基于小球藻的金屬硫蛋白制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供基于小球藻的金屬硫蛋白制備方法，按照下述步驟進(jìn)行，向小球藻反應(yīng)器中分別加入鋅銅離子進(jìn)行培養(yǎng)；微孔濾膜濃縮；小球藻常壓破壁；葉綠素的提?。唤饘倭虻鞍椎奶崛?。金屬硫蛋白的來源拓寬到藻類，顯著降低金屬硫蛋白生產(chǎn)成本；利用小球藻提取金屬硫蛋白具有突出優(yōu)點(diǎn)，生長迅速，積累量大，加工容易；利用本方法提取出金屬硫蛋白后的藻干粉可用于制備畜牧業(yè)的飼料；先利用乙醇對小球藻內(nèi)的葉綠素進(jìn)行提取，降低葉綠素對于金屬硫蛋白提取分離過程的影響，提高金屬硫蛋白的質(zhì)量；采用鋅、銅交替脅迫誘導(dǎo)制備金屬硫蛋白，得到金屬硫蛋白的產(chǎn)率高達(dá)10g/250kg，純化后可得到更高純度的金屬硫蛋白。
【專利說明】基于小球藻的金屬硫蛋白制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及金屬硫蛋白制備【技術(shù)領(lǐng)域】，更具體地說涉及一種基于小球藻的金屬硫蛋白制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002]金屬硫蛋白(metalloth1nein)是由微生物和動植物產(chǎn)生的金屬結(jié)合蛋白，富含半胱氨酸的短肽，對多種重金屬有高度親和性。它是分子質(zhì)量較低，半胱氨酸殘基和金屬含量極高的蛋白質(zhì)。與其結(jié)合的金屬主要是鎘、銅和鋅，廣泛地存在于從微生物到人類各種生物中，其結(jié)構(gòu)高度保守。
[0003]根據(jù)金屬硫蛋白在化妝品、保健品和新醫(yī)藥等三個領(lǐng)域的應(yīng)用發(fā)展情況，結(jié)合我國消費(fèi)者的實(shí)際水平，以及新醫(yī)藥發(fā)展的步驟和速度，化妝品行業(yè)年需求20公斤左右，嬰幼兒食品添加年需求10公斤左右，中老年保健食品年需求10-20公斤，新醫(yī)藥年需求20公斤左右，而產(chǎn)量為:2003年為6.8公斤，2004年為8.6公斤，2005年為9.5公斤，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足實(shí)際需求。2005年國內(nèi)市場價:化妝品、保健品用300萬元/公斤，醫(yī)藥用800-1000萬元/公斤。2005年國外最新報價為82.50美元/毫克，273.7美元/5毫克。
[0004]目前國內(nèi)采用的都是用兔肝生產(chǎn)金屬硫蛋白，設(shè)備投入大，轉(zhuǎn)讓費(fèi)高，而且產(chǎn)量低，難以滿足現(xiàn)在市場對于金屬硫蛋白的需求。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明克服了現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供了一種基于小球藻的金屬硫蛋白制備方法。
[0006]本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)。
[0007]基于小球藻的金屬硫蛋白制備方法，按照下述步驟進(jìn)行:
[0008]步驟1，將培養(yǎng)液置于反應(yīng)器內(nèi)，120°C下滅菌，放入小球藻藻種，再置于25°C光照培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)12h，然后將反應(yīng)器置于25 °C無光照的培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)5h，然后再放入有光照的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12h，如此重復(fù)3-10次，向處于對數(shù)生長期的小球藻中加入5-100 μ mol/L鋅離子溶液，培養(yǎng)24-120h后，再向經(jīng)過上述處理后的小球藻中加入5-100 μ mo I/L銅離子溶液，再培養(yǎng)3-10天；
[0009]步驟2，培養(yǎng)3-10天后，將培養(yǎng)液以及其中的小球藻進(jìn)行微孔濾膜濃縮，濃縮至原培養(yǎng)液體積的0.2-0.6 %，膜濃縮參數(shù):膜濃縮壓力為0.05-0.09MPa，膜濃縮溫度為25-30°C，得小球藻濃縮液；
[0010]步驟3，將步驟2中所得的小球藻濃縮液在常溫下進(jìn)行壓力破壁，所述常溫壓力破壁的條件:破壁溫度為25°C，破壁壓力為300-500MPa，破壁時間為l_2h，得到破壁后的混合藻液；
[0011]步驟4，將步驟3中得到的破壁后的混合藻液用80-95%的乙醇溶液進(jìn)行葉綠素的提取，提取溫度為55-65°C，提取時間為5-7h，提取3-5次，提取后的混合液經(jīng)過離心，離心條件:轉(zhuǎn)速為80-120r/min，離心時間為10_15min，離心2_3次，得到葉綠素提取液以及經(jīng)過脫色的混合藻液；
[0012]步驟5，將步驟4中經(jīng)過脫色的混合藻液離心，離心條件:離心轉(zhuǎn)速為1000-20001./min，離心時間為10-15min，離心3_5次，取上清液，采用葡聚糖凝膠對上述上清液進(jìn)行層析，洗脫液選用5-20mmol/L的鹽酸提取液，經(jīng)柱層析之后得到收集液，離心后所得藻泥在50-60°C下干燥得到藻干粉；
[0013]步驟6，將上述收集液進(jìn)行合并，經(jīng)過真空冷凍干燥之后，用超純水對其進(jìn)行溶解，采用脫鹽柱對其進(jìn)行層析，洗脫液采用超純水，脫鹽純化1-4次，將所得的洗脫液用超濾膜進(jìn)行超濾濃縮，濃縮后的濾液在-40-25 °C下進(jìn)行干燥得到金屬硫蛋白。
[0014]優(yōu)選的，基于小球藻的金屬硫蛋白制備方法，按照下述步驟進(jìn)行:
[0015]步驟1，將培養(yǎng)液置于反應(yīng)器內(nèi)，120°C下滅菌，放入小球藻藻種，再置于25°C光照培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)12h，然后將反應(yīng)器置于25 °C無光照的培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)5h，然后再放入有光照的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12h，如此重復(fù)8次，向處于對數(shù)生長期的小球藻中加入50 ymol/L鋅離子溶液，培養(yǎng)90h后，再向經(jīng)過上述處理后的小球藻中加入70ymol/L銅離子溶液，再培養(yǎng)8天；
[0016]步驟2，培養(yǎng)8天后，將培養(yǎng)液以及其中的小球藻進(jìn)行微孔濾膜濃縮，濃縮至原培養(yǎng)液體積的0.4%，膜濃縮參數(shù):膜濃縮壓力為0.07MPa，膜濃縮溫度為25°C，得小球藻濃縮液；
[0017]步驟3，將步驟2中所得的小球藻濃縮液在常溫下進(jìn)行壓力破壁，所述常溫壓力破壁的條件:破壁溫度為25°C，破壁壓力為450MPa，破壁時間為1.5h，得到破壁后的混合藻液；
[0018]步驟4，將步驟3中得到的破壁后的混合藻液用90%的乙醇溶液進(jìn)行葉綠素的提取，提取溫度為60°C，提取時間為6.5h，提取4次，提取后的混合液經(jīng)過離心，離心條件:轉(zhuǎn)速為lOOr/min，離心時間為12min，離心3次，得到葉綠素提取液以及經(jīng)過脫色的混合藻液；
[0019]步驟5，將步驟4中經(jīng)過脫色的混合藻液離心，離心條件:離心轉(zhuǎn)速為1800r/min，離心時間為12min，離心4次，取上清液，采用葡聚糖凝膠對上述上清液進(jìn)行層析，洗脫液選用12mmol/L的鹽酸提取液，經(jīng)柱層析之后得到收集液，離心后所得藻泥在56°C下干燥得到藻干粉；
[0020]步驟6，將上述收集液進(jìn)行合并，經(jīng)過真空冷凍干燥之后，用超純水對其進(jìn)行溶解，采用脫鹽柱對其進(jìn)行層析，洗脫液采用超純水，脫鹽純化3次，將所得的洗脫液用超濾膜進(jìn)行超濾濃縮，濃縮后的濾液在-35 °C下進(jìn)行干燥得到金屬硫蛋白。
[0021 ] 所述步驟I中的培養(yǎng)液的原料為2g/L的NaHC03、0.5g/L的KN03、0.02g/L的KH2PO4、0.3mg/L 的 Vbi^P 1.0 μ g/L 的 V B12o
[0022]所述小球藻與所述培養(yǎng)液按照體積比為1:1-3的比例進(jìn)行接種。
[0023]所述步驟I中的鋅離子能夠采用硫酸鋅、氯化鋅、葡萄糖酸鋅中的一種或幾種，銅離子能夠采用硫酸銅、氯化銅、葡萄糖酸銅中的一種或幾種。
[0024]本發(fā)明的有益效果為:金屬硫蛋白的來源從傳統(tǒng)主要來源為動物，拓寬到藻類，顯著降低了金屬硫蛋白的生產(chǎn)成本；利用小球藻提取金屬硫蛋白具有突出優(yōu)點(diǎn)，生長迅速，積累量大，加工容易；并且利用本發(fā)明方法提取出金屬硫蛋白后的所得到的副產(chǎn)物藻干粉仍可用于制備畜牧業(yè)的飼料，降低了生產(chǎn)成本；同時，先利用乙醇對小球藻內(nèi)的葉綠素進(jìn)行提取，降低了葉綠素對于金屬硫蛋白提取分離過程的影響，使得最終得到的金屬硫蛋白不帶有葉綠素的顏色，提高了金屬硫蛋白的質(zhì)量；采用自養(yǎng)-異養(yǎng)交替方式培養(yǎng)小球藻，使小球藻的繁殖速率較其他培養(yǎng)方式高30%以上；采用鋅、銅交替脅迫誘導(dǎo)制備金屬硫蛋白，得到金屬硫蛋白的產(chǎn)率高達(dá)10g/250kg，純化后可得到更高純度的金屬硫蛋白。

【具體實(shí)施方式】
[0025]下面通過具體的實(shí)施例對本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步的說明。
[0026]實(shí)施例1
[0027]基于小球藻的金屬硫蛋白制備方法，按照下述步驟進(jìn)行:
[0028]步驟I，小球藻培養(yǎng)液的原料為2g/L的NaHC03、0.5g/L的KN03、0.02g/L的ΚΗ2Ρ04、0.3mg/L的Vbi和1.0 μ g/L的Vb12，將培養(yǎng)液置于反應(yīng)器內(nèi)，120°C下滅菌，小球藻與培養(yǎng)液按照體積比為1:3的比例進(jìn)行接種，再置于25°C光照培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)12h，然后將反應(yīng)器置于25°C無光照的培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)5h，然后再放入有光照的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12h，如此重復(fù)10次，向處于對數(shù)生長期的小球藻中加入5 μ mol/L硫酸鋅溶液，培養(yǎng)120h后，再向經(jīng)過上述處理后的小球藻中加入5 μ mol/L氯化銅溶液，再培養(yǎng)10天；
[0029]步驟2，培養(yǎng)10天后，將培養(yǎng)液以及其中的小球藻進(jìn)行微孔濾膜濃縮，濃縮至原培養(yǎng)液體積的0.6%，膜濃縮參數(shù):膜濃縮壓力為0.09MPa，膜濃縮溫度為30°C，得小球藻濃縮液；
[0030]步驟3，將步驟2中所得的小球藻濃縮液在常溫下進(jìn)行壓力破壁，所述常溫壓力破壁的條件:破壁溫度為25°C，破壁壓力為500MPa，破壁時間為2h，得到破壁后的混合藻液；
[0031]步驟4，將步驟3中得到的破壁后的混合藻液用95%的乙醇溶液進(jìn)行葉綠素的提取，提取溫度為65°C，提取時間為7h，提取5次，提取后的混合液經(jīng)過離心，離心條件:轉(zhuǎn)速為120r/min，離心時間為15min，離心3次，得到葉綠素提取液以及經(jīng)過脫色的混合藻液；
[0032]步驟5，將步驟4中經(jīng)過脫色的混合藻液離心，離心條件:離心轉(zhuǎn)速為2000r/min，離心時間為15min，離心5次，取上清液，采用葡聚糖凝膠對上述上清液進(jìn)行層析，洗脫液選用20mmol/L的鹽酸提取液，經(jīng)柱層析之后得到收集液，離心后所得藻泥在60°C下干燥得到藻干粉；
[0033]步驟6，將上述收集液進(jìn)行合并，經(jīng)過真空冷凍干燥之后，用超純水對其進(jìn)行溶解，采用脫鹽柱對其進(jìn)行層析，洗脫液采用超純水，脫鹽純化4次，將所得的洗脫液用超濾膜進(jìn)行超濾濃縮，濃縮后的濾液在-25 °C下進(jìn)行干燥得到金屬硫蛋白。
[0034]實(shí)施例2
[0035]基于小球藻的金屬硫蛋白制備方法，按照下述步驟進(jìn)行:
[0036]步驟I，小球藻培養(yǎng)液的原料為2g/L的NaHC03、0.5g/L的KN03、0.02g/L的ΚΗ2Ρ04、0.3mg/L的Vbi和1.0 μ g/L的V B12，將培養(yǎng)液置于反應(yīng)器內(nèi)，120°C下滅菌，小球藻與培養(yǎng)液按照體積比為1:1的比例進(jìn)行接種，再置于25°c光照培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)12h，然后將反應(yīng)器置于25°C無光照的培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)5h，然后再放入有光照的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12h，如此重復(fù)3次，向處于對數(shù)生長期的小球藻中加入100 μ mol/L氯化鋅以及葡萄糖酸鋅混合溶液，培養(yǎng)24h后，再向經(jīng)過上述處理后的小球藻中加入100 μ mol/L硫酸銅以及葡萄糖酸銅混合溶液，再培養(yǎng)3天；
[0037]步驟2，培養(yǎng)3天后，將培養(yǎng)液以及其中的小球藻進(jìn)行微孔濾膜濃縮，濃縮至原培養(yǎng)液體積的0.2%，膜濃縮參數(shù):膜濃縮壓力為0.05MPa，膜濃縮溫度為25°C，得小球藻濃縮液；
[0038]步驟3，將步驟2中所得的小球藻濃縮液在常溫下進(jìn)行壓力破壁，所述常溫壓力破壁的條件:破壁溫度為25°C，破壁壓力為300MPa，破壁時間為lh，得到破壁后的混合藻液；
[0039]步驟4，將步驟3中得到的破壁后的混合藻液用80%的乙醇溶液進(jìn)行葉綠素的提取，提取溫度為55°C，提取時間為5h，提取3次，提取后的混合液經(jīng)過離心，離心條件:轉(zhuǎn)速為80r/min，離心時間為lOmin，離心2次，得到葉綠素提取液以及經(jīng)過脫色的混合藻液；
[0040]步驟5，將步驟4中經(jīng)過脫色的混合藻液離心，離心條件:離心轉(zhuǎn)速為1000r/min，離心時間為lOmin，離心3次，取上清液，采用葡聚糖凝膠對上述上清液進(jìn)行層析，洗脫液選用5mmol/L的鹽酸提取液，經(jīng)柱層析之后得到收集液，離心后所得藻泥在50°C下干燥得到藻干粉；
[0041]步驟6，將上述收集液進(jìn)行合并，經(jīng)過真空冷凍干燥之后，用超純水對其進(jìn)行溶解，采用脫鹽柱對其進(jìn)行層析，洗脫液采用超純水，脫鹽純化I次，將所得的洗脫液用超濾膜進(jìn)行超濾濃縮，濃縮后的濾液在-40 °C下進(jìn)行干燥得到金屬硫蛋白。
[0042]實(shí)施例3
[0043]基于小球藻的金屬硫蛋白制備方法，按照下述步驟進(jìn)行:
[0044]步驟I，小球藻培養(yǎng)液的原料為2g/L的NaHC03、0.5g/L的KN03、0.02g/L的ΚΗ2Ρ04、
0.3mg/L的Vbi和1.0 μ g/L的V B12，將培養(yǎng)液置于反應(yīng)器內(nèi)，120°C下滅菌，小球藻與培養(yǎng)液按照體積比為1:2的比例進(jìn)行接種，再置于25°C光照培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)12h，然后將反應(yīng)器置于25°C無光照的培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)5h，然后再放入有光照的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12h，如此重復(fù)8次，向處于對數(shù)生長期的小球藻中加入50 μ mol/L氯化鋅溶液，培養(yǎng)90h后，再向經(jīng)過上述處理后的小球藻中加入70 μ mol/L氯化銅溶液，再培養(yǎng)8天；
[0045]步驟2，培養(yǎng)8天后，將培養(yǎng)液以及其中的小球藻進(jìn)行微孔濾膜濃縮，濃縮至原培養(yǎng)液體積的0.4%，膜濃縮參數(shù):膜濃縮壓力為0.07MPa，膜濃縮溫度為25°C，得小球藻濃縮液；
[0046]步驟3，將步驟2中所得的小球藻濃縮液在常溫下進(jìn)行壓力破壁，所述常溫壓力破壁的條件:破壁溫度為25°C，破壁壓力為450MPa，破壁時間為1.5h，得到破壁后的混合藻液；
[0047]步驟4，將步驟3中得到的破壁后的混合藻液用90%的乙醇溶液進(jìn)行葉綠素的提取，提取溫度為60°C，提取時間為6.5h，提取4次，提取后的混合液經(jīng)過離心，離心條件:轉(zhuǎn)速為lOOr/min，離心時間為12min，離心3次，得到葉綠素提取液以及經(jīng)過脫色的混合藻液；
[0048]步驟5，將步驟4中經(jīng)過脫色的混合藻液離心，離心條件:離心轉(zhuǎn)速為1800r/min，離心時間為12min，離心4次，取上清液，采用葡聚糖凝膠對上述上清液進(jìn)行層析，洗脫液選用12mmol/L的鹽酸提取液，經(jīng)柱層析之后得到收集液，離心后所得藻泥在56°C下干燥得到藻干粉；
[0049]步驟6，將上述收集液進(jìn)行合并，經(jīng)過真空冷凍干燥之后，用超純水對其進(jìn)行溶解，采用脫鹽柱對其進(jìn)行層析，洗脫液采用超純水，脫鹽純化3次，將所得的洗脫液用超濾膜進(jìn)行超濾濃縮，濃縮后的濾液在-35 °C下進(jìn)行干燥得到金屬硫蛋白。
[0050]以上對本發(fā)明做了示例性的描述，應(yīng)該說明的是，在不脫離本發(fā)明的核心的情況下，任何簡單的變形、修改或者其他本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠不花費(fèi)創(chuàng)造性勞動的等同替換均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【權(quán)利要求】
1.基于小球藻的金屬硫蛋白制備方法，其特征在于:按照下述步驟進(jìn)行: 步驟1，將培養(yǎng)液置于反應(yīng)器內(nèi)，120°c下滅菌，放入小球藻藻種，再置于25°C光照培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)12h，然后將反應(yīng)器置于25°C無光照的培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)5h，然后再放入有光照的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12h，如此重復(fù)3-10次，向處于對數(shù)生長期的小球藻中加入5-100 ymol/L鋅離子溶液，培養(yǎng)24-120h后，再向經(jīng)過上述處理后的小球藻中加入5-100 ymol/L銅離子溶液，再培養(yǎng)3-10天； 步驟2，培養(yǎng)3-10天后，將培養(yǎng)液以及其中的小球藻進(jìn)行微孔濾膜濃縮，濃縮至原培養(yǎng)液體積的0.2-0.6%,膜濃縮參數(shù):膜濃縮壓力為0.05-0.09MPa，膜濃縮溫度為25_30°C，得小球藻濃縮液； 步驟3，將步驟2中所得的小球藻濃縮液在常溫下進(jìn)行壓力破壁，所述常溫壓力破壁的條件:破壁溫度為25°C，破壁壓力為300-500MPa，破壁時間為l_2h，得到破壁后的混合藻液； 步驟4，將步驟3中得到的破壁后的混合藻液用80-95%的乙醇溶液進(jìn)行葉綠素的提取，提取溫度為55-65°C，提取時間為5-7h，提取3-5次，提取后的混合液經(jīng)過離心，離心條件:轉(zhuǎn)速為80-120r/min，離心時間為10_15min，離心2_3次，得到葉綠素提取液以及經(jīng)過脫色的混合藻液； 步驟5，將步驟4中經(jīng)過脫色的混合藻液離心，離心條件:離心轉(zhuǎn)速為1000-20001./min，離心時間為10-15min，離心3_5次，取上清液，采用葡聚糖凝膠對上述上清液進(jìn)行層析，洗脫液選用5-20mmol/L的鹽酸提取液，經(jīng)柱層析之后得到收集液，離心后所得藻泥在50-60°C下干燥得到藻干粉； 步驟6，將上述收集液進(jìn)行合并，經(jīng)過真空冷凍干燥之后，用超純水對其進(jìn)行溶解，采用脫鹽柱對其進(jìn)行層析，洗脫液采用超純水，脫鹽純化1-4次，將所得的洗脫液用超濾膜進(jìn)行超濾濃縮，濃縮后的濾液在-40-25 °C下進(jìn)行干燥得到金屬硫蛋白。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于小球藻的金屬硫蛋白制備方法，其特征在于: 步驟1，將培養(yǎng)液置于反應(yīng)器內(nèi)，120°C下滅菌，放入小球藻藻種，再置于25°C光照培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)12h，然后將反應(yīng)器置于25°C無光照的培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)5h，然后再放入有光照的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12h，如此重復(fù)8次，向處于對數(shù)生長期的小球藻中加入50 ymol/L鋅離子溶液，培養(yǎng)90h后，再向經(jīng)過上述處理后的小球藻中加入70 μ mol/L銅離子溶液，再培養(yǎng)8天； 步驟2，培養(yǎng)8天后，將培養(yǎng)液以及其中的小球藻進(jìn)行微孔濾膜濃縮，濃縮至原培養(yǎng)液體積的0.4%，膜濃縮參數(shù):膜濃縮壓力為0.07MPa，膜濃縮溫度為25°C，得小球藻濃縮液； 步驟3，將步驟2中所得的小球藻濃縮液在常溫下進(jìn)行壓力破壁，所述常溫壓力破壁的條件:破壁溫度為25°C，破壁壓力為450MPa，破壁時間為1.5h，得到破壁后的混合藻液； 步驟4，將步驟3中得到的破壁后的混合藻液用90%的乙醇溶液進(jìn)行葉綠素的提取，提取溫度為60°C，提取時間為6.5h，提取4次，提取后的混合液經(jīng)過離心，離心條件:轉(zhuǎn)速為lOOr/min，離心時間為12min，離心3次，得到葉綠素提取液以及經(jīng)過脫色的混合藻液； 步驟5，將步驟4中經(jīng)過脫色的混合藻液離心，離心條件:離心轉(zhuǎn)速為1800r/min，離心時間為12min，離心4次，取上清液，采用葡聚糖凝膠對上述上清液進(jìn)行層析，洗脫液選用12mmol/L的鹽酸提取液，經(jīng)柱層析之后得到收集液，離心后所得藻泥在56°C下干燥得到藻干粉； 步驟6，將上述收集液進(jìn)行合并，經(jīng)過真空冷凍干燥之后，用超純水對其進(jìn)行溶解，采用脫鹽柱對其進(jìn)行層析，洗脫液采用超純水，脫鹽純化3次，將所得的洗脫液用超濾膜進(jìn)行超濾濃縮，濃縮后的濾液在-35 °C下進(jìn)行干燥得到金屬硫蛋白。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的基于小球藻的金屬硫蛋白制備方法，其特征在于:所述步驟I中的培養(yǎng)液的原料為2g/L的NaHC03、0.5g/L的KN03、0.02g/L的KH2P04、0.3mg/L的Vbi和 l.0yg/L 的乂.。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的基于小球藻的金屬硫蛋白制備方法，其特征在于:所述小球藻與所述培養(yǎng)液按照體積比為1:1-3的比例進(jìn)行接種。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的基于小球藻的金屬硫蛋白制備方法，其特征在于:所述步驟I中的鋅離子能夠采用硫酸鋅、氯化鋅、葡萄糖酸鋅中的一種或幾種，銅離子能夠采用硫酸銅、氯化銅、葡萄糖酸銅中的一種或幾種。
【文檔編號】C07D487/22GK104480173SQ201410795199
【公開日】2015年4月1日 申請日期:2014年12月18日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月18日
【發(fā)明者】季延濱, 李濤 申請人:天科慧洋科技發(fā)展（天津）有限公司