(zhèn)痛藥是有效的，U.S 3,294,804；和1-[4-(氨基-和羥基-烷基)-苯基]-2-(4-羥基-4-甲苯基哌嗪子基)-1-鏈烷醇和鏈烷酮已經(jīng)報(bào)道具有鎮(zhèn)痛、抗高血壓、精神治療或抗炎活性，日本公開(kāi)53-02,474(CA8943498y；Derwent摘要14858A)以及53-59，675(CA89146938w；Derwent摘要。48671A)。
本發(fā)明涉及式(I)的神經(jīng)保護(hù)的苯并二氫吡喃醇化合物， 它具有優(yōu)越的口服活性?；衔?I)的光學(xué)異構(gòu)體以及藥物可接受的鹽也是本發(fā)明的主題。
本發(fā)明進(jìn)一步涉及包括式(I)化合物及其藥物可接受的載體的藥物組合物。
另一方面，本發(fā)明提供一種哺乳動(dòng)物體內(nèi)阻滯需要所述阻滯的NMDA受體位點(diǎn)的方法，該法包括向哺乳動(dòng)物施用有效量的式(I)的化合物。
此外還有另一方面，本發(fā)明提供一種治療哺乳動(dòng)物的疾病或病癥的方法。所述疾病或病癥易于用NMDA受體位點(diǎn)的阻滯治療，該方法包括向所述哺乳動(dòng)物施用有效量的式(I)化合物。
可由式(I)化合物治療的疾病或病癥包括頭部創(chuàng)傷、脊髓創(chuàng)傷、中風(fēng)和多梗塞癡呆。
可由式(I)化合物治療的其它疾病或病癥包括阿爾茨海默氏病、亨廷頓氏病、帕金森氏病、癲癇、以及amytropic側(cè)硬化。
易于用式(I)化合物治療的另外疾病或病癥包括疼痛、AIDS癡呆、精神病病態(tài)、藥物癮、偏頭痛、低血糖和焦慮病態(tài)。
易于用式(I)化合物治療的還有另外的疾病或病癥是膀胱失禁。
易于用式(I)化合物治療的還有另外的疾病或病癥是由于CNS手術(shù)、開(kāi)胸心臟手術(shù)或任何涉及心血管系統(tǒng)的機(jī)能手術(shù)過(guò)程操作所引起的缺血性病例。
式(I)的神經(jīng)保護(hù)的苯并二氫吡喃醇，按U.S申請(qǐng)?zhí)?7/916,130所描述的方法很容易制備，該專利申請(qǐng)因此被本文引證作為參考。
本發(fā)明化合物是用常規(guī)方法通過(guò)適當(dāng)保護(hù)的7-羥基苯并二氫吡喃-4-酮，例如7-芐氧基苯并二氫吡喃-4-酮，與溴在反應(yīng)惰性溶劑中反應(yīng)產(chǎn)生7-芐氧基3，3-二溴苯并二氫吡喃-4-酮來(lái)制備的。
然后再使二溴化合物與兩摩爾當(dāng)量的4-(4-氟苯基)-4-羥基哌啶反應(yīng)以產(chǎn)生7-芐氧基-3-[4-(4-氟苯基)-4-羥基-哌啶-1-基]-苯并二氫吡喃-4-酮。通常反應(yīng)是在堿，一般為叔胺存在的情況下在反應(yīng)惰性溶劑如乙醇或乙腈中進(jìn)行的。如有需要，反應(yīng)可在最高一個(gè)摩爾當(dāng)量的碘化物鹽條件下催化。溫度不嚴(yán)格，但不能高到導(dǎo)致過(guò)度分解。在室溫至100℃的范圍內(nèi)的溫度一般令人滿意。
如上述所獲得的苯并二氫吡喃-4-酮用慣用的氫化物還原劑如NaBH4在反應(yīng)惰性溶劑如甲醇或乙醇中于室溫或稍微高些的溫度下還原形成苯并二氫吡喃醇。
在最終步驟中，用常規(guī)方法如催化加氫除去保護(hù)基，例如芐氧基，形成化合物(I)。
如有要求，可把化合物(I)轉(zhuǎn)化成藥物可接受的鹽。
上述有關(guān)“藥物可接受的鹽”指常規(guī)酸加成鹽和陽(yáng)離子鹽。這樣通式(I)的化合物可含有堿性的胺基，而如此能生成所述鹽。所述鹽包括但不限于用HCl、HBr、HNO3、H2SO4、H3PO4、CH3SO3H、p-CH3C6H4SO3H、CH3CO2H、葡糖酸、酒石酸、馬來(lái)酸和琥珀酸的鹽。通常它們都用常規(guī)方法制備，例如通過(guò)式(I)化合物與至少一摩爾當(dāng)量的酸在合適的溶劑中化合。式(I)的化合物含酚羥基同樣也能形成陽(yáng)離子鹽(例如Na、K等等)；短語(yǔ)“藥物可接受的鹽”也可擴(kuò)大到包含這種鹽。這些鹽也可通過(guò)常規(guī)方法制備，例如式(I)的酚化合物與一個(gè)摩爾當(dāng)量的NaOH或KOH在合適的溶劑中化合。
式(I)化合物含有兩個(gè)相應(yīng)于兩種外消旋體和四種光學(xué)活性化合物的不對(duì)稱碳原子。這些外消旋體中的一種是上文指出的順式-異構(gòu)體，和另外的反式-異構(gòu)體。在本發(fā)明中順式異構(gòu)體占優(yōu)勢(shì)而且是優(yōu)選的形式。這些外消旋體中的每一種都能通過(guò)與光學(xué)活性酸形成的非對(duì)映體酸加成鹽而解析成為一對(duì)對(duì)映體。用另一種方法，外消旋醇可轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的非對(duì)映酯或與光學(xué)活性酸或異氰酸酯形成氨基甲酸乙酯。這種共價(jià)鍵結(jié)合的衍生物可使用各種分離方法(例如色譜法、重結(jié)晶法等)。這種非對(duì)映酯是通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法由醇和光學(xué)活性酸形成的，通常這些方法包括酸的活化，例如?；龋缗c烷基氯甲酸酯的混合酐，或與脫水偶合劑如二環(huán)己基碳化亞胺的混合酐。一旦所得到的非對(duì)映酯被分離，例如通過(guò)色譜法，即可用常規(guī)方法進(jìn)行水解，例如含水酸或含水堿，可獲得對(duì)映體的、式(I)的光學(xué)活性醇化合物。本發(fā)明優(yōu)選化合物是(±)順式和(+)順式異構(gòu)體。特別好的化合物是(+)(3R，4S)-3-[4-(4-氟苯基)-4-羥基-哌啶-1-基]苯并二氫吡喃-4，7-二醇酒石酸酯乙醇化物水合物(ethanolate hydrate)。
為合成本發(fā)明化合物所需原料和試劑很容易獲得，或按文獻(xiàn)方法從市場(chǎng)買到，或用下文在制備中舉例說(shuō)明的方法。
上面式(I)的本發(fā)明化合物具有選擇性神經(jīng)保護(hù)活性，基于其抑制局部缺血活性和阻滯興奮氨基酸受體的能力，同時(shí)還具有低或無(wú)顯著低血壓活性。本發(fā)明化合物抑制局部缺血活性是按上述引證的由Gotti等人和Garter等人詳細(xì)說(shuō)明的一種或多種方法，或依據(jù)類似方法測(cè)定的。本發(fā)明化合物阻滯興奮氨基酸受體的能力可被證實(shí)，依據(jù)是所述化合物按下列程序阻滯N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)-誘導(dǎo)新生鼠小腦中cGMP提高的能力。取10只8-14天的Wistar鼠的小腦，迅速切片后放入4℃的krebs/碳酸氫鹽緩沖液中，PH 7.4，然后用Mcllvain組織切碎機(jī)(The Nickle Laboratory Engineering Col，Gomshall，Surrey，England)切碎至0.5mm×0.5mm切片。把得到的小腦片移至37℃下100ml的krebs/碳酸氫鹽緩沖液并連續(xù)用95∶5 O2/CO2平衡。以同樣的方式用三種不同的緩沖溶液使小腦片培養(yǎng)90分鐘。再潷析緩沖液，離心(1分鐘，3200r.p.m)組織然后將組織懸浮于20ml的krebs/碳酸氫鹽的緩沖液中。取出250μl等份樣品(約2mg)放入1.5ml的微型離心(microfuge)管中。從儲(chǔ)存液中取出10μl研究的化合物加到各離心管中，10分鐘培養(yǎng)后，接著用10μl的2.5mM NMDA溶液?jiǎn)?dòng)反應(yīng)。最終的NMDA濃度是100μM。對(duì)照物不加NMDA。各管置于振蕩水浴中37℃下培養(yǎng)一分鐘然后加750μl的50mM的Tris-Cl，5mM EDTA溶液以中止反應(yīng)。立即把管放入沸水中持續(xù)5分鐘。用定于能級(jí)三的探針式近程聲波電定位器聲處理各管內(nèi)含物15秒鐘。取出10μ1然后用Lowry，Anal，Biochem 100201-220(1979)的方法測(cè)定蛋白。使管離心(5分鐘，10,000xg)，移出100μl的上清液再按供應(yīng)廠商的方法采用NewEngland Nuclear(Boston，Massachusetts)cGMP RIA檢驗(yàn)法檢驗(yàn)環(huán)狀GMP(cGMP)的含量。數(shù)據(jù)以每mg蛋白產(chǎn)生的pmol的cGMP記錄。通過(guò)引證已知方法，例如按照Carron等人的方法，還可測(cè)定不要求的低血壓活性。
作為評(píng)價(jià)神經(jīng)保護(hù)活性的替換和優(yōu)選程序是Ismail A.Shalaby等人，J.Pham.和Experimental Therapeutics，260，925(1992)的程序，該文已被本文引證作為參考并在下文予以說(shuō)明。
細(xì)胞培養(yǎng)物。使17天齡胎鼠(CD，Charles River Breeding Laboratories，Inc.，Wilmington，MA)海馬細(xì)胞在PRIMARIA培養(yǎng)板上(Falcon Co.，Lincoln Park，NJ)培養(yǎng)2-3周，使用含血清培養(yǎng)基(最低必需培養(yǎng)基，具有非主要氨基酸，含2mM谷氨酰胺，21mM葡萄糖，青霉素/鏈霉素(各為5000U)，10％胎牛血清(1-7天)和10％馬血清(1-21天)(Choi等人，1987))。細(xì)胞或在96-孔微量滴定板上平板培養(yǎng)，密度為每孔80,000個(gè)細(xì)胞或在24-孔培養(yǎng)板上培養(yǎng)，密度為每孔250,000個(gè)細(xì)胞。培養(yǎng)物在37℃下在含5％CO2-95％空氣的潮濕CO2組織培養(yǎng)物恒溫箱中生長(zhǎng)。通過(guò)加入20μM尿核苷和20μM 5-氟-2-脫氧尿核苷(sigmaChemical公司，St.Louis，MO)控制非神經(jīng)細(xì)胞的增殖，培養(yǎng)6-8天(Martin等人，1990)。培養(yǎng)基每2-3天換一次新鮮的儲(chǔ)存液。
谷氨酸鹽的毒性。培養(yǎng)物從開(kāi)始平板培養(yǎng)2-3個(gè)周檢驗(yàn)谷氨酸鹽毒性。除去培養(yǎng)基后用CSS(Choi等人，1987)洗培養(yǎng)物兩遍，CSS(以毫摩爾計(jì))含NaCl，120；KCl，5.4；MgCl2，0.8；CaCl2，1.8；葡萄糖，15；和4-(2-羥乙基)-1-哌嗪乙烷磺酸，25mM(PH 7.4)。將培養(yǎng)物暴露于各種濃度的谷氨酸鹽下15分鐘(37℃)。經(jīng)這次培養(yǎng)以后，培養(yǎng)物用沒(méi)有谷氨酸鹽的CSS洗3次再用新鮮的無(wú)血清的組織培養(yǎng)基洗兩次。然后把培養(yǎng)物置于無(wú)血清的培養(yǎng)基培育20-24小時(shí)。在暴露谷氨酸鹽前2分鐘或在暴露15分鐘谷氨酸鹽過(guò)程中加藥物。在某些實(shí)驗(yàn)中，藥物在谷氨酸鹽暴露后和暴露20-24小時(shí)之后的不同時(shí)間上加入。
常規(guī)通過(guò)測(cè)量胞液(cytosolic)酶LDH活性，檢驗(yàn)興奮毒素(excitotoxin)暴露后的20-24小時(shí)的細(xì)胞生存性(koh和choi，1987；Wroblewski和LaDue，1995)。LDH活性是由96孔微量滴定板的各孔的培養(yǎng)基測(cè)量的。把50μl的培養(yǎng)基樣品加到等體積含1.32mM丙酮酸鈉和2.9mM NADH的磷酸鈉緩沖液中(0.1M，PH 7.4)。用自動(dòng)分光光度微量滴定板測(cè)量?jī)x(Molecular DevicesMenlo Park，CA)監(jiān)測(cè)96孔中的每孔總反應(yīng)混合物2分鐘內(nèi)每隔5秒種的340nm吸收值。使用IBM SOFT max程序(版本1.01；Molecular Devices)自動(dòng)計(jì)算吸收率并用作LDH活性的指數(shù)。
神經(jīng)元生存性的形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)是用相對(duì)比顯微鏡檢查法測(cè)量的。96-孔培養(yǎng)物平板培養(yǎng)的相對(duì)比成象不好，所以把24-孔平板培養(yǎng)的細(xì)胞用于此目的。兩種平板培養(yǎng)物對(duì)谷氨酸鹽毒性的靈敏性從數(shù)量上看是相同的，暴露于0.1-1.0mM谷氨酸鹽之后24小時(shí)LDH活性均顯示提高2-3倍。
試劑。DTG是從Aldrict化學(xué)公司(Milwaukee，WI)購(gòu)得的，鹵哌啶醇(haloperiol)是從Research Biochemicals公司(Natick，MA)購(gòu)得的。精素是由Sigma化學(xué)公司(St.Louis，MO)購(gòu)得。馬和胎牛血清是從Hyclone(Logan，UT)購(gòu)得。培養(yǎng)基、谷氨酰胺和青霉素/鏈霉素是由Gibco公司(Grand Island，NY)購(gòu)得的。
數(shù)據(jù)分析。神經(jīng)毒性的定量通過(guò)測(cè)量谷氨酸鹽暴露后20-24小時(shí)培養(yǎng)基中所存在的LDH活性。我們的原始實(shí)驗(yàn)證實(shí)了公開(kāi)報(bào)告表明的培養(yǎng)基中提高的LDH活性與神經(jīng)元的破壞和變性有關(guān)(Koh和Choi，1987)。由于LDH的實(shí)際水平依不同的培養(yǎng)基變化，所以數(shù)據(jù)表達(dá)通常與相同培養(yǎng)板緩沖液處理的同型孔有關(guān)。為了從谷氨酸鹽和藥物處理的培養(yǎng)物中獲得LDH活性的指數(shù)，把對(duì)照培養(yǎng)物的LDH值從處理組中減去。藥物處理過(guò)的數(shù)據(jù)表達(dá)成每次實(shí)驗(yàn)用1mM谷氨酸鹽(或NMDA)誘導(dǎo)的LDH提高的百分比。興奮毒素誘導(dǎo)的回復(fù)LDH提高50％(IC50)所需要的NMDA對(duì)抗物的濃度，是采用三次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的匯集(pooled)結(jié)果的log-probit分析進(jìn)行計(jì)算的。不同的處理組是用兩尾t試驗(yàn)進(jìn)行比較。
如此選擇性神經(jīng)保護(hù)的抑制局部缺血和興奮氨基酸的阻滯活性反映了本發(fā)明化合物在治療退化CNS(中樞神經(jīng)系統(tǒng))機(jī)能失調(diào)如中風(fēng)和阿爾茨海默氏病、帕金森氏病和亨廷頓氏病中有效的利用性；沒(méi)有并發(fā)血壓過(guò)度降低的顯著可能。在用神經(jīng)保護(hù)量的式(I)化合物系統(tǒng)治療這類疾病時(shí)，有代表性的劑量約0.02-10mg/kg/天(按典型的人體重50kg計(jì)為1-500mg/天)，可單劑也可分劑量，而不管給藥的途徑。當(dāng)然，依據(jù)具體的化合物和個(gè)體疾病的具體性質(zhì)，由護(hù)理醫(yī)生也可能開(kāi)出超出這種范圍的劑量?？诜o藥通常是優(yōu)選的。然而，當(dāng)病人不能吞咽時(shí)，或口腔吸收有損時(shí)，優(yōu)選的給藥途徑是腸胃外的(i.m.，i.v)或局部的。
本發(fā)明化合物通常是以藥物組合物的形式給藥，該組合物包含至少一種式(I)化合物，以及藥物可接受的載體或稀釋劑。這種組合物通常是以常規(guī)方式使用適合于要求給藥方式的固體或液體載體或稀釋劑配制而成對(duì)于口服來(lái)說(shuō)，采用片劑、硬或軟明膠膠囊、懸浮劑、顆粒劑、粉劑等形式；對(duì)腸胃外給藥，采用注射溶液或懸浮液等形式；對(duì)于局部給藥，采用溶液、洗液、軟膏、油膏等形式。
口服給藥是優(yōu)選的而且口服生物利用率是選擇尤其作為NMDA對(duì)抗物有效的化合物的一種重要參數(shù)。評(píng)價(jià)口服生物利用率可采用Schmidt和Bubser設(shè)計(jì)的方法(Pharmacol.Biochem.Behavior，1989，32，621)，該法測(cè)量口服劑量的試驗(yàn)化合物回復(fù)由鹵哌啶醇誘發(fā)的僵住癥的能力。
雄性Sprague-Dawley鼠(Interfauna，Tutlingen，F(xiàn).R.G.)接受0.5mg/kg鹵哌啶醇(安瓿瓶注射液，Jansen，Neuss，(F.R.G.))的腹膜內(nèi)(IP)注射，為了誘發(fā)中等程度的僵住癥。同時(shí)，既可以是在惰性載體中的式(I)化合物也可以是惰性載體進(jìn)行口服。口服的溶液是化合物溶解在0.3％酒石酸水溶液中制備的。加入固體酒石酸調(diào)PH至3.5。處理30分鐘后測(cè)量各鼠的僵住癥程序。三種既定的試驗(yàn)按下列連續(xù)的順序進(jìn)行1)把兩個(gè)前肢放在離表面9cm的水平條上。
2)把一個(gè)前肢放在臺(tái)上(3cm高)。
3)懸掛在垂直金屬網(wǎng)上。
測(cè)量放置爪子到這些爪子中的一個(gè)首先移動(dòng)(向下隱伏)的時(shí)間間隔(最多180秒)。
使用兩尾的Mann-Whitney U-試驗(yàn)分析組間的差別。規(guī)定P-值＜0.05時(shí)表明組間有明顯差別。
我們意外地發(fā)現(xiàn)式(I)化合物比U.S系列號(hào)07/916,130所述的其它化合物口服劑量時(shí)效果顯著得多。
通過(guò)下列實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行說(shuō)明，但不限于其細(xì)節(jié)。
制備和實(shí)施例所有非水反應(yīng)為了方便均在氮?dú)庀虏僮?，通常可達(dá)到最高產(chǎn)率。按標(biāo)準(zhǔn)公布的方法所有的溶劑/稀釋劑均進(jìn)行干燥或購(gòu)買預(yù)干燥的形式。所有的反應(yīng)或磁力攪拌或機(jī)械攪拌。在250或300MHz下記錄NMR光譜并以ppm表示。除另有規(guī)定外NMR溶劑是CDCl3。IR光譜以CM-1記錄，通常只精確測(cè)定強(qiáng)信號(hào)。使用下列縮寫(xiě)符號(hào)DMF為二甲基甲酰胺，THF為四氫呋喃，HRMS為高分辨率質(zhì)譜。
制備17-芐氧基苯并二氫吡喃-4-酮使7-羥基苯并二氫吡喃-4-酮(10.0g，61mmol)、芐基溴(7.6ml，64mmol)、和碳酸鉀(16.5g，120mmol)在丙酮(250ml)中的混合物溫和地回流24小時(shí)。冷卻混合物后經(jīng)硅藻土過(guò)濾。把濾液濃縮并使殘?jiān)芙庠谝宜嵋阴ブ小Ｓ盟望}水洗有機(jī)溶液，于硫酸鈣上干燥，再濃縮成棕黃的固體。用乙醇重結(jié)晶可得棕黃色晶體12.63g(81％)的7-芐氧基苯并二氫吡喃-4-酮，熔點(diǎn)99-102℃；NMRδ7.85(d，J＝9Hz，1H)，7.44-7.32(m，5H)，6.66(dd，J＝2.4，9Hz，1H)，6.49(d，J＝2.4Hz，1H)，5.09(s，2H)，4.52(t，J＝6.5Hz，2H)，2.76(t，J＝6.5Hz，2H)。分析理論值C16H14O3C，75.58；H，5.55。實(shí)施值C，75.44；H，5.58。
制備27-芐氧基-3，3-二溴苯并二氫吡喃-4-酮往7-芐氧基苯并二氫吡喃-4-酮(12.63g，49.7mmol)在四氯化碳(200ml)和乙酸乙酯(100ml)的漿料中在20分鐘內(nèi)加完溴(5.38ml，104.4mmol)在四氯化碳(100ml)中的溶液。攪拌清亮紅色溶液10分鐘以上，然后用氮?dú)饬髋懦龇磻?yīng)物中的溴化氫(15分鐘)。有機(jī)溶液用亞硫酸氫鈉水溶液、碳酸氫鈉水溶液以及鹽水洗滌；然后在硫酸鈣上干燥再濃縮至緩慢固化的油。乙醇重結(jié)晶后可得到15.73g(76％)的粉紅色晶體7-芐氧基-3，3-二溴苯并二氫吡喃-4-酮，其mp為89-90℃；NMRδ7.96(d，J＝9Hz，1H)，7.43-7.36(m，5H)，6.79(dd，J＝2.4，9Hz，1H)，6.57(d，J＝2.4Hz，1H)，5.12(s，2H)，4.71(s，2H)。分析理論值C16H12Br2O3C，46.64；H，2.94。實(shí)驗(yàn)值C，46.62；H，2.96。
實(shí)施例13R*4S*3-[4-(4-氟苯基)-4-羥基-哌啶-1-基]-苯并二氫吡喃-4，7-二醇在室溫下把7-芐氧基-3，3-二溴苯并二氫吡喃-4-酮(54.7g，133mmol)、4-(4-氟苯基)-4-羥基哌啶(52.0g，266mmol)和三乙胺(38ml，270mmol)在乙腈(2.5L)中的混合物攪拌16小時(shí)。形成并收集黃色沉淀，用水和醚充分洗滌，再用空氣干燥。7-芐氧基-3-[4-(4-氟苯基)-4-羥基-哌啶-1-基]苯并二氫吡喃-4-酮的產(chǎn)率是55.4g(93％)，適合使用而無(wú)需進(jìn)一步提純。由乙醇/四氫呋喃重結(jié)晶的樣品mp為220-210℃，NMR DMSOd6δ7.99(d，J＝9Hz，2H)，7.56-7.40(m，8H)，7.18-7.08(m，4H)，5.25(s，2H)，5.06(s，1H)，3.60(brs，1H)，3.55-3.35(m，1H由于NMR溶劑中的水部分變模糊)，3.10-2.95(m，2H)，2.15-2.00(m，2H)，1.71(br t，J-13.7 Hz，2H)。分析理論值C27H24FNO4C，72.80；H，5.43；N，3.14。實(shí)驗(yàn)值C，72.83；H，5.82；N，2.82。
往7-芐氧基-3-[4-(4-氟苯基)-4-羥基-哌啶-1-基]-苯并二氫吡喃-4-酮(8.24g，18.5mmol)在乙醇(400ml)和四氫呋喃(600ml)中的漿料加硼氫化鈉(7.0g，185mmol)。攪拌該混合物過(guò)夜。加另外的硼氫化鈉(7.0g)再使反應(yīng)攪拌3天。加水并于45℃下減壓除去溶劑。收集形成的固體用水然后用醚洗滌。使固體在真空下進(jìn)一步干燥過(guò)夜可得到5.01g，60％的3R*4S*7-芐氧基-3-[4-(4-氟苯基)-4-羥基-哌啶-1-基]-苯并二氫吡哺-4-醇，它適合使用無(wú)需進(jìn)一步純化。由乙酸乙酯/氯仿重結(jié)晶的樣品mp為194-195℃；NMRδ7.56-7.30(m，8H)，7.06(大范圍偶合t，J＝8.7Hz，2H)，6.63(dd，J＝2.4，8.5Hz，1H)，6.47(d，J＝2.4Hz，1H)，5.04(S，2H)，4.77(d，J＝4.5Hz，1H)，4.36(dd，J＝3.5，10.4Hz，1H)，4.13(t，J＝10.4Hz，1H)，3.82(brs，1H)，3.11(br d，J＝11.2Hz，1H)，2.92-2.71(m，4H)，2.21-2.06(m，2H)，1.87-1.73(m，2H)，1.54(s，1H)。分析理論值C27H28FNO4C，72.14；H，6.28；N，3.12。實(shí)驗(yàn)值C，72.15；H，6.21；N，3.12。
使3R*4S*7-芐氧基-3-[4-(4-氟苯基)-4-羥基-哌啶-1-基]-苯并二氫吡喃-4-醇(0.80g，1.78mmol)，10％負(fù)載碳上的鈀(0.16g)，甲醇(40ml)，以及乙酸(0.8ml)的混合物在起始?jí)毫?8.5psi下加氫8小時(shí)。反應(yīng)物經(jīng)硅藻土過(guò)濾再將濾液壓縮。使殘?jiān)c醚和飽和的碳酸氫鈉水溶液一起強(qiáng)烈攪拌1小時(shí)。使固體產(chǎn)品過(guò)濾，用水和醚洗滌，再真空干燥。用乙醇重結(jié)晶后可得到0.35g(54％)的3R*3S*3-[4-(4-氟苯基)-4-羥基-哌啶-1-基]-苯并二氫吡喃-4，7-二醇白色固體，它的mp為159-160℃；NMR DMSOd6δ7.55-7.47(m，2H)，7.11(t，J＝9Hz，2H)，7.02(d，J＝8.4Hz，1H)，6.32(dd，J＝2.3，8.3Hz，1H)，6.15(d，J＝2.3Hz，1H)，5.10-4.50(在4.03下br m和s在一起，3H)，4.23(dd，J＝2.8，10.3Hz，1H)，4.04(t，J＝10.5Hz，1H)，2.99(br d，J＝10.8Hz，1H)，2.86(brd，J＝10.7Hz，1H)，2.73-2.50(m，3H)，2.08-1.90(m，2H)，1.58(br d，J＝13Hz，2H)。分析理論值C20H22FNO4·0.25H2O；C，66.01；H，6.23；N，3.85。實(shí)驗(yàn)值c，66.22；H，6.58；N，3.46。
實(shí)施例23R 4S 3-[4-(4-氟苯基)-4-羥基-哌啶-1-基]-苯并二氫吡喃-4，7-二醇的(+)對(duì)映體使3R*4S*7-芐氧基3-[4-(4-氟苯基)-4-羥基-哌啶-1-基]-苯并二氫吡喃-4-醇(15.22g，33.86mmol)，N-叔-丁氧基羰基-L-脯氨酸(14.65g，68.06mmol)，4-二甲氨基吡啶(4.18g，34.21mmol)，和1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)-碳化二亞胺鹽酸鹽(13.10g，68.3mmol)在二氯甲烷中的混合物溫和地回流3小時(shí)。減壓下使該混合物濃縮再使殘?jiān)谝宜嵋阴ズ退g分配。相分離后用水和鹽水洗有機(jī)層；再使它在硫酸鈣上干燥并濃縮成黃色泡沫體。加異丙醚(200ml)后快速加熱該混合物至沸點(diǎn)。使該混合物冷到室溫再攪拌過(guò)夜。收集不溶物用異丙醚漂洗稱重為9.62g。把這種物質(zhì)用乙酸乙酯重結(jié)晶得到3R 4S7-芐氧基-3-[4-(4-氟苯基)-4-羥基-哌啶-1-基]-苯并二氫吡喃-4-醇的N-叔-丁氧基羰基-L-脯氨酸酯(+)對(duì)映體6.43g(29％)，它的mp為200-200.5℃；[α]D＝+100.0°，c＝0.345(甲醇)。分析理論值C37H43FN2O7C，68.71；H，6.70；N，4.33。實(shí)驗(yàn)值C，68.36；H，6.78；N，4.57。注意異丙醚濾液含有能制備相應(yīng)(-)標(biāo)題產(chǎn)物的非對(duì)映的N-叔-丁氧基羰基-L-腈氨酸酯產(chǎn)物。
把上述反應(yīng)的產(chǎn)物(0.262g，0.405mmol)加到0℃的氫化鋁鋰(0.020g，0.527mmol)的四氫呋哺(10ml)的漿料中。使該混合物加熱至室溫并攪拌10分鐘。反應(yīng)物用十水硫酸鈉聚冷，用硫酸鈉干燥再用硅藻土過(guò)濾。濾液濃縮后留下白色固體，該固體用醚/己烷研制可產(chǎn)生0.154g(85％)的(+)對(duì)映體3R 4S 7-芐氧基-3-[4-(4-氟苯基)-4-羥基-哌啶-1-基]-苯并二氫吡喃-4-醇，其mp 178-178.5℃；[α]D＝+75.4°C＝0.305(甲醇)；NMRδ7.51-7.30(m，8H)，7.06(t，J＝8.7Hz，2H)，6.63(dd，J＝2.4，8.5Hz，1H)，6.47(d，J＝2.3Hz，1H)，5.04(s，2H)，4.77(d，J＝3Hz，1H)，4.36(dd，J＝3.3，10.5Hz，1H)，4.13(t，J＝10.4Hz，1H)，3.83(s，1H)，3.11(br d，J＝11.1Hz，1H)，2.91-2.72(m，4H)，2.20-2.05(m，2H)，1.86-1.79(m，2H)，1.56(s，1H)；13C NMRδ163.59，160.05，154，95，143.73，136.84，131.84，128.58，127.96，127.42，126.33，126.22，115.33，115.26，115.05，108.91，101.97，77.22，70.68、70.03，62.46，61.76，60.71，47.05，45.09，38.63。分析理論值C27H28FNO4C，72.14；H，6.28；N，3.12。實(shí)驗(yàn)值C，71.75；H，6.45；N，3.12。
使上述反應(yīng)的產(chǎn)物(1.29g，2.87mmol)和10％負(fù)載在碳上的鈀(0.27g)在甲醇(65ml)和乙酸(1.3ml)中的混合物在50psi下(起始?jí)毫?加氫7.25小時(shí)。混合物經(jīng)硅藻土過(guò)濾后濃縮成油。飽和的碳酸氫鈉水溶液(150ml)和醚(50ml)加到所述油中，強(qiáng)烈攪拌該混合物15分鐘。形成白色固體后收集并用空氣干燥可得到0.83g(81％)的(+)對(duì)映體3R 4S 3-[4-(4-氟苯基)-4-羥基-哌啶-1-基]-苯并二氫吡喃-4，7-二醇，其熔點(diǎn)165-166℃；[α]D＝+85.6℃＝0.430(甲醇)；NMR DMSOd6δ9.38(br s，1H)，7.54-7.50(m，2H)，7.12(t，J＝9Hz，2H)，7.02(d，J＝8.4Hz，1H)，6.32(dd，J＝2.4，8.3Hz，1H)，6.16(d，J＝2.3Hz，1H)，4.88(s，1H)，4.77(s，1H)，4.65(s，1H)，4.23(dd，J＝2.5，10.1Hz，1H)，4.05(t，J＝10.6Hz，1H)，3.00(br d，J＝10.3Hz，1H)，2.87(br d，J＝10.3Hz，1H)，2.67(q，J＝11.2Hz，2H)，2.54-2.49(m，1H)，1.94(br t，J＝11.0Hz，2H)，1.59(br d，J＝13Hz，2H)；13CNMR DMSOd6δ162.41，159.21，158.17，154.58，146.42，131，79，126.88，126.78，115.92，114.52，114.24，108.12，101.83，69.47，62.74，61.95，61.45，46.21，45.82，38.37，38.28。分析理論值C20H22FNO4·0.25H2OC，66.01；H，6.23；N，3.85。實(shí)驗(yàn)值C，66.05；H，6.39；N，3.84。
實(shí)施例34R 3S 3-[4-(4-氟苯基)-4-羥基-哌啶-1-基]-苯并二氫吡喃-4，7-二醇的(-)對(duì)映體采用N-叔-丁氧基羰基-D-脯氨酸作拆解試劑按實(shí)施例2的程序制備標(biāo)題產(chǎn)物。如此獲得的中間體和標(biāo)題產(chǎn)物具有下列物理特性4R 3S 7-芐氧基-3-[4-(4-氟苯基)-4-羥基-哌啶-1-基]-苯并二氫吡喃-4-醇的N-叔-丁氧基羰基-D-脯氨酸酯的(-)對(duì)映體mp 199-199.5℃；[α]D＝-92.5°C＝0.320(甲醇)。分析理論值C37H43N2O7C，68.71；H，6.70；N，4.33。實(shí)驗(yàn)值C，68.37；H，6.84；N，4.34。
(-)對(duì)映體4R 3S 7-芐氧基-3-[4-(4-氟苯基)-4-羥基-哌啶-1-基]-苯并二氫吡喃-4-醇mp 177-178℃；[α]D＝-73.0°C＝0.330(甲醇)。分析理論值C27H28FNO4·1.25H2OC，68.70；H，6.51；N，2.96。實(shí)驗(yàn)值C，68.76；H，6.42；N，3.01。
(-)對(duì)映體4R 3S 3-[4-(4-氟苯基)-4-羥基-哌啶-1-基]-苯并二氫吡喃-4，7-二醇mp 166.5-167℃；[α]D＝-84.1°C＝0.290(甲醇)。分析理論值C20H22FNO4·0.25H2OC，66.01；H，6.23；N，3.85。實(shí)驗(yàn)值C，66.22；H，6.27；N，3.96。
用另一方法，可使實(shí)施例2的可溶解的L-脯氨酸酯在基本與上述相同條件下用氫化鋁鋰進(jìn)行水解，回收(-)對(duì)映體含量高的實(shí)施例2的原料，該原料按實(shí)施例2的方法用N-叔-丁氧基羰基-D-脯氨酸處理可產(chǎn)生本實(shí)施例的標(biāo)題產(chǎn)物。
實(shí)施例4(+)(3R，4S)-3-[4-(4-氟苯基)-4-羥基-哌啶-1-基]-苯并二氫吡喃-4，7-二醇酒石酸酯乙醇化物水合物將(+)(3R，4S)-3-[4-(4-氟苯基)-4-羥基-哌啶-1-基]-苯并二氫吡喃-4，-二醇(2.11g，5.87mmol)和酒石酸(0.885g，5.90mmol，Mallinckrodt，右旋，有左旋構(gòu)型)在乙醇(20ml，保溫)中的混合物濃縮至無(wú)定形淡黃色固體，真空下干燥過(guò)夜可得2.995g(100％)的(+)(3R，4S)-3-[4-(4-氟苯基)-4-羥基-哌啶-1-基]-苯并二氫吡喃-4，7-二醇酒石酸酯乙醇化物水合物，它具有mp 85-95℃；[α]D＝55.6°，C＝1.140(甲醇)；1HNMR DMSOd6δ7.53(dd，J＝5.6，8.7Hz，2H)，7.15(t，J＝8.9Hz，2H)，7.08(d，J＝8.4Hz，1H)，6.81(br s，7H)，6.40(dd，J＝2.2，8.3Hz，1H)，6.22(d，J＝2.2Hz，1H)，4.85(s，1H)，4.45(d，J＝-8.4Hz，1H)，4.21-4.13(m，3H)，3.44(q，J＝7.0Hz，2H)，3.34-3.08(m，5H)，2.19(br q，J＝12.9Hz，2H)，1.72(br t，J＝11.8Hz，2H)，1.06(t，J＝7.0Hz，3H)；13C NMRDMSOd6δ174.02，162.62，159.41，158.56，154.24，145.10，131.80，126.87，126.77，114.72，114.45.108.80，101.94，72.11，68.55，61.50，61.08，60.35，56.08，46.57，46.09，36.39，36.24，18.57。分析理論值C20H22FNO4C4H6O6·C2H6O·H2O；C，54.45；H，6.33；N，2.44。實(shí)驗(yàn)值C，54.51，H，6.33；N，2.49。
注在本說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求書(shū)中，CNS指中樞神經(jīng)系統(tǒng)。
權(quán)利要求
1.一種化合物3R*4S*3-[4-(4-氟苯基)-4-羥基-哌啶-1-基]-苯并二氫吡喃-4，7-二醇，其光學(xué)異構(gòu)體以及其藥物可接受鹽。
2.權(quán)利要求1的化合物，它是外消旋的3R*4S*3-[4-(4-氟苯基)-4-羥基-哌啶-1-基]-苯并二氫吡喃-4，7-二醇。
3.權(quán)利要求1的化合物，它是(+)3R，4S3-[4-(4-氟苯基)-4-羥基-哌啶-1-基]-苯并二氫吡喃-4，7-二醇。
4.權(quán)利要求1的化合物，它是(-)4R 3S 3-[4-(4-氟苯基)-4-羥基-哌啶-1-基]-苯并二氫吡喃-4，7-二醇。
5.一種藥物組合物，它含有神經(jīng)保護(hù)量的權(quán)利要求1的化合物和藥物可接受的載體。
6.一種藥物組合物，它含有神經(jīng)保護(hù)量的權(quán)利要求2化合物和藥物可接受的載體。
7.一種藥物組合物，它含有神經(jīng)保護(hù)量的權(quán)利要求3的化合物和藥物可接受的載體。
8.權(quán)利要求5的藥物組合物，其用于口服。
9.阻滯需要所述阻滯的哺乳動(dòng)物的NMDA受體位點(diǎn)的方法，該方法包括向所述哺乳動(dòng)物施用有效量的權(quán)利要求1的化合物。
10.冶療哺乳動(dòng)物的疾病或病癥的方法，所述疾病或病癥易由NMDA受體位點(diǎn)阻滯冶療，該法包括向所述哺乳動(dòng)物施用有效量權(quán)利要求1的化合物。
11.權(quán)利要求10的方法，其中所述疾病或病癥選自頭部創(chuàng)傷、脊髓創(chuàng)傷、中風(fēng)和多梗塞癡呆。
12.權(quán)利要求10的方法，其中所述疾病或病癥選自阿爾茨海默氏病、亨廷頓氏病、帕金森氏病、癲癇、和amytropic側(cè)硬化。
13.權(quán)利要求10的方法，其中所述疾病或病癥選自疼痛、AIDS癡呆、精神病病態(tài)、藥物癮、偏頭痛、低血糖和焦慮病態(tài)。
14.權(quán)利要求10的方法，其中所述疾病或病癥是膀胱失禁。
15.權(quán)利要求10的方法，其中所述疾病或病癥是由CNS手術(shù)、開(kāi)胸心臟手術(shù)或任何涉及心血管系統(tǒng)功能手術(shù)過(guò)程中的操作所產(chǎn)生的局部缺血病例。
16.權(quán)利要求13的方法，其中所述疾病或病癥是偏頭痛。
17.權(quán)利要求1的化合物，它是(+)(3R，4S)-3-[4-(4-氟苯基)-4-羥基-哌啶-1-基]-苯并二氫吡喃-4，7-二醇酒石酸酯乙醇化物水合物。
全文摘要
3R*4S*3-[4-(4-氟苯基)-4-羥基-哌啶-1-基]-苯并二氫吡喃-4，7-二醇，它的對(duì)映體以及藥物可接受鹽對(duì)于易于用NMDA阻滯藥物治療的治療疾病和病癥是有效的口服劑。
文檔編號(hào)C07D405/04GK1142825SQ94194940
公開(kāi)日1997年2月12日 申請(qǐng)日期1994年11月21日 優(yōu)先權(quán)日1994年1月31日
發(fā)明者托德·W·巴特勒, 貝特倫德·L·切納德 申請(qǐng)人:美國(guó)輝瑞有限公司