熒光探針及其制備方法與在檢測超氧陰離子中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種熒光探針及其制備方法與在檢測超氧陰離子中的應(yīng)用，熒光探針的結(jié)構(gòu)式如下：該熒光探針的制備方法為在惰性氣體保護(hù)下，將三聚氰胺、咖啡酸溶于DMF和CH2Cl2的混合液中，再加入HOBT和EDC.HCL，室溫下攪拌反應(yīng)8～16小時(shí)；反應(yīng)后，濃縮，除去溶劑，得熒光探針粗產(chǎn)品；再將熒光探針粗產(chǎn)品用硅膠薄層色譜板分離提純，即得熒光探針純品。本發(fā)明的熒光探針結(jié)構(gòu)新穎、靈敏度、選擇性好、光穩(wěn)定性好。
【專利說明】熒光探針及其制備方法與在檢測超氧陰離子中的應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種熒光探針，及其制備方法，以及在檢測超氧陰離子中的應(yīng)用，屬于 生物檢測【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002] 大量證據(jù)表明，活性氧（ROS)與許多疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，例如退行性疾病， 手術(shù)中的缺血在灌注損傷等。由于超氧陰離子自由基（〇 2'_)是其他R〇S(包括過氧化氫，過 氧化亞硝酰陰離子等）的前體，因此揭示O2'_的水平與疾病的關(guān)系顯得尤為重要。
[0003] 靈敏性高是單光子（OP)熒光成像的明顯優(yōu)勢，所以應(yīng)用OP熒光顯微鏡可視化細(xì) 胞內(nèi)的O 2 ^水平是一種有效檢測O2'1 勺方法。但是，目前檢測細(xì)胞內(nèi)O2 ^的熒光探針仍然 存在諸多問題，例如：來自其他ROS對小分子熒光探針測定的干擾；響應(yīng)時(shí)間較長；不可逆 反應(yīng)等。
[0004] 雙光子（TP)熒光成像的優(yōu)勢包括更深的穿透深度和更低的樣本光損傷，這是由 于TP熒光是同時(shí)吸收兩個(gè)能量更低的光子激發(fā)造成的。但是目前檢測細(xì)胞和活體內(nèi)O 2勺 TP熒光探針尚未見報(bào)道。鑒于細(xì)胞內(nèi)O2 ^的濃度極低、壽命短、對環(huán)境敏感等特點(diǎn)，檢測 〇2'_的探針既需要具備深組織成像和光損傷低的特性，還需要高靈敏度、瞬時(shí)和可逆性；此 夕卜，還應(yīng)便于根據(jù)不同樣品的厚度靈活地選擇成像方式。因此檢測O 2^的探針的設(shè)計(jì)仍是 生命科學(xué)與化學(xué)分析領(lǐng)域最困難的問題之一。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 針對上述現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的目的是提供一種動態(tài)、可逆檢測超氧陰離子的熒光 探針，及其制備方法，以及其基于單雙光子雙模式熒光成像在檢測細(xì)胞和活體內(nèi)超氧陰離 子的應(yīng)用，該熒光探針結(jié)構(gòu)新穎、靈敏度、選擇性好、光穩(wěn)定性好。
[0006] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
[0007] 本發(fā)明的熒光探針，其結(jié)構(gòu)式如下式I所示：
[0008]

【權(quán)利要求】
1. 一種熒光探針，其特征在于，該熒光探針的結(jié)構(gòu)式如式I所示：
2. 權(quán)利要求1所述的熒光探針的合成方法，其特征在于，步驟如下： 在惰性氣體保護(hù)下，將三聚氰胺、咖啡酸溶于DMF和CH2Cl2的混合液中，再加入HOBT和 EDC. HCL，室溫下攪拌反應(yīng)8?16小時(shí)；反應(yīng)后，濃縮，除去溶劑，得熒光探針粗產(chǎn)品； 再將熒光探針粗產(chǎn)品用硅膠薄層色譜板分離提純，即得熒光探針純品； 所述三聚氰胺、咖啡酸、HOBT和EDC. HCL四者的物質(zhì)的量比為1: (2-3. 5) : (2-3. 5): (2-3. 5)； 所述DMF和CH2Cl2的混合液中，DMF和CH2Cl2的體積比為1 :2-6。
3. 如權(quán)利要求2所述的熒光探針的合成方法，其特征在于，所述三聚氰胺、咖啡酸、 HOBT和EDC四者的物質(zhì)的量比為1:2 :2 :2。
4. 如權(quán)利要求2所述的熒光探針的合成方法，其特征在于，所述DMF和CH2Cl2的混合 液中，DMF和CH 2Cl2的體積比為1 :4。
5. 如權(quán)利要求2所述的熒光探針的合成方法，其特征在于，所述用硅膠薄層色譜板分 離提純時(shí)，洗脫劑為乙酸乙酯-環(huán)己烷混合液，其中，乙酸乙酯：環(huán)己烷的體積比為5 :1。
6. 權(quán)利要求1所述的熒光探針在檢測細(xì)胞內(nèi)O2^中的應(yīng)用。
7. 如權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，應(yīng)用方法為：將培養(yǎng)好的待檢測細(xì)胞放于含 有探針分子的緩沖溶液中孵化，孵化后，將細(xì)胞用生理PBS緩沖液洗去多余的探針，然后進(jìn) 行激光共聚焦顯微成像。
【文檔編號】C07D251/70GK104371707SQ201410606425
【公開日】2015年2月25日 申請日期:2014年10月31日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月31日
【發(fā)明者】唐波, 李平, 張雯, 肖海濱 申請人:山東師范大學(xué)